Kit de radiomarcaje y ensayo de unión.

Un método para radiomarcar un anticuerpo conjugado con quelante con 111In para administración a un paciente que comprende:

(i) mezclar el anticuerpo conjugado con quelante con una disolución que contiene 111In para formar una mezcla;

(ii) incubar la mezcla a una temperatura apropiada durante aproximadamente 30 minutos para producir un anticuerpo radiomarcado, en el que el anticuerpo radiomarcado tiene más del 95% de radioincorporación, y

(iii) diluir el anticuerpo radiomarcado en un tampón de formulación hasta una concentración apropiada para administración al paciente, de manera que pueda administrarse directamente al paciente sin purificación adicional de 111In no incorporado, en el que el tampón de formulación comprende disolución salina tamponada con fosfato o disolución salina fisiológica, un radioprotector y quelante no conjugado.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E09158514.

Solicitante: BIOGEN IDEC, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 14 CAMBRIDGE CENTER CAMBRIDGE MA 02142 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: LEONARD, JOHN E., CHINN,PAUL, MORENA,RONALD, LABARRE,MICHAEL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/60 (en los que intervienen sustancias marcadas radioactivas)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/534 (con un marcador radiactivo)

PDF original: ES-2526723_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Kit de radiomarcaje y ensayo de unión Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención

La presente descripción se refiere a ensayos de unión de anticuerpo y kits de radiomarcaje, preparaciones de células liofilizadas, reactivos y protocolos para ensayar la eficacia clínica de anticuerpos terapéuticos para el tratamiento/formación de imágenes de tumores y células tumorales. Específicamente, los kits de la presente descripción se usan para preparar y evaluar conjugados de anticuerpo radiomarcados que se usarán para el tratamiento y formación de imágenes de tumores de linfoma de células B tomando como diana el antígeno de la superficie de las células B, BP35 ("CD20").

2. Antecedentes tecnológicos

Todas las publicaciones y solicitudes de patente en la presente memoria se incorporan por referencia en el mismo grado que si se indicara específicamente e individualmente que cada publicación o solicitud de patente individual se incorpora por referencia.

El sistema inmune de los vertebrados (por ejemplo, primates, que incluyen seres humanos, simios, monos, etc.) consiste en varios órganos y tipos celulares que han evolucionado para: reconocer exactamente y específicamente microorganismos extraños ("antígeno") que invaden el huésped vertebrado; se unen específicamente a dichos microorganismos extraños; y, eliminan/destruyen dichos microorganismos extraños.

Los linfocitos, así como otros tipos de células, son críticos para el sistema inmune. Los linfocitos se producen en el timo, bazo y médula ósea (adulto) y representan aproximadamente el 30% de las células sanguíneas blancas totales presentes en el sistema circulatorio de los seres humanos (adulto).

Existen dos sub-poblaciones principales de linfocitos: células T y células B. Las células T son responsables de la inmunidad mediada por células, mientras las células B son responsables de la producción de anticuerpos (inmunidad humoral). Sin embargo, Las células T y las células B pueden considerarse como interdependientes - en una respuesta inmune típica, las células T se activan cuando el receptor de las células T se une a fragmentos de un antígeno que están unidos a glicoproteínas del complejo mayor de histocompatibilidad ("MHC") en la superficie de una célula presentadora de antígeno; dicha activación causa la liberación de mediadores biológicos ("interleuquinas") que, en esencia, estimulan a las células B para diferenciarse y producir anticuerpo ("inmunoglobulinas") frente al antígeno.

Cada célula B en el huésped expresa un anticuerpo diferente en su superficie - así una célula B expresará anticuerpo específico para un antígeno, mientras otra célula B expresará anticuerpo específico para un antígeno diferente. De acuerdo con esto, las células B son bastante diversas, y esta diversidad es crítica para el sistema inmune. En los seres humanos, cada célula B puede producir un número enorme de moléculas de anticuerpo (es decir, aproximadamente 107 a 108). Dicha producción de anticuerpos cesa lo más típicamente (o disminuye su stand al mente) cuando el antígeno extraño se ha neutralizado. Ocasionalmente, sin embargo, la proliferación de una célula B particular continuará sin cesar; dicha proliferación puede resultar en un cáncer referido como "linfoma de células B".

