Compuestos heterocíclicos condensados, y sus composiciones y usos.

Un compuesto que tiene la fórmula 1:**Fórmula**

en la que

A y B se seleccionan independientemente de CR2'R2'

, CO, y CS;

Y es CR2'R2';

W es N;

Z se selecciona de O y NR2;

L es alquileno de C1-C9 o heteroalquileno de C1-C9;

R1 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico;

R2 se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8;

cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo y aralquilo;

R3 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico;

R4' es H; y en la que L, R1, R2, R2' y R3 pueden estar sustituidos o no sustituidos;

o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica del mismo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2006/017614.

Solicitante: Evotec AG.

Inventor/es: KELLY,MICHAEL,G, KINCAID,JOHN, KAUB,CARL J.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS HETEROCICLICOS (Compuestos macromoleculares... > Compuestos heterocíclicos que contienen átomos... > C07D487/04 (Sistemas condensados en orto)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS HETEROCICLICOS (Compuestos macromoleculares... > Compuestos heterocíclicos que contienen átomos... > C07D471/04 (Sistemas condensados en orto)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/519 (condensadas en orto o en peri con heterociclos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de trastornos del... > A61P25/28 (de los problemas neurodegenerativos del sistema nervioso central, p. ej. noótropos, activadores del conocimiento, medicamentos para el tratamiento del Alzheimer o de otras formas de demencia)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS, CARBOCICLICOS O HETEROCICLICOS... > Compuestos que contienen elementos de los grupos... > C07F9/141 (Esteres de ácidos fosforosos)
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Compuestos heterocíclicos condensados, y sus composiciones y usos.

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DESCRIPCIÓN

Compuestos heterocíclicos condensados, y sus composiciones y usos CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a nuevos compuestos heterocíclicos condensados de la clase de tetrahidropirido[4,3- d]pirimidinas y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. Esta invención también describe métodos para prevenir y/o tratar afecciones en mamíferos, tales como (pero no limitarse a) artritis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, asma, infarto de miocardio, el tratamiento y profilaxis de síndromes de dolor (agudo y crónico o neuropático), trastornos neurodegenerativos, esquizofrenia, trastornos cognitivos, ansiedad, depresión, enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos autoinmunitarios, y para promover la neuroprotección, usando los compuestos heterocíclicos condensados y las composiciones farmacéuticas de la invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se buscan estrategias terapéuticas para el manejo eficaz del dolor y trastornos o enfermedades del sistema nervioso central.

La solicitud de patente internacional, número de publicación WO 02/08221, describe diarilpiperazina y compuestos relacionados que se afirma que son útiles en el tratamiento de estados de dolor crónico y agudo, escozor e incontinencia urinaria.

El documento WO 02/053558 describe algunos derivados de quinazolona como antagonistas de los receptores adrenérgicos alfa 1A/B, y los documentos WO 03/076427 y WO 04/041259 describen compuestos de la misma clase para uso en el tratamiento de disfunción sexual femenina. El documento WO 04/56774 describe ciertos análogos de arilamida sustituida del ácido bifenil-4-carboxílico que tienen una posible aplicación como moduladores de receptores. También, el documento WO 03/104230 describe ciertos derivados de pirimidina bicíclicos, y la solicitud publicada US Serie nº 20030092908 y el documento WO 02/087513 describen inhibidores de PDE7 heterocíclicos condensados. El documento WO 01/51490 A1 describe derivados nucleosídicos y nucleotídicos útiles como agonistas o antagonistas de receptores P1 o P2.

Las patentesUS nos 3.424.760 y 3.424.761 describen una serie de 3-ureidopirroIidinas que se afirma que presentan actividades analgésicas, del sistema nervioso central y psicofarmacológicas. Estas patentes describen específicamente los compuestos 1-(1-fenil-3-pirrolidinil)-3-fenilurea y 1-(1-fenil-3-pirrolidinil)-3-(4-metoxifenil)urea, respectivamente. Las solicitudes de patente internacional, números de publicación WO 01/62737 y WO 00/69849, describen una serie de derivados de pirazol que se señala que son útiles en el tratamiento de trastornos y enfermedades asociados con el subtipo Y5 de receptores para NPY, tales como obesidad. El documento WO 01/62737 describe específicamente el compuesto 5-amino-N-isoquinolin-5-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3- carboxamida. El documento WO 00/69849 describe específicamente los compuestos 5-metil-N-quinolin-8-il-1-[3- (trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-quinolin-7-il-1-[3-trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3- carboxamida, 5-metil-N-quinolin-3-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, N-isoquinolin-5-il-5-metil-1-[3- (trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-quinolin-5-il-1-[3-(trifluorometil)fenil]-1H-pirazol-3- carboxamida, 1-(3-clorofenil)-N-isoquinolin-5-il-5-metil-1H-pirazol-3-carboxamida, N-isoquinolin-5-il-1-(3-metoxifenil)- 5-metil-1H-pirazol-3-carboxamida, 1-(3-fuorofenil)-N-isoquinolin-5-il-5-metil-1H-pirazol-3-carboxamida, 1-(2-cloro-5- trifluorometilfenil)-N-isoquinolin-5-il-5-metil-1N-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-(3-metilisoquinolin-5-il)-1-[3- (trifluorometil)fenil]-1N-pirazol-3-carboxamida, 5-metil-N-(1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-5-il)-1-[3-(trifluorometil)fenil]- 1H-pirazol-3-carboxamida.

La sSolicitud de patente alemana número 2502588 describe una serie de derivados de piperazina. Esta solicitud describe específicamente el compuesto N-[3-[2-(dietiIamino)etil]-1,2-dihidro-4-metil-2-oxo-7-quinolinil]-4-fenil-1- piperazincarboxamida.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se describen aquí compuestos heterocíclicos condensados, y composiciones farmacéuticas de los mismos, con potencia y selectividad en la prevención y tratamiento de afecciones que se han asociado a trastornos y disfunciones neurológicas e inflamatorias.

En particular, los compuestos y las composiciones farmacéuticas proporcionados son útiles para tratar, prevenir o aliviar una serie de afecciones en mamíferos, tales como, pero sin limitarse a, dolor de diversa génesis o etiología, por ejemplo dolor inflamatorio y neuropático, agudo, crónico, dolor dental y cefalea (tal como migraña, cefalea en brotes y cefalea por tensión). En algunas realizaciones, los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los métodos proporcionados son útiles para el tratamiento de dolor inflamatorio e hiperalgesia y alodinia asociadas. En algunas realizaciones, los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los métodos proporcionados son útiles para el tratamiento de dolor neuropático e hiperalgesia y alodinia asociadas (por ejemplo, neuralgia trigeminal o herpética, neuropatía diabética, causalgia, dolor mantenido simpáticamente y síndromes de desaferenciación tales como avulsión del plexo braquial). En algunas realizaciones, los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los métodos descritos son útiles como agentes antiinflamatorios para el tratamiento de artritis, y como agentes para tratar enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, asma, infarto de miocardio, trastornos neurodegenerativos, enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos autoinmunitarios, trastornos renales obesidad, trastornos de la alimentación, cáncer, esquizofrenia, epilepsia, trastornos del sueño, trastornos cognitivos, depresión, ansiedad, tensión arterial y trastornos lipídicos.

En consecuencia, en un aspecto, se proporcionan compuestos heterocíclicos condensados que tienen la fórmula 1: en la que A y B se seleccionan independientemente de CR2'R2', CO, y CS; Y es CR2'R2'; W es N; Z se selecciona de O y NR2; L es un enlace, alquileno de C1-C9, o heteroalquileno de C1-C9; R1 y R3 son, independientemente, un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R2 se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8; cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo y aralquilo; R4' es H; y en la que L, R1, R2, R2' y R3 pueden estar sustituidos o no sustituidos; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica de los mismos.

En otro aspecto, se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto heterocíclico condensado de la invención, y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéutico. La composición farmacéutica puede comprender uno o más de los compuestos heterocíclicos condensados descritos aquí.

Se entenderá que los compuestos heterocíclicos condensados de la presente invención, útiles en las composiciones farmacéuticas y tratamiento descritos aquí, pueden ser farmacéuticamente aceptables como se preparan y se usan.

En otro aspecto, se proporcionan compuestos para el uso como fármaco para prevenir o tratar una afección de entre las enumeradas aquí, y en particular, una afección como se puede asociar con, por ejemplo, artritis, asma, infarto de miocardio, trastornos lipídicos, trastornos cognitivos, ansiedad, esquizofrenia, depresión, disfunciones de la memoria tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos autoinmunitarios.

En aún otro aspecto, se proporcionan compuestos para el uso como fármaco para prevenir o tratar una afección que da lugar a respuestas de dolor o que está relacionada con desequilibrios en el mantenimiento de actividad basal de nervios sensoriales en un mamífero. Los compuestos heterocíclicos condensados proporcionados aquí tienen uso como analgésicos para el tratamiento de dolor de diversas génesis o etiología, por ejemplo dolor inflamatorio, agudo (tal como dolor asociado a osteoartritis y artritis reumatoide); diversos síndromes de dolor neuropático (tales como neuralgia post-herpética, neuralgia trigeminal, distrofia simpático refleja, neuropatía diabética, síndrome de Guillain Barre, fibromialgia, dolor del miembro fantasma, dolor post-mastectomía, neuropatía periférica, neuropatía asociada a VIH, y neuropatías inducidas por quimioterapia y otras neuropatías yatrógenas); dolor visceral, (tal como el asociado a enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, pancreatitis, y diversos trastornos ginecológicos y urológicos), dolor dental y cefalea (tal como migraña, cefalea en brotes y cefalea por tensión).

En otro aspecto, se proporcionan compuestos para el uso como fármaco para prevenir o tratar una enfermedad o trastorno neurodegenerativo en un mamífero. Una enfermedad o trastorno neurodegenerativo puede ser, por ejemplo, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y esclerosis múltiple; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado neuroinflamación, tal como, por ejemplo, encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiátricos mediados centralmente, tales como, por ejemplo, depresión maníaca, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentación, trastornos del sueño y trastornos cognitivos; epilepsia y trastornos de ataque; disfunción de la próstata, la vejiga y el intestino, tal como, por ejemplo, incontinencia urinaria, vacilación urinaria, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostática benigna y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad y trastornos respiratorios y de las vías respiratorias, tales como, por ejemplo, rinitis alérgica, asma, y enfermedad reactiva de las vías respiratorias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, tal como, por ejemplo, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios; escozor / prurito, tal como, por ejemplo, soriasis; obesidad; trastornos lipídicos; cáncer; y trastornos renales.

En aspectos adicionales, se proporcionan métodos para sintetizar los compuestos heterocíclicos condensados descritos aquí, con protocolos y rutas sintéticas representativas descritas a continuación.

Otros objetos y ventajas serán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la consideración de la consiguiente descripción detallada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA La Figura 1 proporciona un esquema sintético general para preparar compuestos proporcionados aquí.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Cuando se describen los compuestos, las composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos, y cuando se usan dichos compuestos y composiciones, los siguientes términos tienen los siguientes significados a menos que se indique de otro modo.

Se debería de entender también que, consistente con el alcance de la presente invención, cualquiera de los restos definidos en la presente memoria y/o expuestos más abajo puede estar sustituido con una variedad de sustituyentes, y que las definiciones respectivas pretenden incluir tales restos sustituidos en su alcance. A título de ejemplo no limitante, tales sustituyentes pueden incluir, por ejemplo, halo (tal como fluoro, cloro, bromo), -CN, -CF3, -OH, -OCF3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C3-C6, alcoxi de C1-C6, arilo y di-alquil C1-C6-amino.

“Acilo” se refiere a un radical -C(O)R, en el que R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo, como se definen aquí. Ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, formilo, acetilo, ciclohexilcarbonilo, ciclohexilmetilcarbonilo, benzoílo, bencilcarbonilo y similares.

“Acilamino” se refiere a un radical –NR’C(O)R, en el que R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, y R es hidrógeno, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, arilalquilo, heteroalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo, como se definen aquí. Ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, formilamino, acetilamino, ciclohexilcarbonilamino, ciclohexilmetil- carbonilamino, benzoilamino, bencilcarbonilamino y similares.

“Aciloxi” se refiere al grupo -OC(O)R, en el que R es hidrógeno, alquilo, arilo o cicloalquilo.

“Alcoxi” se refiere al grupo –OR, en el que R es alquilo. Grupos alcoxi particulares incluye, a título de ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, terc-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi, n-hexoxi, .

1,2-dimetilbutoxi, y similares.

“Alcoxi sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” aquí, y en particular se refiere a un grupo alcoxi que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, heteroarilo, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril- S(O)2-.

“Alcoxicarbonilamino” se refiere al grupo -NRC(O)OR’, en el que R es hidrógeno, alquilo, arilo o cicloalquilo, y R’ es alquilo o cicloalquilo.

“Alifático” se refiere a compuestos o grupos orgánicos hidrocarbílicos caracterizados por una disposición lineal, ramificada o cíclica de los átomos de carbono constituyentes y una ausencia de insaturación aromática. Alifáticos incluye, sin limitación, alquilo, alquileno, alquenilo, alquenileno, alquinilo y alquinileno. Los grupos alifáticos tienen típicamente de 1 o 2 a alrededor de 12 átomos de carbono.

“Alquilo” se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados monovalentes, en particular que tienen hasta alrededor de 11 átomos de carbono, más en particular como un alquilo inferior, de 1 a 8 átomos de carbono, y aún más en particular, de 1 a 6 átomos de carbono. La cadena hidrocarbonada puede ser cadena lineal o ramificada. Este término se ejemplifica por grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, terc-butilo, n- hexilo, n-octilo, terc-octilo y similares. La expresión “alquilo inferior” se refiere a grupos alquilo que tienen 1 a 6 átomos de carbono. El término “alquilo” también incluye “cicloalquilo”, como se define más abajo.

“Alquilo sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” aquí, y en particular se refiere a un grupo alquilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, heteroarilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril- S(O)2-.

“Alquileno” se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados divalentes que tienen particularmente hasta alrededor de 11 átomos de carbono y más en particular 1 a 6 átomos de carbono, que pueden ser de cadena lineal o ramificados. Este término se ejemplifica por grupos tales como metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), los isómeros de propileno (por ejemplo, -CH2CH2CH2- y -CH(CH3)CH2-) y similares.

“Alquileno sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo alquileno que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Alquenilo” se refiere a grupos hidrocarbilo olefínicamente insaturados monovalentes que tienen preferiblemente hasta alrededor de 11 átomos de carbono, en particular de 2 a 8 átomos de carbono, y más en particular, de 2 a 6 átomos de carbono, que pueden ser de cadena lineal o ramificados, y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturación olefínica. Grupos alquenilo particulares incluyen etenilo (-CH=CH2), n-propenilo (- CH2CH=CH2), isopropenilo (-C(CH3)=CH2), vinilo y vinilo sustituido, y similares.

“Alquenilo sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo alquenilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2.

“Alquenileno” se refiere a grupos hidrocarbilo olefínicamente insaturados divalentes que tienen en particular hasta alrededor de 11 átomos de carbono, y más en particular 2 a 6 átomos de carbono, que pueden ser de cadena lineal o ramificados, y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturación olefínica. Este término se ejemplifica por grupos tales como etenileno (-CH=CH-), los isómeros de propenileno (por ejemplo, -CH=CHCH2- y -C(CH3)=CH- y -CH=C(CH3)-) y similares.

“Alquinilo” se refiere a grupos hidrocarbilo acetilénica o alquínicamente insaturados, en particular que tienen hasta alrededor de 11 átomos de carbono, y más en particular 2 a 6 átomos de carbono, que pueden ser cadena lineal o ramificados, y que tienen al menos 1 y en particular de 1 a 2 sitios de insaturación de alquinilo. Ejemplos no limitantes particulares de grupos alquinilo incluyen acetilénico, etinilo (-CCH), propargilo (-CH2CCH) y similares.

“Alquinilo sustituido” incluye a los grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo alquinilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2.

“Alcanoílo”, como se usa en el presente documento, que puede incluir “acilo”, se refiere al grupo R-C(O)-, en el que R es hidrógeno o alquilo como se definió anteriormente.

“Arilo” se refiere a un grupo hidrocarbonado aromático monovalente procedente de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono solo de un sistema anular aromático precursor. Los grupos arilo típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos procedentes de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benceno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexaleno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleyadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno y similares. En particular, un grupo arilo comprende de 6 a 14 átomos de carbono.

“Arilo sustituido” incluye los grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo arilo que puede estar opcionalmente sustituido con 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, en particular 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alquenilo, alquenilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Arilo condensado” se refiere a un arilo que tiene dos de sus carbonos anulares en común con un segundo anillo arílico o con un anillo alifático.

“Alcarilo” se refiere a un grupo arilo, como se definió anteriormente, sustituido con uno o más grupos alquilo, como se definió anteriormente.

“Aralquilo” o “arilalquilo” se refiere a un grupo alquilo, como se definió anteriormente, sustituido con uno o más grupos arilo, como se definió anteriormente.

“Ariloxi” se refiere a grupos -O-arilo en los que “arilo” es como se definió anteriormente.

“Alquilamino” se refiere al grupo alquil-NR’-, en el que R’ se selecciona independientemente de hidrógeno y alquilo.

“Arilamino” se refiere al grupo aril-NR’-, en el que R’ se selecciona independientemente de hidrógeno, arilo y heteroarilo.

“Alcoxiamino” se refiere a un radical -N(H)OR, en el que R representa un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en la presente memoria.

“Alcoxicarbonilo” se refiere a un radical -C(O)-alcoxi, en el que alcoxi es como se define en la presente memoria.

“Alquilarilamino” se refiere a un radical —NRR’, en el que R representa un grupo alquilo o cicloalquilo y R’ es un arilo como se define en la presente memoria.

“Alquilsulfonilo” se refiere a un radical -S(O)2R, en el que R es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en la presente memoria. Ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metilsulfonilo, etilsulfonilo, propilsulfonilo, butilsulfonilo y similares.

“Alquilsulfinilo” se refiere a un radical -S(O)R, en el que R es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en la presente memoria. Ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metilsulfinilo, etilsulfinilo, propilsulfinilo, butilsulfinilo y similares.

“Alquiltio” se refiere a un radical –SR, en el que R es un grupo alquilo o cicloalquilo como se define en la presente memoria que puede estar opcionalmente sustituido como se define en la presente memoria. Ejemplos representativos incluyen, pero no se limitan a, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio y similares.

“Amino” se refiere al radical -NH2.

“Amino sustituido” se refiere a los grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere al grupo -N(R)2, en el que cada R se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, y en el que ambos grupos R se unen para formar un grupo alquileno. Cuando ambos grupos R son hidrógeno, -N(R)2 es un grupo amino no sustituido.

“Aminocarbonilo” o “amido” se refiere al grupo -C(O)NRR, en el que cada R es independientemente: hidrógeno, alquilo, arilo y cicloalquilo, o en el que los grupos R se unen para formar un grupo alquileno.

“Aminocarbonilamino” se refiere al grupo -NRC(O)NRR, en el que cada R es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o cicloalquilo, o en el que dos grupos R se unen para formar un grupo alquileno.

“Aminocarboniloxi” se refiere al grupo -OC(O)NRR, en el que cada R es independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o cicloalquilo, o en el que los grupos R se unen para formar un grupo alquileno.

“Arilalquiloxi” se refiere a un radical -O-arilalquilo, en el que arilalquilo es como se define en la presente memoria.

“Arilamino” significa un radical –NHR, en el que R representa un grupo arilo como se define en la presente memoria.

“Ariloxicarbonilo” se refiere a un radical -C(O)-O-arilo, en el que arilo es como se define en la presente memoria.

“Arilsulfonilo” se refiere a un radical -S(O)2R, en el que R es un grupo arilo o heteroarilo como se define en la presente memoria.

“Azido” se refiere al radical -N3.

“Carbamoílo” se refiere al radical -C(O)NR)2, en el que cada grupo R es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo, como se define en la presente memoria, que puede estar opcionalmente sustituido como se define en la presente memoria.

“Carbocíclico” se refiere a un grupo carbilo cíclico, que incluye un grupo aromático, un grupo no aromático, o un grupo no aromático condensado con un grupo aromático. Los ejemplos de carbocíclicos representativos incluyen los siguientes: “Carboxilo” se refiere al radical -C(O)OH.

“Carboxiamino” se refiere al radical -N(H)C(O)OH.

“Cicloalquilo” se refiere a grupos hidrocarbilo cíclicos que tienen de 3 a alrededor de 10 átomos de carbono y que tienen un único anillo cíclico o múltiples anillos condensados, incluyendo sistemas anulares condensados y en puente, que opcionalmente pueden estar sustituidos con de 1 a 3 grupos alquilo. Dichos grupos cicloalquilo incluyen, a título de ejemplo, estructuras de un solo anillo tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo, 1- metilciclopropilo, 2-metilciclopentilo, 2-metilciclooctilo, y similares, y estructuras de múltiples anillos tales como adamantanilo, y similares.

“Cicloalquilo sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Cicloalcoxi” se refiere al grupo –OR, en el que R es cicloalquilo. Dichos grupos cicloalcoxi incluyen, a título de ejemplo, ciclopentoxi, ciclohexoxi, y similares.

“Cicloalquenilo” se refiere a grupos hidrocarbilo cíclicos que tienen de 3 a 10 átomos de carbono y que tienen un solo anillo cíclico o múltiples anillos condensados, incluyendo sistemas de anillos condensados y en puente y que tienen al menos uno y en particular de 1 a 2 sitios de insaturación olefínica. Dichos grupos cicloalquenilo incluyen, a título de ejemplo, estructuras de un solo anillo tales como ciclohexenilo, ciclopentenilo, ciclopropenilo, y similares.

