METODO PARA EL DIAGNOSTICO DE LA FIBROSIS Y/O LA CIRROSIS HEPATICA ENPACIENTES INFECTADOS CON VHC O COINFECTADOS CON VIH Y VHC.
Método para el diagnóstico de la fibrosis y/o la cirrosis hepática en pacientes infectados con VHC o coinfectados con VIH y VHC.
La presente invención se refiere al campo del diagnóstico y pronóstico clínico de la fibrosis hepática. Más concretamente, la presente invención se refiere a métodos para la cuantificación conjunta de los marcadores MMP2, ASP y del número de plaquetas en pacientes infectados con VHC o bien en pacientes coinfectados con VIH y VHC para su uso en diferentes métodos para el diagnóstico de la presencia de fibrosis hepática o cirrosis hepática en dichos pacientes. La invención se refiere asimismo a un kit de diagnóstico para llevar dichos métodos. La invención también se refiere a un programa de ordenador capaz de ejecutar un algoritmo basado en la introducción de unos valores previamente determinados de MMP2, ASP y del número de plaquetas para inferir un diagnóstico con respecto a la presencia de fibrosis hepática en pacientes con VHC o coinfectados con VIH y VHC así como para determinar su estudio. Por último, la invención se refiere a un aparato electrónico que incorpora dicho programa de ordenador y es capaz de ejecutarlo
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200930115.
Solicitante: FUNDACION VALME.
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: SEVILLA.
Inventor/es: PINEDA VERGARA,JUAN A, MACIAS SANCHEZ,JUAN.
Fecha de Solicitud: 29 de Abril de 2009.
Fecha de Publicación: .
Fecha de Concesión: 2 de Noviembre de 2011.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/569K2
- G01N33/576F
- G01N33/86 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que interviene el tiempo de coagulación de la sangre.
Clasificación PCT:
- C12Q1/37 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › peptidasa o proteinasa.
- C12Q1/48 C12Q 1/00 […] › en los que interviene una transferasa.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
Fragmento de la descripción:
Método para el diagnóstico de la fibrosis y/o la cirrosis hepática en pacientes infectados con VHC o coinfectados con VIH y VHC.
Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo del diagnóstico y pronóstico clínico de la fibrosis hepática. Más concretamente, la presente invención se refiere a métodos para la cuantificación conjunta de los marcadores MMP2, ASP y del número de plaquetas en pacientes infectados con VHC o bien en pacientes coinfectados con VIH y VHC para su uso en diferentes métodos para el diagnóstico de la presencia de fibrosis hepática o cirrosis hepática en dichos pacientes. La invención se refiere asimismo a un kit de diagnóstico para llevar dichos métodos. La invención también se refiere a un programa de ordenador capaz de ejecutar un algoritmo basado en la introducción de unos valores previamente determinados de MMP2, ASP y del número de plaquetas para inferir un diagnóstico con respecto a la presencia de fibrosis hepática en pacientes con VHC o coinfectados con VIH y VHC así como para determinar su estadio. Por último, la invención se refiere a un aparato electrónico que incorpora dicho programa de ordenador y es capaz de ejecutarlo.
Antecedentes de la invención
La extensión de la fibrosis hepática tiene importantes implicaciones pronosticas así como sobre el manejo en la hepatitis crónica C. La fibrosis hepática se estadía siguiendo la clasificación de Scheuer según la cual existen 5 estadios de fibrosis hepática: Fibrosis ligera o ausente (hígado sin fibrosis o fibrosis portal sin septos lobares, F0 y F1), fibrosis moderada (fibrosis portal con pocos septos, F2), fibrosis grave (septos numerosos con distorsión de la arquitectura hepática, pero sin cirrosis, F3), y cirrosis (F4). Dependiendo del grado o estadio de fibrosis el pronóstico del paciente es mejor o peor, siendo el estadio de cirrosis (F4) el más grave.
El diagnóstico de fibrosis se ha basado tradicionalmente en la biopsia hepática. Sin embargo, esta técnica es invasiva, limitada por problemas de variabilidad (1, 2) y de difícil repetición periódica. Por estos motivos, se necesitan tests no invasivos que puedan reemplazar a la biopsia hepática. Entre ellos se encuentran los índices sanguíneos simples, basados en datos disponibles en la rutina clínica diaria, y la elastometría transitoria hepática, validados en pacientes con hepatitis crónica C y coinfección por VIH (3-6).
