Procedimiento para identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia y tratamiento de pacientes de este tipo.

Procedimiento in vitro para la estratificación de riesgos de pacientes con trastornos cognitivos leves con el objetivo de identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia, que comprende

- determinar por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación en una muestra de un fluido biológico procedente de la circulación de un paciente con diagnóstico de un trastorno cognitivo leve, y

- asociar un riesgo aumentado para el desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta a una concentración aumentada para dicho por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación, que se encuentra por encima de un valor umbral específico para el biomarcador

(cut-off) en el intervalo de valores de concentración habituales para estos biomarcadores en el caso de trastornos cognitivos leves, siendo el biomarcador relevante para la circulación seleccionado de entre los fragmentos MR-proANP y/o MR-proADM, y siendo el valor umbral para MR-ProANP 60 - 90 pmol/l y el valor umbral para MR-ProADM 0,5 - 0,7 nmol/l, y siendo los pacientes con el riesgo superior establecido identificados como necesitados de terapia para el tratamiento con un fármaco, que comprende uno o varios principios activos de agentes cardiovasculares seleccionados de entre el grupo constituido por: antagonistas de receptores de ANP, antagonistas de receptores de adenosina, inhibidores de ACE, antagonistas de receptores de angiotensina II, betabloqueantes y diuréticos que reducen la tensión arterial y sus combinaciones, para retardar o evitar el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos o mejorar o mantener el estado del trastorno cognitivo leve.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/051035.

Solicitante: B.R.A.H.M.S GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: Neuendorfstraße 25 16761 Hennigsdorf ALEMANIA.

Inventor/es: BERGMANN, ANDREAS.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K31/00 (Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/68 (en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K45/06 (Mezclas de ingredientes activos sin caracterización química, p. ej. compuestos antiflojísticos y para el corazón)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de trastornos del... > A61P25/28 (de los problemas neurodegenerativos del sistema nervioso central, p. ej. noótropos, activadores del conocimiento, medicamentos para el tratamiento del Alzheimer o de otras formas de demencia)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/522 (teniendo grupos oxo unidos directamente al heterociclo, p. ej. hipoxantina, guanina, aciclovir)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/739 (Lipopolisacáridos)
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Procedimiento para identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia y tratamiento de pacientes de este tipo.

Texto extraído del PDF original:

DESCRIPCIÓN

Procedimiento para identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia y tratamiento de pacientes de este tipo.

La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento in vitro para la estratificación de riesgos de pacientes con trastornos cognitivos leves con el objetivo de identificar pacientes que necesitan terapia, que presentan un riesgo aumentado con respecto a un empeoramiento de sus trastornos cognitivos originariamente leves y con respecto al desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta de demencia de tipo Alzheimer, y con el propósito de suministrar a pacientes que necesitan terapia de este tipo una terapia con determinados agentes, cuya idoneidad con fines terapéuticos en el presente contexto es conocida, que representa una parte esencial de la presente invención. Además, la invención se refiere a un procedimiento para el tratamiento preventivo de determinados pacientes de riesgo con trastornos cognitivos leves identificados debido a una medición de un biomarcador con agentes cardiovasculares para impedir o retardar el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos de demencia de tipo Alzheimer o a la utilización de las sustancias activas de agentes cardiovasculares y la utilización de antagonistas de receptores de ANP en un procedimiento de este tipo así como para la producción de fármacos para dicho propósito de impedir o retardar el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos de demencia de tipo Alzheimer. Los pacientes, para los en el marco de la presente solicitud tuvo lugar una estimación retrospectiva de su riesgo inicial para el desarrollo posterior de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta probada, y en los que además se identificaron factores a partir de su anamnesis (historial médico), que de manera retrospectiva demostraron mejorar el pronóstico, son pacientes con el diagnóstico “trastornos cognitivos leves” (abreviado: LKS). En la bibliografía en inglés se tratan recientemente los criterios para establecer “trastornos cognitivos leves” sobre todo con el término “mild cognitive impairment” (abreviado: MCI). A este respecto se remite, por ejemplo, a Serge Gauthier et al., “Mild cognitive impairment” en: Lancet 2006, 367:1262-1270, así como de manera complementaria a Ronald C. Petersen et al., “Mild Cognitive Impairment, Clinical Characterization and Outcome”, en: Arch Neurol.

1999, 56:303-308, o Ronald C. Petersen et al., “Current Concepts in Mild Cognitive Impairment” en: Arch Neurol. 2001; 58:1985-1992. Uno de los procedimientos de prueba empleados en relación con el establecimiento de un estado de LKS o MCI de un paciente determina un determinado valor característico denominado “miniexamen de estado mental” (MMS) para un paciente evaluado, véase Marshal F. Folstein et al., “MINI-MENTAL STATE - a practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician”, en: J. Psychiat. Res., 1975, 189-198.

Se sabe que sólo en una parte de aquellos pacientes en los que en un momento determinado basándose en observaciones propias, o debido a observaciones de su entorno, se establecen “trastornos cognitivos leves” (LKS) o que cumplen los criterios de “mild cognitive impairment” (MCI), puede observarse posteriormente un empeoramiento progresivo de su estado. Determinados pacientes desarrollan gradualmente el conjunto de síntomas clínicos completo de una enfermedad neurodegenerativa, por ejemplo de una demencia de tipo Alzheimer (AD). En otros se desarrolla una demencia de otro tipo, por ejemplo una demencia vascular. Por el contrario, en otra parte de los pacientes con LKS o MCI no se produce un empeoramiento digno de mención, y a veces incluso vuelven a desaparecer los síntomas originales. El primer grupo mencionado, en el que se desarrolla una enfermedad neurodegenerativa, también se denomina grupo de los “pacientes que presentan conversión a Alzheimer” (converter), mientras que el grupo mencionado en último lugar forma el grupo de los “pacientes que no presentan conversión” (non-converter). Con la situación de partida descrita, sería deseable poder estimar dentro del grupo de los pacientes para los que se ha establecido un diagnóstico de “trastornos cognitivos leves”, ya en el establecimiento del diagnóstico, el riesgo individual de que los pacientes individuales pertenezcan probablemente o no al grupo de los “pacientes que presentan conversión a Alzheimer”, para que en el caso de un riesgo establecido como elevado pueda empezarse con medidas preventivas o terapéuticas (si es que existen medidas de este tipo), mientras que en el caso de establecer un riesgo sólo reducido de una conversión de este tipo puedan evitarse medidas innecesarias y pueda aliviarse a los pacientes afectados de esta considerable carga anímica.

Además sería deseable poder suministrar a pacientes, para los que existe un riesgo aumentado de conversión a Alzheimer, un tratamiento cuya eficacia a largo plazo esté garantizada en el sentido de evitar o retardar una conversión.

La presente invención se basa en el objetivo de proporcionar un procedimiento in vitro, que posibilite una identificación del grupo de los pacientes que presentan conversión a Alzheimer con una probabilidad estadística elevada y que además proporcione una base para la decisión de suministrar un tratamiento preventivo eficaz a los pacientes que presentan conversión identificados.

Estos objetivos se solucionan mediante procedimientos y sus configuraciones preferidas, tales como los que puede deducir el experto de las reivindicaciones.

La invención se implementa en uno de sus aspectos en un procedimiento analítico in vitro, que en un grupo de pacientes, para los que debido a resultados clínicos se estableció el diagnóstico de “trastornos cognitivos leves”, posibilita ya en el establecimiento del diagnóstico la identificación de los pacientes con un alto riesgo de una conversión posterior a Alzheimer y que además posibilita dar una recomendación de terapia concreta para estos pacientes. Por tanto, en el marco de la presente invención se emplea como primera etapa un procedimiento analítico in vitro para determinar concentraciones de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación en muestras de pacientes (plasma, suero), y en el caso de determinar concentraciones que se consideran aumentadas en comparación con concentraciones de referencia correspondientes, se recomienda a los pacientes en cuestión un tratamiento con agentes cardiovasculares, en particular agentes hipotensores o un tratamiento con antagonistas de receptores de ANP, dado que las evaluaciones descritas a continuación dieron como resultado que un tratamiento con agentes hipotensores o con antagonistas de receptores de ANP reduce el riesgo de que un trastorno cognitivo leve establecido empeore para dar una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta de demencia de tipo Alzheimer (AD). Por consiguiente, el objeto de la presente invención es un procedimiento in vitro para la estratificación de riesgos de pacientes con trastornos cognitivos leves con el objetivo de identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia, que comprende: - determinar por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación en una muestra de un fluido biológico procedente de la circulación de un paciente con el diagnóstico de un trastorno cognitivo leve y - asociar un riesgo aumentado para el desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta a una concentración aumentada para dicho por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación, que se encuentra por encima de un valor umbral específico para el biomarcador (cut-off) en el intervalo de valores de concentración habituales para ese biomarcador en el caso de trastornos cognitivos leves, seleccionándose el biomarcador relevante para la circulación de los fragmentos MR-proANP y/o MR- proADM y siendo el valor umbral para MR-ProANP 60 - 90 pmol/l y el valor umbral para MR-ProADM 0,5 - 0,7 nmol/l, e identificándose pacientes con el riesgo superior establecido como que necesitan terapia para el tratamiento con un fármaco, que comprende uno o varios principios activos de agentes cardiovasculares, seleccionados de entre el grupo constituido por: antagonistas de receptores de ANP, antagonistas de receptores de adenosina, inhibidores de ACE, antagonistas de receptores de angiotensina II, betabloqueantes y diuréticos que reducen la tensión arterial y sus combinaciones, para retardar o impedir el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos o mejorar o mantener el estado del trastorno cognitivo leve.