“Cicloalquenilo sustituido” se refiere a aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo cicloalquenilo que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil- S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Cicloalquenilo condensado” se refiere a un cicloalquenilo que tiene dos de sus átomos de carbono anulares en común con un segundo anillo alifático o aromático, y que tiene su insaturación olefínica situada para impartir aromaticidad al anillo de cicloalquenilo.

“Cianato” se refiere al radical -OCN.

“Ciano” se refiere al radical -CN.

“Dialquilamino” significa un radical –NRR’, en el que R y R’ representan independientemente un grupo alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicloheteroalquilo, cicloheteroalquilo sustituido, heteroarilo, o heteroarilo sustituido, como se define en la presente memoria.

“Etenilo” se refiere a -(C=C)- sustituido o no sustituido.

“Etileno” se refiere a -(C-C)- sustituido o no sustituido.

“Etinilo” se refiere a -(CC)-.

“Halo” o “halógeno” se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo. Los grupos halo preferidos son fluoro o cloro.

“Hidroxi” se refiere al radical -OH.

“Nitro” se refiere al radical -NO2.

“Sustituido” se refiere a un grupo en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos cada uno independientemente con el mismo o los mismos sustituyentes o diferentes. Sustituyentes típicos incluyen, pero no se limitan a, -X, -R14, -O-, =O, -OR14, -SR14, -S-, =S, -NR14R15, =NR14, -CX3, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, - N3, -S(O)2O-, -S(O)2OH, -S(O)2R14, -OS(O2)O-, -OS(O)2R14, -P(O)(O-)2, -P(O)(OR14)(O-), -OP(O)(OR14)(OR15), - C(O)R14, -C(S)R14, -C(O)OR14, -C(O)NR14R15, -C(O)O-, -C(S)OR14, -NR16C(O)NR14R15, -NR16C(S)NR14R15, - NR17C(NR16)NR14R15 y -C(NR16)NR14R15, en los que cada X es independientemente un halógeno; cada R14, R15, R16 y R17 son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, -NR18R19, -C(O)R18 o -S(O)2R18 u opcionalmente R18 y R19, junto con el átomo al que ambos están unidos forman un cicloheteroalquilo; y R18 y R19 son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, heteroalquilo, heteroarilo, o heteroarilalquilo.

Ejemplos de arilos sustituidos representativos incluyen los siguientes: y En estas fórmulas, uno de R6’ y R7’ puede ser hidrógeno y al menos uno de R6’ y R7’ es seleccionado cada uno independientemente de alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloheteroalquilo, alcanoílo, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, alquilamino, arilamino, heteroarilamino, NR10COR11, NR10SOR11, NR10SO2R14, COO-alquilo, COO-arilo, CONR10R11, CONR10OR11, NR10R11, SO2NR10R11, S-alquilo, S-alquilo, SO-alquilo, SO2-alquilo, S-arilo, SO-arilo, SO2-arilo; o R6’ y R7’ se pueden unir para formar un anillo cíclico (saturado o insaturado) de 5 a 8 átomos, que contiene opcionalmente uno o más heteroátomos seleccionados del grupo N, O o S. R10, R11, y R12 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, perfluoroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalquilo, o similares.

“Hetero”, cuando se usa para describir un compuesto o un grupo presente en un compuesto, significa que uno o más átomos de carbono en el compuesto o grupo se han reemplazado por un heteroátomo de nitrógeno oxígeno o azufre. Hetero se puede aplicar a cualquiera de los grupos hidrocarbilo descritos anteriormente, tales como alquilo, por ejemplo, heteroalquilo, cicloalquilo, por ejemplo heterocicloalquilo, arilo, por ejemplo heteroarilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo y similares, que tienen de 1 a 5, y especialmente de 1 a 3 heteroátomos.

“Heteroalquileno” se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados divalentes que tienen en particular hasta alrededor de 11 átomos de carbono, y más en particular 1 a 6 átomos de carbono, que pueden ser de cadena ligera o ramificados, y uno o más átomos de carbono en el grupo se han reemplazado por un heteroátomo de nitrógeno, oxígeno, o azufre. Este término se ejemplifica mediante grupos tales como -(CH2)2SCH2-, -(CH2)3-SO2CH2-, - (CH2)2NHCH2-, -(CH2)4OCH2-, y similares.

“Heteroalquileno sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo heteroalquileno que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Heteroarilo” se refiere a un grupo heteroaromático monovalente procedente de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un solo átomo de un sistema de anillo heteroaromático precursor. Los grupos heteroarilo típicos incluyen, pero no se limitan a, grupos procedentes de acridina, arsindol, carbazol, -carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, tetrahidroisoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, tetrahidroquinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno, y similares. En particular, heteroarilo puede incluir otros sistemas anulares saturados, y por lo tanto se pueden obtener de indolina, indolizina, tetrahidroquinolina, y tetrahidroisoquinolina. Preferiblemente, el grupo heteroarilo es heteroarilo con entre 5-20 miembros, prefiriéndose en particular heteroarilo de 5-10 miembros. Los grupos heteroarilo particulares son aquellos obtenidos de tiofeno, pirrol, benzotiofeno, benzofurano, indol, piridina, pirimidina, quinolina, tetrahidroquinolina, isoquinolina, tetrahidroisoquinolina, imidazol, oxazol y pirazina.

Ejemplos de heteroarilos representativos incluyen los siguientes: en los que cada Y se selecciona de carbonilo, N, NR4, O y S, en el que R4 es como se define en la presente memoria.

Como se usa en la presente memoria, el término “cicloheteroalquilo” se refiere a un anillo no aromático heterocíclico estable y anillos condensados que contienen uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S. Un sistema de anillo heterocíclico condensado puede incluir anillos carbocíclicos y solamente requiere incluir un anillo heterocíclico. Ejemplos de anillos heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, piperazinilo, homopiperazinilo, piperidinilo y morfolinilo, e incluyen, por ejemplo, los siguientes: en los que cada X se selecciona de C(R4)2, NR4, O y S; y cada Y se selecciona de NR4, O y S; en los que R4 es como se define en la presente memoria, y R7 se selecciona independientemente del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquiI-S(O)2- y aril-S(O)2-. Opcionalmente, un cicloheteroalquilo puede estar sustituido, por ejemplo, con uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-. Los grupos sustituyentes incluyen carbonilo o tiocarbonilo, que proporcionan, por ejemplo, derivados lactámicos y de urea.

Cicloheteroalquenilos representativos incluyen los siguientes: en los que cada X se selecciona de C(R4)2, NR4, O y S; y cada Y se selecciona de carbonilo, N, NR4, O y S; en los que R4 es como se define en la presente memoria.

Arilos representativos que tienen heteroátomos que contienen sustitución incluyen los siguientes: en los que cada X se selecciona de C-R4, C(R4)2, NR4, O y S; y cada Y se selecciona de carbonilo, NR4, O y S; en los que R4 es como se define en la presente memoria.

“Sustituyente hetero” se refiere a una funcionalidad que contiene un átomo de halógeno, O, S o N que puede estar presente como un R4 en un grupo CR4 presente como sustituyentes directamente en W o Z de los compuestos de esta invención, o puede estar presente como un sustituyente en los grupos arilo, heteroarilo y alifático “sustituidos” presentes en los compuestos. Ejemplos de sustituyentes hetero incluyen: -halo, -NO2, -NH2, -NHR, -N(R)2, -NRCOR, -NRSOR, -NRSO2R, OH, CN, CO2R, -CO2H, -O-R, -CON(R)2, -CONROR, -SO3H, -S-R, -SO2N(R)2, -S(O)R, y - S(O)2R, en los que cada R es independientemente un arilo o alifático, opcionalmente con sustitución. Entre los sustituyentes hetero que contienen grupos R, se da preferencia a aquellos materiales con grupos R arilo y alquilo como se definen en la presente memoria. Cuando sea factible, cada R puede incluir hidrógeno. También, cuando sea factible, dos grupos R cuando están en el mismo átomo se pueden unir para formar un anillo heterocíclico de 3-8 átomos. Por ejemplo, dos grupos R de NR2, SO2NR2, y CONR2 se pueden unir, junto con el átomo de N, para formar un anillo de N-morfolino, N-pirrolo, N-piperidino, y N-pirazolilo. Los sustituyentes hetero preferidos son aquellos enunciados anteriormente.

“Heterocíclico” se refiere a un grupo cíclico que incluye un grupo heteroaromático, un grupo hetero no aromático o un grupo cicloheteroalquilo, un grupo no aromático fusionado con un grupo heteroaromático, un grupo cicloheteroalquilo fusionado con un grupo aromático, y un grupo cicloheteroalquilo fusionado con un grupo heteroaromático. Los ejemplos de grupos heterocíclicos representativos incluyen los siguientes: en los que X se selecciona de C-R4, C(R4)2, NR4, O y S; cada Y se selecciona de carbonilo, NR4, O y S; y en los que R4 y R7 son como se definen en la presente memoria.

“Dihidroxifosforilo” se refiere al radical -PO(OH)2.

“Dihidroxifosforilo sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un radical dihidroxifosforilo en el que se sustituye uno o ambos grupos hidroxilo.

“Aminohidroxifosforilo” se refiere al radical -PO(OH)NH2.

“Aminohidroxifosforilo sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un aminohidroxifosforilo en el que el grupo amino está sustituido con uno o dos sustituyentes, y/o en el que el grupo hidroxilo está sustituido.

“Tioalcoxi” se refiere al grupo –SR, en el que R es alquilo.

“Tioalcoxi sustituido” incluye aquellos grupos citados en la definición de “sustituido” en la presente memoria, y en particular se refiere a un grupo tioalcoxi que tiene 1 o más sustituyentes, por ejemplo de 1 a 5 sustituyentes, y en particular de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste en acilo, acilamino, aciloxi, alcoxi, alcoxi sustituido, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilamino, amino, amino sustituido, aminocarbonilo, aminocarbonilamino, aminocarboniloxi, arilo, ariloxi, azido, carboxilo, ciano, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halógeno, hidroxilo, ceto, nitro, tioalcoxi, tioalcoxi sustituido, tioariloxi, tioceto, tiol, alquil-S(O)-, aril-S(O)-, alquil-S(O)2- y aril-S(O)2-.

“Sulfanilo” se refiere al radical HS-. “Sulfanilo sustituido” se refiere a un radical tal como RS- en el que R es cualquier sustituyente descrito en la presente memoria.

“Sulfinilo” se refiere al radical divalente -S(O2)-. “Sulfinilo sustituido” se refiere a un radical tal como –S(O2)R, en el que R es cualquier sustituyente descrito en la presente memoria. “Aminosulfonilo” o “sulfonamida” se refiere al radical H2N(O2)S-, y “aminosulfonilo sustituido” o “sulfonamida sustituida” se refiere a un radical tal como R2N(O2)S- en el que cada R es independientemente cualquier sustituyente descrito en la presente memoria.

“Sulfóxido” se refiere al radical divalente -S(O)-. “Sulfóxido sustituido” se refiere a un radical tal como -S(O)R, en el que R es cualquier sustituyente descrito en la presente memoria.

“Sulfona” se refiere al grupo -SO2R. En realizaciones particulares, R se selecciona de H, alquilo inferior, alquilo, arilo y heteroarilo.

“Tioariloxi” se refiere al grupo –SR, en el que R es arilo.

“Tioceto” se refiere al grupo =S.

“Tiol” se refiere al grupo -SH.

Un experto en la técnica de la síntesis orgánica reconocerá que el número máximo de heteroátomos en un anillo heterocíclico químicamente factible, estable, ya sea aromático o no aromático, se determina por el tamaño del anillo, el grado de insaturación y la valencia de los heteroátomos. En general, un anillo heterocíclico puede tener uno a cuatro heteroátomos siempre que el anillo heteroaromático sea químicamente factible y estable.

“Farmacéuticamente aceptable” significa homologado por una agencia reguladora del gobierno Federal o uno estatal o enumerado en la Farmacopea de EE.UU. u otra farmacopea reconocida en general para uso en animales, y más en particular en seres humanos.

“Sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a una sal de un compuesto de la invención que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto precursor. Dichas sales incluyen: (1) sales de adición de ácidos, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 1,2-etano-disulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 4-clorobencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 4-toluenosulfónico, ácido canfosulfónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1- carboxílico, ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico, y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto precursor es reemplazado por un ión metálico, por ejemplo un ión de metal alcalino, un ión alcalino-térreo o un ión de aluminio; o coordinados con una base orgánica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglucamina, y similares. Las sales incluyen además, a título de ejemplo solamente, sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio y similares; y cuando el compuesto contiene una funcionalidad básica, sales de ácidos orgánicos o inorgánicos, no tóxicas, tales como hidrocloruro, hidrobromuro, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato, y similares. La expresión “catión farmacéuticamente aceptable” se refiere a un contraión catiónico aceptable, no tóxico, de un grupo funcional ácido. Dichos cationes se ejemplifican mediante cationes de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares.

“Vehículo farmacéuticamente aceptable” se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador con el que se administra un compuesto de la invención.

“Prevenir” o “prevención” se refiere a una reducción en el riesgo de adquirir una enfermedad o trastorno (es decir, provocar que al menos uno de los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrolle en un individuo que puede estar expuesto a o predispuesto a la enfermedad pero aún no experimenta o muestra síntomas de la enfermedad).

“Solvato” se refiere a formas del compuesto que están asociadas con un disolvente, habitualmente mediante una reacción de solvólisis. Los disolventes convencionales incluyen agua, etanol, ácido acético, y similares. Los compuestos de la invención se pueden preparar, por ejemplo, en forma cristalina, y pueden estar solvatados o hidratados. Los solvatos adecuados incluyen solvatos farmacéuticamente aceptables, tales como hidratos, y además incluyen tanto solvatos estequiométricos como solvatos no estequiométricos.

“Individuo” incluye seres humanos. Los términos “ser humano”, “paciente” e “individuo” se usan de forma intercambiable en la presente memoria.

“Cantidad terapéuticamente eficaz” significa la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un individuo para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar dicho tratamiento para la enfermedad. La “cantidad terapéuticamente eficaz” puede variar dependiendo del compuesto, la enfermedad y su gravedad, y de la edad, peso, etc., del individuo que se tiene que tratar.

“Tratar” o “tratamiento” de cualquier enfermedad o trastorno se refiere, en una realización, a aliviar la enfermedad o trastorno (es decir, detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o al menos uno de los síntomas clínicos de la misma). En otra realización, “tratar” o “tratamiento” se refieren a aliviar al menos un parámetro físico, que puede no ser apreciable por el individuo. En otra realización más, “tratar” o “tratamiento” se refiere a modular la enfermedad o trastorno, ya sea físicamente, (por ejemplo, estabilización de un síntoma apreciable), fisiológicamente, (por ejemplo, estabilización de un parámetro físico), o ambos. En otra realización más, “tratar” o “tratamiento” se refiere a retrasar el comienzo de la enfermedad o trastorno, o incluso prevenirlo.

También se tiene que entender que los compuestos que tienen la misma fórmula molecular pero difieren en la naturaleza o secuencia del enlace de sus átomos o la disposición de sus átomos en el espacio se denominan “isómeros”. Los isómeros que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio se denominan “estereoisómeros”.

Los estereoisómeros que no son imágenes especulares entre sí se denominan “diastereómeros”, y los que son imágenes especulares no superponibles entre sí se denominan “enantiómeros”. Cuando un compuesto tiene un centro asimétrico, por ejemplo está unido a cuatro grupos diferentes, es posible un par de enantiómeros. Un enantiómero puede ser caracterizado por la configuración absoluta de su centro asimétrico, y se describe por las reglas de secuenciación R y S de Cahn y Prelog o por la manera en la que la molécula rota el plano de la luz polarizada y se designan como dextrorrotatorio o levorrotatorio (es decir, como isómeros (+) o (-), respectivamente). Puede existir un compuesto quiral como enantiómero individual o como una mezcla de los mismos. Una mezcla que contiene proporciones iguales de los enantiómeros se denomina una “mezcla racémica”.

“Tautómeros” se refiere a compuestos que son formas indistintas de una estructura del compuesto particular, y que varía en el desplazamiento de los átomos de hidrógeno y los electrones. Así, dos estructuras pueden estar en equilibrio a través del movimiento de electrones  y un átomo (normalmente H). Por ejemplo, los enoles y cetonas son tautómeros debido a que se interconvierten rápidamente por tratamiento con ácido o base. Otro ejemplo de tautómerismo son las formas aci- y nitro- de fenilnitrometano, que se forman asimismo por tratamiento con ácido o base. A continuación se ilustran las estructuras enol – ceto representativas y el equilibrio: Las formas tautómeras pueden ser pertinentes para la obtención de la reactividad química óptica y actividad biológica de un compuesto de interés.

Los compuestos de esta invención pueden poseer uno o más centros asimétricos; dichos compuestos por lo tanto se pueden producir como estereoisómeros (R) o (S) individuales o como mezclas de los mismos. A menos que se indique de otro modo, la descripción o denominación de un compuesto particular en la memoria descriptiva y las reivindicaciones pretende incluir tanto enantiómeros individuales como mezclas, racémicas o de otro modo, de los mismos. Los métodos para la determinación de la estereoquímica y la separación de estereoisómeros son bien conocidos en la técnica.

Una “variante isotópica” se refiere a un compuesto, como se proporciona en la presente memoria, que contiene proporciones no naturales de isótopos en uno o más de los átomos que constituyen dicho compuesto. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, una “variante isotópica” de un compuesto puede contener uno o más isótopos no radiactivos, tal como tritio (3H), yodo-125 (125I), carbono-14 (14C), etc. En algunas realizaciones, una “variante isotópica” de un compuesto puede ser una forma estable, esto es, no radiactiva, por ejemplo que contiene uno o más isótopos tales como deuterio (2H), carbono-13 (13C), nitrógeno-15 (15N), etc. Se entenderá que, en un compuesto como se proporciona en la presente memoria, cualquier hidrógeno puede ser 2H, por ejemplo, o cualquier carbono puede ser 13C, como otro ejemplo, o cualquier nitrógeno puede ser 15N, como otro ejemplo, etc., cuando sea factible según el juicio del experto.

Todas las variantes isotópicas de los compuestos proporcionadas en la memoria descriptiva, radiactivas o no, pretenden estar englobadas dentro del alcance de la invención.

LOS COMPUESTOS En algunos aspectos, la presente invención proporciona compuestos heterocíclicos condensados útiles para prevenir y/o tratar un amplio intervalo de afecciones, entre ellas, artritis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, ictus, uveítis, asma, infarto de miocardio, el tratamiento y profilaxis de síndromes de dolor (agudo y crónico o neuropático), lesión cerebral traumática, lesión aguda de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos, alopecia (pérdida de cabello), enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos autoinmunitarios o afecciones en mamíferos.

En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos heterocíclicos condensados según la fórmula 1: en la que A y B se seleccionan independientemente de CR2'R2', CO, y CS; Y es CR2'R2'; W es N; Z se selecciona de O y NR2; L es un enlace, alquileno de C1-C9, o heteroalquileno de C1-C9; R1 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R2 se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8; cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo y aralquilo; R3 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R4' es H; y en la que L, R1, R2, R2' y R3 pueden estar sustituidos o no sustituidos; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica de los mismos.

Con respecto a los compuestos de fórmula 1, en ciertas realizaciones, A, B e Y representan independientemente CR2'R2'. Más adecuadamente, con respecto a la fórmula 1, cada uno de A, B e Y representan independientemente CH2.

Con respecto a los compuestos de fórmula 1, Z es O o NH. En una realización, Z es O. En todavía otra y preferida realización, Z es NH.

En algunas realizaciones, L es un enlace.

En ciertas realizaciones, L es alquileno de C1-C9 o heteroalquileno de C1-C9.

En todavía otras realizaciones, L es alquileno de C2-C5 o heteroalquileno de C2-C5. En algunas realizaciones, L es heteroalquileno de C2-C5 que contiene dos a cuatro átomos de carbono y un heteroátomo seleccionado de O, N, o S.

Adecuadamente, el heteroátomo es S.

En algunas realizaciones, L se selecciona de -CH2-, -(CH2)2-, -(CH2)3-, -(CH2)4-, -CH(CH3)CH2-, -(CH2)2SCH2-, - (CH2)2-SO2CH2-, -CH(CH2CH3)CH2OCH2-, -CH2CHF-, -CH2CF2-, -CH2CH(OH)- y -CH2CO-.

En una realización preferida, L es un enlace, o es un grupo -(CH2)2SCH2-.

Con respecto a la fórmula 1, en ciertas realizaciones, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en 6-(3- cloropiridin-2-il)-N-(4-(difluorometoxi)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)- 5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidro-6-(3-(metilsulfonil)piridin-2- il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3- d]pirimidin-4-amina; 5,6,7,8-tetrahidro-6-(3-(metilsulfonil)piridin-2-il)-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3- d]pirimidin-4-amina; 5,6,7,8-tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N- (4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8- tetrahidro-6-o-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-m-tolilpirido[4,3- d]pirimidin-4-amina; y N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-p-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

Con respecto a la fórmula 1, en ciertas realizaciones en las que L es un enlace, el compuesto no es 6-(3-cloropiridin- 2-il)-N-(4-(difluorometoxi)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8- tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidin-4-amina; 6-(3-cloropiridin-2-il)-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4- amina; N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidro-6-(3-(metilsulfonil)piridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 6- (3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 5,6,7,8-tetrahidro- 6-(3-(metilsulfonil)piridin-2-il)-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; 5,6,7,8-tetrahidro-N-(2,3- dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6- fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-o-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina; o N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8- tetrahidro-6-p-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

En ciertas realizaciones, R1 es un grupo carbocíclico. Alternativamente, R1 es un grupo heterocíclico.

En algunas realizaciones, R1 es un grupo arilo o heteroarilo.

En otras ciertas realizaciones, R1 es un grupo cicloalquilo o cicloheteroalquilo.

En todavía otras realizaciones, R1 se selecciona de y , sustituidos o no sustituidos.

En todavía otras realizaciones, R1 se selecciona y , sustituidos o no sustituidos; en las que Y’ se selecciona de O, N, S, SO, SO2, y NR2'.

