Fragmentos de péptidos activos sintéticos.

Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos VTVGDVTA que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/BR2003/000051.

Solicitante: FUNDACAO OSWALDO CRUZ - FIOCRUZ.

Nacionalidad solicitante: Brasil.

Dirección: AVENIDA BRASIL, 4365 MANGUINHOS, CEP-21045-900 RIO BRASIL.

Inventor/es: TENDLER, MIRIAM, KATZ, NAFTALE, GARRAT,RICHARD CHARLES, SIMPSON,ANDREW JOHN GEORGE, DE BARRIENTOS,FRANK JEFFERSON ALARCON, VILAR,MÔNICA MAGNO, ALMEIDA,MARILIA SIRIANNI DOS SANTOS.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/17 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que provienen de animales; que provienen de humanos.
  • C07K14/435 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de animales; de humanos.
  • G01N33/53 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.

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Fragmentos de péptidos activos sintéticos.

Fragmento de la descripción:

Fragmentos de peptidos activos sinteticos

CAMPO DE LA INVENCION

La presente invención se refiere a fragmentos de peptidos que tienen una o mas secuencias de aminoacidos compartidas y/o similares respecto de las secuencias de aminoacidos de porciones específicas de la protefna de 14 kDa de S. mansoni (Sm14) o FABPs relacionadas (Protefnas de Unión de Acidos Grasos) , y dichos fragmentos de peptidos funcionan como regiones epit6picas continuas o discontinuas de la molecula o imitan su actividad biológica. Mas en particular, la presente invención se refiere a un metodo para construir fragmentos de peptidos activos,

fragmentos de peptidos, composición inmun6gena y equipo de ensayo de diagnóstico mediante el uso de dichos fragmentos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Sm14, que pertenece a la familia de Protefnas de Unión de Acidos Grasos (FABPs) , es un antfgeno de reacción cruzada que muestra un nivel elevado de protección contra la esquistosomiasis y fasciolosis.

Los patógenos son organismos infecciosos, tales como bacterias, virus, protozoos, helmintos, o cualquier parasito que provoca enfermedades infecciosas al hospedador, en general expresando antfgenos específicos que son reconocidos por los sistemas inmunitarios de los hospedadores como extrafos, y se convierten en el objetivo de la respuesta inmunológica para eliminar el patógeno infeccioso.

En general, existen sitios específicos en los antfgenos, los epftopos de unión o simplemente epftopos, que se unen a

una porción complementaria de una protefna celular, es decir, el sitio receptor. Asf, los antfgenos de los patógenos se unen a menudo a receptores celulares en la celula de un hospedador como parte del proceso de infección del hospedador por el patógeno. Existe una complementariedad similar entre los anticuerpos del hospedador generados contra un antfgeno y los determinantes antigenicos del antfgeno propiamente dicho. Estas regiones de la molecula antigenica, sin embargo, pueden ser diferentes de las que son importantes para la invasión de la celula

hospedadora. Para inmunizar al hospedador y reducir la eficacia del patógeno de provocar una exposición al hospedador, se han ideado varias estrategias de vacunación.

Hasta hace poco tiempo, como se describe en el Instituto de Medicina, "Vaccine supply and innovation", Washington, D.C.: National Academy Press (1985) , se han empleado varias estrategias para desarrollar vacunas seguras y eficaces que consisten en patógenos atenuados vivos, patógenos muertos, componentes de patógenos, o toxinas

modificadas (toxoides) .

Hay disponibles vacunas contra diversos virus, bacterias, y protozoos patógenos, tales como viruela, fiebre amarilla, sarampión, difteria y malaria. Con respecto a los helmintos patógenos que son gusanos parasitos y provocan enfermedades humanas y veterinarias, tales como esquistosomiasis y fasciolosis, en la actualidad no se usan vacunas en programas de prevención y control. Estas enfermedades no son transmisibles directamente de una 35 persona (o animal) a otra, y el helminto necesita un hospedador intermedio y condiciones ambientales para completar su complejo ciclo vital. Todavfa existe un gran vacfo en el conocimiento de las variables que influyen en la dinamica de la transmisión de estas enfermedades con respecto a las vacunas y al disefo de los protocolos de vacunación. En otras palabras, y basandose en el conocimiento actual de los parametros epidemiológicos que modulan e influyen en la eficacia de la vacunación contra estas enfermedades, se puede afirmar que todavfa no se

han establecido ni los niveles individuales preferentes de protección requeridos por una vacuna, ni el numero de individuos a vacunar y/o proteger en una población dada.