Según el procedimiento in vitro según la invención pueden identificarse pacientes con el riesgo superior establecido para el desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta como que necesitan terapia para el tratamiento con un fármaco. Para los pacientes con el riesgo superior establecido puede darse entonces una recomendación para un tratamiento con fármacos según las siguientes realizaciones.

Según el procedimiento in vitro según la invención, la muestra es preferentemente una muestra de suero o de plasma. El procedimiento según la invención se caracteriza por que se recomienda un tratamiento con un agente cardiovascular del grupo de los agentes hipotensores, que se selecciona de entre el grupo constituido por los inhibidores de la “enzima convertidora de angiotensina” (inhibidores de ACE), los antagonistas de receptores de angiotensina II (los “sartanos”), los betabloqueantes y los diuréticos utilizados para reducir la tensión arterial. Alternativamente puede recomendarse un tratamiento con un antagonista de receptores de ANP o un antagonista de receptores de adenosina.

En una forma de realización preferida se realiza la determinación con un procedimiento de determinación de inmunodiagnóstico. Por lo demás se prefiere que se determinen fragmentos de precursores prohormonales de péptidos relevantes para la circulación con un efecto fisiológico que no puede establecerse o reducido con respecto a los verdaderos péptidos relevantes para la circulación.

El procedimiento se caracteriza por que se determina la concentración de un fragmento de proANP que contiene el segmento central de proANP (MR-proANP) y/o de un fragmento de proADM de la región media (MR-proADM), que comprende los aminoácidos 45 a 92 de la preproadrenomedulina.

El objetivo de la presente invención es la utilización de biomarcadores peptídicos, en particular MR-ANP y/o MR- ADM, para la estratificación o identificación de pacientes con trastornos cognitivos leves, que presentan un riesgo aumentado para la conversión a un trastorno neurodegenerativo clínicamente manifiesto.

Los receptores de adenosina son una clase de receptores acoplados a proteína G (GPCR) purinérgicos, cuyo ligando endógeno es la adenosina. Se diferencian cuatro subtipos: A1, A2A, A2B y A3, cuya distribución en el cuerpo y función en parte se solapan y en parte son diferentes. Los subtipos de receptores de adenosina también se diferencian entre sí en cuanto a los efectos bioquímicos y las rutas de señalización. Para cada uno de estos subtipos se conocen agonistas y antagonistas, siendo algunos agonistas y antagonistas inespecíficos y mostrando efectos con todos los receptores de adenosina. Los antagonistas de los receptores de ANP en el sentido de la invención son sustancias que pueden administrarse terapéuticamente, que se unen a receptores de ANP, a este respecto impiden o reducen la unión del ligando natural ANP y no conducen a una activación de la guanilato ciclasa con la consecuencia del no aumento o un aumento reducido del cGMP y como consecuencia de lo mismo a una reducción del efecto natriurético del ANP endógeno. Los antagonistas de receptores de adenosina en el sentido de la invención son sustancias que pueden administrarse terapéuticamente, que se unen a receptores de adenosina, a este respecto impiden o reducen la unión del ligando natural adenosina y no conducen a una activación de la guanilato ciclasa con la consecuencia del no aumento o un aumento reducido del cGMP y como consecuencia de los mismo a una reducción del efecto de la adenosina endógena. En una forma de realización especialmente preferida de la invención mencionada anteriormente, el antagonista de receptores de ANP es un polímero de glucosa-ácido caproico (glucose-caproic acid, en particular glucanos β1 → 6 esterificados con ácido caproico). Un representante especialmente importante de los antagonistas de receptores de ANP es HS-142-1 (documento US 5.132.112). Todos los antagonistas mencionados en el documento US 5.132.112 forman parte de la descripción presente en la presente memoria y son antagonistas de receptores de ANP según la invención. Los compuestos HS-142-1 se caracterizan en el documento US 5.132.112 de la siguiente manera: estos compuestos comprenden glucano β1 → 6 lineal, que está esterificado con ácido caproico, ascendiendo el número de los restos de D-glucosa a 28 y el de los restos de ácido caproico a 11. Estos compuestos presentan esencialmente las siguientes propiedades fisicoquímicas: 1) consistencia: polvo blanco 2) punto de fusión: 175-185ºC 3) fórmula molecular: C234H392O152 4) espectro de masas (espectro de masas por FAB negativo): hallado: M/Z 5536,5 (M-H)- calculado: M/Z 5637,3 5) rotación específica: [α]24D =-29,4º (c 0,24, disolución acuosa) 6) espectro de absorción infrarrojo (método de la pastilla de KBr): cm-1: 3420, 2930, 1730, 1635, 1455, 1380, 1250, 1170, 1045 7) espectro de absorción ultravioleta (disolución acuosa): Sólo la absorción terminal es visible. 8) espectro de 1H-RMN (500 MHz, en D2O): como se muestra en la figura 1 del documento US 5.132.112.

9) reacción colorimétrica: reacciones positivas con anisaldehído, ácido sulfúrico y yoduro, reacciones negativas con ninhidrina, dinitrofenilhidrazina, cloruro de hierro, verde de bromocresol y reactivo de Dragendorff.

Por lo demás, en el documento WO 89/00428 se mencionan antagonistas de receptores de ANP e igualmente forman parte de esta descripción. También se sabe que algunos derivados de ANP pueden presentar propiedades antagonistas (documento JP-A-225399/88) – también estos antagonistas forman parte de esta descripción.

Lipooligosacáridos, tales como el HS-142-1, se conocen como antagonistas del receptor de ANP; tales antagonistas y su producción se describen en Yi Qiu, et al. Biosci. Biotech. Biochem. 60 (8) 1308-1315, 1996 y se incorporan por la presente como tales así como su producción. En particular se trata en este caso de derivados de gentiohexaosilo como antagonistas de receptores de ANP. Ejemplos de tales derivados son: HS-142-1, O-(3-O-caproil-β-D- glucopiranosil)-(1→6)-[O-(β-D-glucopiranosil)-(1→6)-O-(3-O-caproil-β-D-glucopiranosil)-(1→6)]2-D-glucopiranosa (1), O-(3-O-hexil-β-D-glucopiranosil)-(1→6)-[O-(β-D-glucopiranosil)-(1→6)-O-(3-O-hexil-β-D-glucopiranosil)-(1→6)]2-D- glucopiranosa (4) y O-(3-O-caproil-2,4,6-tri-O-metil-β-D-glucopiranosil)-(1→6)]2-2,3,4-tri-O-metil-D-glucopiranosa (2). HS-142-1 es un antagonista de ANP y es una mezcla de oligoglucósidos β-1 → 6 (DP: 10-30) parcialmente acilados con grupos caproílo (5-15 en número). En una forma de realización especialmente preferida de la invención mencionada anteriormente, el antagonista de receptores de adenosina es 1,3-dipropil-8-(3-noradamantil)xantina.

El antagonista de receptores de ANP se administra en una concentración, que aumenta el efecto del péptido natriurético, en particular del ANP de la siguiente manera. Mediante la unión aumentada de ligandos (sin activación correspondiente) al receptor de ANP se bloquea el receptor para su ligando natural. Si el tratamiento tiene lugar con una concentración limitada de antagonistas (como máximo el 95%, preferentemente como máximo el 90% de los receptores se unen, lo más preferentemente el 80%), la nueva síntesis del receptor inducida por receptores ocupados conduce a un número en general superior de receptores libres que antes del tratamiento. A través del aumento de los receptores se obtiene entonces como resultado una regulación por incremento del efecto natriurético de la hormona endógena, dado que la situación de equilibrio de ligando libre/ligando unido se desplaza a favor del ligando unido que genera el efecto biológico.

