INHIBIDOR NUCLEOSÍDICO DE VHC.

Un compuesto de fórmula I en la que: R1 , R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno,

COR4, C(=O)OR4 y C(=O)CHR5NHR6; o R1 y R3 son H y R2 es el éster de monofosfato, difosfato o trifosfato; R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en (a) alquilo C1-18 sin ramificar o ramificado, (b) haloalquilo C1-18, (c) cicloalquilo C3-8, (d) heteroalquilo C1-10 y (e) fenilo, estando dicho fenilo opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados independientemente de alquilo C1-3, alcoxi C1-3, halógeno, ciano o nitro; R5 es hidrógeno, alquilo C1-10, fenilo o fenilalquilo C1-3, estando dicho fenilo opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, hidroxi, alcoxi C1-3, alquilo C1-3, ciano y nitro; R6 es hidrógeno o alcoxi C1-6; o, sales de adición de ácidos del mismo

La presente invención proporciona compuestos nucleosídicos y ciertos derivados de los mismos que son inhibidores de la ARN polimerasa viral dependiente de ARN. Estos compuestos son inhibidores de la replicación de virus de ARN dependientes de ARN y son útiles para el tratamiento de la infección por virus de ARN dependientes de ARN. Son particularmente útiles como inhibidores de la polimerasa NS5B del virus de la hepatitis C (VHC), como inhibidores de la replicación de VHC, y para el tratamiento de la infección por hepatitis C.

La invención se refiere a inhibidores nucleosídicos de la replicación de ARN de replicones de VHC. En particular, la invención se refiere al uso de compuestos nucleosídicos de pirimidina como inhibidores de la replicación de ARN subgenómico de VHC y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos.

El virus de la hepatitis C es la causa principal de enfermedad hepática crónica en todo el mundo. (Boyer, N. y col. J. Hepatol. 2000 32:98-112). Los pacientes infectados con VHC tienen riesgo de desarrollar cirrosis hepática y el posterior carcinoma hepatocelular y, por lo tanto, el VHC es la indicación principal para trasplante hepático.

El VHC se ha clasificado como un miembro de la familia de virus Flaviviridae que incluye los géneros flavivirus, pestivirus y hepacivirus, que incluyen los virus de la hepatitis C (Rice, C. M., Flaviviridae: The viruses and their replication, en: Fields Virology, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., y Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa., Capítulo 30, 931-959, 1996). El VHC es un virus con envuelta que contiene un genoma de ARN monocatenario de sentido positivo de aproximadamente 9,4 kb. El genoma viral consiste en una región 5' no traducida (UTR), una fase de lectura abierta larga que codifica un precursor de poliproteína de aproximadamente 3011 aminoácidos y una UTR 3' corta. La UTR 5' es la parte más conservada del genoma de VHC y es importante para la iniciación y control de la traducción de poliproteínas.

El análisis genético de VHC ha identificado seis genotipos principales que divergen en más de un 30% de la secuencia de ADN. Se han distinguido más de 30 subtipos. En los Estados Unidos aproximadamente un 70% de los individuos infectados tienen infección de Tipo 1a y 1b. El Tipo 1b es el subtipo más prevalente en Asia. (X. Forns y J. Bukh, Clinics in Liver Disease 1999 3:693-716; J. Bukh y col., Semin. Liv. Dis. 1995 15:41-63). Desafortunadamente, las infecciones de Tipo 1 son más resistentes a la terapia que los genotipos de tipo 2 o 3 (N. N. Zein, Clin. Microbiol. Rev., 2000 13:223-235).

Las proteínas estructurales virales incluyen una proteína central de la nucleocápsida (C) y dos glicoproteínas de la envuelta, E1 y E2. El VHC también codifica dos proteasas, una metaloproteinasa dependiente de cinc codificada por la región NS2-NS3 y una serina proteasa codificada en la región NS3. Estas proteasas son necesarias para la escisión de regiones específicas de la poliproteína precursora en péptidos maduros. La mitad carboxilo de la proteína 5 no estructural, NS5B, contiene la ARN polimerasa dependiente de ARN. La función de las demás proteínas no estructurales, NS4A y NS4B, y la de NS5A (la mitad amino-terminal de la proteína 5 no estructural) sigue sin conocerse. Se cree que la mayoría de las proteínas no estructurales codificadas por el genoma de ARN de VHC están implicadas en la replicación del ARN.

