GEN NPHS2 IMPLICADO EN EL SINDROME NEFROTICO CORTICORRESISTENTE.
Ácido nucleico aislado, cuya secuencia se selecciona de la SEC ID nº 3 a la SEC ID nº 10,
que representa un fragmento del ADN genómico del gen humano designado NPHS2
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR01/00188.
Solicitante: INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE (INSERM).
Nacionalidad solicitante: Francia.
Dirección: 101, RUE DE TOLBIAC,75013 PARIS.
Inventor/es: ANTIGNAC,CORINNE, BOUTE,NICOLAS.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 28 de Abril de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/705 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
Clasificación PCT:
- A61K31/70 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Hidratos de carbono; Azúcares; Sus derivados (sorbitol A61K 31/047).
- A61K38/17 A61K […] › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que provienen de animales; que provienen de humanos.
- C07K14/705 C07K 14/00 […] › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
- C07K16/28 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
- C12N15/12 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
- C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/566 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
Clasificación antigua:
- C07K14/705 C07K 14/00 […] › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
Fragmento de la descripción:
Gen NPHS2 implicado en el síndrome nefrótico corticorresistente.
En este documento se describe un nuevo gen, denominado NPHS2, que codifica una proteína implicada en el síndrome nefrótico corticorresistente.
El síndrome nefrótico idiopático es una patología que aparece principalmente en la infancia, y que se caracteriza por una proteinuria masiva, y cambios histológicos no específicos del riñón incluyendo a veces una glomeruloesclerosis segmentaria y focal (FSGS). Estas características están asociadas con una desaparición difusa de los pedicelos de los podocitos observado a microscopía electrónica (Broyer y col., 1998), revelador de síndromes nefróticos cualquiera que sea su causa. La mayoría de los casos responden a una terapia a base de esteroides y tienen un buen pronóstico, pero aproximadamente el 20% son resistentes a los esteroides y evolucionan hacia la insuficiencia renal terminal, conduciendo a una glomeruloesclerosis completa. Se habla entonces de síndrome nefrótico corticorresistente.
La ultrafiltración de las macromoléculas del plasma durante la formación de la orina primaria en el glomérulo es una de las principales funciones del riñón humano. La pared capilar estructuralmente compleja responsable de esta función esta compuesta por una membrana basal cubierta por un endotelio fenestrado sobre su superficie interna y por células epiteliales especializadas (podocitos) que forman pedicelos sobre la superficie externa. Se observa en un gran número de enfermedades adquiridas o hereditarias una disfunción del filtro glomerular resultante de una pérdida excesiva de proteínas plasmáticas, lo cual conduce a un síndrome nefrótico, y después quizás a una insuficiencia renal terminal.
El estudio de enfermedades genéticas que afectan a la barrera de filtración proporciona modelos útiles para comprender la fisiopatología del proceso de filtración glomerular. Se han descrito algunas de estas afecciones hereditarias con proteinuria y síndrome nefrótico. La más grave es el síndrome nefrótico congénito de tipo finlandés (CNF), que es una enfermedad recesiva autosómica, con una proteinuria masiva en el útero, un síndrome nefrótico al nacer que conduce habitualmente a una insuficiencia renal terminal durante los dos primeros años de vida. El CNF está provocado por mutaciones en el gen NPHS1 (Kestilä, 1998). Por otro lado, se han descrito casos de proteinuria familiar o de síndrome nefrótico con lesiones histológicas de glomeruloesclerosis segmentaria y focal (FSGS) en pacientes más mayores, en particular adultos. Se han cartografiado dos locus genéticos para la FSGS dominante autosómica, respectivamente, sobre el locus 19q13 próximo al locus del gen NPHS1 (Mathis y col., 1998) y sobre el locus 11q21-q22 (Winn y col., 1999).
En 1995, una nueva entidad de síndrome nefrótico corticorresistente de transmisión autosómica recesiva se caracterizó de acuerdo con los siguientes criterios: comienzo precoz entre tres meses y cinco años, resistencia a una terapia a base de esteroides, evolución hacia la insuficiencia renal terminal antes de la edad de diez años, ausencia de recidiva después del trasplante renal y ausencia de cualquier desorden extra-renal. Histológicamente, sólo se observan modificaciones mínimas en las biopsias precoces aunque generalmente se presenta una FSGS en estadios posteriores. Un locus genético implicado en este síndrome nefrótico corticorresistente se ha cartografiado en la región 1q25-q31 entre los marcadores D1S452 y D1S466, extendiéndose esta región sobre aproximadamente 12 cM (Fuchshuber, 1995). Otro equipo (Lench y col.., 1998) ha confirmado esta localización y, más recientemente, también se ha demostrado una relación de esta región en una familia que presenta una FSGS que comienza en la edad adulta (Tsukaguchi y col., 1999).
Los autores de la presente invención han conseguido ahora identificar de manera precisa un nuevo gen implicado en la entidad del síndrome nefrótico corticorresistente descrito anteriormente. En principio, este gen se ha denominado SRN1 y después se ha renombrado como NPHS2.
