Medio de cultivo selectivo para levaduras con actividad beta-Liasa, métodos de elaboración y uso.

Medio de cultivo selectivo para levaduras con actividad β-liasa, métodos de elaboración y uso.

La presente invención se refiere a un medio de cultivo para seleccionar y aislar levaduras capaces de incrementar la producción de aromas tiólicos en las fermentaciones vínicas en base a su actividad β-liasa. El medio de cultivo de la invención incluye

, como única fuente de nitrógeno, un compuesto de cisteína-S-conjugado. Las levaduras que tienen actividad β-liasa liberan NH3 a partir de dicho compuesto de cisteína-S-conjugado y, de esta manera, obtienen nitrógeno para crecer.

La invención también incluye un método para elaborar el medio de cultivo de la invención así como dos métodos para utilizar el medio de cultivo:

- en forma sólida para la selección y aislamiento de levaduras con actividad β-liasa,

- en forma líquida para la cuantificación de la actividad β-liasa de levaduras.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201500195.

Solicitante: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: SANTOS DE LA SEN,Antonio, MARQUINA DÍAZ,Domingo, BELDA AGUILAR,Ignacio, NAVASCUÉS LÓPEZ-CORDÓN,Eva, ALONSO CONDE,Rafael Alejandro, RUIZ RUIZ,Javier.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/68 (en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/16 (Levaduras; Sus medios de cultivo)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones... > C12N9/88 (Liasas (4.))
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Medio de cultivo selectivo para levaduras con actividad beta-Liasa, métodos de elaboración y uso.

Opinión escrita:

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 27.11.2015

Declaración
Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Reivindicaciones
Reivindicaciones1-30 NO
Actividad inventiva (Art. 8.1 LP 11/1986) Reivindicaciones
Reivindicaciones1-30 NO


Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986) .

Base de la Opinión.-

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Consideraciones:

La invención consiste en un medio de cultivo específico para la selección de levaduras productoras de ß-liasas activas sobre Sconjugados de cisteína. El medio de cultivo está formado por una base nutritiva sin aporte de nitrógeno, un compuesto Sconjugado de cisteína y un cofactor para la enzima ß-liasa.

1. Documentos considerados.-

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

Documento Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
D01 DifcoTM Yeast Carbon Base. Cat. No. 239110. Recuperado de Internet [26.11.2015], <http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/YeastCarbonBase_239210.pdf>
D02 COOPER, A.J.L. et al. Cysteine S-conjugate ß-lyases. AMINO ACIDS. Febrero 2006, Vol. 30, Nº 1, páginas 1-15.
D03 HOWELL, K.S. et al. Genetic determinants of volatile-thiol release by Saccharomyces cerevisiae during wine fermentation. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Septiembre 2005, Vol. 71, Nº 9, páginas 5420-5426.
D04 HOLT, S. et al. Engineering Saccharomyces cerevisiae to release 3-mercaptohexan-1-ol during fermentation through overexpression of an S. cerevisiae gene, STR3, for improvement of wine aroma. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Junio 2011, Vol. 77, Nº 11, páginas 3626-3632.
D05 TOMINAGA, T. et al. Development of a Method for Analyzing the Volatile Thiols Involved in the Characteristic Aroma of Wines Made from Vitis vinifera L. Cv. Sauvignon Blanc. J. AGRIC. FOOD. CHEM. Marzo 1998. Vol. 46, Nº 3, páginas 1044-1048.

El documento D01 , es la información sobre la composición y propiedades del medio Yeast Carbon Base de la casa DifcoTM incluida en su página web. El documento D02 , es una revisión sobre las enzimas ?S-conjugados de cisteína ß-liasas?. El documento D03 , identifica los determinantes genéticos de la ß-liasa de Saccharomyces cerevisiae, implicados en la formación del tiol volátil 4-mercapto-4-metilpentan-2-ona (4MMP) durante la fermentación del vino. El documento D04 , describe la purificación de una enzima ß-liasa de Saccharomyces cerevisiae implicada en la producción de los tioles aromáticos 3-mercaptohexan-1-ol (3MH) y 4-mercapto-4-metilpentan-2-ona (4MMP) , la sobreexpresión del gen que la codifica y el interés de la sobreexpresión para aumentar el aroma del vino. El documento D05 , describe la aplicación de la espectroscopía de masas para analizar tioles volátiles relacionados con el aroma de los vinos

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración

NOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVA Reivindicaciones 1-29 La invención está relacionada con un medio de cultivo específico para seleccionar cepas de levaduras productoras de ß-liasas de S-conjugados de cisteína. Las reivindicaciones 1-29, definen el medio de cultivo de acuerdo a sus componentes de una manera muy general. El medio está integrado por: a) una base nutritiva para levaduras sin aporte de nitrógeno, b) un compuesto de cisteína-S-conjugado y c) un cofactor para la enzima ß-liasa. De acuerdo a la redacción de las reivindicaciones se hacen las siguientes consideraciones.

