Método de identificación de moduladores de la interacción entre ciertos oxiesteroles y EBI2.

Un método de / para identificar un modulador de la interacción entre el 7,25 DHC y / o 7,27 DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2, cuyo método comprende;

(a) proporcionar un modulador candidato;

(b) incubar el modulador de la etapa (a) con 7,25DHC y / o 7,27DHC y / o 7HC y / o 25HC y EBI2,

(c) determinar si la interacción entre el 7,25DHC y / o 7,27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2 es modulada en presencia de dicho modulador candidato en comparación con la interacción entre 7,25DHC y / o 7,27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2 en ausencia de dicho modulador candidato,

en donde

7,25DHC es colest-5-eno-3b, 7,25-triol;

7,27DHC es colest-5-eno-3b, 7,27-triol;

7HC es colest-5-eno-3b, 7-diol;

HC es colest-5-eno-3b, 25-diol; y

EB12 es el receptor 2 inducido por el virus de Epstein-Barr

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/066550.

Solicitante: NOVARTIS AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: LICHTSTRASSE 35 4056 BASEL SUIZA.

Inventor/es: KATOPODIS, ANDREAS, SAILER, ANDREAS, ROGGO, SILVIO, LI,WEI, SPANKA,Carsten, CHEN,YU, BAUMGARTEN,BIRGIT, GESSIER,FRANÇOIS, KNOCHENMUSS,RICHARD, FALCHETTO,ROCCO, SEUWEN,KLAUS, ZHANG,JUAN, HANNEDOUCHE,SÉBASTIEN, NOËL,SOPHIE, ROY,MARIE-ODILE, CHO,CHARLES Y, SHEN,WEIJUN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/705 (Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/395 (Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/566 (utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/7105 (Acidos ribonucleicos naturales, es decir conteniendo unicamente ribosas unidas a la adenina, la guanina, la citosina, o el uracilo y teniendo enlaces 3'-5' fosfodiester)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/113 (Acidos nucleicos no codificantes que modulan la expresión de genes, p.ej. oligonucleótidos antisentido)

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Fragmento de la descripción:

Método de identificación de moduladores de la interacción entre ciertos oxiesteroles y EBI2

La presente invención se refiere a un método para la identificación de moduladores de la interacción entre colest-5eno-3b, 7a, 25-triol (7a, 25-dihidroxicolesterol) ("7a, 25DHC") y / o colest-5-eno-3b, 7a, 27-triol (7a, 27-dihidroxicolesterol) ("7a, 27DHC") y / o colest-5-eno-3b, 7b, 25-triol (7b, 25-dihidroxicolesterol) ("7b, 25DHC") y / o colest-5-eno-3b, 7b, 27triol (7b, 27-dihidroxicolesterol) ("7b, 27DHC") y / o colest-5-eno-3b, 7a-diol (7a-hidroxicolesterol) ("7aHC") y / o colest5-eno-3b, 7b-diol (7b-hidroxicolesterol) ("7bHC") , 25-diol (25-hidroxicolesterol) ("25HC") y el receptor 2 inducido por el virus de Epstein-Barr ("EBI2") . Otros aspectos, objetivos y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la descripción que se suministra a continuación.

El gen 2 del EBl2 inducido por el virus de Epstein-Barr (VEB) , también llamado GPR183, codifica para un receptor que pertenece a la superfamilia de los receptores 7TM del tipo Rodopsina (siete receptores del segmento transmembrana) , también conocidos como receptores acoplados a la proteína G (GPCR) . EBI2, es un receptor huérfano acoplado a la proteína G para el que no se conoce ningún ligando. EBI2 fue clonado en 1993 como uno de los genes más sobrerregulados hasta (> 200 veces) en células de linfoma de Burkitt infectadas por el virus de Epstein-Barr (VEB) (Birkenbach, M., et al. (1993) . Epstein-Barr virus-induced genes: first lymphocyte-specific G protein-coupled peptide receptors. J. Virol. 67, 2209 - 2220) . El gen EBI2 se localiza en el cromosoma 13q32.3. EBl2 comparte aproximativamente 35% de homología a nivel de aminoácidos con el virus de la viruela aviar FPV206, 3032% con los receptores P2Y5 y P2Y9. EBI2 está también estrechamente relacionado con el receptor 7TM huérfano GPR18 y los dos receptores de lípidos, los receptores 1 y 2 de cisteinil Ieucotrieno (CysLT1, y 2) (25% y 28% de homología, respectivamente) .