En algunas realizaciones, R1 se selecciona de , sustituidos o no sustituidos.

En ciertas realizaciones, R1 se selecciona de , sustituidos o no sustituidos.

En otras realizaciones, R1 se selecciona de y , sustituidos o no sustituidos.

En todavía otras realizaciones, R1 se selecciona de y , sustituidos o no sustituidos, en las que Y’ se selecciona de CR2', CR2'R2', N, O, S, SO, SO2 y NR2'.

En algunas realizaciones, R1 se selecciona de y , sustituidos o no sustituidos.

En algunas realizaciones, R1 se selecciona de , y , sustituidos o no sustituidos.

En realizaciones preferidas, R1 se selecciona de 5 5 y Adecuadamente, el sustituyente en N es H o alquilo sustituido o no sustituido, cuado sea factible.

Con respecto a la fórmula 1, en ciertas realizaciones, cada R2' se selecciona independientemente de hidrógeno, y alquilo de C1-C6 sustituido o no sustituido. En realizaciones preferidas, R2' es hidrógeno.

En ciertas realizaciones, R3 es un grupo carbocíclico. En algunas realizaciones, R3 es un grupo heterocíclico. En ciertas realizaciones, R3 es un arilo o heteroarilo. En algunas realizaciones, R3 es an arilo.

En algunas realizaciones, R3 se selecciona de arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquenilo sustituido o no sustituido, biciloalquilo sustituido o no sustituido, bicicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, bicicloalquenilo sustituido o no sustituido, bicicloheteroalquenilo sustituido o no sustituido, bicicloarilo sustituido o no sustituido, y bicicloheteroarilo sustituido o no sustituido.

En algunas realizaciones, R3 es fenilo. En ciertas realizaciones, R3 es fenilo sustituido.

En algunas realizaciones, R3 es fenilo monosustituido.

En otras realizaciones, R3 es fenilo disustituido.

En ciertas realizaciones, R3 es fenilo sustituido, en el que el sustituyente en el fenilo se selecciona de halo, amido, alquilo, alcoxi, sulfonilo, sulfonamidilo, haloalquilo y trihaloalquilo. En realizaciones preferidas, la sustitución en el fenilo de R3 se selecciona de Cl, F, CF3, Me, OMe, SO2R2', NR2'R2', y SO2NR2'R2'. En realizaciones más preferidas, la sustitución en el fenilo de R3 se selecciona de Cl, Me y SO2Me. En realizaciones más preferidas, la sustitución en el fenilo de R3 es Cl.

En realizaciones en las que R3 es fenilo sustituido, uno o más sustituyentes están en el fenilo en la posición 2 (orto), 3 (meta) y/o 4 (para) con respecto al carbono unido al átomo de nitrógeno en la estructura heterocíclica condensada en la fórmula 1 o 1a. En ciertas realizaciones, R3 es fenilo sustituido, en el que un sustituyente está en el fenilo en la posición 2 (orto), 3 (meta) y/o 4 (para). En realizaciones más preferidas, la sustitución en el fenilo de R3 está en la posición 2 o 4. En las realizaciones más preferidas, la sustitución en el fenilo de R3 está en la posición 2.

En algunas realizaciones, R3 es a heteroarilo.

En ciertas realizaciones, R3 es un grupo piridilo o pirimidina sustituido.

En algunas realizaciones, R3 es piridilo sustituido.

En algunas realizaciones, R3 es pirid-2-ilo sustituido. En ciertas realizaciones, el pirid-2-ilo de R3 está di-sustituido. En realizaciones preferidas, el pirid-2-ilo de R3 es mono-sustituido.

En otras realizaciones, el sustituyente en el pirid-2-ilo de R3 se selecciona de halo, amido, alquilo, alcoxi, sulfonilo, sulfonamidilo, haloalquilo y trihaloalquilo.

En realizaciones preferidas, la sustitución en el pirid-2-ilo de R3 se selecciona de Cl, F, CF3, Me, OMe, SO2R2', NR2'R2', y SO2NR2'R2'. En realizaciones más preferidas, la sustitución en pirid-2-ilo de R3 se selecciona de Cl, Me y SO2Me. En las realizaciones más preferidas, la sustitución en pirid-2-ilo de R3 es Cl o Me.

En algunas realizaciones, la sustitución en el pirid-2-ilo de R3 está en la posición 3, 4 o 5. En realizaciones más preferidas, la sustitución en el pirid-2-ilo de R3 está en la posición 3 o 5. En las realizaciones más preferidas, la sustitución en el pirid-2-ilo de R3 está en la posición 3.

En las realizaciones más preferidas, R3 es 3-cloropirid-2-ilo o 5-metilpirid-2-ilo.

En algunas realizaciones, R1 o R3 se seleccionan de en los que el subíndice n’ se selecciona de 1-5, y cada R5 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, acilamino sustituido o no sustituido, alquilamino sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alcoxi sustituido o no sustituido, ariloxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo sustituido, alquilarilamino sustituido o no sustituido, arilalquiloxi, arilalquiloxi sustituido, amino, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, sulfóxido sustituido o no sustituido, sulfona sustituida o no sustituida, sulfanilo sustituido o no sustituido, aminosulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, ácido sulfúrico, éster del ácido sulfúrico, dihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, aminodihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, azido, carbamoílo sustituido o no sustituido, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, dialquilamino sustituido o no sustituido, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, hidroxi, nitro, y tio.

A, B y Y pueden, por ejemplo, representar CH2. Alternativamente, A puede representar CO, y B e Y representan CH2. Alternativamente, B puede representar CO, y A e Y representan CH2.

Entre los compuestos descritos anteriormente por la fórmula 1, en ciertas realizaciones preferibles, R3 es un anillo de arilo o heteroarilo de 6 miembros.

Con respecto a la fórmula 1, en ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto que tiene la fórmula 2: en la que W, Z, L, R1, R3 y R4' son como se definen anteriormente en la fórmula 1, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica del mismo.

En algunas realizaciones, Z es NH.

En algunas realizaciones, R3 se selecciona de arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo, cicloheteroalquenilo sustituido o no sustituido, biciloalquilo sustituido o no sustituido, bicicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, bicicloalquenilo sustituido o no sustituido, bicicloheteroalquenilo sustituido o no sustituido, bicicloarilo sustituido o no sustituido, y bicicloheteroarilo sustituido o no sustituido.

En algunas realizaciones, el compuesto según la fórmula 1 puede describirse mediante la fórmula 3: en la que X es N o CR4; L es un enlace, alquileno de C1-C9, o heteroalquileno de C1-C9; R1 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; cada R4 se selecciona independientemente de H, alquilo sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, acilamino sustituido o no sustituido, alquilamino sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alcoxi sustituido o no sustituido, alcoxicarbonilo sustituido o no sustituido, alquilarilamino sustituido o no sustituido, arilalquiloxi sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, arilalquilo sustituido o no sustituido, sulfóxido sustituido o no sustituido, sulfona sustituida o no sustituida, sulfanilo sustituido o no sustituido, aminosulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, ácido sulfúrico, éster del ácido sulfúrico, dihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, aminodihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, azido, carbamoílo sustituido o no sustituido, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, dialquilamino sustituido o no sustituido, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, hidroxi, nitro, y tio; R4' es H; y el subíndice m se selecciona de 0-4, y en la que L y R1 pueden estar sustituidos o no sustituidos.

En ciertas realizaciones, el subíndice m se selecciona de 0 a 3.

En algunas realizaciones, el subíndice m se selecciona de 0, 1, 2 o 3.

Se entenderá que los compuestos proporcionados aquí, por ejemplo como se proporcionan en cualquier fórmula, incluyendo las fórmulas 1-9, pueden estar en foma de una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero, o variante isotópica.

En ciertas realizaciones, se proporcionan compuestos que tienen una cualquiera de las fórmulas 5-9: en las que R4 se selecciona de Cl, F, Me, iso-Pr, OMe, OCF3, SO2CF3, SO2Me, y SO2NMe2, y L, R1 y R4' son como se definen anteriormente.

En algunas realizaciones, L-R1 se puede seleccionar, por ejemplo, de y sus versiones sustituidas, en las que el fenilo está sustituido con 1, 2 o 3 grupos halo, CF3, o SMe.

En ciertas realizaciones, L-R1 se selecciona de y sustituidos o no sustituidos.

En algunas realizaciones, L-R1 se selecciona de y sustituidos o no sustituidos, en los que el sustituyente en N es H o alquilo sustituido o no sustituido.

En ciertas realizaciones, L-R1 se selecciona de y sustituidos o no sustituidos, en los que R1" es H, alquilo, o un grupo representado por -(CR2'R2')n-R3"; cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6 sustituido o no sustituido, cicloalquilo de C3-C8 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido y aralquilo sustituido o no sustituido; R3" es hidrógeno, un sustituyente hetero, un anillo de arilo, heteroarilo, heteroalquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, cicloalquenilo, cicloheteroalquenilo, bicicloalquilo, bicicloheteroalquilo, bicicloalquenilo, bicicloheteroalquenilo, bicicloarilo, o bicicloheteroarilo; y el subíndice n se selecciona de 2-5.

En realizaciones preferidas, cada R2' es H; el subíndice n es 2-4, y R3" es cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo, arilo o heteroarilo.

R3" puede ser, por ejemplo, o sustituidos o no sustituidos, y en los que R2 es H o alquilo.

R3" puede, por ejemplo, ser un sustituyente hetero, y hay preferencia porque el sustituyente hetero sea COOH, SO2Me, SMe, OH, OEt, OMe, NEt2, halo, NHSO2Me, CONH2, CONMe2, SO2NH2, y SO2NMe2.

Se exponen realizaciones adicionales dentro del alcance de la presente invención, de modo no limitante en otra parte en la presente memoria y en los ejemplos. Se debería entender que estos ejemplos son para fines ilustrativos solamente, y no se tienen que interpretar como limitantes de ningún modo.

Algunos compuestos de esta invención tienen actividad en sus formas tanto de ácido como de derivado de ácido, pero la forma sensible de ácido ofrece con frecuencia ventajas de solubilidad, compatibilidad de tejidos o liberación retardada en el organismo del mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs, págs. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam 1985). Profármacos incluyen derivados de ácido conocidos para los profesionales de la técnica, tales como, por ejemplo, ésteres preparados por reacción del ácido precursor con un alcohol adecuado, o amidas preparadas por reacción del compuesto ácido precursor con una amina sustituida o no sustituida, o anhídridos de ácido o anhídridos mixtos. Ésteres alifáticos o aromáticos simples, amidas y anhídridos procedentes de grupos ácidos colgantes en los compuestos de esta invención son profármacos preferidos. En algunos casos es deseable preparar profármacos de tipo éster doble tales como ésteres (aciloxi)alquílicos o ésteres ((alcoxicarbonil)oxi)alquílicos. Se prefieren los ésteres alquílicos de C1 a C8, alquenílicos de C2-C8, arílicos, arílicos sustituidos de C7-C12 y arilalquílicos de C7-C12 de los compuestos proporcionados de la invención.

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Cuando se emplean como fármacos, los compuestos heterocíclicos condensados de esta invención se administran típicamente en forma de una composición farmacéutica. Dichas composiciones se pueden preparar de una manera conocida en la técnica farmacéutica y comprenden al menos un compuesto activo.

En general, los compuestos de esta invención se administran en una cantidad terapéuticamente eficaz. La cantidad del compuesto administrada en realidad se determinará típicamente por un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección que se esté tratando, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente, y similares.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar por una variedad de vías incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Dependiendo de la ruta de suministro pretendida, los compuestos de esta invención se formulan preferiblemente como composiciones inyectables u orales, o como pomadas, como lociones o como parches, todos para administración transdérmica.

Las composiciones para administración oral pueden tomar la forma de disoluciones o suspensiones líquidas volumétricas, o polvos volumétricos. Más comúnmente, sin embargo, las composiciones se presentan en formas farmacéuticas unitarias para facilitar la dosificación precisa. La expresión “formas farmacéuticas unitarias” se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para individuos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un excipiente farmacéutico adecuado. Las formas farmacéuticas unitarias típicas incluyen ampollas o jeringas premedidas, precargadas de las composiciones líquidas, o píldoras, comprimidos, cápsulas o similares en el caso de composiciones sólidas. En dichas composiciones, el compuesto de ácido furansulfónico es normalmente un componente minoritario (de alrededor de 0,1 a alrededor de 50% en peso o preferiblemente de alrededor de 1 a alrededor de 40% en peso), siendo el resto diversos vehículos o portadores y agentes auxiliares de procesamiento útiles para formar la forma farmacéutica deseada.

Formas líquidas adecuadas para administración oral pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso adecuado con tampones, agentes de suspensión y dispersantes, colorantes, sabores y similares. Las formas sólidas pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante, tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente, tal como almidón o lactosa, un agente disgregante, tal como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz; un lubricante, tal como estearato de magnesio; un antiapelmazante, tal como dióxido de silicio coloidal; un edulcorante, tal como sacarosa o ; o un agente aromatizante, tal como menta, salicilato de metilo o aromatizante de naranja.

Las composiciones inyectables se basan típicamente en disolución salina estéril inyectable o disolución salina tamponada con fosfato u otros portadores inyectables conocidos en la técnica. Como antes, el compuesto activo en dichas composiciones es típicamente un componente minoritario, siendo con frecuencia de alrededor de 0,05 a 10% en peso, siendo el resto el portador inyectable y similar.

Las composiciones transdérmicas se formulan típicamente como ungüento o crema tópica que contiene el o los ingredientes activos, en general en una cantidad que oscila de alrededor de 0,01 a alrededor de 20% en peso, preferiblemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 20% en peso, preferiblemente de alrededor de 0,1 a alrededor de 10% en peso, y más preferiblemente de alrededor de 0,5 a alrededor de 15% en peso. Cuando se formula como un ungüento, los ingredientes activos se combinarán típicamente con una base de ungüento parafínico o uno miscible en agua. Alternativamente, los ingredientes activos se pueden formular en una crema con, por ejemplo, una base de crema de aceite en agua. Dichas formulaciones transdérmicas son bien conocidas en la técnica, y en general incluyen ingredientes adicionales para mejorar la penetración dérmica de estabilidad de los ingredientes activos o la formulación. Todas las dichas formulaciones transdérmicas conocidas e ingredientes están incluidos dentro del alcance de esta invención.

Los compuestos de esta invención también se pueden administrar mediante un dispositivo transdérmico. En consecuencia, la administración transdérmica se puede lograr usando un parche del tipo depósito o de tipo membrana porosa, o de una variedad de matrices sólidas.

Los componentes descritos anteriormente para composiciones administrables por vía oral, inyectables o administrables por vía tópica son simplemente representativos. Otros materiales así como técnicas de procesamiento y similares se exponen en la Parte 8 de Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ª edición, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsilvania, que se incorpora aquí como referencia.

Los compuestos de esta invención también se pueden administrar en formas de liberación sostenida o de sistemas de suministro de fármacos de liberación sostenida. Una descripción de materiales de liberación sostenida representativos se puede encontrar en Remington’s Pharmaceutical Sciences.

Los siguientes ejemplos de formulación ilustran composiciones farmacéuticas representativas de esta invención. La presente invención, sin embargo, no está limitada a las siguientes composiciones farmacéuticas.

Formulación 1 - Comprimidos Se mezcla un compuesto de fórmula I como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seca en una relación en peso aproximada de 1:2. Se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se conforma en comprimidos de 240-270 mg (80-90 mg de compuesto activo por comprimido) en una prensa para comprimidos.

Formulación 2 - Cápsulas Se mezcla un compuesto de fórmula I como un polvo seco con un diluyente de almidón en una relación en peso aproximada de 1:1. Con la mezcla se rellenan cápsulas de 250 mg (125 mg de compuesto activo por cápsula).

Formulación 3 - Líquido Se mezcla un compuesto de fórmula I (125 mg), sacarosa (1,75 g) y goma xantana (4 mg), se pasa por un tamiz de malla nº 10 U.S. y después se mezcla con una disolución preparada previamente de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio (11:89, 50 mg) en agua. Se diluye benzoato de sodio (10 mg), sabor y color con agua, y se añaden con agitación. Se añade después suficiente agua para producir un volumen total de 5 ml.

Formulación 4 - Comprimidos Se mezcla un compuesto de fórmula I como un polvo seco con un aglutinante de gelatina seca en una relación en peso aproximada de 1:2. Se añade una cantidad minoritaria de estearato de magnesio como lubricante. La mezcla se conforma en comprimidos de 450-900 mg (150-300 mg de compuesto activo) en una prensa para comprimidos.

Formulación 5 - Inyección Se disuelve o se suspende un compuesto de fórmula I en un medio acuoso inyectable de disolución salina estéril tamponada hasta una concentración de aproximadamente 5 mg/ml.

Formulación 6 - Tópica Se funde alcohol estearílico (250 g) y una vaselina blanca (250 g) a alrededor de 75ºC y después se añade una mezcla de un compuesto de fórmula I (50 g) metilparabeno (0,25 g), propilparabeno (0,15 g), laurilsulfato de sodio (10 g) y propilenglicol (120 g) disueltos en agua (alrededor de 370 g), y la mezcla resultante se agita hasta que solidifica.

COMPUESTOS PARA USO EN MÉTODOS DE TRATAMIENTO Los presentes compuestos heterocíclicos condensados se usan como agentes terapéuticos para el tratamiento de afecciones en mamíferos. En consecuencia, los compuestos y las composiciones farmacéuticas de esta invención encuentran uso como sustancias terapéuticas para prevenir y/o tratar afecciones neurodegenerativas, autoinmunitarias e inflamatorias en mamíferos, incluyendo seres humanos.

En un aspecto de tratamiento, esta invención proporciona compuestos para uso como un fármaco para tratar un mamífero susceptible de o aquejado de una afección asociada con artritis, asma, infarto de miocardio, enfermedad inflamatoria del intestino y trastornos autoinmunitarios, método que comprende administrar una cantidad eficaz de una o más de las composiciones farmacéuticas descritas.

En todavía otro aspecto de tratamiento, esta invención proporciona compuestos para uso como un fármaco para tratar un mamífero susceptible de o aquejado de una afección que da lugar a respuestas de dolor o que se refiere a desequilibrios en el mantenimiento de actividad basal de nervios sensoriales. Los presentes compuestos tienen uso como analgésicos para el tratamiento de dolor de diversa génesis o etiología, por ejemplo dolor inflamatorio agudo (tal como dolor asociado a osteoartritis y artritis reumatoide); diversos síndromes de dolor neuropático (tal como neuralgia post-herpética, neuralgia trigeminal, distrofia simpático refleja, neuropatía diabética, síndrome de Guillain Barre, fibromialgia, dolor del miembro fantasma, dolor post-mastectomía, neuropatía periférica, neuropatía asociada con VIH y neuropatías inducidas por quimioterapia y otras neuropatías yatrogénicas); dolor visceral, (tal como el asociado a enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, pancreatitis y diversos trastornos ginecológicos y urológicos), dolor dental y cefalea (tal como migraña, cefalea en brotes y cefalea por tensión).

En aspectos adcionales de tratamiento, esta invención proporciona compuestos para uso como un fármaco para tratar un mamífero susceptible de o aquejado de enfermedades y trastornos neurodegenerativos tales como, por ejemplo, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y esclerosis múltiple; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado neuroinflamación, tal como, por ejemplo, encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiátricos mediados centralmente tales como, por ejemplo, depresión maníaca, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentación, trastornos del sueño y trastornos cognitivos; epilepsia y trastornos por ataque; disfunción de la próstata, vejiga e intestino, tal como, por ejemplo, incontinencia urinaria, vacilación urinaria, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostática benigna y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad y trastornos respiratorios y de las vías respiratorias, tales como, por ejemplo, rinitis alérgica, asma y enfermedad reactiva de las vías respiratorias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, tales como, por ejemplo, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios; escozor / prurito, tal como, por ejemplo, soriasis; obesidad; trastornos lipídicos; cáncer; y trastornos renales; comprendiendo el método administrar una cantidad eficaz para tratar la afección o prevenir la afección de una o más de las composiciones farmacéuticas descritas.

Como un aspecto más de la invención, se proporcionan los presentes compuestos heterocíclicos condensados para uso como un fármaco especialmente en el tratamiento o la prevención de las afecciones y enfermedades mencionadas anteriormente. También se proporciona el uso de los presentes compuestos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una de las afecciones y enfermedades mencionadas anteriormente.

Los niveles de la dosis de inyección oscilan de alrededor de 0,1 mg/kg/hora hasta al menos 10 mg/kg/hora, todos ellos durante alrededor de 1 a alrededor de 120 horas, y especialmente 24 a 96 horas. También se puede administrar un bolo precargado de alrededor de 0,1 mg/kg a alrededor de 10 mg/kg o más para conseguir niveles de estado estacionario adecuados. No se espera que la dosis total máxima exceda alrededor de 2 g/día para un paciente humano de 40 a 80 kg.

Para la prevención y/o el tratamiento de afecciones a largo plazo, tales como afecciones neurodegenerativas y autoinmunitarias, el régimen para tratamiento normalmente se alarga a lo largo de muchos meses o años, así que se prefiere la dosificación oral por conveniencia y tolerancia del paciente. Con la dosificación oral, los regímenes representativos son una a cinco y especialmente dos a cuatro y típicamente tres dosis orales al día. Usando estos patrones de dosificación, cada dosis proporciona de alrededor de 0,01 a alrededor de 20 mg/kg del compuesto de la invención, proporcionando cada uno dosis preferidas de alrededor de 0,1 a alrededor de 10 mg/kg y especialmente alrededor de 1 a alrededor de 5 mg/kg.

En general se seleccionan dosis transdérmicas para proporcionar niveles sanguíneos similares o menores que los que se consiguen usando dosis de inyección.

