Método para la elaboración de un producto lácteo enriquecido en inmunoglobulinas específicas frente a Campylobacter jejuni.

En la presente invención se contempla un procedimiento para la obtención de una solución láctea enriquecida en inmunoglobulinas activas específicas frente a Campylobacter jejuni, mediante a) la obtención de una vacuna a partir de antígenos procedentes de cepas de este patógeno inactivados térmicamente empleando como adyuvante Hidróxido de Aluminio o adyuvante incompleto de Freud; b) la inmunización de vacas, en cualquier momento de su ciclo reproductivo, mediante la administración progresiva de soluciones de la vacuna obtenida; y c) la obtención de una solución láctea enriquecida en lg específicas frente a Campylobacter jejuni a partir de la leche de las vacas previamente inmunizadas. Asimismo, se contempla la solución láctea así obtenida y su empleo en la elaboración de productos lácteos inmunológicamente activos

Método para la elaboración de un producto lácteo enriquecido en inmunoglobulinas específicas frente a Campylobacter jejuni.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método para la producción de una solución láctea que contiene factores inmunológicamente activos frente a determinados microorganismos. En concreto, esta invención describe un procedimiento para la obtención de leche, o derivados, enriquecida en inmunoglobulinas específicas frente a Campylobacter jejuni, procedente de vacas inmunizadas con cepas de este patógeno, así como el empleo de las soluciones obtenidas en la elaboración de productos lácteos inmunológicamente activos.

Antecedentes de la invención

Campylobacter jejuni es una de las bacterias que producen más intoxicaciones alimentarias en todo el mundo. Hasta la década de los 70 no se le dio la debida importancia como posible agente patógeno, sin embargo, está demostrado que es responsable de prácticamente el doble de los casos registrados de enteritis que la conocida Salmonella (M.S. Pasternak, Impact and Management of Campylobacter in human medicine - US perspective. International Journal of Infections Diseases, 6, 3, December 2002, 37-43).

El Campylobacter jejuni es capaz de vivir en los intestinos de las aves sin producirles enfermedad alguna, mientras que en el ser humano se comporta como un patógeno invasor, siendo el contacto y la ingestión de los animales una de las vías de infección más frecuentes.

La concentración suficiente para causar una infección es muy pequeña y en las últimas dos décadas la incidencia en la intoxicación por esta bacteria ha crecido alarmantemente en los países desarrollados.

El síntoma principal de la infección, cuando ésta se produce a través del agua o de los alimentos contaminados, es la diarrea, y otros síntomas son: fiebre, náuseas y dolores abdominales y de cabeza. La enfermedad se manifiesta generalmente entre 2 y 5 días después de haber ingerido la bacteria y sus efectos debilitantes duran unos 10 días.

Los métodos actualmente empleados en la prevención y el tratamiento de los desórdenes entéricos en general, se basan en la inclusión de factores inmunológicos de origen lácteo como complemento en productos alimenticios para lactantes y recién nacidos.

Así, en la patente US3984539 se define un procedimiento para la obtención de una solución inyectable de inmunoglobulinas (Ig) bovinas para combatir la diarrea producida por determinados patógenos, basado en el aislamiento de Ig procedentes del suero ó plasma bovino mediante procedimientos de fraccionamiento salino. En la solución obtenida se observan cantidades apreciables de Ig frente a diferentes serotipos de E. coli.

La patente US 4834974 describe el proceso de obtención de una fracción proteica inmunológicamente activa de inmunoglobulinas bovinas a partir de lactosuero empleando tecnologías de membranas. Los concentrados obtenidos se emplean como sustitutivos de calostros para la alimentación de terneros.

La patente US 6180099 describe un método para la elaboración de un preparado con un 40-60% en peso de inmunoglobulinas y fibra para mantener la salud gastrointestinal. Las inmunoglobulinas se obtienen a partir de leche, productos lácteos o lactosuero.

Las inmunoglobulinas activas, presentes en las formulaciones descritas en estos documentos, no provienen de animales previamente inmunizados, por lo que no están dirigidas contra ningún microorganismo en concreto, sino que emplean los anticuerpos naturalmente contenidos en la leche de los mamíferos.

Por otra parte, en la patente US 3992521 se describe un proceso para la obtención de un producto inmune que contiene anticuerpos procedentes del suero de caballos hiperinmunizados a través de la inoculación de antígenos de Escherichia coli y Salmonella.

La patente US 3128230 describe un método para producir anticuerpos mediante la inyección de una mezcla de microorganismos inactivados térmicamente de Escherichia coli, Streptococus viridans, hemolítico y no hemolítico, Diplococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus y albus, en un mamífero productor de leche y el aislamiento de anticuerpos procedentes del suero o de la leche.