La PCR en tiempo real de las células infectadas por el VEB mostraron alta expresión de EBl2 durante la replicación viral latente así como la lítica (Rosenkilde, et al. (2006) Molecular pharmacological phenotyping of EBI2 - An orphan seven-transmembrane receptor with constitutive activity. Journal of Biological Chemistr y 281[19], 13199 - 13208) . Se reportó una expresión muy alta del gen EBl2 en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) , en tejido linfoide (bazo y ganglios linfáticos) y tejido pulmonar (Birkenbach, M., et al. (1993) ; Rosenkilde, M. M. et al. (2006) ) . La expresión de EBI2 demostró ser más alta en los linfocitos B, seguido por los linfocitos T, las células NK y la más bajo en monocitos (Rosenkilde, M. M. et al. (2006) , Cahir-McFarland, E. D. et al. (2004) . Role of NF-kappa B in cell survival and transcription of latent membrane protein 1-expressing or Epstein-Barr virus latency III-infected cells. J. Virol. 78, 4108 - 4119) . El perfil de expresión de EBI2 sugiere un papel en la modulación del sistema inmune. Por último, también se demostró la señalización constitutiva a través de Gai y la localización en la superficie de la célula de EBI2 (Rosenkilde, M. M. et al. (2006) ) .

La patente europea EP1286165 da a conocer la identificación de un receptor huérfano acoplado a la proteína G de EBI2 (y variantes del mismo) como un receptor de neuropéptidos de la familia de CRF, y el uso de tales péptidos, por ejemplo, urotensina I o sauvagina (y análogos o miméticos de cualquiera de los dos) como moduladores para EBI2. También se refiere a métodos de selección para identificar agonistas y antagonistas de este receptor neuropéptido.

Costagliola et al. (J. Immunol 1998 160 (3) : 1458 - 1465) reporta la inmunización genética como un método eficiente de generar anticuerpos que reconocen la estructura nativa del hTSHR y una nueva forma de la inducción de tiroiditis en ratones.

Un objetivo de la presente invención es la de identificar ligandos para EBI2.

La presente invención se basa, al menos en parte, en la búsqueda de que 7, 25DHC y 7, 27DHC y 7HC y 25HC son ligandos para EBI2.

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un método para identificar un modulador (por ejemplo, inhibidor) de la interacción entre el 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC (es decir, el ligando) y EBI2 (por ejemplo, EBI2 humano) , preferiblemente entre 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC y EBI2 (por ejemplo EBI2 humano) , especialmente 7a, 25DHC y EBI2 (por ejemplo EBI2 humano) .

En otras formas de realización de este aspecto, el modulador se enlaza con 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC y / o EBI2, preferiblemente con 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC y / o EBI2, más preferiblemente con 7a, 25DHC y / o EBI2, e inhibe la interacción entre el ligando y EBI2. El inhibidor puede ser una proteína terapéutica, tal como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, o una entidad química de una molécula pequeña molécula.

En otras formas de realización de este aspecto, el modulador modula (por ejemplo inhibe) la producción endógena de 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o la producción de 25HC, preferiblemente el modulador modula (por ejemplo, inhibe) la producción endógena de 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC, por ejemplo, mediante la inhibición de la producción endógena mediada enzimáticamente de 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o la producción de 25HC, preferentemente el modulador inhibe la producción endógena mediada enzimáticamente de 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC. El modulador puede inhibir la enzima responsable de la conversión del precursor inmediato de 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC, preferiblemente de precursores del precursor inmediato de 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC a 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC, respectivamente.

En algunas otras formas de realización de este aspecto, el modulador se selecciona del grupo que consiste en: una entidad química pequeña, anticuerpo, Adnectina, Anquirina, Maxybody/Avimer, Affibody, Anticalina, Afilina, oligonucleótido antisentido, ARN corto de interferencia (ARNci) . El modulador puede ser un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. Cuando el modulador es un anticuerpo, puede comprender la región constante humana y / o puede tener un isotipo de IgG (por ejemplo, IgG1 o IgG4) y / o puede ser un anticuerpo quimérico, humano o humanizado.

Cuando el modulador es un fragmento de anticuerpo, el fragmento de anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: Fab, Fab', F (ab') 2, Fv, ScFv, el dominio VH, el dominio VHH.