Cuando se usan para evitar el comienzo de una afección neurodegenerativa, autoinmunitaria o inflamatoria, los compuestos de esta invención se administrarán a un paciente con riesgo de desarrollar la afección, típicamente con el consejo y bajo la supervisión de un médico, a los niveles de dosis descritos anteriormente. Pacientes con riesgo de desarrollar una afección particular incluyen en general aquellos que tienen una historia familiar de la afección, o aquellos que se han identificado por ensayo genético o detección sistemática que son susceptibles en particular de desarrollar la afección.

Los compuestos de esta invención se pueden administrar como el único agente activo o se pueden administrar junto con otros agentes, incluyendo otras aminas activas y derivados.

PROCEDIMIENTOS SINTÉTICOS GENERALES Los compuestos heterocíclicos condensados de esta invención se pueden preparar a partir de materiales de partida fácilmente disponibles usando los siguientes métodos y procedimientos generales. Véase, por ejemplo, la Figura 1 y los Esquemas sintéticos 1-10, a continuación. Se apreciará que en el caso en el que se den las condiciones del procedimiento típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, relaciones molares de agentes reaccionantes, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones del procedimiento a menos que se indique de otro modo. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los agentes reaccionantes o el disolvente particulares usados, pero dichas condiciones se pueden determinar por un experto en la téecnica por procedimientos de optimización habituales.

Adicionalmente, como será evidente para los expertos en la técnica, pueden ser necesarios grupos protectores convencionales para evitar que ciertos grupos funcionales experimenten reacciones no deseadas. La elección de un grupo protector adecuado para un grupo funcional particular, así como las condiciones adecuadas para la protección y desprotección, son conocidas en la técnica. Por ejemplo, numerosos grupos protectores, y su introducción y eliminación, se describen en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición, Wiley, Nueva York, 1991 y las referencias citadas en la misma.

Los compuestos de esta invención, por ejemplo, se pueden preparar por la reacción de un cloroderivado con una amina apropiadamente sustituida, y el producto se puede aislar y purificar por procedimientos estándar conocidos. Dichos procedimientos incluyen (pero no se limitan a) recristalización, cromatografía de columna o HPLC. Los siguientes esquemas se presentan con detalles en cuanto a la preparación de compuestos heterocíclicos representativos que han sido enumerados anteriormente. Los compuestos de esta invención se pueden preparar a partir de materiales de partida y reactivos conocidos o comercialmente disponibles por un experto en la técnica de síntesis orgánica.

Esquema sintético 1 Los diversos derivados N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina se preparan usando un procedimiento general descrito más abajo. En consecuencia, el hidrocloruro de 1-bencil-4-oxopiperidin-3- carboxilato de etilo se hace reaccionar con acetato de formamidina para producir 6-bencil-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(4aH)-ona, que, a su vez, se hace reaccionar con POCl3 para dar el 4-cloroderivado.

El cloroderivado intermedio se condensa entonces con anilina o amina sustituida para dar la N-sustituido-6-bencil- 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina deseada. La desbencilación usando procedimientos estándar conocidos en la técnica, seguida del desplazamiento nucleofílico de una 2-halopiridina apropiada, produce la N- sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiada. Como ejemplo representativo, en el Esquema 1 se representa la síntesis de N-(4-terc-butilfenil)-6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidin-4-amina.

Esquema sintético 2 Por el contrario, los derivados de N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina se preparan desprotegiendo en primer lugar la 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(4aH)-ona, y haciendo reaccionar el producto con una 2-halopiridina apropiada para dar la 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidin-4(4aH)-ona, que se hace reaccionar con POCl3, seguido de la condensación con una anilina o amina apropiada, para producir la N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiada. Como ejemplo representativo, en el Esquema 2 se representa la síntesis de N-(4-terc-butilfenil)-6-(3-cloropiridin-2-il)- 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

Esquema sintético 3 Los derivados 2-piridosustituido[4,3-d]pirimidin-4-ona (no de la invención) se preparan usando la secuencia sintética dada más abajo. La 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-2-(metiltio)pirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona intermedia se forma mediante reacción de hidrocloruro de 1-bencil-3-oxopiperidin-4-carboxilato de etilo con tiourea. Este metiltioderivado intermedio se somete entonces a secuencia sintética esquematizada anteriormente (Esquema 2) para dar el derivado de N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-2-(metiltio)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiado, que se oxida al derivado de sulfona correspondiente y a su vez se hace reaccionar con un nucleófilo apropiado para dar el derivado de 2-sustituido-N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina análogo. Como ejemplo representativo, en el Esquema 3 se representa la síntesis de N-(4-terc-butilfenil)-6-(3-cloropiridin-2-il)- 5,6,7,8-tetrahidro-2-metoxipirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

Esquema sintético 4 A la inversa, hidrocloruro de 2-cloroacetamidina se hace reaccionar con un nucleófilo apropiado para formar un derivado de amidina apropiado. La amidina se hace reaccionar con hidrocloruro de 1-bencil-4-oxopiperidin-3- carboxilato de etilo para dar el derivado de 2-sustituido-N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidin-4-amina intermedio. Esta pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina intermedia se somete entonces a la secuencia de reacción representada en el Esquema 2 para producir el derivado de N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiadamente sustituido en 2. Como ejemplo representativo, en el Esquema 4 se representa la síntesis de N-(4-terc-butilfenil)-6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-2- (morfolinometil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (no de la invención).

Esquema sintético 5 La N-arilosustituido-5,6,7,8-tetrahidro-6-arilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiada, obtenida siguiendo el esquema sintético 2, se prepara mediante la reacción de la N-sustituido-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina correspondiente con un ácido arilborónico apropiado en presencia de acetato de cobre y trietilamina. Como ejemplo representativo, en el Esquema 5 se representa la preparación de N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-m- tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

Esquema sintético 6 Los derivados de 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(1,2,3,4-tetrahidro-4,4-dimetil-1-sustituido)quinolin-7-il)pirido[4,3- d]pirimidin-4-amina apropiados se preparan partiendo de 1,2,3,4-tetrahidro-4,4-dimetil-7-nitroquinolina. El derivado de nitroquinolina se hace reaccionar con un agente alquilante apropiado para dar la nitroquinolina N-sustituida, que se reduce usando procedimientos estándar conocidos en la técnica para producir el derivado de 7-aminoquinolina. El derivado de aminoquinolina resultante se condensa entonces con la 4-cloro-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina apropiada para dar el derivado de 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(1,2,3,4- tetrahidro-4,4-dimetil-1-sustituido)quinolin-7-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina deseado. Como ejemplo representativo, en el Esquema 6 se representa la preparación del derivado N-morfolinoetílico.

Esquema sintético 7 Una secuencia similar de reacciones que usa amidinas sustituidas, y expuesta en el esquema presentado a continuación, da lugar a productos 2-sustituidos (no de la invención). Por ejemplo, se puede emplear trifluorometilamidina en la secuencia similar de reacciones para producir productos 2-trifluorometil sustituidos.

Esquema sintético 8 De forma similar, se puede emplear otra secuencia de reacciones, como se representa en el Esquema 8, usando amidinas sustituidas para preparar derivados 2-sustituidos (no de la invención).

Esquema sintético 9: Síntesis general de 4-alquilamino-pirido[4,3-d]pirimidinas Los derivados de N-alquilosustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina se preparan desprotegiendo en primer lugar la 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(4aH)-ona y haciendo reaccionar el producto con una 2-halo-piridina apropiada para dar la 6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin- 4(4aH)-ona, que se hace reaccionar con POCl3, seguido de la condensación con una alquilamina apropiada, para producir la N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina apropiada. Como ejemplo representativo, en el Esquema 9 se representa la síntesis de N-(alquil)-6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina.

L = cadena de alquileno o de heteroalquileno, y R1 = grupo carbocíclico o heterocíclico sustituido o no sustituido.

Esquema sintético 10: Síntesis general de pirido[4,3-d]pirimidinas 2-sustituidas Los derivados de pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona 2-sustituidos (no de la invención) se preparan usando la secuencia sintética dada a continuación. La N-sustituido-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-2-(metiltio)pirido[4,3-d]pirimidin-4- amina intermedia, como se prepara según el Esquema sintético 3, se oxida al derivado de sulfona correspondiente, y a su vez se hace reaccionar con un nucleófilo apropiado para dar el derivado de 2-sustituido-N-sustituido-6-(piridin- 2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina análogo.

Nu = R4”-L’-Z’-; R4” = grupo carbocíclico o heterocíclico sustituido y no sustituido; L’ = cadena de alquileno o de heteroalquileno; y Z’-= S-, u O-.

Esquema sintético 11: Síntesis general de 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina 6-sustituida Diversas 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidinas 6-sustituidas se preparan usando un procedimiento general mostrado anteriormente. Se hace reaccionar hidrocloruro de 1-bencil-4-oxopiperidin-3- carboxilato de etilo con acetato de formamidina para producir 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(4aH)- ona, que, a su vez, se reduce a 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona. El intermedio se acopla con 5- cloro-2-metil-piridina para producir 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona. La cloración del producto resultante usando POCl3, y el desplazamiento del cloruro usando diversas bencilaminas vía desplazamiento por microondas, dará diversas 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidinas 6- sustituidas.

Los siguientes ejemplos sintéticos y biológicos se ofrecen para ilustrar esta invención, y no se tienen que interpretar de ningún modo como limitantes del alcance de esta invención. En los ejemplos a continuación, todas las temperaturas están en grados Celsius (a menos que se indique de otro modo). Las síntesis de estos compuestos representativos se realizan según los métodos explicados anteriormente y usando los reactivos, materiales de partida y métodos de purificación apropiados conocidos para los expertos en la técnica.

Compuestos ejemplares de la invención Los siguientes compuestos se han preparado según los métodos de invención. Los compuestos correspondientes se han citado anteriormente aquí o en las reivindicaciones. A menos que se indique de otro modo, se llevaron a cabo reacciones en microondas en modelos de microondas Emrys Optimizer o Smith Creator fabricados por Personal Chemistry, Inc.

SÍNTESIS DE INTERMEDIOS INTERMEDIO 1 6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona Una mezcla de hidrocloruro de 1-bencil-4-oxopiperidin-3-carboxilato de etilo (50,0 g, 0,168 moles), acetato de formamidina (16,2 g, 0,201 moles), 4,37 M de metóxido de sodio en metanol (190 ml) y metanol (200 ml, 5 moles) se calentó hasta 85ºC durante 16 horas en una vasija de reacción de 350 ml cerrada herméticamente. La mezcla se dejó enfriar, y se redujo a vacío. El residuo se disolvió en NaOH 1N (150 ml), y se vertió sobre hielo. Se añadió ácido acético glacial a la mezcla hasta que el pH de la mezcla fue 7 y precipitó un sólido bronceado. El sólido se filtró, se lavó con agua y con éter frío, y se secó a alto vacío para producir el compuesto del título como un sólido bronceado. (26,2 g, 61,4%).

MS: M+H= 242,2.

1H RMN (DMSO-d6): δ 2,29 (t, 5,8 Hz, 2H); 2,61 (t, 5,8 Hz, 2H); 3,26 (s, 2H); 3,64 (s, 2H); 7,21 - 7,36 (m, 6H); 7,96 (s, 1H).

INTERMEDIO 2 6-Bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina Una mezcla de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona (5,0 g, 0,02 moles), cloruro de fosforilo (3,30 ml, 0,035 moles) y acetonitrilo (80 ml) y DMF (cantidad catalítica) se calentó hasta 70ºC durante 1 hora. La mezcla se redujo a vacío, y el residuo negro que queda se recogió en diclorometano (250 ml) y se vertió sobre hielo. La mezcla se neutralizó cuidadosamente con la adición de bicarbonato de sodio sólido. Las capas se separaron, y la orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se redujo a vacío. La mezcla se cromatografió usando un gradiente de acetato de etilo:hexanos (0-100%) sobre un sistema de cromatografía ultrarrápida Isco. Las fracciones puras combinadas se redujeron a vacío para producir el compuesto del título como un aceite amarillo (3 g, 57,8%).

MS: M+H= 260.

1H RMN (DMSO-d6): δ 8,80 (s, 1H). 7,40-7,24 (m, 5H), 3,76 (s, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,92 (t, 2H), 2,80 (t, 2H).

EJEMPLOS

Compuesto 1 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil]pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil]pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (1,09 g, 4,21 mmoles) preparada como se describe anteriormente (Intermedio 2, 1,0 g, 3,86 mmoles) en acetonitrilo anhidro (3 ml), y se añadió 4- difluorometoxianilina (1,34 g, 8,42 mmoles). La mezcla se calentó a 180ºC durante 600 s en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry). Los disolventes se eliminaron a vacío para dar el producto deseado como un polvo beige (1,3 g, 94,2%). El producto bruto se usó para la etapa subsiguiente.

B. 5,6,7,8-Tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil]pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil]pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (1,012 g, 2,65 mmoles) en metanol (20 ml), y se añadieron hidróxido de paladio (1,5 g, 20% en peso) y formiato de amonio (1,67 g, 26,46 mmoles). La mezcla se calentó a reflujo durante una hora y después 10 horas a temperatura ambiente en nitrógeno. La mezcla se filtró a través de celita, y el filtrado se concentró para producir un sólido que se recogió en bicarbonato de sodio saturado (100 ml). El acuoso se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron para dejar un sólido bronceado. El sólido bruto se purificó mediante cromatografía en columna usando un gradiente de metanol:cloruro de metileno (0-20%). Las fracciones puras combinadas se redujeron a vacío para producir el compuesto del título (0,201 g) como un sólido amarillo que se usó directamente en la etapa siguiente.

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil] pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 5,6,7,8-tetrahidro-N-[(4-difluorometoxi)fenil]pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (0,091 g, 0,31 mmoles) en una mezcla de dioxano/N,N-dimetilacetamida (4:1) (2 ml). A la mezcla se añadió 2,3-dicloropiridina (0,092 g, 0,62 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,081 ml, 0,47 mmoles). La mezcla se calentó a 170ºC en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry) durante 10 h. La mezcla se dejó enfriar hasta la temperatura ambiente y se vertió en agua (60 ml), y se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron, y se evaporaron para dar un residuo marrón. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (0,38 g).

Compuesto 2 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (Intermedio 2, 1,0 g, 3,86 mmoles) en acetonitrilo anhidro (3 ml), y se añadió anilina (0,39 ml, 4,24 mmoles). La mezcla se calentó a 180ºC durante 600 s en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry). Los disolventes se eliminaron a vacío para dar el producto deseado como un polvo beige (1,5 g, cuant.). El producto bruto se usó como tal para la etapa subsiguiente.

MS: M+H = 317.

B. 5,6,7,8-Tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (1,5 g, 3,8 mmoles) en metanol (25 ml), y se añadió hidróxido de paladio (1,5 g, 20% en peso). La mezcla se agitó en un agitador Parr bajo una atmósfera de H2 (g) (60 PSI) durante 1 día. La mezcla se filtró a través de celita, y se evaporó para dar 0,95 g de material como un sólido amarillo (cuant.), que se usó como tal para la etapa siguiente.

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 5,6,7,8-tetrahidro-N-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (500 mg, 2,2 mmoles) en una mezcla de dioxano/N,N-dimetilacetamida (4:1) (2 ml). A la mezcla se añadió 2,3-dicloropiridina (423 mg, 2,86 mmoles) y N,N- diisopropiletilamina (0,38 ml, 2,2 mmoles). La mezcla se calentó a 150ºC en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry) durante 16 h. Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se evaporó para dar un residuo marrón. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (190 mg).

1H RMN (DMSO-d6): δ 8,58 (s, 1H). 8,40 (s, 1H) 8,28 (dd, 4,8 Hz, 1,7 Hz, 1H); 8,28 (dd, 4,8 Hz, 1,7 Hz, 1H); 7,88 (dd, 7,8 Hz, 1,7 Hz, 1H); 7,67-7,63 (m, 2H); 7,28 - 7,34 (m, 2H); 7,10-7,03 (m, 2H); 4,39 (s, 2H) 3,62 (t, 5,8 Hz, 2H) 2,88 (t, 5,8 Hz, 2H).

Compuesto 3 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidina (Intermedio 2, 0,25 g, 0,97 mmoles) en acetonitrilo anhidro (3 ml), y se añadió 4-fluorobencenamina (0,10 ml, 1,06 mmoles). La mezcla se calentó a 200ºC durante 600 s en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry). Los disolventes se eliminaron a vacío para dar el producto deseado como un polvo beige (0,313 g, 97%.).

MS: M+H = 335.

B. N-(4-Fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (0,64 g, 1,9 mmoles) en metanol (25 ml), y se añadió hidróxido de paladio (0,5 g, 20% en peso). La mezcla se agitó en un agitador Parr bajo una atmósfera de H2 (g) (60 PSI) durante 1 día. La mezcla se filtró a través de celita, y se evaporó para dar 0,47 g de material que se usó como tal para la etapa siguiente.

MS: M+H = 245.

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(4-fluorofenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (0,47 g, 1,92 mmoles) en una mezcla de dioxano/N,N-dimetilacetamida (4:1) (3 ml). A la mezcla se añadió 2,3-dicloropiridina (420 mg, 2,86 mmoles) y N,N- diisopropiletilamina (0,38 ml, 2,2 mmoles). La mezcla se calentó a 150ºC en un microondas Personal Chemistry durante 16 h. Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se evaporó para dar un residuo marrón. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (200 mg, 30%).

1H RMN (DMSO-d6): δ 8,62 (s, 1H); 8,38 (s, 1H); 8,28 (dd, 4,7 Hz, 1,4 Hz, 1H) 7,89 (dd, 7,8 Hz, 1,4 Hz, 1H); 7,67- 7,61 (m, 2H); 7,19-7,12 (m, 2H); 7,08 (dd, 7,8 Hz, 4,7 Hz, 1H); 4,38 (s, 2H); 3,61 (t, 5,4 Hz, 2H); 2,88 (t, 5,4 Hz, 2H).

Compuesto 4 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (0,5 g, 1,93 mmoles) en dioxano anhidro (3 ml), y se añadió 6-trifluorometilpiridin-3-ilamina (469 mg, 2,9 mmoles), seguido de HI/H2O (0,3 ml, 47%). La mezcla se calentó a 130ºC durante 600 s en un microondas Personal Chemistry. Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se evaporó para dar el producto como un sólido naranja (700 mg, 95% bruto). El producto bruto se usó para la etapa subsiguiente.

MS: M+H = 386.

B. N-(6-(Trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (1,7 g, 4,4 mmoles) en metanol (25 ml), y se añadió hidróxido de paladio (0,2 g, 20% en peso). La mezcla se agitó en un agitador Parr bajo una atmósfera de H2 (g) (60 PSI) durante 1 día. La mezcla se filtró a través de celita, y se evaporó para dar 1,3 g (cuant.) como un aceite naranja, que se usó como tal para la etapa siguiente.

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(6-(trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (130 mg, 0,44 mmoles) en una mezcla de dioxano/N,N-dimetilacetamida (4:1) (2 ml). A la mezcla se añadió 2,3-dicloropiridina (98 mg, 0,66 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,11 ml, 0,66 mmoles). La mezcla se calentó a 150ºC en un microondas Personal Chemistry durante 16 h. Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se evaporó para dar un residuo marrón. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (50 mg, 28%).

1H RMN (DMSO-d6): δ 9,15 (s, 1H). 9,05 (d, 2,4 Hz, 1H); 8,54 (s, 1H); 8,44 (dd, 8,7 Hz, 2,4 Hz, 1H); 8,29 (dd, 4,6 Hz, 1,6 Hz, 1H); 7,90 (dd, 7,8 Hz, 1,6 Hz, 1H); 7,85 (d, 8,7 Hz, 1H); 7,09 (dd, 7,8 Hz, 4,6 Hz, 1H); 4,45 (s, 2H); 3,63 (t, 5,6 Hz, 2H); 2,95 (t, 5,6 Hz, 2H).

Compuesto 5 N-(6-(Trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidro-6-(3-(metilsulfonil)piridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina El compuesto del título se preparó según el procedimiento descrito para el Compuesto 4 y haciendo reaccionar N-(6- (trifluorometil)piridin-3-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (140 mg, 0,47 mmoles) con 2-cloro-3- (metilsulfonil)piridina (Ponticello, JOC, 44(17), 1979) (0,115 g, 0,06 mmoles), en presencia de N,N- diisopropiletilamina (0,17 ml, 0,98 mmoles), para dar el Compuesto 5 deseado como un polvo blancuzco (55 mg, 26%).

1 H RMN (DMSO-d6): δ 9,07 (s, 1H). 9,04 (d, 2,3 Hz, 1H) 8,74 (dd, 4,7 Hz, 1,9 Hz, 1H); 8,46 (dd, 8,7 Hz, 2,3 Hz, 1H); 8,56 (s, 1H); 8,37 (dd, 7,8 Hz, 1,9 Hz, 1H); 7,85 (d, 8,7 Hz, 1H); 7,52 (dd, 7,8 Hz, 4,7 Hz, 1H); 4,39 (s, 2H); 3,33 (s, 3H); 3,53 (t, 5,7 Hz, 2H); 2,99 (t, 5,7 Hz, 2H).

Compuesto 6 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento dado para el Compuesto 4A, usando 6- bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (0,2 g, 0,77 mmoles), y 4-(trifluorometilsulfonil)anilina (0,27 g, 1,2 mmoles), para dar el intermedio N-bencílico deseado como un sólido marrón (278 mg. 82%).

MS: M+H = 449.

B. 5,6,7,8-Tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (270 mg, 0,55 mmoles) en cloroformo anhidro (10 ml), y se añadió cloroformiato de 1-cloroetilo (0,18 ml, 1,65 mmoles). Después de agitar durante 30 min., se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,24 ml, 1,65 mmoles), y la mezcla se agitó durante otras 2 h. El cloroformo se eliminó a vacío, y se añadieron 30 ml de metanol, y la mezcla se calentó durante 30 min. Al terminar la reacción, el metanol se eliminó, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para dar el producto (163 mg, 83%).

