Identificación de nuevas toxinas antagonistas de canales de calcio de tipo T de aplicación analgésica.

Péptido de secuencia aminoacídica

YCQKFLWTCDSERPCCEGLVCRLWCKIN (SEQ ID NO 1).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR2010/000037.

Solicitante: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS).

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 3, RUE MICHEL-ANGE 75794 PARIS CEDEX 16 FRANCIA.

Inventor/es: LAZDUNSKI, MICHEL, BOURINET,EMMANUEL, ESCOUBAS,PIERRE, MARGER,FABRICE, NARGEOT,JOËL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/17 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que provienen de animales; que provienen de humanos.
  • A61P25/04 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 25/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso. › Analgésicos que actúan sobre el sistema nervioso central, p.ej. opioides.
  • C07K14/435 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de animales; de humanos.
  • C12N15/12 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.

PDF original: ES-2524564_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Identificación de nuevas toxinas antagonistas de canales de calcio de tipo T de aplicación analgésica Campo técnico de la invención La presente invención se refiere a una toxina antagonista de canales de calcio de tipo T ("canales de tipo T") . En particular, se refiere a un péptido compuesto por un péptido, a ácidos nucleicos que codifican este péptido y al uso de dicho péptido como antagonista y/o agonista inverso de canales de calcio de tipo T. La presente invención se refiere igualmente al uso de este péptido para la fabricación de un medicamento.

Encuentra aplicación especialmente en el tratamiento del dolor, en patologías cardiovasculares, en el tratamiento de la disfunción eréctil y potencialmente en el tratamiento de cánceres.

En la descripción siguiente, las referencias indicadas como " Ref. " remiten a la lista de referencias presentadas después de los ejemplos.

Estado de la técnica La toma en consideración y el tratamiento del dolor son esenciales para la calidad de vida. El dolor afecta a un número significativo de personas. En Europa, se estima que 60 millones de personas están afectadas cada año por el dolor, lo que representa un coste anual de 1.000 millones de dólares en medicamentos para su tratamiento. Los gastos efectuados anualmente en medicamentos analgésicos pueden evaluarse en aproximadamente 25.000 millones de dólares y deberían alcanzar los 42.000 millones en 2010. El dolor se divide en dos categorías: el dolor agudo y el dolor crónico. El dolor agudo corresponde a un dolor rápido y breve, limitado en el tiempo, en contraposición con el dolor crónico, que es un dolor persistente y que puede estar ligado, por ejemplo, a una hiperalgesia.

Se han efectuado numerosos estudios referentes a la identificación de los mecanismos que permiten la transmisión del dolor. La transmisión de la señal de dolor por el sistema nervioso hace intervenir a receptores neuronales que transforman el estímulo doloroso en una señal eléctrica. Esta se transmitirá entonces al sistema nervioso central por los nervios, haciendo intervenir a receptores moleculares específicos.

Entre las diversas neuronas sensoriales, se pueden citar las neuronas nociceptivas, que reaccionan específicamente a los estímulos dolorosos.

A causa de su especificidad, las neuronas nociceptivas poseen un repertorio único de canales iónicos, que son proteínas responsables de la excitabilidad celular, y que representan una clase importante de dianas de medicamentos. Así, los canales iónicos expresados específicamente en las neuronas nociceptivas representan también dianas para el descubrimiento de nuevos analgésicos.

Las moléculas que inhiben el dolor, o analgésicos, son conocidas desde hace mucho tiempo. Se pueden citar, por ejemplo, la clase de los opiáceos, que actúan sobre la señalización de la señal de dolor y estimulan las vías nerviosas inhibidoras del dolor. Se usan otras moléculas para tratar los dolores crónicos. Son, por ejemplo, moléculas que actúan sobre los receptores de GABA como badofeno, diazepám, tizanidina y dartroleno.