Este efecto se produce cuando los receptores están ocupados por lo menos al 50% por antagonistas, preferentemente al 70%, lo más preferentemente al 80%, pero no a más del 95%. Esto corresponde habitualmente en el caso de HS-142-1 a una dosis de desde 0,01 mg hasta 0,1 mg de HS 142-1/kg de peso corporal, preferentemente 0,05 mg/kg.

El experto conoce que los intervalos de concentración para antagonistas, así como antagonistas de receptores de ANP, dependen de la afinidad del antagonista. Por tanto, partiendo de la ocupación determinada del receptor y de la afinidad del antagonista del receptor, el experto puede determinar la respectiva dosis para el respectivo antagonista (en esta determinación también es posible orientarse por la concentración en plasma de proANP y por ejemplo definir a > 74 pmol/l (concentración en plasma) un intervalo de 1x ProANP - 100x ProANP, es decir en el caso de 4 l de plasma y un valor de ProANP de 100 pmol/l un intervalo de 400 pmol-40 nmol de antagonista/administración). El efecto deseado del antagonista de receptores de adenosina se produce cuando los receptores están ocupados por lo menos al 50% por antagonista, preferentemente al 70%, lo más preferentemente al 80%, pero no a más del 95%. Estos corresponden habitualmente en el caso de la 1,3-dipropil-8-(3-noradamantil)xantina preferida a una dosis de desde 0,025 hasta 1 mg/kg de peso corporal, preferentemente 0,5 mg/kg. Los fármacos mencionados anteriormente son útiles en particular en el caso de que la alteración neurodegenerativa clínicamente manifiesta sea una demencia de tipo Alzheimer.

En una forma de realización preferida, el principio activo es por consiguiente un antagonista de receptores de ANP y se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50%, preferentemente el 70%, lo más preferentemente 80%, pero no más del 95% de los receptores de ANP están ocupados. En otra forma de realización preferida, el principio activo es un antagonista de receptores de adenosina y se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50%, preferentemente el 70%, lo más preferentemente el 80%, pero no más del 95% de los receptores de adenosina están ocupados. Pueden identificarse antagonistas de receptores de ANP adicionales mediante un procedimiento de examen, que comprende las siguientes etapas: ο realizar un ensayo de receptores competitivo para identificar candidatos de antagonista, ο someter a prueba los candidatos de antagonista para determinar la capacidad para bloquear la formación de cGMP inducida por ANP, e ο identificar los antagonistas de los receptores para el péptido natriurético atrial.

Pueden identificarse posibles candidatos de antagonistas de receptores de ANP, por ejemplo basándose en un radioensayo de receptores o un radioinmunoensayo, que desplazan el ANP marcado radiactivamente, en el candidato. El experto conoce tales ensayos y están descritos en la bibliografía, por ejemplo en Capper et al. (1990) Clin. Chem. 36/4, 656. Los posibles candidatos se someten entonces a prueba para determinar su capacidad para bloquear la formación de cGMP inducida por ANP. El experto conoce ensayos correspondientes y están disponibles comercialmente, por ejemplo de la empresa CisBio international (http://www.htrf.com/products/gpcr/cgmp/). En relación con la presente invención, como antagonista de receptores de ANP se considera un compuesto que en el radioensayo de receptores descrito a continuación presenta un valor de CI50 menor de 10 nmol/l, preferentemente menor de 10 pmol/l y en un ensayo de bloqueo de cGMP inducido por ANP en valor de CI50 menor de 10 nmol/l, preferentemente menor de 10 pmol/l. El valor de CI50 es la concentración de un (posible) antagonista (inhibidor), a la que se observa un desplazamiento del 50% del ligando (ANP) del receptor de ANP o un bloqueo del 50% de la formación de cGMP inducida por ANP.

El radioensayo de receptores se basa en el desplazamiento de un derivado de ANP radiomarcado de los sitios de unión del receptor de ANP por parte de un (posible) antagonista y se realiza tal como sigue: 1. Se proporciona el receptor de ANP unido a membrana reconstituido (guanilato ciclasa A o B) a partir de tejido animal o humano (preferentemente preparaciones de células renales) o líneas celulares adecuadas con receptor de ANP natural o recombinante en un número de células de 100-100.000 células/análisis en una solución tampón PBS 50 mM, pH 7,5.

2. Se añaden desde 1 fM hasta 100 nM del (posible) antagonista, ANP 1-28 radiomarcado a 2000-100.000 cpm, con yodo radiactivo en Tyr 28, aproximadamente 2200 Ci/mmol (radioyodada por medio del método de cloramina T conocido para el experto) de modo que la razón de ANP/receptor de ANP asciende a entre 100:1 y 1:100.

3. Se incuba durante 90 min a temperatura ambiente.

4. Se centrifuga (30 min, 4ºC, 2000 g) para separar receptores y sobrenadante. 5. Se determina la concentración de péptido ANP radiomarcado libre (sobrenadante) y unido a receptor (sedimento) mediante la detección de la radiactividad por medio de un contador gamma.

6. Se determina el valor de CI50 a partir de la concentración de péptido ANP radiomarcado unido a receptor en función de la concentración del antagonista añadido.

El ensayo de bloqueo de cGMP HTRF® (fluorescencia con resolución temporal homogénea, homogeneous time

resolved fluorescence) (CisBio international, Bagnols-sur-Cèze, Francia) se basa en la inhibición de la formación de cGMP inducida por ANP mediante un (posible) antagonista. A este respecto, se aprovecha que la guanilil ciclasa unida a membrana (tipo 1) se activa mediante ANP. En el ensayo de bloqueo de cGMP se determina, en presencia de diferentes concentraciones del (posible) antagonista, la formación de cGMP mediante el presente receptor de ANP. En un inmunoensayo competitivo se determina a continuación la cantidad del respectivo cGMP formado en comparación con una concentración conocida de cGMP marcado con fluorescencia por medio de un anticuerpo anti- cGMP igualmente marcado con fluorescencia. El ensayo de cGMP HTRF® se realiza tal como sigue: 1. Se proporciona el receptor de ANP unido a membrana (guanilato ciclasa) de tejido animal o humano (preferentemente preparaciones de células renales) o líneas celulares adecuadas con receptor de ANP natural o recombinante en un número de células de 100-100.000 células/análisis. En PBS 50 mM, BSA al 0,2%, pH 7,2.

2. Se añaden desde 1 fM hasta 100 nM del (posible) antagonista y ANP 1-28 5-100.000 pM, humano. 3. Se incuba durante 30 min a 37ºC. 4. Se determina la concentración de cGMP formado por medio de la adición de cGMP-d2 en tampón de lisis y criptatos anti-cGMP (anticuerpos anti-cGMP en tampón de lisis) en un inmunoensayo competitivo. La concentración de cGMP es proporcional a la razón de la intensidad de fluorescencia a 665/620 nm). A partir de la dependencia del cGMP formado con respecto a la respectiva concentración de antagonista se determina el valor de CI50.

Procedimientos para el diagnóstico (en una definición amplia de este término) de enfermedades neurodegenerativas mediante la determinación de péptidos relevantes para la circulación (vasoactivos) en, por ejemplo, muestras de suero o de plasma de pacientes pertinentes se describen en solicitudes anteriores del solicitante, concretamente en particular en los documentos DE 10 2006 023 175 A1 o WO 2007/131 775 A1, en los que se demuestra una correlación estadísticamente relevante entre la gravedad de una enfermedad neurodegenerativa y las concentraciones medibles en las muestras de pacientes de péptidos natriuréticos, así como en los documentos DE 2006 027 818 A1 o WO 2007/144 194 A1, en los que se describe que se obtiene una mejor correlación estadísticamente relevante, en particular cuando se tienen en cuenta al mismo tiempo más de un péptido vasoactivo, concretamente en particular en forma de una combinación de las concentraciones de péptidos con acción vasodilatadora por un lado y péptidos con acción vasoconstrictora en la muestra de paciente por otro lado.

Las mediciones descritas en dichas solicitudes anteriores tienen lugar utilizando muestras (en particular muestras de plasma) de pacientes, para los que ya existía un diagnóstico de “enfermedad neurodegenerativa desarrollada”, o en los que por lo menos existía la sospecha de que padecían una forma temprana de una enfermedad de este tipo. Las mediciones no se evaluaron con fines de pronóstico, dado que el desarrollo adicional de la salud de los pacientes individuales, cuyas muestras se habían medido, no se siguió durante periodos de tiempo prolongados ni se relacionó con las concentraciones de biomarcador medidas previamente. Sin embargo, dichas solicitudes anteriores contienen discusiones exhaustivas de las definiciones clínicas reconocidas de diferentes tipos de enfermedades neurodegenerativas y con respecto a los problemas de su diagnóstico acertado. Dado que la presente solicitud se basa por lo menos parcialmente en los resultados de investigación descritos en dichas dos solicitudes, se remite expresamente al experto interesado al contenido completo de las dos solicitudes anteriores para completar las siguientes realizaciones. Tal como se explica, las enfermedades neurodegenerativas (enfermedades de demencia) son generalmente enfermedades crónicas que se desarrollan lentamente de etiología no infecciosa. Los periodos de tiempo de observación largos necesarios para un establecimiento de diagnóstico fiable representan tanto en cuanto al diagnóstico y al pronóstico como tales, como en cuanto a la investigación de dichas enfermedades y el desarrollo de estrategias de prevención y de terapia eficaces un problema considerable.