M+H = 359.

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-N-(4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina El compuesto del título se preparó según el procedimiento dado para el Compuesto 4C usando 5,6,7,8-tetrahidro-N- (4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (160 mg, 0,45 mmoles), 2,3-dicloropiridina (135 mg, 0,9 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,16 ml, 0,9 mmoles), para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (40 mg, 19%).

Compuesto 7 5,6,7,8-Tetrahidro-6-(3-(metilsulfonil)piridin-2-il)-N-(4-(trifluorometilsulfonil) fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina El compuesto del título se preparó según el procedimiento dado para el Compuesto 4C, usando 5,6,7,8-tetrahidro-N- (4-(trifluorometilsulfonil)fenil)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (308 mg, 0,86 mmoles), 2-cloro-3-(metilsulfonil)piridina (Ponticello, JOC, 44(17), 1979) (0,200 g, 1,04 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,25 ml, 1,43 mmoles), para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (75 mg, 19%).

1H RMN (DMSO-d6): δ 9,28 (s, 1H). 8,74 (dd, 4,8 Hz, 1,8 Hz, 1H); 8,64 (s, 1H); 8,37 (dd, 7,8 Hz, 1,8 Hz, 1H); 8,20 (d, 9,0 Hz, 2H); 8,02 (d, 9,0 Hz, 2H); 7,51 (dd, 7,8 Hz, 4,8 Hz, 1H); 4,41 (s, 2H); 3,53 (t, 5,6 Hz, 2H); 3,31 (s, 3H); 3,0 (t, 5,6 Hz, 2H); Compuesto 8 5,6,7,8-Tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)pirido[3,4-d]pirimidin-4-amina El compuesto del título se puede preparar usando el procedimiento general expuesto para el Compuesto 1, anteriormente, usando 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-amina (0,32 ml, 2,63 mmoles) y 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8- tetrahidropirido[3,4-d]pirimidina (Compuesto 1B) (0,621 g, 2,39 mmoles) en acetonitrilo (3 ml).

B. 5,6,7,8-Tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Una mezcla de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)pirido[3,4-d]pirimidin-4-amina (0,742 g, 1,98 mmoles), formiato de amonio (1,25 g, 19,83 mmoles) y paladio, 10% en peso sobre carbono activado (75 mg), en metanol (10 ml), se calienta hasta 60ºC durante 2 h. La mezcla se enfría hasta r.t. y se filtra sobre celita. El filtrado se concentra a presión reducida para dar un sólido blanco que se disuelve en agua. La mezcla se extrae dos veces con una mezcla 3:1 de cloroformo:isopropanol. Los extractos orgánicos combinados se secan sobre sulfato de sodio y se concentran hasta sequedad para dar el compuesto del título.

C. 5,6,7,8-Tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 5,6,7,8-tetrahidro-N-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (110 mg, 0,39 mmoles) en THF anhidro (2 ml). A la mezcla se añadió ácido m-tolilborónico (105 mg, 0,78 mmoles), Cu(OAc)2 (141 mg,0,78 mmoles) y trietilamina (0,68 g, 0,095 ml) y 390 mg de tamices moleculares 4A activados, machacados. La mezcla se agitó durante 6 h, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo rojizo (14 mg, 9,6%).

Compuesto 9 N-(4-(Trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-fenilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina La (5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il)-(4-trifluorometilfenil)amina (100 mg, 0,34 mmoles) se disolvió en THF anhidro (2 ml). A la mezcla se añadió ácido fenilborónico (83 mg, 0,68 mmoles), Cu(OAc)2 (124 mg, 0,68 mmoles) y trietilamina (0,68 g, 0,095 ml). La mezcla se agitó durante 6 h, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo rojizo (8,0 mg, 6,0%).

1H RMN (DMSO-d6): δ 8,82 (s, 1H). 8,50 (s, 1H); 7,96 (d, 8,8 Hz, 2H); 7,71 (d, 8,8 Hz, 2H); 7,32-7,26 (m, 2H); 7,20- 7,15 (m, 2H); 6,85 -6,80 (m, 1H); 4,27 (s, 2H); 3,61 (t, 5,8 Hz, 2H); 2,90 (t, 5,8 Hz, 2H).

Compuesto 10 N-(4-(Trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-o-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,34 mmoles) en THF anhidro (2 ml). A la mezcla se añadió ácido o-tolilborónico (92 mg, 0,68 mmoles), Cu(OAc)2 (124 mg, 0,68 mmoles) y trietilamina (0,68 g, 0,095 ml). La mezcla se agitó durante 6 h, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo rojizo (6,0 mg, 5%).

Compuesto 11 N-(4-(Trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-m-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,34 mmoles) en THF anhidro (2 ml). A la mezcla se añadió ácido m-tolilborónico (92 mg, 0,68 mmoles), Cu(OAc)2 (124 mg, 0,68 mmoles) y trietilamina (0,68 g, 0,095 ml). La mezcla se agitó durante 6 h, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo rojizo (6,2 mg, 5%).

1 H RMN (DMSO-d6): δ 8,81 (s, 1H). 8,50 (s, 1H); 7,97 (d, 8,8 Hz, 2H); 7,71 (d, 8,8 Hz, 2H); 7,19-7,14(m, 1H); 7,01- 6,94 (m, 2H); 6,65 (d, 7,6 Hz, 1H); 4,25 (s, 2H); 3,58 (t, 5,6 Hz, 2H); 2,89 (t, 5,6 Hz, 2H); 2,30 (s, 3H).

Compuesto 12 N-(4-(Trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-6-p-tolilpirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,34 mmoles) en THF anhidro (2 ml). A la mezcla se añadió ácido p-tolilborónico (92 mg, 0,68 mmoles), Cu(OAc)2 (124 mg, 0,68 mmoles) y trietilamina (0,68 g, 0,095 ml). La mezcla se agitó durante 6 h, y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo rojizo (12,8 mg, 10%).

1 H RMN (DMSO-d6): δ 8,80 (s, 1H). 8,49 (s, 1H); 7,96 (d, 8,7 Hz, 2H); 7,7 (d, 8,7 Hz, 2H); 7,10 (d, 9,1 Hz, 2H); 7,07 (d, 9,1 Hz, 2H); 4,21 (s, 2H); 3,54 (t, 5,7 Hz, 2H); 2,88 (t, 5,7 Hz, 2H); 2,23 (s, 3H).

Compuesto 13 6-[6-(3-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3,3-dimetil-1,3-dihidro-indol-2-ona A. 6-amino-3,3-dimetilindolin-2-ona Una mezcla de 3,3-dimetil-6-nitroindolin-2-ona (1,2 g, 5,8 mmoles) (Mertens et al, J. Med. Chem. 30:1279, 1987), Pd al 10%-C (100 mg), y MeOH (100 ml) se agitó en una atmósfera de hidrógeno (1 atm.) durante 10 h. El catalizador se filtró, y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante columna para dar un sólido blancuzco (700 mg).

MS: M+H = 177.

1H RMN (d6-DMSO): 10,01 (s, 1H), 6,84 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,13-6,10 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 1,15 (s, 6H).

B. 6-(6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino)-3,3-dimetilindolin-2-ona Una mezcla de 6-amino-3,3-dimetilindolin-2-ona (156 mg), 4-cloro-6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3- d]pirimidina (100 mg), y CH3CN (5 ml) se llevó a un reactor de microondas a 180ºC durante 1 h. Tras enfriar, la mezcla se trató con Na2CO3 ac. sat., y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron. El residuo se purificó mediante columna para dar un sólido blancuzco (120 mg, 80%).

1H RMN (d6-DMSO): 10,32 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,28 (dd, 1H, J= 5,2, 1,6 Hz), 7,89 (dd, 1H, J = 8,0, 1,6 Hz), 7,30 (s, 1H), 7,19 (s, 2H), 7,08 (dd, 1H, J = 8,0, 4,8 Hz), 4,38 (s, 2H), 3,61 (t, 2H, J= 6,0 Hz), 2,88 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 1,24 (s, 6H).

Compuesto 14 1-{6-[6-(3-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3,3-dimetil-2,3-dihidro-indol-1-il)- etanona A. 3,3-dimetil-6-nitroindolina A una disolución agitada de 3,3-dimetil-6-nitroindolin-2-ona (0,6 g, 3 mmoles) (Mertens et al., J. Med. Chem. 30:1279, 1987) en THF (40 ml) a 0ºC en N2 se añadió una disolución 2,0 M de complejo de BH3·Me2S en THF (10 ml, 20 mmoles). La mezcla se agitó a rt durante 10 h, y después se paralizó mediante adición de agua (10 ml) y HCl concentrado (20 ml). La mezcla se agitó adicionalmente a rt durante 5 h, y después se basificó con Na2CO3 ac. sat., y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron para dar un jarabe naranja.

MS: M+H = 193.

B. 1-(3,3-dimetil-6-nitroindolin-1-il)etanona A una disolución agitada de 3,3-dimetil-6-nitroindolina (450 mg) en CH2Cl2 (15 ml) y Et3N (0,6 ml) a -10ºC se añadió cloruro de acetilo (180 l, 2,5 mmoles). La mezcla se agitó a rt toda la noche y se paralizó mediante adición de NaHCO3 ac. sat., y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron. El residuo se purificó mediante columna para dar un sólido amarillo claro (390 mg, 71% durante dos etapas).

MS: M+H = 235.

C. 1-(6-amino-3,3-dimetilindolin-1-il)etanona Una mezcla de 1-(3,3-dimetil-6-nitroindolin-1-il)etanona (300 mg), Pd al 10%-C (50 mg), y EtOH (50 ml) se agitó en una atmósfera de hidrógeno (1 atm.) durante 3 h. El catalizador se filtró, y el filtrado se concentró para dar un sólido amarillo claro (260 mg).

MS: M+H = 205.

D.

1-{6-[6-(3-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3,3-dimetil-2,3-dihidro-indol-1-il}- etanona Una mezcla de 1-(6-amino-3,3-dimetilindolin-1-il)etanona (80 mg), 4-cloro-6-(3-cloropiridin-2-il)-5,6,7,8- tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (80 mg), y CH3CN (5 ml) se llevó a un reactor de microondas a 180ºC durante 1 h.

Tras enfriar, la mezcla se trató con Na2CO3 ac. sat., y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron. El residuo se purificó mediante columna para dar un sólido amarillo claro (75 mg).

1H RMN (d6-DMSO): 8,61 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,28 (dd, 1H, J = 4,8, 1,6 Hz), 8,19 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 7,88 (dd, 1H,

J = 8,0, 1,6 Hz), 7,35 (dd, 1H, J = 8,0, 2,0 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 8,0, 4,8 Hz), 4,38 (s, 2H), 3,86 (s, 2H), 3,61 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,87 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,16 (s, 3H), 1,30 (s, 6H).

Compuesto 15 Sal de HCl de [6-(3-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1H-indol-6-il)- amina Una mezcla de 1-{6-[6-(3-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-3,3-dimetil-2,3-dihidro- indol-1-il}-etanona (30 mg), EtOH (5 ml), y HCl acuoso 5N (1 ml) se agitó a 55ºC durante 10 h. La mezcla se concentró a vacío para dar la sal de HCl como un sólido amarillo claro (35 mg).

1H RMN (d6-DMSO): 10,38 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,30 (dd, 1H, J = 4,8, 1,6 Hz), 7,93 (dd, 1H, J= 8,0, 1,6 Hz), 7,55- 7,42 (m, 3H), 7,13 (dd, 1H, J = 8,0, 4,8 Hz), 4,46 (s, 2H), 3,66 (t, 2H, J= 5,6 Hz), 3,48 (s, 2H), 3,06 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 1,37 (s, 6H).

Compuesto 16 [6-(3-Cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-metil-indol-6-il)-amina A una mezcla agitada de sal de HCl de [6-(3-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(3,3-dimetil- 2,3-dihidro-1H-indol-6-il)-amina (10 mg), DMF (5 ml), y K2CO3 (50 mg) se añadió MeI (50 l). La mezcla de reacción se agitó a rt durante 5 h, y después se diluyó con EtOAc (50 ml). La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2SO4) y se concentró. El residuo se purificó mediante columna para dar un sólido blancuzco (7 mg).

1H RMN (d6-DMSO): 8,35 (s, 2H), 8,28 (dd, 1H, J = 4,8, 1,6 Hz), 7,88 (dd, 1H, J = 8,0, 1,6 Hz), 7,07 (dd, 1H, J = 8,0, 4,4 Hz), 6,91 (s, 2H), 6,73 (s, 1H), 4,35 (s, 2H), 3,61 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 3,03 (s, 2H), 2,86 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,67 (s, 3H), 1,23 (s, 6H).

Compuesto 17 (6-terc-Butil-piridin-3-il)-[6-(3-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina A. (6-Bencil-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il)-(6-terc-butil-piridin-3-il)-amina El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento dado para el Compuesto 1A, usando 6- bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina (Intermedio 2) y 6-terc-butil-piridin-3-ilamina, para dar el intermedio N-bencílico deseado como un sólido marrón.

B. (5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il)-(6-terc-butil-piridin-3-il)-amina El compuesto del título se preparó sustancialmente según el procedimiento dado para el Compuesto 1B mediante la desprotección de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il)-(6-terc-butil-piridin-3-il)-amina.

C. (6-terc-Butil-piridin-3-il)-[6-(3-cloro-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina El compuesto del título se preparó según el procedimiento dado para el Compuesto 1C, haciendo reaccionar (5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il)-(6-terc-butil-piridin-3-il)-amina con 2,3-dicloropiridina para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco.

Compuesto 18 3,3-Dimetil-1-{[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ilamino]-metil}-ciclohexanol Se calentaron 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina (0,030 g, 0,00012 moles) y 1- aminometil-3,3-dimetil-ciclohexanol (0,022 g, 0,00014 moles) en acetonitrilo (3 ml, 0,06 moles) vía microondas en un tubo cerrado herméticamente a 180ºC durante un total de 2 horas y cinco minutos. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se vertió en bicarbonato de sodio saturado. La mezcla se extrajo con cantidades iguales de acetato de etilo, y la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice metanol/diclorometano (0-10%) para producir el compuesto del título.

Compuestos 24-33 y 35-129 Síntesis general Síntesis de 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina aminosustituida A. 5,6,7,8-Tetrahidro-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona Una mezcla de 6-bencil-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona (Intermedio 2, 18,0 g, 0,0738 moles), trietilamina (48 ml, 0,34 moles) e hidróxido de paladio (10 g, 0,07 moles) en metanol (242 ml, 5,91 moles) se calentó hasta 60ºC. Se añadió ácido fórmico (7,6 ml, 0,20 moles) gota a gota a la mezcla durante un período de 15 minutos. La mezcla se calentó a 65ºC durante tres horas, se dejó enfriar, y se filtró sobre celita. El filtrado se concentró a vacío reducido para producir el compuesto del título como un sólido amarillo, que se usó directamente en la reacción siguiente. (9,62 g, 77,6%).

MS:M+H= 152,2.

B. 5,6,7,8-Tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidin-4(3H)-ona En un tubo de microondas de 20 ml se combinaron 5,6,7,8-tetrahidro-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-4-ona (0,280 g, 0,00183 moles), 2-cloro-5-metilpiridina (0,47 g, 0,0037 moles), 1,4-dioxano (2,5 ml, 0,032 moles), N,N- diisopropiletilamina (0,64 ml, 0,0037 moles) y N,N-dimetilacetamida (0,5 ml, 0,005 moles). La mezcla se calentó vía microondas a 150ºC durante 4 horas. La mezcla se redujo a vacío, y se recogió en cloroformo:IPA (3:1) (50 ml). El orgánico se lavó con bicarbonato de sodio y con salmuera (1 X 50 ml), se secó sobre sulfato de sodio, y se redujo a vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando un gradiente de cloruro de metileno:metanol (0-10%). Las fracciones puras combinadas se redujeron a vacío para producir un sólido amarillo brillante (0,215 g, 47,9%).

MS:M+H= 243,28.

1H RMN (DMSO-d6): δ 12,50 (s a, 1H), 8,05 (s, 1H) 7,98 (d, 1H), 7,41 (dd, 1H), 6,84 (d, 1H), 4,24, (s, 2H), 3,77 (t ,2H), 2,67 (t ,2H), 2,15 (s 3H).

C. 4-Cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina En un matraz de fondo redondo de 250 ml se combinaron 5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3- d]pirimidin-4(3H)-ona (0,250 g, 0,00103 moles), cloruro de fosforilo (0,8 ml, 0,008 moles), y 1,2-dicloroetano (10 ml, 0,1 moles). Se añadió N,N-dimetilanilina (0,01 g, 0,0001 moles) gota a gota, y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla se redujo a vacío para producir un aceite marrón oscuro. El aceite se recogió en cloruro de metileno (50 ml), y se vertió sobre hielo. La mezcla se neutralizó cuidadosamente usando bicarbonato de sodio sat. Las capas se separaron, y la orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se redujo a vacío. La mezcla se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice usando cloruro de metileno:metanol (0-10%). Las fracciones puras combinadas se redujeron a vacío para producir un sólido amarillo brillante. (0,141 g, 52,4%).

MS:M+H=260,8.

1H RMN (DMSO-d6): δ 8,83 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 6,99 (d, 1H), 4,67 (s, 2H), 3,89 (t, 2H), 2,98 (t, 2H), 2,16 (s, 3H).

D. Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2-il)pirido[4,3-d]pirimidina 4-sustituida En un tubo de reacción de microondas de 5 ml se combinaron 4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-6-(5-metilpiridin-2- il)pirido[4,3-d]pirimidina (0,015 mg, 0,05 mmoles), bencilamina (1 eq.), acetonitrilo (800 ul) y DIPEA (2,0 eq.). La mezcla se calentó a 150 grados durante 15 minutos. Los volátiles se eliminaron a presión reducida, y la mezcla se purificó mediante cromatografía de fluidos supercríticos para producir el producto deseado.

Los siguientes compuestos (24-33 y 35-129) se pueden preparar sustancialmente según el procedimiento dado anteriormente usando 4-cloro-6-(5-metilpiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina y una amina apropiada para dar los derivados de tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina amínicos correspondientes, como se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1 ID Amina Estructura 24 2-Metil-bencilamina 4-Cloro-bencilamina 26 C-Ciclohexil-metilamina 27 2-Metoxi-bencilamina 28 3-Metoxi-bencilamina ID Amina Estructura 29 C-(1-p-Tolil-ciclohexil)-metilamina 2-Cloro-bencilamina 31 2-Etoxi-bencilamina 32 2-(2-Cloro-fenil)-etilamina 33 C-Adamantan-1-il-metilamina 2-(4-Metoxi-fenil)-etilamina 36 Bencil-metil-amina 37 C-Benzo[1,3]dioxol-5-il-metilamina 38 3-Trifluorometil-bencilamina 39 2-Trifluorometil-bencilamina 4-Trifluorometoxi-bencilamina ID Amina Estructura 41 3-Trifluorometoxi-bencilamina 42 2-Trifluorometoxi-bencilamina 43 Indan-1-ilamina 44 4-terc-Butil-bencilamina Fenetilamina 46 2-(3-Metoxi-fenil)-etilamina 47 2-(3,4-Dimetoxi-fenil)-etilamina 48 2-(4-Cloro-fenil)-etilamina 49 2-p-Tolil-etilamina 4-Trifluorometil-bencilamina 51 2-(3,5-Dimetoxi-fenil)-etilamina ID Amina Estructura 52 2-Difluorometoxi-bencilamina 53 4-Metoxi-bencilamina 54 2-(3,4-Diclorofenil)-etilamina 3-Cloro-bencilamina 56 4-Metil-bencilamina 57 3-Fluoro-bencilamina 58 4-Isopropil-bencilamina 59 (3,4-Dimetoxi-bencil)-metil-amina 2-(4-Fluoro-fenil)-1,1-dimetiletilamina 61 2-(3-Trifluorometilfenil)-etilamina 62 (4-Cloro-bencil)-metil-amina 63 (2-Metoxi-bencil)-metil-amina ID Amina Estructura 64 (3-Metoxi-bencil)-metil-amina (4-Etil-bencil)-metil-amina 66 (3-Cloro-bencil)-metil-amina 67 (4-Fluoro-bencil)-metil-amina 68 (4-Metoxi-bencil)-metil-amina 69 Metil-(4-trifluorometil-bencil)-amina Metil-(4-metilbencil)-amina 71 2,5-Difluoro-bencilamina 72 2,6-Difluoro-bencilamina 73 3,4-Difluoro-bencilamina 74 2-Fluoro-5-trifluorometil-bencilamina 75 3-Fluoro-5-trifluorometil-bencilamina ID Amina Estructura 76 4-Fluoro-3-trifluorometil-bencilamina 77 2,3-Difluoro-bencilamina 78 2,4-Diclorobencilamina 79 2,4-Dimetilbencilamina 80 2,3-Dimetilbencilamina 81 1-Metil-1-fenil-etilamina 82 4-Difluorometoxi-bencilamina 83 4-Cloro-2-fluoro-bencilamina 84 3,4-Dimetoxi-bencilamina 85 3,4-Dicloro-bencilamina 86 1-(4-Fluoro-fenil)-etilamina 87 3,5-Dimetoxi-bencilamina ID Amina Estructura 88 2,4-Dimetoxi-bencilamina 89 2-Cloro-5-trifluorometil-bencilamina 90 C-Piridin-3-il-metilamina 91 C-Piridin-4-il-metilamina 92 3-Metil-bencilamina 93 4-Fluoro-bencilamina 94 3,5-Dimetilbencilamina 95 2,5-Dimetil-bencilamina 96 3,4-Dimetilbencilamina 97 4-Etil-bencilamina 98 4-Fluoro-3-metil-bencilamina 99 1-(3-Fluoro-fenil)-etilamina ID Amina Estructura 100 2,4-Difluoro-bencilamina 101 3,5-Difluoro-bencilamina 102 4-Cloro-2-metil-bencilamina 103 5-Cloro-2-metil-bencilamina 104 3-Cloro-2-metil-bencilamina 105 1-(4-Cloro-fenil)-etilamina 106 2,6-Difluoro-3-metil-bencilamina 107 C-Quinolin-6-il-metilamina 108 4-Cloro-3-fluoro-bencilamina 109 2-Cloro-4-fluoro-bencilamina 110 3-Cloro-2-fluoro-bencilamina 111 5-Cloro-2-fluoro-bencilamina ID Amina Estructura 112 3-Cloro-4-fluoro-bencilamina 113 2,6-Dimetoxi-bencilamina 114 2,3-Dimetoxi-bencilamina 115 3,5-Diclorobencilamina 116 2,3-Diclorobencilamina 117 1-(3-Trifluorometilfenil)-etilamina 118 4-Fluoro-2-trifluorometil-bencilamina 119 5-Fluoro-2-trifluorometil-bencilamina 120 2-Fluoro-3-trifluorometil-bencilamina 121 2-Fluoro-4-trifluorometil-bencilamina 122 3-Fluoro-4-trifluorometil-bencilamina 123 1-(4-Metanosulfonil-fenil)-etilamina ID Amina Estructura 124 3-Fenoxi-bencilamina 125 3,5-Bis-trifluorometil-bencilamina 126 5-Fluoro-2-metil-bencilamina 127 4-Cloro-3-trifluorometil-bencilamina 128 [(S)-1-(4-Cloro-fenil)-etil]amina 129 [(R)-1-(4-Cloro-fenil)-etil]amina Compuestos 19, 20 y 22 Los siguientes compuestos (19, 20 y 22) se pueden preparar sustancialmente según el procedimiento dado anteriormente usando 4-cloro-6-(5-trifluorometilpiridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina y una amina apropiada para dar los derivados de tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina amínicos correspondientes, como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2 ID Amina Estructura 19 Bencilamina 2-(2-cloro-fenil) etilamina 22 C-ciclohexil-metilamina Compuestos 21 y 23 Los siguientes compuestos (21 y 23) se pueden preparar sustancialmente según el procedimiento dado anteriormente usando 4-cloro-6-(piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina y una amina apropiada para dar los derivados de tetrahidropirido[4,3-d]pirimidina amínicos correspondientes, como se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3 ID Amina Estructura 21 C-ciclohexilmetilamina 23 2-(2-cloro-fenil)etilamina Compuesto 34 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido [4,3-d] pirimidin-4-amina A. 6-Bencil-N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-4-cloro-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidina (0,6 g, 2,3 mmoles) en dioxano anhidro (2 ml), y se añadió 4-(trifluorometil)anilina (0,43 ml, 3,45 mmoles), seguido de HI/H2O (0,2 ml, 47%). La mezcla se calentó a 130ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 10 min. en un microondas (modelo Smith creator, Personal Chemistry). Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para dar el compuesto deseado como un sólido amarillo (800 mg, 91%), que se usó como tal para la etapa siguiente.