1) El medio está integrado por una base nutritiva para levaduras, sin aporte de nitrógeno. Esta base nutritiva es una composición de la que no se aportan ni los componentes ni las proporciones en las que los cuales se encuentran en la misma. Estos datos tampoco se incluyen en la descripción. La base nutritiva no tiene características técnicas por lo que las reivindicaciones 1-29, no tienen características técnicas y soporte en la descripción.

2) En los ejemplos presentados en la descripción, se utiliza como base nutritiva para levaduras sin aporte de nitrógeno, el producto comercial Yeast Carbon Base de la casa DIFCOTM (ver D01 ) que está protegida por derechos de marca registrada. Un producto registrado, no puede formar parte de una composición que se pretende patentar.

Las reivindicaciones 1-29, no cumplen los requisitos de novedad y actividad inventiva de los Art. 6 y 8 de la LP.

Reivindicación 30

La aplicación de la espectroscopía de masas para cuantificar los tioles volátiles producidos durante la fermentación del vino, está ampliamente descrita en el estado de la técnica y un ejemplo es el documento D05 . La reivindicación 30, no cumple los requisitos de novedad y actividad inventiva de los Art. 6 y 8 de la LP.


 


Informe sobre el Estado de la Técnica:

Clasificación:
C12N1/16 (2006.01)
C12N9/88 (2006.01)
G01N33/68 (2006.01)


El presente informe ha sido realizado para las siguientes reivindicaciones: TODAS
Fecha de realización del informe: 27.11.2015
Examinador: M. Novoa Sanjurjo

CategoríaDocumentos citadosReivindicaciones afectadas
X DifcoTM Yeast Carbon Base. Cat. No. 239110. Recuperado de Internet [26.11.2015], <http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/YeastCarbonBase_239210.pdf> todo el documento. 1-30
X COOPER, A.J.L. et al. "Cysteine S-conjugate ß-lyases". AMINO ACIDS. Febrero 2006, Vol. 30, Nº 1, páginas 1-15, todo el documento. 1-30
X HOWELL, K.S. et al. "Genetic determinants of volatile-thiol release by Saccharomyces cerevisiae during wine fermentation". APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Septiembre 2005, Vol. 71, Nº 9, páginas 5420-5426, todo el documento. 1-30
X HOLT, S. et al. "Engineering Saccharomyces cerevisiae to release 3-mercaptohexan-1-ol during fermentation through overexpression of an S. cerevisiae gene, STR3, for improvement of wine aroma". APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Junio 2011, Vol. 77, Nº 11, páginas 3626-3632, todo el documento. 1-30
X TOMINAGA, T. et al. "Development of a Method for Analyzing the Volatile Thiols Involved in the Characteristic Aroma of Wines Made from Vitis vinifera L. Cv. Sauvignon Blanc". J. AGRIC. FOOD. CHEM. Marzo 1998. Vol. 46, Nº 3, páginas 1044-1048, todo el documento. 30


Categoría de los documentos citados
X: de particular relevancia O: referido a divulgación no escrita
Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud
A: refleja el estado de la técnica E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud

CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)

C12N, G01N

Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)

INVENES, EPODOC, BIOSIS, REGISTRY, HCAPLUS, GOOGLE


 


Texto extraído del PDF original:

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS 21 N.º solicitud: 201500195 ESPAÑA 22 Fecha de presentación de la solicitud: 16.03.2015 32 Fecha de prioridad: INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA 51 Int. Cl. : Ver Hoja Adicional DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría

56 Documentos citados

Reivindicaciones

afectadas

X DifcoTM Yeast Carbon Base. Cat. No. 239110. Recuperado de Internet [26.11.2015], 1-30 <http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/YeastCarbonBase_239210.pdf> todo el documento.

X COOPER, A.J.L. et al. “Cysteine S-conjugate β-lyases”. AMINO ACIDS. Febrero 2006, Vol. 30, 1-30 Nº 1, páginas 1-15, todo el documento.

X HOWELL, K.S. et al. “Genetic determinants of volatile-thiol release by Saccharomyces cerevisiae

1-30 during wine fermentation”. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Septiembre 2005, Vol. 71, Nº 9, páginas 5420-5426, todo el documento.

X HOLT, S. et al. “Engineering Saccharomyces cerevisiae to release 3-mercaptohexan-1-ol during 1-30 fermentation through overexpression of an S. cerevisiae gene, STR3, for improvement of wine aroma”. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Junio 2011, Vol. 77, Nº 11, páginas 3626-3632, todo el documento.

X TOMINAGA, T. et al. “Development of a Method for Analyzing the Volatile Thiols Involved in the Characteristic Aroma of Wines Made from Vitis vinifera L. Cv. Sauvignon Blanc”. J. AGRIC.

FOOD. CHEM. Marzo 1998. Vol. 46, Nº 3, páginas 1044-1048, todo el documento.