Actualmente hay un número limitado de terapias aprobadas disponibles para el tratamiento de la infección por VHC. Se han revisado enfoques terapéuticos nuevos y existentes para tratar VHC y la inhibición de la polimerasa NS5B de VHC: R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999 19:5; Di Besceglie, A. M. y Bacon, B. R., Scientific American, October: 1999 80-85; G. Lake-Bakaar, Current and Future Therapy for Chronic Hepatitis C Virus Liver Disease, Curr. Drug Targ. Infect Dis. 2003 3(3):247-253; P. Hoffmann y col., Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection (1999-2002), Exp. Opin. Ther. Patents 2003 13(11):1707-1723; M. P. Walker y col., Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitis C, Exp. Opin. investing. Drugs 2003 12(8):1269-1280; S. L. Tan y col., Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov. 2002 1:867-881.

**(Ver fórmula)**

La ribavirina (1a; amida del ácido 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-[1,2,4]triazol3-carboxílico; Virazol) es un análogo de nucleósido antiviral de amplio espectro, sintético, no inductor de interferón. La ribavirina tiene actividad in vitro contra varios virus de ADN y ARN incluyendo Flaviviridae (Gary L. Davis, Gastroenterology 2000 118:S104-S114). En monoterapia, la ribavirina reduce los niveles de aminotransferasa en suero a los normales en el 40% de los pacientes, pero no reduce los niveles en suero de ARN de VHC. La ribavirina también presenta una toxicidad significativa y se sabe que induce anemia. La viramidina 1b es un profármaco que se convierte en 1a en hepatocitos.

Se dispone de interferones (IFN) para el tratamiento de hepatitis crónica desde hace casi una década. Los IFN son glicoproteínas producidas por células inmunes en respuesta a una infección viral. Se reconocen dos tipos distintos de interferones: el Tipo 1 incluye varios interferones  y un interferón , el tipo 2 incluye interferón . Los interferones del Tipo 1 se producen principalmente por células infectadas y protegen a las células vecinas de la infección de novo. Los IFN inhiben la replicación viral de muchos virus, incluyendo VHC, y cuando se usa como único tratamiento para la infección por hepatitis C, el IFN reprime el ARN de VHC en suero hasta niveles indetectables. Además, el IFN normaliza los niveles en suero de aminotransferasa. Desafortunadamente, los efectos del IFN son temporales. El cese de la terapia da como resultado una tasa de recaída del 70% y únicamente un 10-15% presenta una respuesta virológica sostenida con niveles normales en suero de alanina transferasa (L. B. Davis, supra).

Una limitación de la terapia temprana con IFN era la rápida eliminación de la proteína de la sangre. La derivatización química del IFN con polietilenglicol (PEG) ha dado como resultado proteínas con propiedades farmacocinéticas sustancialmente mejoradas. PEGASYS es un conjugado de interferón -2a y un mono-metoxi PEG ramificado de 40 kD y PEG-INTRON es un conjugado de interferón -2b y un mono-metoxi PEG de 12 kD. (B. A. Luxon y col., Clin. Therap. 2002 24(9):13631383; A. Kozlowski y J. M. Harris, J. Control. Release, 2001 72:217-224).

La terapia de combinación de VHC con ribavirina e interferón- actualmente representa la terapia óptima. La combinación de ribavirina y PEG-IFN (infra) da como resultado una respuesta viral sostenida en el 54-56% de los pacientes. La TSP (tasa de supervivencia) se aproxima al 80% para el VHC de tipo 2 y 3. (Walker, supra) Desafortunadamente, la combinación también produce efectos secundarios que representan desafíos clínicos. Con el IFN- subcutáneo están asociados depresión, síntomas de tipo gripe y reacciones cutáneas y con el tratamiento sostenido con ribavirina está asociada la anemia hemolítica.

Ahora se han identificado varias dianas moleculares potenciales para el desarrollo de fármacos como productos terapéuticos anti-VHC que incluyen, pero sin limitación, la autoproteasa NS2-NS3, la proteasa N3, la helicasa N3 y la polimerasa NS5B. La ARN polimerasa dependiente de ARN es absolutamente esencial para la replicación del genoma de ARN, de sentido positivo, monocatenario. Esta enzima ha suscitado un interés significativo entre los químicos farmacéuticos.