M+H = 385.

B. N-(4-(Trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió 6-bencil-N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (1,5 g, 3,9 mmoles) en metanol (25 ml), y se añadió hidróxido de paladio (1,5 g, 20% en peso). La mezcla se agitó en un agitador Parr bajo una de atmósfera H2 (g) (60 PSI) durante 3 días. La mezcla se filtró a través de celita y se evaporó para dar 1,0 g de material como un sólido amarillo (87%), que se usó como tal para la etapa siguiente.

MS: M+H = 295.

1H RMN (DMSO-d6): 8,61 (s, 0,8H)., 8,46 (s, 1H), 7,94 (d, 8,6 Hz, 2H), 7,66 (d, 8,6 Hz, 2H), 3,84 (s, 2H), 3,05 (t, 5,6 Hz, 2H), 2,68 (t, 5,6 Hz, 2H).

C. 6-(3-Cloropiridin-2-il)-N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina Se disolvió N-(4-(trifluorometil)fenil)-5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-d]pirimidin-4-amina (700 mg, 3,4 mmoles) en una mezcla de dioxano/N,N-dimetilacetamida (4:1) (2 ml). A la mezcla se añadió 2,3-dicloropiridina (1,5 g, 10,2 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (0,87 ml, 5,1 mmoles). La mezcla se calentó en un tubo cerrado herméticamente a 150ºC en un microondas (modelo Emrys Optimizer, Personal Chemistry) durante 16 h. Los disolventes se eliminaron a vacío, y el residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 sat. y con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó para dar un residuo marrón. El residuo se purificó usando un gradiente de acetato de etilo:hexano (0-100%) para dar el compuesto deseado como un polvo blancuzco (340 mg, 26%).

1H RMN (DMSO-d6 8,91 (s a, 1H). 8,50 (s, 1H), 8,28 (dd, 4,7Hz, 1,6Hz, 1H), 7,94 (d, 8,4Hz, 2H), 7,89 (dd, 7,7Hz, 1,6Hz, 1H), 7,67 (d, 8,4 Hz, 2H), 7,08 (dd, 7,6Hz, 4,7Hz, 1H), 4,44 (s, 2H), 3,63 (t, 5,6Hz, 2H), 2,92 (t, 5,6 Hz, 2H).

ENSAYOS Los compuestos proporcionados en la presente memoria se pueden evaluar usando ensayos bioquímicos, por ejemplo ensayos de unión a receptores P2X2 y P2X3, se pueden evaluar usando ensayos a base de células, o se pueden evaluar en modelos animales de dolor. Los ejemplos de ensayos se describen a continuación.

Los receptores purinérgicos P2X2 y P2X3 se expresan en una variedad de tejidos neuronales y no neuronales, incluyendo diversos ganglios sensoriales y simpáticos, tales como los ganglios de la raíz dorsal (DRG), nudoso (ND), trigeminal (TG) y cervical superior (SCG), y también en células del músculo liso (Burnstock, Trends Pharmacol. Sci. 27:166-76, 2006). En varias regiones, los receptores P2X2 y P2X3 se coexpresan, y estudios funcionales han demostrado la presencia de receptores P2X2/3 heteroméricos cuyas propiedades difieren de las de cualquier receptor homomérico. Además, se han descrito receptores quiméricos P2X2/3, que contienen el dominio citoplasmático N-terminal de P2X2 fusionado al primer dominio transmembránico de P2X3; estos canales quiméricos retienen el perfil farmacológico de los receptores P2X3 homoméricos, al tiempo que ganan el fenotipo no desensibilizante del receptor P2X2 homomérico (Neelands et al., Br. J. Pharmacol. 140:202-10, 2003). El comportamiento no desensibilizante del receptor quimérico es especialmente útil para detección sistemática.

Los miembros de la familia P2X son canales de cationes no selectivos que se abren por ligando, cuya actividad se puede caracterizar usando métodos electrofisiológicos, o midiendo la entrada de ión calcio usando colorantes fluorescentes sensibles al calcio. Las aplicaciones de agonistas tales como ATP o un análogo de ATP, tal como ,β- adenosina 5’-trifosfato (MeATP, Sigma-Aldrich), causan la apertura de canales, dando como resultado flujo de corriente y entrada de calcio (Bianchi et al., Eur. J. Pharmacol. 376:127-38, 1999).

Los compuestos de la invención se pueden ensayar en busca de la actividad antagonista en receptores P2X3 y P2X2/3 midiendo su capacidad para afectar a la apertura del receptor por ATP, MeATP u otros agonistas. Los ensayos funcionales de actividad del receptor incluyen pero no se limitan a: (i) entrada de ión calcio medida por fluorescencia de un colorante sensible al calcio, y (ii) entrada de iones que resulta de la apertura de canales medida por métodos electrofisiológicos. Estos métodos se pueden usar para evaluar la función de los canales cuando el receptor pertinente se exprese de manera heteróloga en células de mamíferos o anfibios. Estos métodos también se pueden usar para evaluar compuestos de la invención en neuronas primarias de roedores y otras células primarias de mamífero y estirpes celulares que expresan normalmente el receptor de interés.

Los compuestos se pueden evaluar además en busca de su capacidad para unirse a receptores P2X3 y P2X2/3 usando enfoques bioquímicos. Los compuestos también se pueden evaluar en busca de su capacidad para modificar la señalización del sistema nervioso sensorial y autónomo en el que se sabe que los receptores tienen un papel (por ejemplo, señalización aferente de la vejiga urinaria, sensación de dolor del nervio sensorial). Finalmente, los compuestos de la invención se pueden ensayar in vivo en modelos animales de dolor conocidos por un experto en la técnica, tal como, por ejemplo, modelos de dolor neuropático, inflamatorio o visceral, o modelos de incontinencia urinaria.

Los siguientes ejemplos biológicos se ofrecen para ilustrar la presente invención, y no se tienen que interpretar de ningún modo como limitación del alcance de la misma.

Ensayo de absorción de calcio Clones y estirpes celulares: Se clonan P2X3 (Nº de acceso NM_002559) y P2X2 (Nº de acceso NM_170682) humanos, y P2X3 (Nº de acceso NM_031075) y P2X2 (Nº de acceso NM_053656) de rata, en un vector de expresión de mamífero (por ejemplo, pcDNA5/TO o pcDNA3 Invitrogen). Para la coexpresión de P2X2 y P2X3, las regiones codificantes de ambos receptores se clonaron en un vector bicistrónico usando métodos similares a los descritos por Kawashima et al., Receptors Channels 5:53-60, 1998. El clon quimera P2X2/3 se creó como se describe por Neelands et al, y después se clonó en un vector de expresión como anteriormente. Los receptores se expresan en células (por ejemplo, HEK293 o 1321N1) vía transinfección transitoria usando transinfección mediada por lípidos estándar, o por creación de transfectantes estables para cada receptor. Las estirpes celulares se mantienen en DMEM + Glutamax al 5%, el nivel apropiado de antibiótico selectivo, y FBS inactivado por calor al 10%.

Ensayo de antagonista de P2X: La EC50 del agonista se determina al comienzo del ensayo, y se realizan experimentos de IC50 del compuesto usando una concentración de agonista predeterminada (EC50-90 dependiendo de la estirpe celular) como estímulo. Los agonistas usados son MeATP, ATP u otros análogos de ATP. Los compuestos se pueden ensayar a concentraciones que oscilan de 1 pM a 10 M. La actividad funcional de los compuestos en el receptor P2X se determina midiendo su capacidad para inhibir la entrada de calcio inducida por agonistas. Los compuestos se pueden ensayar para determinar la actividad antagonista contra la quimera P2X2/3, el homómero P2X3, o el heterómero P2X2/3. Para ensayar la actividad antagonista, células que expresan el receptor apropiado se siembran sobre placas de 96 o 384 pocillos 18-24 horas antes del ensayo. En el día del ensayo, las células se cargan con colorante fluorescente sensible al calcio (por ejemplo, reactivo no lavado Fluo-4 - nº de cat. de Invitrogen F36206, o el Kit de Ensayo de Calcio BD™ PBX – nº de cat. de BD 640175) en Disolución de Sal Tamponada de Hank (HBSS) con CaCl2 suplementario hasta 10 mM. Las placas se incubaron a 37ºC, y después se equilibraron a temperatura ambiente. El antagonismo de entrada de calcio inducida por agonistas se mide usando un lector de placas de formación de imágenes fluorescentes. El ensayo comprende dos etapas: una fase de pre-tratamiento, seguida de una fase de tratamiento. Los compuestos se pueden ensayar como sigue: para la fase de pre-tratamiento, se añaden 50 l de concentración x3 de compuesto de ensayo en HBSS a células que contienen 100 l de medio de carga de colorante para conseguir una concentración final x1. Para la fase de tratamiento, a un intervalo establecido después del pre-tratamiento, se añaden 50 l de compuesto de ensayo x1 más disolución de agonista x4. La fluorescencia se mide a intervalos de 0,1-3 segundos con una longitud de onda de excitación de 494 nm y una longitud de onda de emisión de 515 nm.

Las respuestas se miden como fluorescencia pico después de adición de agonista de compuesto menos fluorescencia de referencia previa al tratamiento. El porcentaje de inhibición se calcula como sigue: Experimentos electrofisiológicos Fijación de voltaje de células enteras: Se realiza registros de células enteras usando el amplificador de fijación de voltaje Multiclamp700A y el programa de adquisición Clampex (Molecular Devices Corporation). Se obtienen registros de células enteras de células 1321N1 o HEK transfectadas de manera estable o de manera transitoria. Se aplicaron disoluciones durante periodos de 1 a 3 s mediante un sistema de suministro de 8 válvulas de flujo por gravedad, o durante periodos de milisegundos usando el sistema de perfusión Dynaflow de cambio rápido (Cellectricon Inc.). La disolución de la pipeta interna puede incluir cloruro de cesio 140 mM, EGTA 10 mM y Hepes 5 mM a pH 7,2; la disolución externa normal es NaCl 140 mM, KCl 5 mM, CaCl2 1 mM. MgCl2 2 mM, Hepes 25 mM y glucosa 10 mM. Se obtienen curvas de concentración frente a respuesta registrando corrientes como respuesta a aplicaciones breves de agonista a intervalos de 1-3 min cuando se perfusiona disolución externa normal durante los intervalos. Para obtener curvas de inhibición, los antagonistas se aplican previamente a las células durante un periodo de tiempo definido antes de una corta aplicación del agonista + antagonista. Los periodos de aplicación previa de antagonista y aplicaciones de agonista + antagonista son constantes para todas las series de concentración de ensayo. Las corrientes provocadas por el agonista se miden en células que están fijadas al voltaje a -60 o -80 milivoltios.

Preparación de oocitos: Se obtuvieron ovarios de Xenopus extirpados quirúrgicamente de NASCO. Los oocitos se aíslan por disociación enzimática usando colagenasa (Worthington, 2 mg/ml). Se inyectan después individualmente oocitos con ARN de P2X3, de P2X2, o de una combinación de P2X2 y P2X3. Cada oocito recibe ~ 64 nl de disolución de ARN en agua a una concentración de ~0,01 g/l. Los oocitos inyectados se almacenan en disolución de incubación de oocitos estándar, ND96, que contiene (en mM) 96 NaCl, 2 KCl, 1 MgCl2, 1-5 CaCl2 y 50 g/ml de gentamicina a 16 ºC. Se observa corriente inducida por agonista causada por abertura de el canal de P2X en oocitos de 1-5 días después de la inyección.

Registro de fijación de voltaje de dos electrodos: Se colocan ocho oocitos en las cámaras de registro. Cada oocito se ensarta mediante 2 electrodos de vidrio con resistencias de 0,5 a 1 MOhm cuando se llenan con una disolución de KCl 3 M. El avance del electrodo y la inserción de oocitos están controlados por software (OPUSXPRESS 1.1, Molecular devices Corporation). Las disoluciones se preparan en placas de 96 pocillos y se pipetean robóticamente en las cámaras de registro de oocitos mediante una pipeta de 8 canales. El suministro de las disoluciones de ensayo a los oocitos durante el experimento también está controlado por software. Inicialmente se usa un conjunto de placas con pocillos que contienen agonista, para verificar la expresión de P2X. Se prepara un conjunto de placas de 96 pocillos que contienen las disoluiones de ensayo. La inhibición por antagonistas se determina calculando el % de corriente que queda cuando los oocitos se estimulan con agonista en presencia de compuesto de ensayo, comparado con la corriente pico en presencia de agonista solo. La secuencia de aplicación de las disoluciones al oocito es como sigue: se añade primero una concentración específica (por ejemplo, EC50, EC80 o EC90) del agonista para provocar la respuesta máxima. Después del pulso, los oocitos se lavan durante varios minutos con ND96. Se añade después el compuesto de ensayo a una concentración particular, seguido del compuesto a la misma concentración junto con el agonista. En un caso, las concentraciones ensayadas para los compuestos pueden oscilar de 0,3 a 10.000 nM.

Fijación del voltaje de dos electrodos manual: Se ensartaron manualmente oocitos individuales con 2 electrodos, y la corriente provocada por agonistas se midió usando un amplificador de fijación de Oocitos (Warner Instrument Corp.) y el software de adquisición Clampex (Molecular Devices Corporation). Las disoluciones se suministran usando flujo por gravedad, y se aplican como anteriormente. La corriente inducida por el agonista se mide en ausencia y en presencia de antagonista. Los antagonistas se ensayan en una serie de concentraciones para obtener una curva de inhibición.

La medida cuantitativa del bloque de corriente de P2X se realiza calculando el área bajo la curva descrita por la corriente entrante. Los números resultantes para las corrientes inducidas por agonista en presencia de una concentración creciente de compuestos se normalizan a la corriente máxima obtenida. Estos puntos se representan entonces gráficamente en una escala logarítmica y se ajustan mediante una función de Hill. La IC50 se calcula a partir del ajuste de Hill resultante.

Detección sistemática de la selectividad: Los compuestos que inhiben la activación de P2X3 y/o P2X2/3 se ensayarán para buscar la actividad frente a otros receptores P2X para determinar su selectividad para miembros de la familia de P2X específicos. La lista de receptores a ensayar incluye, pero no está restringida a, P2X1, P2X2, P2X4, P2X5, P2X6 y P2X7. Los tipos de ensayo usados para la determinación de la selectividad pueden incluir: 1) entrada de calcio inducida por agonistas en células que expresan de manera heteróloga el receptor pertinente, 2) determinación electrofisiológica de la inhibición de receptores en células de mamífero u oocitos de Xenopus que expresan de manera heteróloga el receptor de interés. Los métodos y el análisis de los datos serán similares a los descritos anteriormente para P2X3 y P2X2/3.

Unión de radioligando: Se realizan experimentos de radioligando para determinar la afinidad de los compuestos de ensayo por receptores homoméricos P2X3 y heteroméricos P2X2/3. Estos estudios también proporcionan conocimientos valiosos en el mecanismo de acción del antagonismo. Las metodologías generales usadas para experimentos de unión de radioligando para receptores P2X3 y P2X2/3 se describen por Jarvis et al., J. Pharmacol. Exp. Ther: 10:407-16, 2004.

De forma breve, se preparan membranas celulares de células que expresan de manera transitoria o de manera estable receptores P2X3 o P2X2/3. Las células se cultivan hasta la confluencia, se lavan, se aíslan, y se almacenan como peletes a -80ºC hasta su uso. Algunos estudiosde unión requieren la adición de Apyrase (Sigma-Aldrich) durante la preparación de membranas para minimizar la desensibilización de receptores durante la preparación de membranas. Las membranas se preparan resuspendiendo el pelete celular en tampón de homogeneización, homogeinizando y centrifugando para obtener un pelete de membranas. Las concentraciones de proteínas totales se determinan usando métodos estándar.

Se realizan estudios de unión por desplazamiento usando procedimientos adaptados de Jarvis et al. En condiciones optimizadas, se realizan experimentos de competición de ligandos usando radioligando ([3H]A-317491, Abbott) u otros compuestos de alta afinidad y una serie de diferentes concentraciones de compuestos de ensayo en tampón de unión. Los estudios de saturación de ligandos se realizan usando una serie de concentraciones de radioligando.

Todas las reacciones de unión se terminan por filtración rápida a través de un filtro de fibra de vidrio. Las membranas se lavan, se incuban en agente de centelleo, y se cuentan en un contador de centelleo. Los valores de IC50 se determinan usando una ecuación de Hill logística de cuatro parámetros.

Registros de nervios aferentes de la vejiga: Para determinar el papel preciso de inhibición de receptores P2X3 y P2X2/3 en la respuesta de la micción, se examinarán los compuestos de ensayo en busca de su capacidad para modular la señalización aferente de la vejiga urinaria. Los compuestos se evaluarán en la preparación de la vejiga urinaria/nervio pélvico descrita por Vlaskovska et al., J. Neuroscience, 21:5670-7, 2001, y Cockayne et al., J. Physiol. 567:621-39, 2005. De forma breve, todo el aparato urinario unido a las vértebras inferiores y los tejidos circundantes se aísla en conjunto y se perfunde en una cámara de registro con disolución de Krebs oxigenada (CO2 al 5% y O2 al 95%). La vejiga se cateteriza a través de la uretra para infusión intravenosa intraluminal. Se inserta un segundo catéter de doble luz en la vejiga para medir la presión intraluminal y drenar la vejiga. Después de que se prepara la vejiga, el nervio pélvico que sale de las vértebras se disecciona y se ensarta con un electrodo de vidrio de succión. La actividad nerviosa se mide usando métodos electrofisiológicos estándar. Después de un periodo de estabilización de 60 min, se realizan distensiones en gradiente repetidas hasta que la respuesta aferente se estabiliza. Esta respuesta aferente estabilizada se usó para comparar la sensibilidad mecánica de aferentes de la vejiga entre diferentes grupos de tratamiento.

Metabolismo de fármacos y farmacocinética Permeabilidad de Caco-2: La permeabilidad de Caco-2 se mide según el método descrito en Yee, Pharm. Res. 14:763-6, 1997. Se cultivan células Caco-2 en soportes de filtro (sistema de inserción de múltiples pocillos Falcon HTS) durante 14 días. El medio de cultivo se elimina de los compartimentos apical y basolateral, y las monocapas se incuban previamente con 0,3 ml de tampón apical precalentado y 1,0 ml de tampón basolateral durante 0,75 horas a 37ºC en un baño de agua agitador a 50 ciclos/min. El tampón apical consiste en disolución de sal equilibrada de Hank, D-glucosa monohidrato 25 mM, tampón biológico MES 20 mM, CaCl2 1,25 mM y MgCl2 0,5 mM (pH 6,5). El tampón basolateral consiste en disolución de sal equilibrada de Hank, D-glucosa monohidrato 25 mM, tampón biológico HEPES 20 mM, CaCl2 1,25 mM y MgCl2 0,5 mM (pH 7,4). Al final de la preincubación, se elimina el medio y se añade disolución de compuesto de ensayo (10 M) en tampón al compartimento apical. Los insertos se mueven a pocillos que contienen tampón basolateral reciente, y se incuban durante 1 h. La concentración de fármaco en el tampón se mide por análisis de LC/MS.