En general, como enfermedades de demencia (dementia) se denominan enfermedades para las que la pérdida de capacidades intelectuales adquiridas, sobre todo de la memoria y del nivel de personalidad normal como consecuencia de daños cerebrales, es una característica común. Si los fenómenos de demencia aparecen antes de una edad avanzada, ya en la edad madura, se denominan enfermedades de demencia presenil.

En las enfermedades de demencia se diferencian, basándose en los síntomas típicos de las mismas y los cambios patológicos cerebrales que pueden establecerse post mortem, diferentes enfermedades o grupos de enfermedades: De éstas, la demencia de tipo Alzheimer (AD) (enfermedad de Alzheimer; morbus Alzheimer) es la enfermedad de demencia neurodegenerativa más frecuente. Constituye 2/3 de todos los casos de demencia y también representa el campo de aplicación más importante desde el punto de vista práctico para la presente invención. La AD se caracteriza por tres características patológicas importantes que sin embargo sólo pueden establecerse con seguridad post mortem: la formación de placas de amiloide y haces neurofibrilares así como la pérdida de células nerviosas (véase de manera complementaria la introducción de la descripción de las solicitudes anteriores mencionadas anteriormente).

Enfermedades de demencia adicionales, que son de menor importancia en el marco de la presente solicitud y por tanto no se discuten en detalle en este caso, son las denominadas demencias vasculares (vascular dementia; VAD), en las que se genera una demencia debido a alteraciones del riego sanguíneo en el cerebro. Hay diferentes tipos de VAD, representando la demencia multiinfarto (MID) y la VAD subcortical (también denominada enfermedad de Binswanger) las formas más frecuentes. Además, para que sea más completa, deben mencionarse la demencia con cuerpos de Lewy (dementia with lewy-bodies: DLB) y la demencia frontotemporal (FTD), también denominada enfermedad de Pick. Las alteraciones cerebrales típicas para las diferentes enfermedades de demencia no pueden establecerse directamente en pacientes vivos de manera natural y los exámenes médicos con aparatos de las funciones cerebrales por medio, por ejemplo, de radiotomografía o tomografía de espín nuclear son complejas y caras. Por tanto, las enfermedades de demencia siguen hoy en día sin diagnosticarse suficientemente o no se diagnostican correctamente, y las posibilidades de pronóstico y las posibilidades de terapia son correspondientemente deficientes. Los trabajos del solicitante van dirigidos a mejorar las posibilidades de diagnóstico y de pronóstico de enfermedades neurodegenerativas, en particular el diagnóstico de AD, mediante el desarrollo de procedimientos de medición que puedan utilizarse de manera relativamente sencilla, en el marco de los cuales se determinen en muestras biomarcadores que puedan medirse bien a partir de la circulación de los pacientes. A los biomarcadores según la invención prometedores pertenecen diferentes biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación, de los que en el marco del procedimiento de la presente invención preferentemente se identifican biomarcadores en forma de péptidos de acción vasodilatadora, concretamente en particular péptidos natriuréticos tales como ANP, BNP y/o CNP y/o el péptido adrenomedulina (ADM). La determinación de las concentraciones de péptidos natriuréticos se muestra a modo de ejemplo en la determinación de la concentración de ANP. El ANP se determina preferentemente como concentración de un fragmento de proANP con ayuda de un ensayo del solicitante, que reconocen una sección central del proANP (MR- proANP). Un ensayo de este tipo se describe en el documento EP 1 562 984 B1 o en: Nils G. Morgenthaler et al., Immunoluminometric Assay for the Midregion of Pro-Atrial Natriuretic Peptide in Human Plasma, Clinical Chemistry 50:1, 2004, 234-236.

La concentración de adrenomedulina (ADM) se determina preferentemente como concentración de un fragmento de proADM de la región media (MR-proADM), que comprende los aminoácidos 45 a 92 de la preproadrenomedulina. Un ensayo adecuado se describe en los documentos EP 1 488 209 B1 o WO 2004/090546 o en Nils G. Morgenthaler et al., Measurement of Midregional Proadrenomedullin in Plasma with an Immunoluminometric Assay, Clinical Chemistry 51:10, 2005, 1823-18.29. Por tanto, cuando en esta solicitud se utiliza un término tal como “concentración de un biomarcador peptídico” o un término similar, no se hace referencia, en el sentido de una equiparación restrictiva, sólo a la concentración estacionaria medible en la muestra biológica del verdadero péptido vasoactivo.

Los verdaderos péptidos vasoactivos liberados de manera fisiopatológica discutidos en el marco de la presente invención sólo se encuentran libres en un porcentaje reducido o de manera que puedan medirse sin obstáculo en fluidos biológicos. Porcentajes esenciales de los verdaderos péptidos vasoactivos liberados de manera fisiopatológica rápidamente se extraen del fluido biológico mediante la unión a receptores y otras estructura de membrana o vasculares y/o se degradan. La medición de copéptidos inactivos, formados por los mismos propéptidos precursores, como tiene lugar preferentemente en el marco de la presente invención utilizando los ensayos ya mencionados del solicitante preferentemente, refleja, a diferencia de la concentración momentánea medible en un fluido biológico, la liberación de los péptidos vasoactivos en el sentido de “concentraciones eficaces” a través de un intervalo de tiempo prolongado y permite también una determinación conjunta indirecta de porcentajes unidos o degradados rápidamente del péptido vasoactivo liberado originariamente. Esto conduce, junto con la mayor estabilidad de tales copéptidos, a valores de concentración absoluta mediables mayores para los analitos de interés en el fluido biológico, por ejemplo en suero o plasma.

En el caso de enfermedades con una evolución crónica más bien crónica sin empeoramientos o mejoras repentinos del estado del pacientes, como sucede por regla general en el caso de enfermedades de demencia, existe sin embargo una probabilidad considerable de que, con respecto a los diferentes analitos relevantes para la enfermedad se forma un estado general estacionario poco variable, que sólo cambia lentamente. Por tanto, las concentraciones que pueden medirse de manera estacionaria en el fluido biológico del paciente de un analito activo del tipo de un biomarcador peptídico, en el presente caso un péptido vasoactivo, deberían ser esencialmente proporcionales a las cantidades liberadas de manera fisiopatológica durante periodos de tiempo más prolongados del mismo analito, tal como pueden medirse en forma del copéptido fisiológicamente inactivo. Esto significa que las desviaciones que pueden establecerse en la determinación preferida de copéptidos inactivos según la presente invención de los valores de control de sujetos sanos, así como la marcha típica para la enfermedad de estas desviaciones, deben reflejarse también en las concentraciones estacionarias por regla general más reducidas de los analitos activos, de modo que la elección concreta de las “concentraciones de analito” medidas no debe tener una influencia cualitativa decisiva sobre la evaluación del diagnóstico.

En el marco de la presente invención pudo recurrirse con fines de medición a una colección de muestras de plasmas de pacientes, que comprendía muestras de plasma de diferentes pacientes individuales que se habían obtenido en el momento del establecimiento de diagnóstico de “trastornos cognitivos leves” (t=0) (“pacientes con LKS”). El desarrollo a continuación del estado de salud de los pacientes individuales se documentó a lo largo del un periodo de tiempo de 6 años.

Se encontró que las concentraciones de los biomarcadores examinados en el plasma de pacientes con LKS estaban aumentados de media con respecto a personas control sin trastornos cognitivos, y que dentro del intervalo de las concentraciones halladas podía definirse un valor de concentración cut-off, que permite una diferenciación de pacientes con LKS con un riesgo reducido para la conversión posterior de pacientes con LKS con respecto a un riesgo considerable para la conversión posterior a AD. La diferenciación de los grupos de pacientes se mejoró adicionalmente con la observación simultánea de dos biomarcadores. Al estudiar además el inventor, tal como se mostrará en la parte experimental, los resultados de medición basados en las historias clínicas documentadas adicionalmente a continuación si los pacientes para los que no se observó o sólo se observó una conversión posteriormente claramente retardada en el sentido del desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta (demencia de tipo Alzheimer) ya se habían sometido por otros motivos a un tratamiento con determinados medicamentos o tipos de medicamentos, pudo establecer que aparentemente un tratamiento con agentes cardiovasculares, en particular agentes hipotensores, había tenido un efecto positivo sobre el pronóstico en el sentido de impedir o retardar la “conversión a AD”.