Los índices sanguíneos simples se implementan fácilmente y son baratos. Sin embargo, la precisión diagnóstica de estos índices es menor en los pacientes coinfectados por VIH/VHC que en los monoinfectados por VHC (3, 4). En concreto, el diagnóstico de cirrosis no se puede establecer con seguridad (3).
La elastometría transitoria hepática es una técnica prometedora en los pacientes coinfectados por VIH/VHC (5, 6). Sin embargo, la tasa de errores de clasificación utilizando un único punto de corte de rigidez hepática impide su aplicación para detectar a los pacientes coinfectados con ausencia de fibrosis o fibrosis mínima (5, 6). El empleo de dos puntos de corte para detectar y excluir la presencia de fibrosis significativa mejora la exactitud diagnóstica de la elastometría transitoria hepática en la coinfecación por VIH/VHC, pero deja un número sustancial de pacientes sin clasificar (7). Además, esta técnica no está disponible ampliamente en todos los centros sanitarios debido a su coste, y al hecho de que en algunos países no se encuentra aprobada como técnica de diagnóstico de la fibrosis.
La fibrosis es una respuesta universal para curar las lesiones tisulares que se acompaña de aumento de la fibrogénesis y la fibrolisis. Ambos procesos de acumulación y eliminación de fibrosis pueden producir elevaciones en los niveles circulantes de componentes de la matriz extracelular o de fragmentos de los mismos (8, 9). Se han elaborado tests que incluyen marcadores de la matriz extracelular en combinaciones diversas con otros datos para intentar predecir la presencia de fibrosis hepática en la infección por VHC (9-17). Sin embargo, hay poca información sobre el valor diagnóstico de estos biomarcadores séricos en los pacientes coinfectados por VIH/VHC (18, 19).
El diagnóstico no invasivo de la fibrosis en la infección por VIH y VHC necesita mejorar. Los índices séricos simples pueden evitar la realización de una biopsia hepática en hasta la mitad de los pacientes (20). Los tests séricos que incluyen biomarcadores de la matriz extracelular, como el índice SHASTA, o completamente basados en biomarcadores de fibrogénesis también dejan una proporción significativa de pacientes sin un diagnóstico definitivo (18, 19). La elastometría transitoria hepática es menos precisa para detectar a los pacientes con fibrosis mínima o ausente (5, 6).
Por tanto, existe una clara necesidad de desarrollar métodos alternativos de diagnostico de fibrosis hepática en pacientes con VHC que combinen una alta sensibilidad y especificidad con un alto valor predictivo.
Los autores de la presente invención tras el ensayo de diferentes marcadores han descubierto un método basado en el valor predictivo combinado de tres marcadores séricos como son la metaloproteinasa 2 (MMP2), la aspartato amino transferasa (AST) y el recuento de plaquetas. Estos tres marcadores sirven para establecer la presencia o ausencia de fibrosis hepática tanto en pacientes infectados con VHC, como coinfectados con VIH y VHC y también para establecer el grado de la misma, especialmente para establecer si dicho paciente padece cirrosis hepática.
Breve descripción de las figuras
Figura 1. A) Mediana de los niveles séricos de MMP-2 según el estadio de fibrosis hepática (p=0.009). B) Mediana de los niveles séricos de TIMP-1 según el estadio de fibrosis hepática (p=0.16). C) Mediana de los niveles séricos de AST según el estadio de fibrosis hepática (p=0.002). D) Mediana del recuento de plaquetas según el estadio de fibrosis hepática (p=0.004).
Figura 2. Curvas ROC del modelo para predecir la presencia y ausencia de fibrosis en pacientes infectados por VIH y VHC. Se muestran los puntos de corte de la puntuación obtenida del modelo elegidos para maximizar los valores predictivos negativo (VPN) y positivo (VPP). A) Curva ROC para la discriminación de la fibrosis significativa (F0-F1 vs. F2-F4), área bajo la curva ROC 0.74. B) Curva ROC para la discriminación de la cirrosis (F0-F3 vs. F4), área bajo la curva ROC 0.88.