La velocidad de flujo (F, masa/tiempo) se calcula a partir de la pendiente del aspecto acumulado del sustrato en el lado receptor, y el coeficiente de permeabilidad aparente (Papp) se calcula a partir de la siguiente ecuación: Papp (cm/s) = (F * VD) / (SA * MD) en la que SA es la superficie para transporte (0,3 cm2), VD es el volumen donante (0,3 ml), MD es la cantidad total de fármaco en el lado donante a t = 0. Todos los datos representan la media de 2 insertos. La integridad de la monocapa se determina mediante transporte de Amarillo Lucifer.

Unión de dofetilida humana: La pasta celular de células HEK-293 que expresan el producto HERG se puede suspender en un volumen de 10 veces de tampón Tris 50 mM ajustado a pH 7,5 a 25ºC con HCI 2 M que contiene MgCl2 1 mM, KCl 10 mM. Las células se homogeneizan usando un homogeneizador Polytron (a la potencia máxima durante 20 segundos) y se centrifugan a 48.000g durante 20 minutos a 4ºC. El pelete se volvió a suspender, se homogenizó y se centrifugó una vez más de la misma manera. El sobrenadante resultante se desecha, y el pelete final se volvió a suspender (volumen de 10 veces de tampón Tris 50 mM) y se homogeneizó a la potencia máxima durante 20 segundos. El homogenado de membrana se repartió en alícuotas y se almacenó a -80ºC hasta su uso. Se usa una alícuota para la determinación de la concentración de proteínas usando un Kit Rápido de Ensayo de Proteínas y lector de placas ARVO SX (Wallac). Toda la manipulación, disolución madre y equipo se mantienen en hielo todo el tiempo. Para ensayos de saturación, los experimentos se realizan en un volumen total de 200 l. La saturación se determina incubando 20 l de [3H]-dofetilida y 160 l de homogenados de membrana (20-30 g de proteína por pocillo) durante 60 min a temperatura ambiente en ausencia o en presencia de dofetilida 10 M a las concentraciones finales (20 l) para la unión total o no específica, respectivamente. Todas las incubaciones se terminan mediante filtración a vacío rápida sobre papeles de filtro de fibra de vidrio empapados en polieterimida (PEI) usando colector de células Skatron seguido de dos lavados con tampón Tris 50 mM (pH 7,5 a 25ºC). La radioactividad ligada al receptor se cuantificó por recuento de centelleo de líquidos usando un contador Packard LS.

Para el ensayo de competición, los compuestos se diluyen en placas de polipropileno de 96 pocillos como diluciones de 4 puntos en formato semilogarítmico. Todas las diluciones se realizan en DMSO primero y después se transfieren a tampón Tris 50 mM (pH 7,5 a 25ºC) que contiene MgCl2 1 mM, KCl 10 mM de manera que la concentración final de DMSO llegue a ser igual a 1%. Los compuestos se dispensan por triplicado en placas de ensayo (4 l). Los pocillos de unión total y de unión no específica se montan en 6 pocillos como vehículo y dofetilida 10 M a la concentración final, respectivamente. El radioligando se prepara a concentración final 5,6x, y esta disolución se añade a cada pocillo (36 l). El ensayo se inicia por adición de perlas de Ensayo de Proximidad de Centelleo de YSi poli-L-lisina (SPA) (50 l, 1 mg/pocillo) y membranas (110 l, 20 g/pocillo). La incubación se continúa durante 60 min a temperatura ambiente. Las placas se incuban durante 3 horas más a temperatura ambiente para que las perlas sedimenten. La radiactividad ligada al receptor se cuantifica por recuento del contador de placas WALLAC MICROBETA.

Ensayo de HERG: Para el estudio electrofisiológico se usan células HEK 293 que expresan de manera estable el canal de potasio de HERG. La metodología para transinfección estable de este canal en células HEK se puede encontrar en otra parte (Zhou et al., Biophys. J. 74:230-41, 1998). Antes del día de la experimentación, las células se recogen de matraces de cultivo y se colocan sobre cubreobjetos de vidrio en un medio Medio Esencial Mínimo (MEM) estándar con Suero Fetal Bovino al 10% (FCS). Las células cultivadas se almacenan en una incubadora a 37ºC mantenida en una atmósfera de 95% de O2/5% de CO2. Las células entre 15-28 h después de la recogida.

Las corrientes de HERG se estudian usando técnicas de fijación de voltaje estándar en el modo de célula completa. Durante el experimento, las células se perfusionan con una disolución externa estándar de la siguiente composición (mM); NaCl, 130; KCl, 4; CaCI2, 2; MgCl2,1; Glucosa, 10; HEPES, 5; pH 7,4 con NaOH. Se hacen registros de células completas usando un amplificador de fijación de voltaje y pipetas que tienen una resistencia de 1-3 MOhm cuando se llenan con la disolución interna estándar de la siguiente composición (mM); KCl, 130; MgATP, 5; MgCI2, 1,0; HEPES, 10; EGTA 5, pH 7,2 con KOH. Solamente se aceptan aquellas células con resistencias de acceso por debajo de 15 M y resistencias de cierre >1 G para experimentación adicional. Se aplicó compensación de resistencia en serie hasta un máximo de 80%. No se hizo sustracción de fuga. Sin embargo, la resistencia de acceso aceptable dependió del tamaño de las corrientes registradas y del nivel de compensación de resistencia en serie que se puede usar con seguridad. Después de lograr la configuración de células completas y el tiempo suficiente para la diálisis de las células con disolución de pipeta (>5 min), se aplica un protocolo de voltaje estándar a la célula para provocar corrientes de membrana. El protocolo de voltaje es como sigue. Se despolariza la membrana de un potencial de fijación de -80 mV a +40 mV durante 1000 ms. A esto le siguió un gradiente de voltaje descendente (tasa 0,5 mV ms-1) de vuelta al potencial de fijación. El protocolo de voltaje se aplica a una célula de manera continua durante todo el experimento cada 4 segundos (0,25 Hz). Se mide la amplitud de la corriente pico provocada a alrededor de -40 mV durante el gradiente. Una vez que se obtienen respuestas de corriente provocadas estables en la disolución externa, se aplica un vehículo (DMSO al 0,5% en la disolución externa estándar) durante 10-20 min mediante una bomba peristáltica. Siempre que haya cambios mínimos en la amplitud de la respuesta de la corriente provocada en la condición de control del vehículo, se aplica el compuesto de ensayo de cualquiera de 0,3, 1, 3, 10 mM durante un periodo de 10 min. El periodo de 10 min incluye el tiempo que está pasando la disolución que se suministra por el tubo del depósito de disolución a la cámara de registro vía la bomba. El tiempo de exposición de las células a la disolución del compuesto fue mayor que 5 min después de que la concentración de fármaco en la cámara alcanzó perfectamente la concentración que se intenta. Hay un periodo de lavado posterior de unos 10-20 min para evaluar la reversibilidad. Finalmente, las células se exponen a dosis altas de dofetilida (5 mM), un bloqueador de IKr específico, para evaluar la corriente endógena insensible.

Todos los experimentos se realizan a temperatura ambiente (23 ± 1ºC). Las corrientes de membrana provocadas se registran on-line en un ordenador, se filtran a 500-1 KHz (Bessel -3dB) y se toman muestras a 1-2 KHz usando el amplificador de fijación de voltaje y software específico que analiza los datos. La amplitud de la corriente pico, que tiene lugar a alrededor de -40 mV, se mide fuera de línea en el ordenador.

La media aritmética de los diez valores de amplitud se calcula en condiciones de control del vehículo y en presencia de fármaco. El porcentaje de disminución de IN en cada experimento se obtuvo mediante el valor de corriente normalizado usando la siguiente fórmula: IN = (1- ID/IC )x100, en la que ID es el valor de corriente medio en presencia de fármaco, e IC es el valor de corriente medio en condiciones de control. Se realizan experimentos separados para cada concentración de fármaco o control acoplado al tiempo, y la media aritmética en cada experimento se define como el resultado del estudio.

Semivida en microsomas de hígado humano (HLM): Los compuestos de ensayos (1 M) se incuban con MgCl2 3,3 mM y 0,78 mg/ml de HLM (HL101) en tampón de fosfato de potasio 100 mM (pH 7,4) a 37ºC en la placa de 96 pocillos. La mezcla de reacción se divide en dos grupos, un grupo no de P450 y uno de P450. Solamente se añade NADPH a la mezcla de reacción del grupo P450.

Se recoge una alícuota de muestras de grupo de P450 en los instantes de tiempo 0, 10, 30 y 60 min, en el que el instante de tiempo 0 min indica el tiempo cuando NADPH se añade a la mezcla de reacción del grupo de P450. Se recoge una alícuota de muestras del grupo no de P450 en el instante del tiempo -10 y 65 min. Las alícuotas recogidas se extraen con disolución de acetonitrilo que contiene un patrón interno. La proteína precipitada se centrifuga en una centrífuga (2000 rpm, 15 min). La concentración de compuesto en el sobrenadante se mide por el sistema de LC/MS/MS. El valor de la semivida se obtiene representando gráficamente el logaritmo natural de la relación del área de pico de los compuestos/patrón interno frente al tiempo. La pendiente de la recta del mejor ajuste por los puntos proporciona la velocidad de metabolismo (k). Esta se convierte en un valor de la semivida usando la siguiente ecuación: Semivida= In 2 / k.

Ensayos in vivo: Se realizarán diversos ensayos de dolor neuropático, inflamatorio y visceral in vivo en ratas macho Sprague-Dawley que pesan 250-350 g. Los compuestos de ensayo también se pueden evaluar en modelos de función de la vejiga. Los antagonistas de P2X3 se pueden administrar previamente a o post-inducción del modelo de dolor dependiendo del modelo específico y las características PK del compuesto. La vía de administración puede incluir intraperitoneal, (i.p.), subcutánea (s.c.) oral (p.o.), intravenosa (i.v.), intratecal (i.t.) o intraplantar. Los puntos finales para estos estudios pueden incluir alodinia mecánica, hiperalgesia térmica, alodinia al frío, respuestas disminuidas al dolor inducidas por formalina, retorcimiento disminuido y contracciones o sensación mecánica de vejiga alterada cuando sea apropiado para el modelo como se describió anteriormente.

Modelos de dolor neuropático Modelo de lesión por constricción crónica (modelo CCI o Bennett): El modelo CCI se realiza según el método descrito por Bennett y Xie, Pain, 33:87-107, 1988. De forma breve, con anestesia de isoflurano, el nervio ciático derecho se expone a nivel del muslo medio vía disección roma por el bíceps crural. Próximo a la bifurcación del nervio ciático, se eliminan aproximadamente 7 mm de nervio de tejido adherente, y se atan 4 ligaduras sueltas de chromic gut 4.0 alrededor del nervio. El espaciamiento entre ligaduras es aproximadamente 1 mm. La herida se cierra en capas, y la piel se cierra con grapas o suturas no de seda. Los animales operados falsamente son tratados de manera idéntica con la excepción de que no se ligará el nervio ciático. El ensayo de alodinia mecánica, alodinia al frío, o hiperalgesia térmica se produce 7-21 días desupés de la cirugía.

Transección del nervio espinal (modelo de SNT o de Chung): El modelo de SNT se llevará a cabo según el método descrito por Kim y Chung, Pain, 50:355-363, 1992. Bajo anestesia de isoflurano, se realiza una incisión longitudinal a los niveles lumbar inferior y sacral, exponiendo los músculos paraespinales en el lado izquierdo. La localización de la incisión se determina mediante la posición del proceso espinoso L5. Los músculos paravertebrales se aíslan y se retiran del nivel del proceso espinoso L4 hasta el sacro. Esto abre el espacio ventrolateral a los procesos articulares, dorsal al proceso transverso L6, y medial al íleo. Los tejidos conjuntivos y músculos que quedan son eliminados. Bajo un microscopio de disección, se elimina el proceso transverso L6, que cubre el nervio raquídeo L5. Debido a su estrecha proximidad, puede ser necesario separar los nervios raquídeos L4 y L5 para exponer completamente el nervio raquídeo L5 para la ligación usando una precaución adicional para no dañar el nervio L4 durante este proceso. Los animales que muestran daño del nervio L4, evidenciado por la caída de la pata tras la anestesia, no se incluyen en los estudios. Una vez que se expone el nervio raquídeo L5, el nervio se liga con seda 6-0. Como alternativa, el nervio raquídeo se corta distalmente al sitio de ligación. Si es necesaria una neuropatía más completa, entonces el nervio raquídeo L6 también se puede ligar usando el procedimiento descrito anteriormente. Los animales operados de forma falsamente se tratan de forma idéntica, con la excepción de que los nervios no se ligarán/cortarán transversalmente. Tras la ligación del nervio raquídeo, se confirma la hemostasia, los músculos se suturan en capas, y la piel se cierra con grapas o suturas no de seda. El ensayo de alodinia mecánica, alodinia fría, o hiperalgesia térmica se produce 7-21 días después de la cirugía.

Neuropatía dolorosa inducida por quimioterapia: La neuropatía por quimioterapia es inducida por administración i.p. de 1 mg/kg de Taxol administrado una vez/día en 4 días alternos (dosis total = 4 mg/kg) (Polomano et al., Pain, 94:293-304, 2001). El ensayo de alodinia mecánica, alodinia al frío, o hiperalgesia térmica se produce 9-30 días después del primer día 1 de administración de Taxol.

Modelos de dolor inflamatorio Modelo de la formalina: Los compuestos de ensayo se administran en diversos tiempos previamente a la administración intraplantar de formalina. Se administra s.c. una disolución diluida de formalina (50 l de 2,5% de formaldehído/disolución salina) a la superficie plantar de la parte posterior izquierda con ligera restricción. Inmediatamente después de la inyección, los animales se colocan en un puesto de malla dentro de una cámara de observación transparente, suficientemente grande para permitir el movimiento libre de los animales durante el estudio. Los comportamientos se puntúan usando puntuación manual o puntuación automatizada.

Puntuación manual: Usando un cronómetro de tres canales, el observador registra el tiempo (t en segundos) de soporte de peso disminuido (t1), elevación de pata (t2) y lamida/mordida/sacudida (t3). Los resultados se ponderan según el método de Dubuisson y Dennis, Pain 4:161-174, 1977, usando la fórmula t1+2t2+3t3/180, en la que 180 s es el tiempo de evaluación para cada incremento. Los comportamientos se adquieren en incrementos de 3 min alternos empezando en el tiempo = 0 min (es decir, 0-3 min, 6-9 min etc.) y terminando a 60 min.

Puntuación automatizada: Se coloca en la pata izquierda una banda de metal pequeña que pesa 0,5 g. Se administra formalina y el animal se coloca sin restricciones en una cámara de observación sobre un sistema detector electromagnético (Automated Nociception Analyzer, Universidad de California, San Diego). El número de encogimientos de dolor de la pata se registra de manera electrónica.

Modelo de Adyuvante Completo de Freund (CFA): Los animales reciben una inyección s.c. 100 l de adyuvante completo de Freund que contiene 100 g de cepa H37Ra de Mycobacterium tuberculosis en la superficie plantar de la pata posterior derecha bajo anestesia de isoflurano. La hinchazón e inflamación son visibles en 1 h después de la administración. El ensayo de alodinia mecánica o hiperalgesia térmica comienza 24 h tras la administración de CFA.

Carragenano: Los animales reciben una inyección subcutánea de 100 l de carragenano al 2% o disolución slaina (controles) en la superficie plantar de la pata posterior derecha bajo anestesia de isoflurano. La hinchazón e inflamación son visibles en 1 h después de la administración. El ensayo de alodinia mecánica o hiperalgesia térmica comienza 3-24 h tras la administración de carragenano (Hargreaves et al., Pain, 32: 77-88, 1.988).

Dolor inflamatorio inducido por ATP y por -metileno ATP ( meATP): Se administra a las ratas hasta 1 nmoles de meATP, ATP, adenosina o PBS en un volumen de hasta 100 l de manera subcutánea en la superficie plantar de la pata posterior izquierda. Inmediatamente después de la inyección, los animales se colocan en un puesto de malla en una cámara de observación transparente, suficientemente grande para permitir el movimiento libre de los animales. La duración del encogimiento por dolor y de la lamida se registra durante un intervalo de 4 minutos para evaluar el comportamiento nocifensivo. Tras el cribado nocifensivo, el ensayo de comportamiento, que incluye medidas de alodinia mecánica e hiperalgesia térmica, se adquiere durante hasta 6 h tras la administración.

Modelos de dolor visceral Distensión colo-rectal (CRD): Previamente a la inducción del modelo, los animales son privados de alimento pero se les permite acceso a agua a voluntad durante 16 h previas a la inducción del modelo. Se une un balón de látex de 5 cm a un sistema de barostat compuesto por un medidor de flujo y un programa de control de la presión mediante una longitud del tubo. Bajo anestesia de isoflurano, el balón se inserta en el colon distal vía el ano a una distancia de 5 cm del ano y se pega a la base de la cola. Tras la anestesia, el animal se coloca sin restricción en una jaula de polipropileno limpia, y se deja que se aclimate durante 30 min. El balón se infla progresivamente de 0-75 mm de Hg en incrementos de 5 mm cada segundos. El umbral de reacción colónica se define como la presión que induce la primera contracción abdominal. La contracción abdominal indicativa de dolor visceral está relacionada con encorbamiento, posición gibada, lamida del abdomen inferior, ondas de contracción repetidas de la musculatura oblicua ipsilateral con virajes hacia dentro de la pata trasera ipsilateral, estiramiento, aplastamiento del abdomen inferior contra el suelo (Wesselman, Neurosci. Lett., 246:73-76, 1998).

Ensayo de retorcimiento de ácido acético: Se administra i.p. una disolución al 0,6% de ácido acético (10 ml/kg) a ratas y se cuenta el número de constricciones abdominales en 30 min.

Ensayo de comportamiento Ensayo mecánico: El ensayo de alodinia mecánica se llevó a cabo usando el método de arriba-abajo de Dixon, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 20:441-462, 1980, modificado para umbrales mecánicos por Chaplan et al., J. Neurosci. Methods 53:55-63, 1994. El ensayo se llevó a cabo durante la porción de día del ciclo circadiano (7:00-19:00). Los animales se colocan en recintos de plástico separados con un fondo de malla que permitió el acceso total a las patas. Para todos los ensayos, los animales se aclimataron al aparato durante al menos 15 min. antes del ensayo, o hasta que la exploración de la jaula y las actividades de preparación principales cesaron. El área ensayada será la pata trasera plantar media. La pata se toca con 1 de una serie de 8 cerdas de von Frey (Stoelting, Wood Dale, IL) con rigidez logarítmicamente creciente (0,4, 0,6, 1,4, 2, 4, 6, 8, y 15 g). Cada cerda de von Frey se presenta perpendicular a la superficie plantar con fuerza suficiente para provocar un ligero alabeo contra la pata, y se mantuvo durante aproximadamente 6-8 s. La estimulación se presenta a intervalos de varios segundos, permitiendo la resolución aparente de cualquier respuesta de comportamiento a estímulos previos. Se anotará una respuesta positiva si la pata se retira repentinamente. El encogimiento de dolor inmediatamente después de eliminar la cerda también será considerado como una respuesta positiva. La deambulación será considerada una respuesta ambigua y, en tales casos, se repetirá el estímulo.

ES 2 552 804 T3   Para determinar el umbral de retirada del 50%, el ensayo se iniciará con la fibra de 2 g (la fibra central en la serie). Las fibras se presentarán de una manera consecutiva, ya sea ascendente o descendentemente. En ausencia de una respuesta de retirada de la pata a la fibra seleccionada inicialmente, se presentará la siguiente fibra más elevada. En el caso de una retirada de la pata, se presentará la siguiente fibra más débil. El cálculo del umbral óptimo mediante este método requiere 6 respuestas en la vecindad inmediata del umbral de retirada del 50%. El recuento de los 6 puntos de datos críticos no comenzará hasta que el umbral de respuesta se cruce por primera vez, en cuyo momento las dos respuestas que abarquen el umbral se designarán como las 2 primeras respuestas de la serie de 6. Cuatro respuestas adicionales a la presentación continuada de las fibras constituyen las 4 respuestas restantes.

En los casos en los que se observan respuestas positivas o negativas continuas hasta completar el conjunto de fibras, se asignarán valores de 15 g y 0,25 g, respectivamente.

El intervalo de fibras ensayado en este paradigma no ha demostrado que provoque daño tisular, aunque la estimulación prolongada a lo largo de intervalos de tiempo cortos puede dar como resultado sensibilización y/o habituación, escenarios que podrían conducir a umbrales menores o mayores, respectivamente. Por lo tanto, hay un intervalo mínimo de 1 h entre las sesiones de ensayo, con no más de 4 sesiones de ensayo por día. Para los intervalos de ensayo, los animales se devolvieron a sus jaulas después de todas las sesiones de ensayo. Las sesiones de ensayo no durarán más de 1 h. No se producirán dos sesiones de ensayo en horas consecutivas. Par minimizar el sufrimiento, el ensayo de alodinia mecánica no se realiza más de 4 veces por día.

Ensayo térmico: Para medir la hiperalgesia térmica por calor, se proporcionará una fuente de calor radiante de Ugo Basile (intensidad de I.R. de 40) mediante una bombilla enfocada sobre la superficie plantar de la pata (Hargreaves et al., Pain 32:77- 88, 1988). Las latencias de retirada de la pata se definen como el tiempo que tarda el animal para retirar su pata de la fuente de calor. Para asegurarse de que no se produce daño tisular, todos los ensayos tendrán un corte de 20 s, incluso cuando el animal no retira su pata de la estimulación térmica. El ensayo consiste en 3 medidas de la misma pata, con intervalos mínimos de 5 minutos entre cada determinación. Para minimizar el sufrimiento, el ensayo térmico no se realiza más de 3 veces por día.