En otras formas de realización adicionales de este aspecto, el modulador es un inhibidor de la expresión de EBI2. Tales inhibidores pueden ser un oligonucleótido antisentido que comprende o que consiste esencialmente en una secuencia (a) capaz de formar un tríplex estable con una porción del gen del EBI2, o (b) capaz de formar un dúplex estable con una porción de un transcrito de ARNm del gen del EBI2 en condiciones fisiológicas. Alternativamente, o además, el inhibidor puede ser una molécula de oligonucleótido antisentido o un ARN corto de interferencia (ARNci) que inhibe la expresión de la proteína del EBI2 (por ejemplo, es capaz de interferir con la traducción del transcrito del EBl2) .

El modulador identificado en el método de la invención puede ser usado en una composición farmacéutica que comprende un modulador del primer aspecto más arriba junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método de / para identificar un modulador de la interacción entre el 7, 25 DHC y / o 7, 27 DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2, cuyo método comprende;

(a) proporcionar un modulador candidato;

(b) incubar el modulador de la etapa (a) con 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC y EBI2,

(c) determinar si la interacción entre el 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2 es modulada en presencia de dicho modulador candidato en comparación con la interacción entre 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2 en ausencia de dicho modulador candidato,

en donde 7, 25DHC es colest-5-eno-3b, 7, 25-triol; 7, 27DHC es colest-5-eno-3b, 7, 27-triol; 7HC es colest-5-eno-3b, 7-diol; 25HC es colest-5-eno-3b.

2. diol; y EB12 es el receptor 2 inducido por el virus de Epstein-Barr.

2. El método de la reivindicación 1, en el que se identifica un modulador de la interacción entre 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC y EBI2.

3. El método de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho modulador de la interacción entre el 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2 humano es un inhibidor de dicha interacción.

4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en el que dicho modulador se puede utilizar para el tratamiento de una enfermedad humana o trastorno sensible a la modulación de la interacción entre 7a, 25DHC y / o 7b, 25DHC y / o 7a, 27DHC y / o 7b, 27DHC y / o 7aHC y / o 7bHC y / o 25HC y EBI2.

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en el que dicho modulador se puede utilizar para el tratamiento profiláctico de un enfermedad humana o trastorno sensible a la modulación de la interacción entre 7, 25DHC y / o 7, 27DHC y / o 7HC y / o 25HC con EBI2.

6. El método de la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que la enfermedad o el trastorno se selecciona del grupo que consiste de: hipertensión, angina de pecho, aterosclerosis, insuficiencia cardiaca congestiva, accidente cerebrovascular, obesidad, síndrome metabólico, enfermedades autoinmunes tales como artritis, (artritis reumatoide especialmente) y lupus, afecciones atópicas tales como asma y dermatitis atópica, EPOC, hipertensión pulmonar, infecciones virales tales como EBV, VIH, hepatitis (A o C) , enfermedad de hígado graso, cirrosis hepática (cirrosis hepática inducida particularmente por el alcohol) , cáncer, dislipidemia, diabetes (especialmente de tipo II) , rechazo de trasplante, síndrome de intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedades de inflamación crónica, alergia, psoriasis, fibrosis quística, hipercolesterolemia, enfermedad renal, esclerosis múltiple.

7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho modulador se selecciona del grupo que consiste de: una pequeña entidad química, anticuerpo, Adnectina, Anquirina, Maxybody / Avimero, Affibody, Anticalina, Affilina, oligonucleótidos antisentido, y ARN pequeño de interferencia (ARNpi) .

8. El método de la reivindicación 7, en el que dicho modulador es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo.

9. El método de la reivindicación 8, en el que dicho anticuerpo comprende una región constante humana.

10. El método de las reivindicaciones 8 o 9, en el que dicho anticuerpo tiene un isotipo de IgG ( por ejemplo, IgG1 o IgG4) .

11. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el que dicho anticuerpo es quimérico, humano o humanizado.

12. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que dicho anticuerpo es un fragmento de anticuerpo seleccionado de entre el grupo que consiste de: Fab, Fab', F (ab) 2, Fv, ScFv, dominio VH, dominio VHH.

13. El método de la reivindicación 7, en el que dicho modulador es un oligonucleótido antisentido o ARNpi que inhibe la expresión de la proteína EBI2.