Adjunto a este documento se encuentra una lista de secuencias, en la cual la secuencia SEC ID nº 1 representa el fragmento de ADNc del gen NPHS2 en el ser humano correspondiente a la fase de lectura abierta (ORF). Este ORF contiene 1149 bases y codifica una proteína de 383 aminoácidos, denominada podocina, cuya secuencia se presenta la SEC ID nº 2.
Las secuencias SEC ID nº 3 a SEC ID nº 10 representan fragmentos del ADN genómico del gen NPHS2 humano que incluye respectivamente 8 exones (en negrita en el listado adjunto), como se indica a continuación:
SEC ID nº 3:
SEC ID nº 4:
SEC ID nº 5:
SEC ID nº 6:
SEC ID nº 7:
SEC ID nº 8:
SEC ID nº 9:
SEC ID nº 10:
La secuencia SEC ID nº 11 abarca una parte del exón 5, los exones 6 y 7 y una gran parte del exón 8 (de la base 9792 del ADNc).
Las secuencias SEC ID nº 12 a nº 27 son cebadores utilizados para amplificar secuencias humanas.
La secuencia SEC ID nº 28 es la secuencia del ADNc de podocina de rata, siendo la secuencia SEC ID nº 29 la secuencia de aminoácidos correspondiente. La presente invención se refiere a un ácido nucleico como se define en las reivindicaciones 1, 4, 5, 6 y 9.
Por otro lado, se describe un ácido nucleico aislado, cuya secuencia se selecciona entre la SEC ID nº 3 a la SEC ID nº 10, o una secuencia homóloga, definida como
La presente invención también tiene por objeto un ácido nucleico aislado, que comprende la secuencia SEC ID nº 1 o 28, o una secuencia homóloga, definida como
Preferentemente, una secuencia de nucleótidos homóloga de acuerdo con la invención es idéntica a al menos el 75% de la secuencia SEC ID nº 1, más preferentemente a al menos el 85%, o a al menos el 90%.
De manera preferente, una secuencia de nucleótidos...
Reivindicaciones:
1. Ácido nucleico aislado, cuya secuencia se selecciona de la SEC ID nº 3 a la SEC ID nº 10, que representa un fragmento del ADN genómico del gen humano designado NPHS2.
2. Polipéptido aislado, denominado podocina, constituido por la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 2.
3. Polipéptido aislado, constituido por una secuencia homóloga a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº 2, definiéndose dicha secuencia homóloga como:
entendiéndose que dicho polipéptido presenta la actividad biológica de la podocina, polipéptido de secuencia SEC ID nº 2.
4. Ácido nucleico aislado, constituido por una secuencia diferente de la secuencia SEC ID nº 1 por una mutación, inserción o deleción, en al menos una posición entre los nucleótidos 481, 173/174, 488, 924/925, 128, 343, 482, 548, 607 y 940, o también 1033, 529, 622, 774-782, 154, 422, 442, 571, 572, 583, 783, 794 y 848, a reserva de que dicho ácido nucleico aislado esté implicado en un síndrome nefrótico corticorresistente.
5. Ácido nucleico aislado, constituido por la secuencia SEC ID nº 1 que codifica un polipéptido designado podocina.
6. Ácido nucleico aislado, constituido por una secuencia homóloga a la secuencia SEC ID nº 1, definiéndose dicha secuencia homologa como:
7. Vector de clonación y/o de expresión que contiene un ácido nucleico, de acuerdo con una de las reivindicaciones 1, 4, 5 o 6.
8. Célula huésped transfectada por un vector de acuerdo con la reivindicación 7.
9. Ácido nucleico constituido por una secuencia seleccionada entre las secuencias SEC ID nº 11 a SEC ID nº 27.
10. Procedimiento de producción de un polipéptido recombinante podocina, en el que un vector que contiene un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6 se transfiere a una célula huésped, que se cultiva en condiciones que permiten la expresión del polipéptido de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, respectivamente.
11. Anticuerpo dirigido contra el polipéptido como se define en la reivindicación 2 ó 3.
12. El uso de al menos un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 11 para detectar o purificar un polipéptido como se define en la reivindicación 2 ó 3 en una muestra biológica.
13. El uso de al menos un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1, 4, 5 ó 6 para detectar una anomalía en el gen NPHS2, definido como que comprende una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1 o, en su transcrito, definido como que comprende una secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 5 ó 6.
14. Procedimiento de diagnóstico in vitro de un síndrome nefrótico corticorresistente, que comprende las etapas constituidas por:
o, según una alternativa,
15. Composición farmacéutica que comprende un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, o un ácido nucleico que codifica dicho polipéptido, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
16. Polipéptido de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, o un ácido nucleico que codifica dicho polipéptido, para su uso en el tratamiento de enfermedades renales, particularmente de un síndrome nefrótico corticorresistente.
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