Se conocen tanto inhibidores nucleosídicos como no nucleosídicos de NS5B.

Los inhibidores nucleosídicos pueden actuar como un terminador de la cadena o como un inhibidor competitivo que interfiere con la unión de nucleótidos a la polimerasa. Para funcionar como un terminador de la cadena, el análogo de nucleósido debe captarse por la célula y convertirse in vivo en un trifosfato para competir por el sitio de unión del nucleótido de la polimerasa. Esta conversión en el trifosfato comúnmente está mediada por quinasas celulares que imparten requisitos estructurales adicionales a un posible inhibidor nucleosídico de polimerasa. Además, esto limita la evaluación directa de nucleósidos como inhibidores de la replicación de VHC en ensayos basados en células con capacidad de fosforilación... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula I

**(Ver fórmula)**

en la que: R1 , R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, COR4, C(=O)OR4 y C(=O)CHR5NHR6; o R1 y R3 son H y R2 es el éster de monofosfato, difosfato o trifosfato;

R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en (a) alquilo C1-18 sin ramificar o ramificado, (b) haloalquilo C1-18, (c) cicloalquilo C3-8, (d) heteroalquilo C1-10 y (e) fenilo, estando dicho fenilo opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados independientemente de alquilo C1-3, alcoxi C1-3, halógeno, ciano o nitro; R5 es hidrógeno, alquilo C1-10, fenilo o fenilalquilo C1-3, estando dicho fenilo opcionalmente sustituido con uno a tres grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, hidroxi, alcoxi C1-3, alquilo C1-3, ciano y nitro;

R6 es hidrógeno o alcoxi C1-6; o,

sales de adición de ácidos del mismo.

15 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que cada uno de R1 , R2 y R3 es hidrógeno.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que cada uno de R1 , R2 y R3 es independientemente hidrógeno, COR4 o C(=O)OR4, donde R4 es alquilo C1-10 sin ramificar o ramificado.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es hidrógeno, R2 y R3 son COR4 y R4 es alquilo C110 sin ramificar o ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

20 5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en el que todos los restos R4 son iguales y se seleccionan de metilo, etilo, i-propilo o t-butilo.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, denominado 3',5'-O-bis(isobutiril)-4'-azido-2'--C-metil-2'desoxicitidina:

25 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 y R3 son hidrógeno, R2 se selecciona del grupo que consiste en COR4, C(=O)OR4 y COCH(R5)NHR6 .

**(Ver fórmula)**

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en el que R2 es COCH(R5)NHR6, R5 es iso-propilo, iso-butilo o sec-butilo y R6 es hidrógeno, preferentemente en el que R5 tiene la estereoquímica de un L-aminoácido.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en el que R2 es COR4 y en el que R4 es alquilo C1-10 sin 30 ramificar o ramificado.

10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en 3',5'-O-bis(isobutiril)-4'-azido-2'--C-metil-2'-desoxicitidina, 3',5'-O-bis(L-valinil)-4'-azido-2'--C-metil-2'-desoxicitidina, 4'-Azido-3'-O-(L-valinil)-2'--C-metil-2'-desoxicitidina, 4'-Azido-3'-O-isobutiril-2'--C-metil-2'-desoxicitidina, 5'-O-(L-valinil)-4'-azido-2'--C-metil-2'-desoxicitidina, 5'-O-isobutiril -4'-azido-2'--C-metil-2'-desoxicitidina;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por el virus de la Hepatitis C (VHC).

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el régimen de tratamiento o medicamento comprende además al menos un modulador del sistema inmune y/o al menos un agente antiviral que inhibe la replicación de VHC.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el modulador del sistema inmune es un interferón, interleucina, factor de necrosis tumoral o factor estimulador de colonias.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el modulador del sistema inmune es un interferón o un interferón derivatizado químicamente.

15. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el régimen de tratamiento o medicamento comprende además al menos otro agente antiviral.

16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15, en el que el compuesto antiviral se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de proteasa de VHC, otro inhibidor nucleosídico de polimerasa de VHC, un inhibidor no nucleosídico de polimerasa de VHC, un inhibidor de helicasa de VHC, un inhibidor de primasa de VHC y un inhibidor de la fusión de VHC.

17. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 mezclada con al menos un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

18. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso como un medicamento.

19. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por el Virus de la Hepatitis C (VHC).