La patente GB 1573995 define un procedimiento para la obtención de un concentrado proteico de inmunoglobulinas que muestran especificidad frente a Escherichia coli procedente de la leche de animales hiperinmunizados.

La patente US 4051235 define un método para la preparación de soluciones inmunológicas procedentes del calostro empleadas en el tratamiento del ganado. En este documento se sugiere la estimulación de las vacas antes del parto mediante la inyección de antígenos para la producción de determinados anticuerpos.

La patente EP 0469359 describe una técnica para producir anticuerpos específicos en leche o calostro de vacas inmunizando mamíferos, y la elaboración a partir de esta leche o calostro de una composición farmacéutica que incluya estas inmunoglobulinas no desnaturalizadas, de modo que sean capaces de unirse a Helicobacter pylori en el estómago humano.

La patente US 6616927 describe una técnica para producir inmunoglobulina A en leche a partir de mamíferos hiperinmunizados por dos vías diferentes (seleccionadas entre intramamaria, intraperitoneal e intramuscular) y su inclusión en formulaciones para proporcionar inmunidad pasiva contra ciertos tipos de patógenos.

Se conocen por tanto formulaciones diversas que contienen altos niveles de anticuerpos específicos frente a diferentes patógenos, que pueden ser empleados para el tratamiento de lactantes con desordenes entéricos, así como para el tratamiento de pacientes inmunodeprimidos, pero no se conoce ninguna a partir de leche de vaca enriquecida en IgG específicas frente a Campylobacter jejuni.

En general los tratamientos existentes frente a C. jejuni describen el empleo de factores inmunológicos de origen lácteo como complemento en productos alimenticios para lactantes y recién nacidos.

Así, en la patente US 6202546 se describe la preparación de un producto de origen lácteo compuesto por leche a la que se añade un concentrado proteico que contiene inmunoglobulinas, elaborado a partir de calostro de vacas inmunizadas frente a una serie de patógenos que afectan al ser humano, entre los que se nombra a C. jejuni.

Esta patente describe un procedimiento para reducir la carga microbiana del citado calostro por medio de procesos de centrifugación y procesos de concentración. El calostro esterilizado y concentrado se adiciona a la leche tras su proceso de pasteurización, dando lugar a un producto compuesto de origen lácteo. Este documento no describe ninguna fórmula de obtención del calostro hiperinmune, sino que simplemente sugiere que se podría obtener inmunizando a cualquier mamífero con los citados microorganismos, sin describir ningún protocolo para la realización de este procedimiento.

A la luz de estos documentos, se demuestra la falta de un proceso de inmunización que tenga como resultado final la obtención de leche procedente directamente de la vaca que contenga Inmunoglobulinas con actividad específica frente a Campylobacter jejuni.

Por otra parte, en todos los procedimientos descritos, la inmunización del vacuno se realiza siempre en estadios finales del ciclo reproductivo del ganado, dos semanas antes del parto, en donde, debido a la fisiología del animal, las posibilidades de que aparezcan Ig activas son mayores.

Sin embargo, los presentes autores, a través de sus investigaciones, han demostrado que el ganado vacuno puede generar anticuerpos específicos contra Campylobacter jejuni. Así, en base a las necesidades del actual estado de la técnica, han desarrollado un procedimiento de inmunización de vacas para la obtención de leche enriquecida en IgG específicas frente a Campylobacter jejuni, que sorprendentemente, puede ser implementado en cualquier momento del ciclo de lactación, ya que las Ig aparecen activas en la leche producida durante todo el ciclo, y no solamente en los primeros días calostrales.

Así, en esta invención, los autores describen, a diferencia de los productos compuestos inmunológicamente activos del estado de la técnica, una leche con la misma composición que la leche producida por una vaca sin inmunizar (grasa, azúcares, minerales y proteínas), pero enriquecida con una fracción...

1. Procedimiento para la obtención de una solución láctea enriquecida en inmunoglobulinas activas específicas frente a Campylobacter jejuni que comprende:

2. Procedimiento según la reivindicación 1 caracterizado porque el adyuvante empleado en a) es Hidróxido de Aluminio.

3. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 caracterizado porque la solución láctea obtenida en c) procede del calostro.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 caracterizado porque la solución láctea obtenida en c) procede del lactosuero resultante de la precipitación enzimática de las caseínas.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 caracterizado porque la solución láctea obtenida en c) procede del lactosuero resultante de la precipitación ácida de las caseínas.

6. Solución láctea enriquecida en Ig específicas frente a Campylobacter jejuni obtenida según cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

7. Empleo de una solución láctea, según la reivindicación 6, en la elaboración de productos lácteos inmunológicamente activos frente a Campylobacter jejuni.

8. Empleo de una solución láctea, según la reivindicación 7, en la elaboración de productos lácteos pasteurizados inmunológicamente activos frente a Campylobacter jejuni.