Las células T y las células B comprenden ambas proteínas de superficie celular que pueden utilizarse como "marcadores" para la diferenciación e identificación. Un marcador de célula B humano como éste es el antígeno de diferenciación restringido para linfocitos B humanos, Bp35, referido como "CD20". CD20 se expresa durante el desarrollo temprano de células pre-B y permanece hasta la diferenciación de las células plasmáticas. Específicamente, la molécula CD20 puede regular una etapa en el proceso de activación que se requiere para el inicio del ciclo celular y la diferenciación y se expresa habitualmente a niveles muy altos en células B neoplásicas ("tumorales"). CD20, por definición, está presente tanto en células B "normales" así como células B "malignas", es decir, aquellas células B cuya proliferación sin cesar pueden dar lugar a linfoma de células B. Así, el antígeno de superficie CD20 tiene el potencial de servir como un candidato para "tomar como diana" los linfomas de células B.

En esencia, dicho direccionamiento puede generalizarse como sigue: anticuerpos específicos para el antígeno de superficie CD20 de las células B se Inyectan, por ejemplo, en un paciente. Estos anticuerpos antl-CD20 se unen específicamente al antígeno de la superficie celular CD20 de (ostensiblemente) células B tanto normales como malignas; el anticuerpo anti-CD20 unido al antígeno de superficie CD20 puede dar lugar a la destrucción y depleción de células B neoplásicas. Además, pueden conjugarse agentes químicos o mareajes radiactivos, que tienen el potencial para destruir el tumor, al anticuerpo anti-CD20 de manera que el agente se "administra" específicamente, por ejemplo, a las células B neoplásicas. Independientemente de la estrategia, un objetivo primario es destruir el tumor: la estrategia específica puede determinarse por el anticuerpo antl-CD20 particular que se utiliza y, así, las estrategias disponibles para tomar como diana el antígeno CD20 pueden vahar considerablemente.

Por ejemplo, se han indicado esfuerzos para dicho direccionamiento hacia el antígeno de superficie CD20. El anticuerpo monoclonal murlno (de ratón) 1F5 (un anticuerpo antl-CD20) se administró según se Indica por Infusión Intravenosa continua a pacientes con linfoma de células B. Se Indicó que se requerían niveles extremadamente altos (>2 gramos) de 1F5 para depleclonar células tumorales circulantes y se describió que los resultados eran "transitorios". Press et al., "Monoclonal Antlbody 1F5 (Antl-CD20) Serotherapy of Human B-Cell Lymphomas", Blood 69/2: 584-591 (1987).

Un problema potencial con esta estrategia es que los anticuerpos monoclonales no humanos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales murinos) carecen típicamente de funcionalidad efectora humana, es decir, son incapaces, entre otros, de mediar la llsls dependiente de complemento o Usar células diana humanas mediante toxicidad celular dependiente de anticuerpo o fagocitosis mediada por receptor Fe. Además, los anticuerpos monoclonales no humanos pueden ser reconocidos por el huésped humano como una proteína extraña; por lo tanto, las Inyecciones repetidas de dichos anticuerpos extraños pueden dar lugar a la Inducción de respuestas inmunes que dan lugar a reacciones de hlpersenslbllldad dañinas. Para los anticuerpos monoclonales basados en murinos, esto se refiere frecuentemente como una respuesta Humana Antl-Antlcuerpo de Ratón, o respuesta "HAMA". Además, estos anticuerpos "extraños" pueden ser atacados por el sistema inmune del huésped de manera que, en efecto, son neutralizados antes de que alcancen su sitio diana.