Las moléculas analgésicas usadas actualmente presentan varios inconvenientes. Es bien conocido que los derivados de los opioides pueden provocar fenómenos alucinatorios y depresiones cardiorrespiratorias. Son igualmente fuente de dependencias, como por ejemplo dependencia de morfina, metadona, etc. Por último, el tratamiento con opiáceos está asociado a efectos indeseables como un estreñimiento grave.

Existen igualmente casos de habituación de estos medicamentos, es decir, que deba aumentarse la dosis necesaria para obtener un efecto constante. Esta habituación crece con el tiempo y conlleva por tanto la necesidad de aumentar las dosis y puede conllevar la ineficacia del medicamento. Efectivamente, la cantidad necesaria puede volverse superior a la dosis tóxica de dicho medicamento.

Por ejemplo, en el caso de dolores neuropáticos, que pueden aparecer en casos de diabetes, cáncer, tratamientos quimioterapéuticos, dolores inflamatorios crónicos, casos de síndrome del colon irritable, etc., el tratamiento del dolor con analgésicos y antálgicos conocidos induce frecuentemente un fenómeno de habituación y por tanto problemas de tratamiento de estos dolores.

Existe por tanto una necesidad real de encontrar nuevas moléculas analgésicas o antálgicas que palien estos defectos, inconvenientes y obstáculos de la técnica anterior con el fin de reducir los costes y mejorar el tratamiento del dolor y el bienestar de los pacientes.

Exposición de la invención Los inventores han mostrado mediante experimentos de inhibición de la expresión del gen Cacna1h, que codifica el canal de calcio de tipo T Cav3.2 presente en los nocirreceptores, que dicho canal está implicado en la percepción del dolor.

Los canales Cav3.2 forman parte de la familia de los canales de calcio de "umbrales bajos" o "de tipo T" y se expresan en neuronas nociceptivas Al usar un enfoque de represión génica por inyección intratecal de ADN anticodificante en rata, como se describe en Bourinet, E., et al., "Silencing of the CaV3.2 T-type calcium channel gene in sensor y neurons demonstrates its major role in nociception". Embo J., 2005. 24 (2) : pág. 315-24 (Ref 1) , los inventores han demostrado que la disminución de los canales de calcio Cav3.2 en neuronas nociceptivas de animales sanos o en estado de neuropatía conlleva una analgesia espectacular. En consecuencia, los canales de calcio de tipo T representan una diana potencial para el desarrollo de nuevos enfoques terapéuticos del tratamiento del dolor.

Por otro lado, se ha demostrado que los canales de calcio Cav3.2 están implicados en la proliferación celular (Taylor, J.T., Zeng, X.B., Pottle, J.E., Lee, K., Wang, A.R., Yi, S.G., Scruggs, J.A., Sikka, S.S. y Li, M. (2008) "Calcium signaling and T-type calcium channels in cancer cell cycling". World J. Gastroenterol., 14, 4984-4991 (Ref 8) ) y en la regulación de la tensión sanguínea (Chen, C.C., Lamping, K.G., Nuno, D.W., Barresi, R., Prouty, S.J., Lavoie, J.L., Cribbs, L.L., England, S.K., Sigmund, C.D., Weiss, R.M., Williamson, R.A., Hill, J.A. y Campbell, K.P. (2003) "Abnormal coronar y function in mice deficient in alpha1H T-type Ca2+ channels". Science, 302, 1416-1418. (Ref 9) ) . Los canales de calcio de tipo T representan una diana potencial para el desarrollo de nuevos enfoques terapéuticos del tratamiento del de hipertensión y cánceres, por ejemplo cánceres ligados a una proliferación anárquica de las células cancerosas.