Ensayo de frío: Para medir la alodinia al frío, se aplica una gota de acetona a la superficie plantar de la pata a través de la cara inferior del enrejado sobre el que los animales están de pie, usando una jeringuilla de Hamilton de 50 l. El procedimiento se lleva a cabo 5 veces, con un intervalo de 3 min. entre cada vez. La agitación vigorosa se registrará como una respuesta positiva. El ensayo de la gota de acetona se realiza no más de 5 veces a lo largo del estudio (incluyendo el estudio de valor inicial previo a la cirugía), y no más de una vez por día (Kotinen et al., Pain 80:341- 346, 1999).

Ensayo de la función urinaria Cistometría de vejiga: Los animales se anestesiaron, y se realizó una cistometría cerrada transuretral como se describió previamente (Dmitrieva et al., Neuroscience 78:449-59, 1997; Cockayne et al., Nature 407:1011-5, 2000). La vejiga se cateteriza canulada transuretralmente con un catéter de polipropileno PE-10. Cada cistometrograma consiste en llenar lentamente la vejiga con disolución salina normal vía el catéter transuretral, y registrar después la presión asociada con el llenado vía un transductor de presión. Las contracciones mayores que un valor umbral predeterminado se interpretan como contracciones de micción. Para cada cistometrograma, se registra el volumen al que se produjeron las contracciones activas (umbral de micción) y el número de contracciones por cistometrograma.

Medidas de dolor neuropático usando el modelo de Chung Bajo anestesia con pentobarbital (60 mg/kg, i.p.), las ratas se colocan en posición prona sobre una superficie plana estéril. Se realiza una incisión central de L4-S2, y los músculos paravertebrales izquierdos se separan de los procesos espinosos. Los nervios raquídeos L5 y L6 se ligan fuertemente con una sutura de seda tratada con silicona 4-0, según el método descrito por Kim y Chung, Pain, 50:355-363, 1992. Se evita con cuidado de que el nervio raquídeo L4 sea lesionado quirúrgicamente. La piel se cierra con grapas para heridas, y los animales se devuelven a sus jaulas. Los animales que muestran déficits neurológicos postoperatorios prolongados o mal aseo son excluidos de los experimentos. Los animales se evalúan para determinar la respuesta a estímulos mecánicos dañinos determinando el umbral de retirada de la pata (PWT), como se describe más abajo, antes de la cirugía (valor inicial), después inmediatamente antes de y en diversos puntos de tiempo después de administrarles un compuesto heterocíclico condensado de esta invención (30 mg/kg) en la pata trasera izquierda del animal. Además, otros animales se pueden evaluar para determinar la hiperalgesia térmica o mecánica, como se describe más abajo.

Evaluación de la alodinia táctil: Para evaluar la alodinia táctil, las ratas se colocan en compartimentos de plexiglás transparentes con un suelo de malla de alambre, y se deja que se habitúen durante un período de al menos 15 minutos. Después de la habituación, se presenta una serie de monofilamentos de von Frey a la superficie plantar de

ES 2 552 804 T3   la pata izquierda (operada) de cada rata. La serie de monofilamentos de von Frey consiste en seis monofilamentos de diámetro creciente, presentándose primero la fibra de diámetro más pequeño. Se realizan cinco ensayos con cada filamento, separándose cada ensayo aproximadamente 2 minutos. Cada presentación dura un período de 4-8 segundos, o hasta que se observa un comportamiento de retirada nocirreceptivo. El encogimiento por dolor, la retirada de la pata o la lamida de la pata son considerados respuestas de comportamiento nocirreceptivas.

Respuesta a estímulos térmicos como una evaluación de la hiperalgesia térmica: El ensayo plantar se puede usar para evaluar la hiperalgesia térmica. Para este ensayo, las latencias de retirada de la pata posterior a un estímulo térmico dañino se determinan usando un aparato de ensayo plantar (comercialmente disponible de Ugo Basile de Italia), siguiendo la técnica descrita por Hargreaves et al., Pain 32: 77-88, 1988. El tiempo de exposición máximo se fija en 32 segundos para evitar daño tisular, y cualquier retirada de la pata dirigida desde la fuente térmica se toma como punto final. Se determinan tres latencias en cada punto de tiempo y se promedian. Solo se ensaya la pata afectada (ipsilateral). Un incremento de la latencia de retirada de la pata demuestra inversión de hiperalgesia.

Respuesta a estímulos mecánicos como una evaluación de hiperalgesia mecánica: El ensayo de presión de la pata se puede usar para evaluar la hiperalgesia mecánica. Para este ensayo, los umbrales de retirada de la pata posterior (PWT) a un estímulo mecánico dañino se determinan usando un analgesímetro (Modelo 7200, comercialmente disponible de Ugo Basile de Italia), como se describe en Stein et al., Pharmacol. Biochem. Behav. 31:451-455, 1988. El peso máximo que se puede aplicar a la pata posterior se fija en 250 g, y el punto final se toma como retirada total de la pata. PWT se determina una vez para cada rata en cada punto de tiempo, y solamente se ensaya la pata afectada (ipsilateral).

Actividad de los compuestos de la invención Se llevó a cabo un ensayo de absorción de calcio como se describe en los párrafos [00318] a [00317] anteriormente. En la Tabla 4 más abajo se dan los datos de % de inhibición para los compuestos representativos. En la Tabla 4, la actividad de cada compuesto se expresa como sigue: + el compuesto mostró inhibición de 0-25% a 3 M ++ el compuesto mostró inhibición de 25-50% a 3 M +++ el compuesto mostró inhibición de 50-75% a 3 M ++++ el compuesto mostró una inhibición de 75% o mayor a 3 M * el compuesto mostró inhibición de 0-25% a 10 M ** el compuesto mostró inhibición de 25-50% a 10 M *** el compuesto mostró inhibición de 25-50% a 10 M **** el compuesto mostró inhibición de 25-50% a 10 M Tabla 4 ID MW (calc.) MW (obs.) % de inhibición de entrada de calcio en P2X2/3C a 3M/10M 1 403.82 403.40 2 337.81 339.20 +/ 3 355.80 356.00 4 406.80 407.80 /* 450.44 450.90 6 469.87 470.20 +/ 7 513.52 515.30 8 374.44 374.70 9 370.38 370.60 384.40 385.70 /* 11 384.40 384.60

ES 2 552 804 T3   12 384.40 385.90 /* 13 420.90 421.40 /* 14 448.96 449.20 406.92 407.40 /* 16 420.95 421.50 +/ 17 394.91 394.80 /* 18 381.52 382.3 /* 19 385.39 385.40 433.86 433.60 21 323.44 324.30 22 391.44 391.80 23 365.87 366.10 24 345.45 345.80 /**** 365.87 366.20 ++++/ 26 337.47 338.40 /**** 27 361.45 362.36 /**** 28 361.45 362.35 ++++/**** 29 427.59 428.00 365.87 366.19 ++++/ 31 375.47 375.70 32 379.89 380.30 ++++/**** 33 389.54 390.40 34 405.81 406.00 375.47 376.36 ++++/ 36 345.45 346.24 +/ 37 375.43 376.26 ++++/ 38 399.42 400.17 +++/ 39 399.42 400.18 +++/ 415.42 416.31 +++/ 41 415.42 416.31 42 415.42 416.31 ++++/ 43 357.46 358.26 44 387.53 388.40 +/ 345.45 346.22 ++++/ 46 375.47 376.36 ++++/ 47 405.50 406.36 +++/

ES 2 552 804 T3   48 379.89 380.30 ++++/ 49 359.47 360.29 ++++/ 399.42 400.17 ++++/ 51 405.50 406.35 +++/ 52 397.43 398.22 ++++/ 53 361.45 362.33 ++++/ 54 414.34 414.17 +++/ 365.87 366.20 ++++/ 56 345.45 346.20 ++++/ 57 349.41 350.32 ++++/ 58 373.50 374.22 +/ 59 405.50 406.35 ++/**** 391.49 61 413.44 414.22 ++++/**** 62 379.89 380.30 +/ 63 375.47 376.35 +/ 64 375.47 376.34 +/ 373.50 374.22 +/ 66 379.89 380.30 +/ 67 363.44 364.32 +/*** 68 375.47 376.35 +/ 69 413.44 414.22 +/ 359.47 360.29 ++/ 71 367.40 368.1 +++/ 72 367.40 73 367.40 367.00 ++++/ 74 417.41 417.90 +/ 75 417.41 418.4 +/ 76 417.41 417.00 +/ 77 367.40 368.0 ++++/ 78 400.31 400.00 +/ 79 359.47 360.4 ++/ 80 359.47 360.4 +/ 81 359.47 82 397.43 83 383.86 384.0 +++/

ES 2 552 804 T3   84 391.47 391.00 85 400.31 399.00 +/ 86 363.44 363.00 ++++/ 87 391.47 392.2 +/ 88 391.47 391.00 89 433.86 435.00 +/* 90 332.41 333.9 91 332.41 332.00 92 345.45 345.00 93 349.41 349.00 94 359.47 359.00 95 359.47 359.00 96 359.47 359.00 97 359.47 359.00 98 363.44 363.00 ++++/ 99 363.44 364.00 100 367.40 367.00 101 367.40 367.00 102 379.89 380.00 103 379.89 379.00 104 379.89 379.00 105 379.89 379.00 106 381.43 381.00 107 382.47 382.00 108 383.86 384.00 109 383.86 384.00 110 383.86 384.00 111 383.86 383.00 +++/ 112 383.86 384.00 113 391.47 391.00 114 391.47 391.00 115 400.31 400.00 +/ 116 400.31 400.00 117 413.44 414.00 118 417.41 417.00 119 417.41 417.00

ES 2 552 804 T3   120 417.41 417.00 121 417.41 417.00 ++++/ 122 417.41 417.00 123 423.54 424.00 124 423.52 423.00 125 467.42 466.00 +/ 126 363.44 363.00 127 433.86 433.80 128 379.89 381.8 129 379.89 381.1 Al menos algunos de los nombres químicos de los compuestos de la invención como se dan y se exponen en esta solicitud se pueden haber generado de forma automatizada mediante uso de un programa de software de nomenclatura química comercialmente disponible, y no se han verificado de forma independiente. Los programas representativos que llevan a cabo esta función incluyen la herramienta de nomenclatura Lexichem vendida por Open Eye Software, Inc. y la herramienta Autonom Software vendida por MDL, Inc.

A partir de la descripción anterior, a los expertos en la técnica se les ocurrirán diversas modificaciones y cambios en las composiciones y métodos de esta invención. Todas las mencionadas modificaciones que surgen del alcance de las reivindicaciones anejas pretenden estar incluidas allí.

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REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que tiene la fórmula 1: en la que A y B se seleccionan independientemente de CR2'R2', CO, y CS; Y es CR2'R2'; W es N; Z se selecciona de O y NR2; L es alquileno de C1-C9 o heteroalquileno de C1-C9; R1 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R2 se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8; cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo y aralquilo; R3 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R4' es H; y en la que L, R1, R2, R2' y R3 pueden estar sustituidos o no sustituidos; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica del mismo.

2. Un compuesto que tiene la fórmula 1: en la que A y B se seleccionan independientemente de CR2'R2', CO, y CS; Y es CR2'R2'; W es N; Z se selecciona de O y NR2; L es un enlace; R1 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R2 se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8; cada R2' se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo y aralquilo;

ES 2 552 804 T3   R3 es un grupo carbocíclico o un grupo heterocíclico; R4' es H; y en la que R1, R2, R2' y R3 pueden estar sustituidos o no sustituidos; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica del mismo.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que L es alquileno de C1-C9 ramificado, alquileno de C1-C9 sustituido, heteroalquileno de C1-C9 ramificado o heteroalquileno de C1-C9 sustituido; o en el que L es alquileno de C1-C9 no sustituido o heteroalquileno de C1-C9 no sustituido.

4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Z es NH.

5. Un compuesto según la reivindicación 1, que tiene la fórmula 2: en la que W, Z, L, R1, R3 y R4' son como se definen en la reivindicación 1.

6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el que Z es NH; y R3 se selecciona de un anillo arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, cicloalquenilo, cicloheteroalquenilo, bicicloalquilo, bicicloheteroalquilo, bicicloalquenilo, bicicloheteroalquenilo, bicicloarilo, y bicicloheteroarilo.

7. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que L se selecciona de -CH2-, -CHMe-, -CMe2-, -(CH2)2-, -CMe2- CH2-, -(CH2)3-, -(CH2)4-, -CH(CH3)CH2-, -(CH2)2SCH2-, -(CH2)2-SO2CH2-, -CH(CH2CH3)CH2OCH2-, -CH2CHF-, - CH2CF2-, -CH2CH(OH)- y -CH2CO-; o en el que L se selecciona de -CH2-, -CHMe-, -CMe2-, -(CH2)2-, -CMe2-CH2-, - (CH2)3-.

8. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que R1 es arilo, heteroarilo, bicicloarilo, bicicloalquilo, o bicicloheteroarilo; en el que R1 es cicloalquilo sustituido o no sustituido; en el que R1 se selecciona de quinolina, isoquinolina, metilendioxifenilo, e indol sustituidos o no sustituidos; o en el que R1 es o en los que el subíndice n’ se selecciona de 1-5, y cada R5 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, acilamino sustituido o no sustituido, alquilamino sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alcoxi sustituido o no sustituido, ariloxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo sustituido, alquilarilamino sustituido o no sustituido, arilalquiloxi, arilalquiloxi sustituido, amino, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, sulfóxido sustituido o no sustituido, sulfona sustituida o no sustituida, sulfanilo sustituido o no sustituido, aminosulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, ácido sulfúrico, éster del ácido sulfúrico, dihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, aminodihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, azido, carbamoílo sustituido o no sustituido, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, dialquilamino sustituido o no sustituido, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, hidroxi, nitro, y tio.

9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el que el subíndice n’ es 1, 2 o 3.

ES 2 552 804 T3   10. Un compuesto según la reivindicación 8, en el que cada R5 se selecciona independientemente de Me, Et, Pr, iso- Pr, Ph, Cl, F, Br, CN, OH, OMe, OEt, OPh, COPh, CO2Me, CH2-N-morfolino, CH2-N-(4-Me-piperidino), CONH2, CF3, CHF2, OCF3, OCHF2, t-Bu, SMe, CH=CH-CO2H, SOMe, SO2Me, SO2CF3, SO2NH2, SO3H, SO3Me, y piridilo.

11. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que R3 es o en los que el subíndice n’ se selecciona de 1-5, y cada R5 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, acilo sustituido o no sustituido, acilamino sustituido o no sustituido, alquilamino sustituido o no sustituido, alquiltio sustituido o no sustituido, alcoxi sustituido o no sustituido, ariloxi, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilo sustituido, alquilarilamino sustituido o no sustituido, arilalquiloxi, arilalquiloxi sustituido, amino, arilo, arilo sustituido, arilalquilo, sulfóxido sustituido o no sustituido, sulfona sustituida o no sustituida, sulfanilo sustituido o no sustituido, aminosulfonilo sustituido o no sustituido, arilsulfonilo sustituido o no sustituido, ácido sulfúrico, éster del ácido sulfúrico, dihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, aminodihidroxifosforilo sustituido o no sustituido, azido, carbamoílo sustituido o no sustituido, carboxilo, ciano, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, dialquilamino sustituido o no sustituido, halo, heteroariloxi, heteroarilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, hidroxi, nitro, y tio, o en el que R3 es o 12. Un compuesto según la reivindicación 11, en el que el subíndice n' es 1, 2 o 3.

13. Un compuesto según la reivindicación 11, en el que cada R5 se selecciona independientemente de Me, Et, Pr, iso-Pr, Ph, Cl, F, CN, OH, OMe, OEt, OPh, CF3, CHF2, OCF3, OCHF2, t-Bu, SO2Me, SO2CF3, y SO3Me.

14. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que R3 es o en el que R3 es 15. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en: (2,3-Difluoro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (4-Fluoro-3-metil-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; y (2-Fluoro-4-trifluorometil-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica del mismo; o seleccionado del grupo que consiste en: (2-Metil-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (4-Cloro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; Ciclohexilmetil-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina;

ES 2 552 804 T3   (2-Metoxi-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (3-Metoxi-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (2-Cloro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [2-(2-Cloro-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [2-(4-Metoxi-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; Benzo[1,3]dioxol-5-ilmetil-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(2-trifluorometoxi-bencil)-amina; [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-fenetil-amina; [2-(3-Metoxi-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [2-(4-Cloro-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(2-p-tolil-etil)-amina; [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-(4-trifluorometil-bencil)-amina; (2-Difluorometoxi-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (4-Metoxi-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (3-Cloro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (4-Metil-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; (3-Fluoro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; [6-(5-Metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-[2-(3-trifluorometil-fenil)-etil]-amina; (3,4-Difluoro-bencil)-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; y [1-(4-Fluoro-fenil)-etil]-[6-(5-metil-piridin-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-4-il]-amina; o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, estereoisómero, tautómero o variante isotópica de los mismos.

16. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15.

17. La composición farmacéutica según la reivindicación 16, en la que el portador es un portador parenteral, un portador oral, o un portador tópico.

18. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para uso como un fármaco.

19. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para uso como un fármaco en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada de: dolor, incluyendo dolor agudo, inflamatorio y neuropático, dolor visceral, dolor crónico, dolor dental y cefalea, incluyendo migraña, cefalea en brotes y cefalea por tensión, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y esclerosis múltiple; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado neuroinflamación, encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiátricos mediados centralmente, depresión maníaca, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentación, trastornos del sueño y trastornos cognitivos; enfermedades y trastornos neurológicos y neurodegenerativos; epilepsia y trastornos de ataque; disfunción de la próstata, la vejiga y el intestino, incontinencia urinaria, vacilación urinaria, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostática benigna y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad y trastornos respiratorios y de las vías respiratorias, rinitis alérgica, asma, y enfermedad reactiva de las vías respiratorias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, artritis, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios, escozor / prurito, psoriasis; obesidad; trastornos lipídicos; cáncer; y trastornos renales.

20. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es enfermedad de Parkinson o enfermedad de Alzheimer.

21. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es dolor.

ES 2 552 804 T3   22. El compuesto para uso de la reivindicación 21, en el que el dolor está asociado con una afección seleccionada del grupo que consiste en síndrome de dolor post-mastectomía, dolor del muñón, dolor del miembro fantasma, dolor neuropático oral, dolor de Charcot, dolor de muelas, mordedura de serpiente venenosa, mordedura de araña, picadura de insecto, neuralgia post-herpética, neuropatía diabética, distrofia simpático refleja, neuralgia trigeminal, osteoartritis, artritis reumatoide, fibromialgia, síndrome de Guillain Barre, meralgia parestésica, estomatodinia, neuropatía periférica bilateral, causalgia, ciática, neuritis periférica, polineuritis, neuritis segmentaria, neuritis de Gombault, neuronitis, neuralgia cervicobraquial, neuralgia craneal, neuralgia geniculada, neuralgia glosofaríngea, neuralgia migrañosa, neuralgia idiopática, neuralgia intercostal, neuralgia mamaria, neuralgia de la articulación mandibular, neuralgia de Morton, neuralgia nasociliar, neuralgia occipital, eritromelalgia, neuralgia de Sluder, neuralgia esfenopalatina, neuralgia del supraorbitario, neuralgia vidiana, cefalea sinusal, cefalea por tensión, parto, alumbramiento, gas intestinal, menstruación, cáncer, y trauma.

23. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es dolor neuropático.

24. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que el dolor visceral está asociado a enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, pancreatitis, y diversos trastornos ginecológicos y urológicos.

25. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es una enfermedad autoinmunitaria.

26. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es una enfermedad o afección inflamatoria.

27. El compuesto para uso de la reivindicación 19, en el que la enfermedad o afección es una enfermedad o afección neurológia o neurodegenerativa.

28. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, para uso para tatar un mamífero que sufre al menos un síntoma seleccionado del grupo que consiste en síntomas de exposición a capsaicina, síntomas de quemaduras o irritación debidos a exposición a calor, síntomas de quemaduras o irritación debidos a exposición a luz, síntomas de quemaduras, broncoconstricción o irritación debidos a exposición a gas lacrimógeno, y síntomas de quemaduras o irritación debidos a exposición a ácido.

29. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada de: dolor, incluyendo dolor agudo, inflamatorio y neuropático, dolor visceral, dolor crónico, dolor dental y cefalea, incluyendo migraña, cefalea en brotes y cefalea por tensión, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y esclerosis múltiple; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado neuroinflamación, encefalitis; enfermedades y trastornos neuropsiquiátricos mediados centralmente, depresión maníaca, enfermedad bipolar, ansiedad, esquizofrenia, trastornos de la alimentación, trastornos del sueño y trastornos cognitivos; enfermedades y trastornos neurológicos y neurodegenerativos; epilepsia y trastornos de ataque; disfunción de la próstata, la vejiga y el intestino, incontinencia urinaria, vacilación urinaria, hipersensibilidad rectal, incontinencia fecal, hipertrofia prostática benigna y enfermedad inflamatoria del intestino; enfermedad y trastornos respiratorios y de las vías respiratorias, rinitis alérgica, asma, y enfermedad reactiva de las vías respiratorias y enfermedad pulmonar obstructiva crónica; enfermedades y trastornos que están mediados por o dan como resultado inflamación, artritis, artritis reumatoide y osteoartritis, infarto de miocardio, diversas enfermedades y trastornos autoinmunitarios, escozor / prurito, psoriasis; obesidad; trastornos lipídicos; cáncer; y trastornos renales.

30. Uso según la reivindicación 29, en el que el dolor visceral está asociado a enfermedad de reflujo gastroesofágico, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, pancreatitis, y diversos trastornos ginecológicos y urológicos.

ES 2 552 804 T3   Figura 1