De esto se obtuvo como resultado que para pacientes con trastornos cognitivos leves ya en el establecimiento del diagnóstico es posible no sólo una estratificación de riesgos, sino que a los pacientes con un riesgo de conversión a AD aumentado determinado también se le puede recomendar un nuevo tratamiento razonable, que actualmente no pertenece al repertorio de tratamiento de los médicos especialistas pertinentes, concretamente un tratamiento con agentes cardiovasculares, en particular agentes hipotensores, o un tratamiento con antagonistas de receptores de ANP o antagonistas de receptores de adenosina. Agentes cardiovasculares o agentes hipotensores en el sentido anterior son agentes en sí conocidos, que ya se han sometido a pruebas clínicas extensamente. Los agentes hipotensores utilizados hoy en día rutinariamente de manera terapéutica o preventiva pertenecen esencialmente a cuatro tipos de medicamentos diferentes, concretamente en particular a medicamentos del grupo de los inhibidores de la “enzima convertidora de angiotensina” (inhibidores de ACE), los antagonistas de receptores de angiotensina II (los “sartanos”), los betabloqueantes y los diuréticos utilizados para reducir la tensión arterial. Detalles más concretos de los tipos utilizados hoy en día de estos medicamentos o los representantes recetados a gran escala de las clases de dichos principios activos pueden extraerse de la muy extensa bibliografía técnica, que se ocupa de medidas para la reducción de la tensión arterial de pacientes con tensión arterial elevada. Únicamente a modo de ejemplo, como representantes de los inhibidores de ACE se mencionan las sustancias farmacológicos captopril, enalapril, lisinopril y ramipril, como representantes de los antagonistas de receptores de angiotensina II subtipo 1 (antagonistas AT1; sartanos) las sustancias farmacológicas losartán, valsartán, candesartán, irbesartán, telmisartán, eprosartán y olmesartán, y como diuréticos en particular los denominados diuréticos de tiazida tales como hidroclorotiazida y los análogos de tiazida tales como clortalidona, clopramida, indepramida, metolazona, xipramida y mefrusida.

La siguiente tabla 1 resume brevemente la información básica de los diferentes tipos de medicamentos y sus mecanismos de acción: Tabla 1: Medicamento Efecto Bloquean la acción de la proteína endógena ACE, que es responsable de la producción de la hormona angiotensina-II (AT-II). La AT-II estrecha los vasos sanguíneos y mantiene la tensión arterial alta. Mediante la reducción de la concentración de AT-II en el cuerpo, los vasos sanguíneos permanecen ensanchados de manera permanente y disminuye la tensión arterial.

Inhibidores El corazón tiene que trabajar contra una resistencia reducida y se libera de una carga.

de ACE Además, pueden ralentizar una metaplasia patógena del músculo cardiaco. Los inhibidores de ACE mejoran el pronóstico de la insuficiencia cardiaca y son muy tolerables. Con frecuencia aparece un estímulo tusígeno, pero que es inofensivo.

Antagonistas de También se denominan “sartanos” y compiten con la angiotensina-II por los sitios de unión del receptores de receptor correspondiente. Diferentes pacientes los toleran mejor o muestran en diferentes angiotensina II pacientes un mejor efecto que los inhibidores de ACE y se utilizan cuando un paciente no tolera ningún inhibidor de ACE o éstos no muestran en él el efecto deseado.

Betabloqueantes Reducen el efecto de las hormonas del estrés (catecolaminas) en el corazón. Las hormonas del estrés se segregan de manera aumentada en el caso de insuficiencia cardiaca y pueden conducir a alteraciones del ritmo cardiaco. Los betabloqueantes mejoran el pronóstico, dado que previenen alteraciones del ritmo cardiaco potencialmente mortales.

Diuréticos Medicamentos que promueven la excreción de orina especiales (antagonistas de aldosterona) mejoran el pronóstico en el caso de un estadio avanzado. El modo de acción exacto no está claro hasta la fecha.

Preferentemente, el antagonista de receptores de ANP es un polímero de glucosa-ácido caproico. Preferentemente, el antagonista de receptores de adenosina es 1,3-dipropil-8-(3-noradamantil) xantina (“rolofilina”).

El término “estratificación de riesgos” (también “estratificación de riesgos” o simplemente “estratificación”) designa en medicina la estimación del riesgo de que en un paciente, o en un subgrupo de un colectivo de prueba de pacientes, progrese una enfermedad y conduzca a complicaciones cada vez más graves o a un final predefinido (por ejemplo muerte debido a la enfermedad). Con el propósito de una estratificación de riesgos se registran factores de riesgo o parámetros relevantes desde el punto de vista del diagnóstico, de los que se sabe que están relacionados con el progreso de una enfermedad y/o con la aparición de complicaciones. Con ayuda de diferentes técnicas de evaluación biométricas estadísticas in forma de tablas, algoritmos o programas informáticos que trabajan con los mismos se determina, basándose en los datos registrados, el riesgo individual de un paciente o el riesgo de un subgrupo de pacientes. También pueden considerarse las estratificaciones de riesgo como instrumento del pronóstico, con el que debe deducirse un pronóstico, que debe entenderse como una determinada probabilidad, a partir de criterios de prueba que han demostrado ser relevantes o válidos para el respectivo planteamiento en exámenes previos, por ejemplo para iniciar a tiempo contramedidas necesarias, cuando existen terapias preventivas razonables para los trastornos sanitarios que estén desarrollándose, o para evitar también que tales pacientes se sometan a medidas de terapia y de prevención que suponen una carga y/o caras, que ni siquiera necesitan tales medidas con una gran probabilidad.

Un procedimiento matemático conocido, adaptado a condiciones de prueba especiales para la estratificación de riesgos es el denominado método de Kaplan-Meier (también “estimador de Kaplan-Meier” o “Kaplan-Meier estimator”), que por ejemplo se emplea para el análisis del tiempo de supervivencia cuando no todas las personas de prueba tenidas en cuenta en la prueba están disponibles durante toda la duración de la prueba, por ejemplo porque se unen al colectivo de pacientes más tarde, se retiran del mismo, por ejemplo por muerte que no es atribuible al riesgo estudiado, o porque no muestran resultados claros en el plazo de la duración de la prueba. Dicho procedimiento de evaluación, que se describe más detalladamente por ejemplo en manuales de biometría médica y/o para el que se encuentran explicaciones en Internet bajo dichas denominaciones y para cuya aplicación se ofrecen programas informáticos comerciales, se aplica en el marco de la evaluación de la medición descrita en la parte experimental más adelante de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación en el plasma de tales pacientes, para los que se estableció un primer diagnóstico de “trastornos cognitivos leves”. Al aplicar este procedimiento se obtiene denominados “gráficos de Kaplan-Meier”, tal como se muestran en la mayoría de las figuras de la presente solicitud.

A continuación se enumeran algunas formas de realización, que no forman parte del alcance de protección de la presente solicitud, pero que pretenden contribuir a su comprensión: 1. fármaco, que comprende uno o varios principios activos de agentes cardiovasculares, seleccionado de entre el grupo constituido por: antagonistas de receptores de ANP, antagonistas de receptores de adenosina, inhibidores de ACE, antagonistas de receptores de angiotensina II, betabloqueantes y diuréticos que reducen la tensión arterial y sus combinaciones para el tratamiento de pacientes con trastornos cognitivos leves para retardar o impedir el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos o mejorar o mantener el estado del trastorno cognitivo leve.

2. Fármaco según el detalle 1, en el que el antagonista de receptores de ANP es un polímero de glucosa-ácido caproico.

3. Fármaco según el detalle 1, en el que el antagonista de receptores de adenosina es 1,3-dipropil-8-(3- noradamantil) xantina.

4. Fármaco según uno de los detalles 1 o 2, en el que el principio activo es un antagonista de receptores de ANP y el antagonista se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50% de los receptores de ANP están ocupados.

5. Fármaco según uno de los detalles 1 o 3, en el que el principio activo es un antagonista de receptores de adenosina y el antagonista se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50% de los receptores de adenosina están ocupados.

6. Fármaco según uno de los detalles 1 a 5, en el que el trastorno neurodegenerativo clínicamente manifiesto es demencia de tipo Alzheimer.

7. Fármaco según uno de los detalles 1 a 6, en el que para el tratamiento se selecciona un grupo de pacientes, que debido a un aumento mediable en su circulación de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación pueden identificarse como pacientes con un riesgo aumentado para el desarrollo de una demencia de tipo Alzheimer clínicamente manifiesta.