Descripción de la invención
Un primer objeto de de la invención se refiere a un método de cuantificación para su uso en el diagnóstico de la fibrosis hepática en pacientes infectados con VHC o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende:
Por tanto, una realización particular del método de cuantificación antes mencionado comprende en una etapa a) determinar conjuntamente los valores de MMP2, AST y el recuento de plaquetas en pacientes infectados simplemente con VHC. La etapa b) en esta realización comprende comparar los valores obtenidos para los marcadores MMP2, AST y para el recuento de plaquetas en dicho paciente infectado solo con VHC frente a valores de referencia de pacientes infectados solo con VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1).
Otra realización particular y preferida del método de cuantificación antes mencionado comprende en la etapa a) determinar conjuntamente los valores de MMP2, AST y el recuento de plaquetas en pacientes coinfectados con VIH y VHC y en la etapa b) comparar los valores obtenidos para MMP2, AST y para el recuento de plaquetas en dicho paciente coinfectado con VIH y VHC frente a valores de referencia de pacientes coinfectados con VIH y VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1).
En ambas realizaciones, la cuantificación de los marcadores se puede llevar a cabo por cualquier método o técnica comúnmente conocida para un experto en la materia. Son especialmente preferidas las técnicas inmunoquímicas...
Reivindicaciones:
1. Método de cuantificación para su uso en el diagnóstico de la fibrosis hepática en pacientes infectados VHC o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende:
2. Método de acuerdo con la reivindicación 1 donde la determinación de MMP2, ASP y el recuento de plaquetas se lleva a cabo por medio de técnicas inmunoquímicas.
3. Método de acuerdo con la reivindicación 2 donde dichas técnicas inmunoquímicas comprenden radioinmunoensayo, ELISA, inmunofluorescencia, western blot o citometría de flujo.
4. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la muestra es una muestra de sangre, suero o plasma.
5. Método de diagnóstico de la fibrosis hepática en pacientes infectados VHC o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende:
caracterizado porque una variación conjunta significativa de todos y cada uno de los valores de MMP2, AST y del recuento de plaquetas frente a dichos valores de referencia en pacientes infectados con VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1) o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1), implica la presencia de fibrosis hepática en dicho paciente infectado con VHC o coinfectado con VIH y VHC.
6. Método de acuerdo con la reivindicación 5 donde dicha variación conjunta significativa de todos y cada uno de los valores de MMP2, AST y del recuento de plaquetas frente a dichos valores de referencia en pacientes infectados con VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1) o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que no padecen fibrosis hepática o padecen fibrosis hepática ligera (F0 o F1), resultando en la presencia de fibrosis hepática del paciente infectado con VHC o coinfectado con VIH y VHC, comprende un aumento en los valores de MMP2 y AST y el descenso en el recuento de plaquetas en una muestra.
7. Método de cuantificación para su uso en el diagnóstico de cirrosis hepática en pacientes infectados con VHC o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende:
8. Método de acuerdo con la reivindicación 7 donde la determinación de MMP2, AST y plaquetas se lleva a cabo por medio de de técnicas inmunoquímicas.
9. Método de acuerdo con al reivindicación 8 donde dichas técnicas inmunoquímicas comprenden radioinmunoensayo, ELISA, inmunofluorescencia, western blot o citometría de flujo.
10. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-9 donde la muestra es una muestra de sangre, suero o plasma.
11. Método de diagnóstico de la cirrosis hepática en pacientes infectados VHC o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende:
caracterizado porque una variación conjunta significativa de todos y cada uno de los valores de MMP2, AST y del recuento de plaquetas frente a dichos valores de referencia en pacientes infectados con VHC que padecen como máximo una fibrosis hepática grave (F0, F1, F2 o F3) o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que padecen como máximo una fibrosis hepática grave (F0, F1, F2 o F3) implica que dicho paciente infectado con VHC o coinfectado con VIH y VHC padece cirrosis hepática.