Puede tratarse de cánceres de diversos órganos, por ejemplo:

 cáncer de próstata (véase GackiÃre F, Bidaux G, Delcourt P, Van Coppenolle F, Katsogiannou M, Dewailly E, Bavencoffe A, Van Chuoï-Mariot MT, Mauroy B, Prevarskaya N, Mariot P. (2008) "CaV3.2 T-type calcium channels are involved in calcium-dependent secretion of neuroendocrine prostate cancer cells". J. Biol. Chem., 283 (15) : 10162-73 (Ref 16) ,

 glioma (véase Panner A, Cribbs LL, Zainelli GM, Origitano TC, Singh S, Wurster RD. (2005) "Variation of Ttype calcium channel protein expression affects cell division of cultured tumor cells". Cell Calcium, 37 (2) : 105-19 (Ref 11) ) ,

 carcinoma de esófago (véase Lu F, Chen H, Zhou C, Liu S, Guo M, Chen P, Zhuang H, Xie D, Wu S. (2008) "T-type Ca2+ channel expression in human esophageal carcinomas: a functional role in proliferation" Cell Calcium. 43 (1) : 49-58 (Ref 12) )

 cáncer de mama (véase Taylor JT, Huang L, Pottle JE, Liu K, Yang Y, Zeng X, Keyser BM, Agrawal KC, Hansen JB, Li M (2008) "Selective blockade of T-type Ca2+ channels suppresses human breast cancer cell proliferation". Cancer Lett., 18; 267 (1) : 116-24 (Ref 13) .

En particular, es el objeto de la presente patente un enfoque farmacológico que usa antagonistas selectivos del canal Cav3.2 de tipo T.

La invención responde precisamente a la necesidad de encontrar nuevas moléculas analgésicas o antálgicas que proporcionen una nueva molécula capaz de inhibir especialmente una señal de dolor, más particularmente una molécula capaz de inhibir los receptores responsables de esta señal. Esta molécula es un péptido de secuencia: YCQKFLWTCDSERPCCEGLVCRLWCKIN (SEQ ID NO 1) .

Se entiende por "derivado" que estos "fragmentos" o "derivados" son aquellos que conservan las propiedades del péptido de la presente invención. Puede considerarse igualmente que los derivados o fragmentos son análogos del péptido de la presente invención.

Por ejemplo, un derivado puede ser el péptido de secuencia ID NO1 con modificaciones en al menos uno de los aminoácidos. Las modificaciones son, por... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Péptido de secuencia aminoacídica YCQKFLWTCDSERPCCEGLVCRLWCKIN (SEQ ID NO 1) .

2. Ã?cidos nucleicos que codifican el péptido definido en la reivindicación 1.

3. Ã?cido nucleico según la reivindicación 2, en el que la secuencia de ácido nucleico es

en las que A es adenosina, C es citidina, G es guanosina, T es timidina y H es A o C o T, M es A o C, N es A o C o G o T, R es A o G, S es C o G, W es A o T e Y es C o T:

4. Sistema de expresión que comprende un plásmido y/o un vector de expresión que comprende un ácido 10 nucleico según la reivindicación 2.

5. Péptido antagonista de un canal de calcio de tipo T de secuencia aminoacídica: YCQKFLWTCDSERPCCEGLVCRLWCKIN (SEQ ID NO 1) .

6. Péptido antagonista de un canal de calcio de tipo T según la reivindicación 5, en el que dicho canal es un canal elegido del grupo que comprende el canal Cav3.2 y el canal Cav3.1.

7. Péptido según la reivindicación 1, para su uso como medicamento.

8. Péptido según la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento del dolor.

9. Péptido según la reivindicación 1, para su uso como medicamento analgésico.

10. Procedimiento de síntesis del péptido según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una etapa de síntesis química sobre soporte sólido o una etapa de síntesis por recombinación genética.

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Figura 4

Figura 5

Secuencia de pT7-7:

Figura 6 (1/2)

Secuencia de pGex-4-T1:

Figura 6 (2/2)

Figura 7 (1/3)

Secuencia de pET32

Figura 7 (2/3)

Figura 7 (3/3)

Figura 8 Inhibición de Cav3.2 recombinante Péptido sintético frente al natural


 

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