8. Procedimiento in vitro para la identificación de pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia, en el que - en una muestra de un fluido biológico de la circulación de un paciente con el diagnóstico de una alteración cognitiva leve se determina por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación y - a una concentración para dicho por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación, que se encuentra por encima de un valor umbral específico para el marcador (cut-off) en el intervalo de valores de concentración habituales para este biomarcador en el caso de trastornos cognitivos leves, se le asocia un riesgo aumentado para el desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta.

9. Procedimiento in vitro según el detalle 8, en el que para los pacientes con el riesgo superior establecido se da una recomendación para un tratamiento con fármacos según las reivindicaciones 1 a 6.

10. Procedimiento según el detalle 8 o 9, caracterizado por que la muestra es una muestra de suero o de plasma. 11. Procedimiento según uno de los detalles 8 a 10, caracterizado por que los biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación se seleccionan de los péptidos natriuréticos ANP y/o BNP y/o adrenomedulina (ADM) o de fragmentos de las respectivas prohormonas correspondientes proANP, proBNP o proADM.

12. Procedimiento según uno de los detalles 8 a 11, caracterizado por que se recomienda un tratamiento con un agente cardiovascular del grupo de los agentes hipotensores, que se selecciona de entre el grupo constituido por los inhibidores de la “enzima convertidora de angiotensina” (inhibidores de ACE), los antagonistas de receptores de angiotensina II (los “sartanos”), los betabloqueantes y los diuréticos utilizados para reducir la tensión arterial.

13. Procedimiento según el detalle 11, caracterizado por que se realiza la determinación con un procedimiento de determinación de inmunodiagnóstico y por que se determinan fragmentos de precursores prohormonales de péptidos relevantes para la circulación con una acción fisiológica que no puede establecerse o disminuida con respecto a los verdaderos péptidos relevantes para la circulación.

14. Procedimiento según el detalle 13, caracterizado por que se determina la concentración de un fragmento de proANP que contiene el segmento central de proANP (MR-proANP) y/o de un fragmento de proADM de la región media (MR-proADM), que comprende los aminoácidos 45 a 92 de la preproadrenomedulina.

15. Procedimiento de examen para identificar antagonistas de los receptores para el péptido natriurético atrial que comprende las etapas siguientes: ο realizar un ensayo de receptores competitivo para identificar candidatos de antagonistas, ο someter a prueba los candidatos de antagonistas para determinar la capacidad para bloquear la formación de cGMP inducida por ANP, e ο identificar los antagonistas de los receptores para el péptido natriurético atrial.

16. Utilización de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación, en particular los péptidos natriuréticos ANP, BNP y/o adrenomedulina (ADM) o fragmentos de los mismos o fragmentos de las prohormonas correspondientes proANP, proBNP o proADM para la estratificación o identificación de pacientes con trastornos cognitivos leves que presentan un riesgo aumentado para la conversión a un trastorno neurodegenerativo clínicamente manifiesto.

17. Antagonista de receptores de ANP para su utilización como medicamento.

18. Antagonista de receptores de ANP según el detalle 17, en el que el antagonista de receptores de ANP es un polímero de glucosa-ácido caproico.

Más adelante, en la parte experimental, se explican aún más detalladamente las mediciones en las que se basa la presente invención y las correspondientes evaluaciones de los resultados de medición haciendo referencia a varias figuras y tablas. A este respecto, se hace referencia a diez figuras (diagramas), cuyo contenido se explicará a continuación: Figura 1. Muestra un denominado gráfico de Kaplan-Meier, en el que se representa el desarrollo del estado de salud, en el sentido de una conversión a Alzheimer, es decir un desarrollo de una AD, del colectivo de medición de 131 pacientes con el establecimiento de diagnóstico original de “trastornos cognitivos leves” basándose en el diagnóstico puramente clínico a lo largo de un periodo de tiempo de más de seis años. En el periodo de tiempo monitorizado, 57 de los 131 pacientes desarrollaron una demencia de tipo Alzheimer clínicamente manifiesta (AD). Figura 2. Muestra las concentraciones medidas en las muestras de plasma del grupo de pacientes de la figura 1 para el biomarcador peptídico MR-proADM en el establecimiento del diagnóstico (t=0), por separado para los pacientes que presentan conversión a Alzheimer posteriormente (pacientes que presentan conversión a AD), los pacientes que no presentan conversión y pacientes que presentan conversión a otras formas de demencia “no de AD”.

Figura 3. Muestra las concentraciones medidas en las muestras de plasma del grupo de pacientes de la figura 1 para el biomarcador peptídico MR-proANP en el establecimiento del diagnóstico (t=0), por separado para los pacientes que presentan conversión a Alzheimer posteriormente (pacientes que presentan conversión a AD), los pacientes que no presentan conversión y pacientes que presentan conversión a otras formas de demencia “no de AD”. Figura 4. Muestra un gráfico de Kaplan-Meier para la conversión a AD para dos grupos de pacientes una vez con una concentración de MR-proANP medida, que se encontraba por encima del valor de cut-off de 74 pmol/l (mayor de 74), y por otro lado con una concentración que se encuentra por debajo de dicho valor de cut-off (menor de 74). Figura 5. Muestra un gráfico de Kaplan-Meier para la conversión a AD para dos grupos de pacientes una vez con una concentración de MR-proADM medida, que se encontraba por encima del valor de cut-off de más de 0,62 nmol/l (mayor de 0,62), y por otro lado con una concentración que se encuentra por debajo de dicho valor de cut- off (menor de 0,62). Figura 6. Muestra un gráfico de Kaplan-Meier para la conversión a AD de pacientes, en el que se tuvieron en cuenta al mismo tiempo las concentraciones en plasma de ambos biomarcadores peptídicos MR-proANP y proADM, concretamente diferenciado según grupos de pacientes, en los que (a) las concentraciones para ambos biomarcadores se encontraban por debajo de los valores de cut-off indicados en las figuras 4 y 5 (ambas reducidas), (b) sólo una de las concentraciones se encontraba por debajo de un valor de cut-off indicado en las figuras 4 y 5 (intermedia), y (c) las concentraciones para ambos biomarcadores se encontraban por encima de los valores de cut-off indicados en las figuras 4 y 5 (ambas elevadas).

Figura 7. Muestra la conversión a AD diagnosticada clínicamente de los 131 pacientes con LKS separada por un lado según pacientes, que según su historial médico antes del establecimiento del diagnóstico se habían tratado con agentes cardiovasculares (tratados), y por otro lado según pacientes, para los que no se había documentado un tratamiento previo de este tipo. Basándose en una evaluación de este tipo no puede establecerse ninguna diferencia significativa entre dichos grupos de pacientes. Figura 8. Muestra la conversión a AD diagnosticada clínicamente de un subgrupo de 108 pacientes de los 131 pacientes con LKS originales, para los que se había medido un valor de MR-proADM por encima del cut-off de 0,62 nmol/l, separada por un lado según pacientes, que según su historial médico antes del establecimiento del diagnóstico se habían tratado con agentes cardiovasculares (tratados), y por otro lado según pacientes, para los que no se había documentado ningún tratamiento previo de este tipo (no tratados). Figura 9. Muestra la conversión a AD clínicamente diagnosticada de un subgrupo de 92 pacientes de los 131 pacientes con LKS originales, para los que se había medido un valor de MR-proANP por encima del cut-off de 74 pmol/l, separada por un lado según pacientes, que según su historial médico antes del establecimiento del diagnóstico se habían tratado con agentes cardiovasculares (tratados), y por otro lado según pacientes, para los que no se había documentado ningún tratamiento previo de este tipo (no tratados). Figura 10. Muestra la conversión a AD diagnosticada clínicamente de un subgrupo de aquellos 85 pacientes de los 131 pacientes con LKS originales, para los que se había medido tanto un valor de MR-proANP por encima del cut-off de 74 pmol/l como un valor de MR-proADM por encima del cut-off de 0,62 nmol/l, separada por un lado según pacientes, que según su historial médico antes del establecimiento del diagnóstico se habían tratado con agentes cardiovasculares (tratados), y por otro lado según pacientes, para los que no se había documentado ningún tratamiento previo de este tipo (no tratados).