12. Método de acuerdo con la reivindicación 11 donde dicha variación conjunta significativa de todos y cada uno de los valores de MMP2, AST y del recuento de plaquetas frente a dichos valores de referencia en pacientes infectados con VHC que padecen como máximo una fibrosis hepática grave (F0, F1, F2 o F3) o en pacientes coinfectados con VIH y VHC que padecen como máximo una fibrosis hepática grave (F0, F1, F2 o F3), resultando en la presencia de cirrosis hepática del paciente infectado con VHC o del paciente coinfectado con VIH y VHC, comprende el aumento en los valores de MMP2 y AST y el descenso en el recuento de plaquetas en una muestra.
13. Kit de diagnóstico de fibrosis y/o cirrosis hepática en pacientes coinfectados con VIH y VHC que comprende un anticuerpo contra MMP-2 y los medios para cuantificar AST y para el recuento de plaquetas de una muestra de un paciente de acuerdo con cualquiera de los métodos de las reivindicaciones 1-4 y 7-10.
14. Kit de diagnóstico de acuerdo con la reivindicación 13 caracterizado porque comprende un anticuerpo contra MMP-2 y los medios para cuantificar AST y para el recuento de plaquetas de una muestra de sangre suero o plasma.
15. Un programa de ordenador que comprende instrucciones para comparar los valores de MMP2, AST y el recuento de plaquetas previamente determinados en un paciente infectado con VHC o coinfectado con VIH y VHC
para inferir un diagnóstico estadísticamente significativo en dichos pacientes con respecto a la presencia o ausencia de fibrosis hepática así como el grado de la misma, cuando se ejecuta en un ordenador.
16. Un soporte físico que comprende almacenado un programa de ordenador de acuerdo con la reivindicación 15.
17. Un aparato electrónico que comprende un soporte físico de acuerdo con la reivindicación 16 incorporado y que es capaz de ejecutar un programa de ordenador de acuerdo con la reivindicación 15.
Patentes similares o relacionadas:
Procedimiento de prueba de plaquetas en sangre, del 15 de Julio de 2020, de FUJIMORI KOGYO CO., LTD: Procedimiento para someter a prueba la agregación plaquetaria, que comprende someter sangre anticoagulada a un tratamiento débil de activación […]
Composición para la determinación de las características de coagulación de un líquido de ensayo, del 6 de Mayo de 2020, de C A CASYSO AG: Una composición de diagnóstico para su uso en el análisis viscoelástico de un líquido de ensayo seleccionado de entre sangre entera o plasma sanguíneo, que comprende: […]
Concentración de células raras, del 23 de Octubre de 2019, de SIEMENS HEALTHCARE DIAGNOSTICS INC.: Método para aumentar una razón de células raras con respecto a células no raras en una muestra de sangre que se sospecha que contiene células raras y células no raras, comprendiendo […]
Procedimiento de detección de coagulación intravascular diseminada o coagulación intravascular diseminada infecciosa, del 2 de Octubre de 2019, de LSI Medience Corporation: Un procedimiento in vitro de detección de coagulación intravascular diseminada, que comprende medir sCD14-ST en una muestra.
Interfaz y procedimientos de un interpretador de resultados de un sistema de examen de sangre, del 18 de Septiembre de 2019, de C A Casyso GmbH: Un procedimiento para proporcionar un producto de interpretación de resultados, que comprende: recibir, en una máquina analizadora de sangre […]
Ensayo para determinar anticoagulantes en sangre o plasma sanguíneo, del 31 de Julio de 2019, de Ravmarker AB: Un ensayo para determinar los anticoagulantes en una muestra de sangre o de plasma sanguíneo, en el que los anticoagulantes determinados en dicho ensayo son inhibidores […]
Dispositivo que incluye componentes sanguíneos para separar moléculas o partículas diana de muestras, del 24 de Julio de 2019, de Debiopharm International S.A: Dispositivo de recogida de muestras para separar agentes infecciosos, toxinas, ácidos nucleicos y/o proteínas de una muestra que comprende: (i) un código […]
Reactivo de tiempo de protrombina que contiene un quelante de hierro, del 6 de Junio de 2019, de SIEMENS HEALTHCARE DIAGNOSTICS PRODUCTS GMBH: Reactivo de tiempo de protrombina que contiene proteína de factor tisular y fosfolípidos, caracterizado porque el reactivo contiene además al menos un quelante de hierro, […]