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia O: referido a divulgación no escrita Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación misma categoría de la solicitud A: refleja el estado de la técnica E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud

El presente informe ha sido realizado

para todas las reivindicaciones 

para las reivindicaciones nº:

Fecha de realización del informe

Examinador

Página

27.11.2015 M. Novoa Sanjurjo 1/4 INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA Nº de solicitud: 201500195 CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUD

C12N1/16 (2006.01)

C12N9/88 (2006.01)

G01N33/68 (2006.01) Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) C12N, G01N Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, BIOSIS, REGISTRY, HCAPLUS, GOOGLE Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201500195

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 27.11.2015

Declaración

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)

Reivindicaciones

SI

Reivindicaciones 1-30

NO

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)

Reivindicaciones

SI

Reivindicaciones 1-30

NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986). Base de la Opinión.- La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica. Consideraciones: La invención consiste en un medio de cultivo específico para la selección de levaduras productoras de β-liasas activas sobre S- conjugados de cisteína. El medio de cultivo está formado por una base nutritiva sin aporte de nitrógeno, un compuesto S- conjugado de cisteína y un cofactor para la enzima β-liasa.

Informe del Estado de la Técnica Página 3/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201500195

1. Documentos considerados.- A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

Fecha

Documento

Número Publicación o Identificación

Publicación

D01 DifcoTM Yeast Carbon Base. Cat. No. 239110. Recuperado de Internet [26.11.2015], <http://www.mibius.de/out/oxbaseshop/html/0/images/wysiwigpro/YeastCarbonBase_239210.pdf> D02 COOPER, A.J.L. et al. “Cysteine S-conjugate β-lyases”. AMINO ACIDS. Febrero 2006, Vol. 30, Nº 1, páginas 1-15.

D03 HOWELL, K.S. et al. “Genetic determinants of volatile-thiol release by Saccharomyces cerevisiae

during wine fermentation”. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Septiembre 2005, Vol. 71, Nº 9, páginas 5420-5426.

D04 HOLT, S. et al. “Engineering Saccharomyces cerevisiae to release 3-mercaptohexan-1-ol during fermentation through overexpression of an S. cerevisiae gene, STR3, for improvement of wine aroma”. APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY. Junio 2011, Vol. 77, Nº 11, páginas 3626-3632.

D05 TOMINAGA, T. et al. “Development of a Method for Analyzing the Volatile Thiols Involved in the Characteristic Aroma of Wines Made from Vitis vinifera L. Cv. Sauvignon Blanc”. J. AGRIC. FOOD. CHEM. Marzo 1998. Vol. 46, Nº 3, páginas 1044-1048.

El documento D01, es la información sobre la composición y propiedades del medio “Yeast Carbon Base” de la casa DifcoTM incluida en su página web. El documento D02, es una revisión sobre las enzimas “S-conjugados de cisteína β-liasas“. El documento D03, identifica los determinantes genéticos de la β-liasa de Saccharomyces cerevisiae, implicados en la formación del tiol volátil 4-mercapto-4-metilpentan-2-ona (4MMP) durante la fermentación del vino. El documento D04, describe la purificación de una enzima β-liasa de Saccharomyces cerevisiae implicada en la producción de los tioles aromáticos 3-mercaptohexan-1-ol (3MH) y 4-mercapto-4-metilpentan-2-ona (4MMP), la sobreexpresión del gen que la codifica y el interés de la sobreexpresión para aumentar el aroma del vino. El documento D05, describe la aplicación de la espectroscopía de masas para analizar tioles volátiles relacionados con el aroma de los vinos 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración NOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVA Reivindicaciones 1-29 La invención está relacionada con un medio de cultivo específico para seleccionar cepas de levaduras productoras de β-liasas de S-conjugados de cisteína. Las reivindicaciones 1-29, definen el medio de cultivo de acuerdo a sus componentes de una manera muy general. El medio está integrado por: a) una base nutritiva para levaduras sin aporte de nitrógeno, b) un compuesto de cisteína-S-conjugado y c) un cofactor para la enzima β-liasa. De acuerdo a la redacción de las reivindicaciones se hacen las siguientes consideraciones. 1) El medio está integrado por una base nutritiva para levaduras, sin aporte de nitrógeno. Esta base nutritiva es una composición de la que no se aportan ni los componentes ni las proporciones en las que los cuales se encuentran en la misma. Estos datos tampoco se incluyen en la descripción. La base nutritiva no tiene características técnicas por lo que las reivindicaciones 1-29, no tienen características técnicas y soporte en la descripción. 2) En los ejemplos presentados en la descripción, se utiliza como base nutritiva para levaduras sin aporte de nitrógeno, el producto comercial “Yeast Carbon Base” de la casa DIFCOTM (ver D01) que está protegida por derechos de marca registrada. Un producto registrado, no puede formar parte de una composición que se pretende patentar. Las reivindicaciones 1-29, no cumplen los requisitos de novedad y actividad inventiva de los Art. 6 y 8 de la LP. Reivindicación 30 La aplicación de la espectroscopía de masas para cuantificar los tioles volátiles producidos durante la fermentación del vino, está ampliamente descrita en el estado de la técnica y un ejemplo es el documento D05. La reivindicación 30, no cumple los requisitos de novedad y actividad inventiva de los Art. 6 y 8 de la LP.

Informe del Estado de la Técnica Página 4/4