Parte experimental Colectivo de pacientes: De los 131 pacientes con el diagnóstico de trastornos cognitivos leves (LKS o MCI) y una mediana de la edad de 71,5 años (n=131) se obtuvieron en el primer establecimiento del diagnóstico (t=0) muestras de sangre en EDTA, y de éstas se generaron muestras de plasma en EDTA como material de estudio para mediciones de biomarcadores. Se estudiaron los pacientes regularmente en los 6 años siguientes con separaciones de 6 meses. Cada vez se registró si se había producido una conversión a una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta (demencia de tipo Alzheimer, demencia vascular). Se diagnosticó la demencia de tipo Alzheimer según los criterios de NINCDS-ADRDA (McKhann et al., Neurology 1984; 34: 939-944). Se diagnosticó el MCI según los criterios de Petersen (Arch Neurol 1999; 56: 303-308).

En el periodo de tiempo de observación, de los 131 pacientes 75 pacientes (pacientes que presentan conversión) desarrollaron una neurodegeneración documentada (n=60 demencia de tipo Alzheimer; n=15 demencia vascular), 56 pacientes (pacientes que no presentan conversión) permanecen en el estado de LKS.

La figura 1 muestra dichos resultados para todo el colectivo de pacientes en forma de un gráfico de Kaplan-Meier basado sólo en el diagnóstico clínico. La tabla 2 muestra los números de los pacientes con LKS (pacientes con un riesgo para el desarrollo de una demencia) y su desarrollo clínico en el periodo de tiempo de estudio, expresado concretamente como el número de los pacientes que mostraron una conversión a Alzheimer (pacientes que presentan conversión a AD), que mostraron una conversión a otra forma de demencia (pacientes que no presentan conversión AD), que no mostraron ninguna conversión (pacientes que no presentan conversión) así como las proporciones porcentuales de los pacientes que presentan conversión AD, con respecto al número de los pacientes en el estudio.

Tabla 2 Conversión a Alzheimer (AD) Inclusión 12 meses 24 meses 36 meses 48 meses 60 meses Pacientes en el estudio 131 131 131 131 125 106 Pacientes que presentan 6 27 41 57 conversión a AD Pacientes que no presentan 3 8 17 17 18 conversión a AD Pacientes que no presentan 131 122 96 73 58 31 conversión Porcentaje de pacientes que 0% 4,6% 20,6% 31,3% 40,0% 53,8% presentan conversión a AD* *Calculado con respecto a los pacientes en el estudio Mediciones de biomarcadores/descripción del ensayo y evaluación En las muestras de plasma en EDTA, que se habían obtenido en el establecimiento del diagnóstico, se midieron con ensayos del solicitante las concentraciones de los biomarcadores peptídicos MR-proANP y MR-proADM. La medición de MR-proANP en el plasma tuvo lugar con un ensayo tipo sándwich inmunoluminométrico esencialmente tal como se describe en la parte experimental del documento WO 2004/046181 mencionado anteriormente.

La medición de MR-proADM en el plasma tuvo lugar con un ensayo tipo sándwich inmunoluminométrico esencialmente tal como se describe en la parte experimental del documento WO 2004/090546 descrito anteriormente.

Como se mostró en dichas solicitudes de patente anteriores, para los sujetos sanos (60 personas control asintomáticas, que no mostraban síntomas de trastornos cognitivos ni padecían ninguna otra enfermedad reconocible, para la que se conoce que en la misma puede medirse de manera aumentada el respectivo analito biomarcador), se determinaron las medianas para las concentraciones medidas tal como sigue: MR-proANP = 62,3 pmol/l MR-proADM = 0,60 nmol/l.

Evaluaciones Las concentraciones de los biomarcadores peptídicos medidas en el plasma obtenido en el establecimiento del diagnóstico de los 131 pacientes con LKS se ilustran en la figura 2 (para MR-proADM) o en la figura 3 (para MR- proANP), concretamente en cada caso separadas según pacientes que presentan conversión a AD posteriormente, pacientes que presentan conversión a otras demencias (a demencia vascular) y pacientes que no presentan conversión.

Se encontró que para ambos biomarcadores ya se diferencian significativamente en el primer establecimiento del diagnóstico las medianas para los grupos los diferentes pacientes que presentan conversión y los pacientes que no presentan conversión.

Como se muestra de manera resumida en la tabla 3 a continuación, las medianas de los valores de concentración medidos para pacientes que presentan conversión posteriormente están aumentadas significativamente para ambos biomarcadores.

Tabla 3 MR-proADM MR-proANP Pacientes que no presentan conversión 0,71 nmol/l 73 pmol/l Pacientes que no presentan conversión a AD 0,99 nmol/l 125 pmol/l Pacientes que presentan conversión a AD 0,83 nmol/l 113 pmol/l La determinación de un valor de cut-off óptimo para la evaluación adicional para el respectivo biomarcador tuvo lugar basándose en denominados gráficos ROC (no mostrados). Se encontró que los valores de cut-off pueden encontrarse sólo de manera relativamente ligera por encima de las medianas determinadas para las personas control. Las figuras 4 y 5 muestran los gráficos de Kaplan-Meier que se obtienen al aplicar los valores de cut-off anteriores al colectivo de pacientes con LKS, divididos según grupos de pacientes con valores de concentración para el biomarcador peptídico indicado por encima del respectivo cut-off (mayor), y aquéllos por debajo (menor). Como puede observarse en las figuras 4 y 5, en la medición de concentraciones de MR-proANP o MR-proADM en el plasma de pacientes con LKS, que en el primer establecimiento del diagnóstico se encuentran por encima de los valores de cut-off determinados para dichos ensayos, existe para los respectivos pacientes una probabilidad considerablemente mayor de una conversión posterior que en el caso de los valores menores. Por consiguiente, el riesgo de desarrollo de degeneraciones neurológicas del tipo demencia de tipo Alzheimer está asociado al aumento de los marcadores sanguíneos seleccionados. De los pacientes, para los que se midieron las concentraciones de MR-proADM en el plasma por debajo del cut-off de MR-proADM 0,62 nmol/l, sólo el 17,4% desarrolló una enfermedad de AD, mientras que el 60,1% de los pacientes con valores por encima de dicho cut-off presentaron conversión a AD. Por consiguiente, el riesgo de conversión es a concentraciones por encima del cut-off aproximadamente 3,45 mayor. De manera análoga, el 67,1% de los pacientes con valores por encima del cut-off de 74 pmol/l para MR-proANP presentaron conversión y sólo el 18,2% de aquellos pacientes, para los que se midieron concentraciones de MR- proANP por debajo del mismo; por consiguiente, el riesgo aumenta para pacientes con valores de concentración de MR-proANP por encima del cut-off en un factor de aproximadamente 3,7. Mediante la combinación de biomarcadores pueden mejorarse aún adicionalmente los pronósticos de riesgo: a modo de ejemplo, en la evaluación de los resultados de medición anteriores se formaron por tanto 3 grupos de pacientes: a) pacientes con ambos marcadores por debajo de los valores de cut-off seleccionados, b) pacientes con uno de los marcadores por encima del cut-off correspondiente, y d) pacientes con ambos marcadores por encima de los respectivos valores de cut-off. La figura 6 muestra la representación de Kaplan-Meier obtenida en una evaluación de este tipo.

Como puede deducirse de la figura 6, cuando se tienen en cuenta ambos biomarcadores conjuntamente, se obtiene que los pacientes, en los que en el establecimiento del diagnóstico (t=0) ambos biomarcadores se encuentran por debajo de los respectivos valores de cut-off, pertenecen con una probabilidad muy alta al grupo de los pacientes que no presentan conversión, mientras que entonces, cuando ambos biomarcadores se encuentran al mismo tiempo por encima de los valores de cut-off correspondientes, para un paciente de este tipo la probabilidad de una conversión a AD en el plazo de 5 años es muy elevada. El riesgo relativo de desarrollo de una degeneración neurológica manifiesta del tipo AD entre el grupo “ambos marcadores por debajo del cut-off” (conversión del 6,8%) y “ambos marcadores por encima del cut-off” (conversión del 69%) aumenta hasta aproximadamente 11. Evaluación teniendo en cuenta tratamientos previos de los pacientes con agentes cardiovasculares Los biomarcadores medidos ADM y ANP, cuya liberación a la circulación se midió indirectamente mediante los fragmentos de MR-proANP o MR-proADM, se conocen como biomarcadores de insuficiencia cardiaca. Por consiguiente, se obtiene como resultado una fuerte asociación entre los aumentos de biomarcadores de insuficiencia cardiaca y el desarrollo de enfermedades neurodegenerativas, sobre todo la demencia de tipo Alzheimer. Sin embargo, la correlación se muestra a un nivel sorprendentemente bajo de las concentraciones de biomarcadores, que se encuentran dentro de las dispersiones determinadas para los respectivos marcadores de las “concentraciones normales”. Por consiguiente, se trata más bien de aumentos escasos de los marcadores considerados. Motivado por esto, se llegó a la conclusión de que en el caso de pacientes, que posteriormente desarrollan una degeneración neurológica, en particular del tipo AD, también puede observarse un empeoramiento de la capacidad de rendimiento circulatorio aunque sólo reducido, continuo. A partir de esto, el inventor desarrolló la hipótesis de que una estabilización de la circulación de pacientes con LKS con concentraciones de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación ligeramente aumentadas podría ser eficaz en el sentido de impedir o retardar la conversión. Sin embargo, si partiendo de las reflexiones anteriores a continuación se estudia el desarrollo de los 131 pacientes con LKS con respecto al desarrollo de una demencia de tipo Alzheimer clínicamente manifiesta (AD) teniendo en cuenta el aspecto “tratado previamente antes del establecimiento del diagnóstico con agentes cardiovasculares” y “no tratado previamente antes del establecimiento del diagnóstico con agentes cardiovasculares”, entonces no puede establecerse ninguna diferencia significativa entre los dos grupos de pacientes. Se remite para ello a la figura 7.

