LATE-PCR.

Procedimiento de amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) no simétrica que comprende termociclar una mezcla de reacción de PCR que contiene una secuencia diana de amplificación de ácido desoxirribonucleico

(ADN), un par de cebadores para PCR, dNTP y una polimerasa termoestable de manera repetida a través de las etapas de PCR de fundido de la cadena, apareamiento de cebador y extensión de cebador, en el que, al principio de la amplificación (a) la mezcla de reacción contiene hasta 1.000.000 de copias de la secuencia diana de amplificación, (b) el par de cebadores para PCR comprende un cebador limitativo y un cebador en exceso, estando presente el cebador limitativo en una concentración de hasta 200 nM y estando presente el cebador en exceso en una concentración por lo menos cinco veces superior que el cebador limitativo, (c) la temperatura de fusión ajustada a la concentración, inicial del cebador limitativo es igual a o superior a la temperatura de fusión ajustada a la concentración, inicial del cebador en exceso, (d) si el cebador limitativo no es totalmente complementario a dicha secuencia diana, la temperatura de fusión ajustada a la concentración de esa parte del cebador limitativo que hibrida con dicha secuencia diana no es superior a 5ºC por debajo de la temperatura de fusión ajustada a la concentración del cebador en exceso, (e) la temperatura de fusión del amplicón producido mediante la extensión del cebador en exceso supera la temperatura de fusión ajustada a la concentración inicial del cebador en exceso en no más de 18ºC, y (f) el termociclado se repite un número de veces suficiente para incluir múltiples ciclos de amplificación lineal usando el cebador en exceso tras el agotamiento del cebador limitativo.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: BRANDEIS UNIVERSITY.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 415 SOUTH STREET,WALTHAM, MA 02254-9110.

Inventor/es: WANGH, LAWRENCE J., PIERCE,KENNETH, HARTSHORN,CRISTINA, RICE,JOHN, SANCHEZ,J.,AQUILES.

Fecha de Publicación: .

Fecha Concesión Europea: 7 de Mayo de 2008.

Clasificación PCT:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS;... > C07H19/00 (Compuestos que contienen un heterociclo que comparten un heteroátomo del ciclo con un radical sacárido; Nucleósidos; Mononucleótidos; Sus anhidro-derivados)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS;... > Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido... > C07H21/02 (con ribosilo como radical sacárido)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS;... > Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido... > C07H21/04 (con desoxirribosilo como radical sacárido)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN... > Preparación de compuestos que contienen radicales... > C12P19/34 (Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos)
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LATE-PCR.