METODO DE HIDRATACION SUSTRACTIVA.
Un método para realizar una hibridación sustractiva utilizando una muestra de verificador y una muestra de director para determinar la presencia de una diferencia en la secuencia de un ácido nucleico entre la muestra de verificador y la muestra de director que comprende:
(a) aislar por separado el ácido nucleico total de la muestra de verificador y la muestra de director, y generar ADNc/ADN de doble hebra a partir de dicho ácido nucleico total de dicha muestra de verificador y dicha muestra de director; (b) digerir dicho ADNc/ADN de doble hebra generado a partir de la muestra de verificador y dicha muestra de director de la etapa (a) con una endonucleasa de restricción con el fin de producir un grupo de fragmentos de restricción para cada muestra; (c) ligar dichos fragmentos de restricción del director y del verificador de cada grupo de la etapa (b) a un grupo de adaptadores oligonucleotídicos 1, y amplificar los productos resultantes con cebadores selectivos de manera que un subgrupo de dichos fragmentos de restricción de la etapa (b) sea amplificado; (d) separar dichas secuencias cebadoras selectivas (primera ronda) o secuencias adaptadoras (rondas siguientes) mediante digestión con endonucleasa de restricción con el fin de producir amplicones de verificador y director, ligar los extremos 5' de dichos amplicones de director y verificador a un grupo de adaptadores oligonucleotídicos 2 para formar un control director y un verificador, mezclar el control director y el verificador por separado con un exceso de amplicón de director no ligado cada uno, desnaturalizar dichas mezclas resultantes, y permitir que las hebras de ácido nucleico desnaturalizado de cada mezcla hibriden; (e) rellenar los extremos 3' del director/verificador rehibridado y del control director/director rehibridado utilizando una ADN polimerasa termoestable y amplificar las secuencias resultantes; (f) separar el ADN de hebra sencilla restante mediante digestión con una ADN nucleasa de hebra sencilla y amplificar; etapas (d) a (f), donde las etapas (d) a (f) utilizan un grupo de adaptadores oligonucleotídicos no utilizado en ninguna ronda de RDA previa, donde una ronda consta del funcionamiento de las etapas (d) a (f), y utilizan como director, para cada nueva ronda de RDA, el producto escindido con la endonucleasa de restricción de la sustracción de control director/director de las etapas inmediatamente precedentes (d) a (f).
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: ABBOTT LABORATORIES.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: D377/AP6D 100 ABBOTT PARK ROAD,ABBOTT PARK, IL 60064-6050.
Inventor/es: BIRKENMEYER, LARRY, G., LEARY, THOMAS, P., MUERHOFF, A., SCOTT, DESAI, SURESH, M., MUSHAHWAR, ISA, K.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 2 de Agosto de 2001.
Fecha Concesión Europea: 27 de Septiembre de 2006.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Clasificación PCT:
- C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Finlandia, Chipre, Oficina Europea de Patentes.
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