Sin embargo, la situación cambia cuando no se tienen en cuenta todos los pacientes con LKS, sino sólo aquéllos, para los que en las mediciones de biomarcadores anteriores se determinaron concentraciones en plasma para los biomarcadores relevantes para la circulación medidos por encima de los respectivos valores de cut-off. Si se estudia, mediante las historias clínicas documentadas de los pacientes con LKS del colectivo de pacientes estudiado, cuántos de aquellos pacientes que en el establecimiento del diagnóstico de “LKS” presentan en su plasma valores de concentración para uno de los o ambos biomarcadores peptídicos estudiados MR-proANP y/o MR-proADM por encima de los valores de cut-off seleccionados, ya se habían tratado previamente por otros motivos con por lo menos un medicamento de los medicamentos listados en la tabla 1 anterior, y en qué medida un tratamiento de este tipo se refleja en dichos grupos de pacientes en las tasas de conversión a AD observadas, se encuentran correlaciones claras en el sentido de que los pacientes en los que uno de los o ambos biomarcadores relevantes para la circulación medidos en el establecimiento del diagnóstico de LKS se había(n) encontrado aumentado(s) y que se habían tratado previamente con medicamentos de dicha clase de medicamentos cardiovasculares, mostraban una conversión a AD significativamente menor que los pacientes correspondientes, que no habían recibido ningún tratamiento previo correspondiente.

Las tablas 4, 5 y 6 a continuación resumen los resultados de una evaluación de este tipo de los datos de pacientes, concretamente una vez teniendo en cuenta sólo pacientes para los que se había encontrado MR-proANP aumentado (tabla 4), para los que se había encontrado MR-proADM aumentada (tabla 5), y además pacientes para los que ambos biomarcadores se habían encontrado aumentados.

Tabla 4 Conversión a Alzheimer (AD), MR-proANP > 74 pmol/l Tratados No tratados Total 37 Pacientes que presentan conversión a AD Porcentaje de pacientes que presentan conversión a AD 41% 64% Conversión a AD bajo tratamiento en pacientes con MR-proANP>74, p=0,035 Reducción de la conversión a AD en caso de tratamiento: 35,9% Tabla 5 Conversión a Alzheimer (AD), MR-proADM > 0,62 nmol/l Tratados No tratados Total 43 Pacientes que presentan conversión a AD 16 37 Porcentaje de pacientes que presentan conversión a AD 37% 43% Conversión a AD bajo tratamiento en pacientes con MR-proADM >0,62, p=0,051 Reducción de la conversión a AD en caso de tratamiento: 14,0% Tabla 6 Conversión a Alzheimer (AD), MR-proANP > 74 pmol/l y al mismo tiempo MR-proADM > 0,62 nmol/l Tratados No tratados Total Pacientes que presentan conversión a AD 14 33 Porcentaje de pacientes que presentan conversión a AD 40% 66% Conversión a Alzheimer (AD) con MR-proANP >74 y MR-proADM >0,62, p=0,026 Reducción de la conversión a AD en caso de tratamiento: 39,4% El contenido de las tablas 4, 5 y 6 se muestra gráficamente en las figuras 8, 9 o 10 en forma de gráficos de Kaplan- Meier. De las tablas o de las figuras correspondientes puede deducirse que la tasa de conversión a AD de pacientes tratados previamente con medicamentos, para los que en el establecimiento del diagnóstico se habían encontrado concentraciones en plasma de los biomarcadores peptídicos medidos que se encontraban en sí por encima de los valores de cut-off fijados, era mucho menor, es decir que se desarrollaban menos enfermedades de AD clínicamente manifiestas que en el caso de pacientes comparables, que sin embargo no habían recibido ningún tratamiento medicamentoso previo.

De esto pueden derivarse mejoras considerables del pronóstico de pacientes con LKS (o MCI), para los que pueden medirse biomarcadores relevantes para la circulación (ligeramente) aumentados, cuando se trata a tales pacientes a su debido tiempo con uno o varios medicamentos cardiovasculares (agentes hipotensores; agentes para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca).

En consecuencia, según la presente invención, para pacientes con LKS, en los que en un análisis in vitro previo se encontraron en el plasma valores aumentados para biomarcadores peptídicos (ANP; ADM), es decir para los que existe en sí un pronóstico más bien malo, también puede recomendarse un tratamiento con medicamentos cardiovasculares, dado que éste puede reducir el riesgo de conversión a AD en sí establecido.

Por consiguiente, la invención se refiere también a un método para el pronóstico y la terapia de trastornos cognitivos leves o a procedimientos para identificar pacientes que necesitan terapia y para el tratamiento preventivo de pacientes de este tipo con trastornos cognitivos leves.

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento in vitro para la estratificación de riesgos de pacientes con trastornos cognitivos leves con el objetivo de identificar pacientes con trastornos cognitivos leves que necesitan terapia, que comprende - determinar por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación en una muestra de un fluido biológico procedente de la circulación de un paciente con diagnóstico de un trastorno cognitivo leve, y - asociar un riesgo aumentado para el desarrollo de una enfermedad neurodegenerativa clínicamente manifiesta a una concentración aumentada para dicho por lo menos un biomarcador peptídico relevante para la circulación, que se encuentra por encima de un valor umbral específico para el biomarcador (cut-off) en el intervalo de valores de concentración habituales para estos biomarcadores en el caso de trastornos cognitivos leves, siendo el biomarcador relevante para la circulación seleccionado de entre los fragmentos MR-proANP y/o MR-proADM, y siendo el valor umbral para MR-ProANP 60 - 90 pmol/l y el valor umbral para MR-ProADM 0,5 - 0,7 nmol/l, y siendo los pacientes con el riesgo superior establecido identificados como necesitados de terapia para el tratamiento con un fármaco, que comprende uno o varios principios activos de agentes cardiovasculares seleccionados de entre el grupo constituido por: antagonistas de receptores de ANP, antagonistas de receptores de adenosina, inhibidores de ACE, antagonistas de receptores de angiotensina II, betabloqueantes y diuréticos que reducen la tensión arterial y sus combinaciones, para retardar o evitar el desarrollo de trastornos neurodegenerativos clínicamente manifiestos o mejorar o mantener el estado del trastorno cognitivo leve.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el antagonista de receptores de ANP es un polímero de glucosa-ácido caproico.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el antagonista de receptores de adenosina es 1,3-dipropil-8-(3- noradamantil)xantina. 4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el principio activo es un antagonista de receptores de ANP y el antagonista se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50% de los receptores de ANP están ocupados. 5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 3, en el que el principio activo es un antagonista de receptores de adenosina y el antagonista se administra en una dosis, en la que por lo menos el 50% de los receptores de adenosina están ocupados. 6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el trastorno neurodegenerativo clínicamente manifiesto es una demencia de tipo Alzheimer.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, en el que para el tratamiento se selecciona un grupo de pacientes, que debido a un aumento medible en su circulación de biomarcadores peptídicos relevantes para la circulación pueden identificarse como pacientes con un riesgo aumentado para el desarrollo de una demencia de tipo Alzheimer clínicamente manifiesta.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado por que la muestra es una muestra de suero o de plasma. 9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado por que se recomienda un tratamiento con un agente cardiovascular de entre el grupo de los agentes hipotensores, que se selecciona de entre el grupo constituido por los inhibidores de la “enzima convertidora de angiotensina” (inhibidores de ACE), los antagonistas de receptores de angiotensina II (los “sartanos”), los betabloqueantes y los diuréticos utilizados para reducir la tensión arterial. 10. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que se realiza la determinación con un procedimiento de determinación de inmunodiagnóstico, y por que se determina MR-proADM o proANP con una acción fisiológica que no puede establecerse o disminuida con respecto a los verdaderos péptidos relevantes para la circulación ADM o ANP.