Los linfocitos y las células de linfoma son sensibles de manera inherente a radioterapia. Por lo tanto, las malignidades de células B son dianas atractivas para la radioinmunoterapia (RIT) por varias razones: la emisión local de radiación ionizante de anticuerpos radiomarcados puede matar a las células con o sin el antígeno diana (por ejemplo, CD20) muy cerca del anticuerpo unido al antígeno; la radiación penetrante, es decir, emisores beta, pueden obviar el problema del acceso limitado al anticuerpo en tumores voluminosos o poli vascularizados; y, la cantidad total de anticuerpo requerida puede reducirse. El radionúclido emite partículas radiactivas que pueden dañar el ADN celular hasta el punto en el que los mecanismos de reparación celular son incapaces de permitir que la célula continúe viviendo; por lo tanto, si las células diana son... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para radiomarcar un anticuerpo conjugado con quelante con 111ln para administración a un paciente que comprende:

(i) mezclar el anticuerpo conjugado con quelante con una disolución que contiene 111ln para formar una mezcla;

(ii) incubar la mezcla a una temperatura apropiada durante aproximadamente 30 minutos para producir un anticuerpo radiomarcado, en el que el anticuerpo radlomarcado tiene más del 95% de radlolncorporaclón, y

(iii) diluir el anticuerpo radiomarcado en un tampón de formulación hasta una concentración apropiada para administración al paciente, de manera que pueda administrarse directamente al paciente sin purificación adicional de 111ln no incorporado, en el que el tampón de formulación comprende disolución salina tamponada con fosfato o disolución salina fisiológica, un radioprotector y quelante no conjugado.

2. El método según la reivindicación 1 en el que el anticuerpo conjugado con quelante comprende un anticuerpo anti- CD20.

3. El método según la reivindicación 2 en el que el anticuerpo anti-CD20 es 2B8-MX-DTPA.

4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que la disolución que contiene 111ln se ajusta a un pH de aproximadamente 3 a 5 antes de mezclarla con el anticuerpo conjugado con quelante.

5. El método según la reivindicación 4 en el que el pH se ajusta con una disolución de acetato sódico con bajo contenido en metal.

6. El método según la reivindicación 5 en el que la disolución de acetato sódico está a una concentración de aproximadamente 10 a 1.000 mM.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el que la cantidad de volumen de 111ln usada es aproximadamente 4 a 6 mCi dividida por la concentración de radiactividad en el momento del mareaje.

8. El método según la reivindicación 7 en el que la cantidad de volumen de 111ln usada es 5,5 mCi dividida por la concentración de radiactividad en el momento del mareaje.

9. El método según la reivindicación 8 en el que aproximadamente 1 mi de anticuerpo conjugado con MX-DTPA a una concentración de aproximadamente 0,5 a 30 mg/ml se mezcla con la disolución que contiene 111ln.

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en el que el tampón de formulación se añade en una cantidad necesaria para conseguir un volumen final total de 10 mi a 50 mi.

11. El método según la reivindicación 10 en el que el radioprotector es albúmina de suero humano (HSA), ascorbato, ácido ascórblco, fenol, un sulflto, glutatión, cisterna, ácido gentísico, ácido nicotínico, palmitato de ascorbilo, HOP(:0)H2, glicerol, sulfoxilato sódico de formaldehído, Na2S2Ü5, Na2S2Ü3, o SO2.

12. El método según la reivindicación 11 en el que el radioprotector es HSA.

13. El método según la reivindicación 12 en el que la HSA está a una concentración de aproximadamente 1 a 25% (p/v).

14. El método según la reivindicación 13 en el que la concentración de HSA es aproximadamente 7,5% (p/v).

15. El método según la reivindicación 11 en el que el radioprotector es ascorbato.

16. El método según la reivindicación 15 en el que el ascorbato está a una concentración de aproximadamente 1 a 100 mg/ml.

17. El método según la reivindicación 10 en el que el quelante no conjugado es DTPA.

18. El método según la reivindicación 17 en el que la concentración de DTPA es aproximadamente 1 mM.