En la actualidad, el uso de vacunas compuestas de componentes de patógenos o de parasitos atenuados para la inmunización humana se considera poco practico y potencialmente peligroso. La preocupación de usar tales mezclas complejas e indefinidas proviene del hecho de que la mayoría de los componentes estimulan respuestas

inmunitarias no funcionales, y ciertos componentes pueden ser incluso perjudiciales para los sujetos vacunados, al poder generarse productos t6xicos de peroxidación de lfpidos por el ataque inmunitario contra otros antfgenos del parasito, en particular antfgenos de superficie.

Estas consideraciones han llevado a los investigadores a buscar metodos alternativos para una inmunización eficaz, y se ha hecho un gran esfuerzo para purificar protefnas naturales de fuentes naturales o para producirlas de manera 50 sintetica mediante medios químicos o de manera alternativa mediante el uso de la tecnologfa del ADN recombinante.

Los intentos de vacunar modelos animales contra esquistosomiasis con homogenizados llevaron a los investigadores a descubrir un extracto salino (ES) que presenta buenos resultados para conferir protección contra enfermedades provocadas por infecciones por Schistosoma en seres humanos.

La inmunidad protectora contra esquistosomas se inform6 en el uso de una "mezcla" de componentes de esquistosoma (denominada ES) liberada de forma temprana durante la incubación de gusano adulto S. mansoni vivo y recien perfundido en solución salina tamponada con fosfato (PBS) . Centrandose en los intentos de conseguir una protección contra la infección cercarial mediante la vacunación, se disef6 un modelo experimental, en dos hospedadores animales diferentes no relacionados, el ratón SW y el conejo NZ, que se sabe que son completamente susceptibles y parcialmente resistentes a la infección por S. mansoni, respectivamente.

Los estudios sobre la respuesta inmunitaria inducida en animales vacunados dirigidos a la identificación de los componentes protectores de ES funcionalmente relevantes, el sitio y el mecanismo de la muerte del parasito, así como los marcadores de protección, han sido el centro de atención de los esfuerzos de los autores en los ultimos afos. Hasta el momento ha habido poca información sobre la composición molecular de ES, así como sobre la identificación y el aislamiento de sus componentes protectores. (vease: Tendler, M. y Scapin, M. (1979) . "The presence of Schistosoma mansoni antigens in solutions used for storing adult worms". Rev. Inst. Med. Trop. 21 (6) : 293-296; Tendler, M et al. (1982) . "Immunogenic and protective activity of an extract of Schistosoma mansoni". Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 77 (3) : 275-283) .

La Patente de EE.UU. 4.396.600 expedida el 2 de agosto de 1983 a nombre de Luigi Messineo y Mauro Scarpin describfa un extracto de gusanos adultos de Schistosoma mansoni obtenidos mediante incubación en tampón de cloruro s6dico-fosfato s6dico 0, 15 M de pH 5, 8. El extracto contiene protefnas, carbohidratos, y acidos nucleicos y/o subproductos de este ultimo componente, y se resuelve en cuatro fracciones principales (I-IV) mediante cromatograffa en gel en columnas de Sephadex G-100 y G-200. Los ensayos de inmunodifusión con extracto serico anti-total de conejo revelan tres lfneas de precipitación que corresponden a las fracciones I y II y una con III o IV. Se descubri6 que los conejos inmunizados con este extracto total eran totalmente o parcialmente (al menos un 77%) resistentes a una infección por exposición. El material antigenico del extracto salino es una vacuna eficaz para el tratamiento y la inmunización de esquistosomiasis y otras infecciones por esquistosoma.

Otro estudio publicado es "A 14-KDa Schistosoma mansoni Polypeptide is Homologous to a gene family of fatty Acid Binding Proteins" -The Journal of Biological Chemistr y -vol. 266, N° 13, ejemplar del 5 de mayo, pags. 8447-8454, 1991; D. Moser, M. Tendler, G. Griffiths, y Mo-Quen Klinkert. Este estudio describe la secuenciación del gen y la demostración de la actividad funcional de Sm-14 como una protefna que se une a lfpidos.

Asf, se han clonado, secuenciado, y caracterizado los antfgenos de esquistosoma presentes en el ES y otros antfgenos de helminto relacionados, y se han preparado las protefnas recombinantes correspondientes. Los ejemplos son: Sm14 (Patente de EE.UU. 5.730.984 concedida a la Fundación Oswaldo Cruz el 24 de marzo de 1998; Fh-15 (Perez et al. (1992) . "Fasciola hepatica: Molecular cloning. Nucleotide sequence and expression of gene encoding a polypeptide homologous to a Schistosoma mansoni Fatty Acid-Binding Protein". J. Exp. Parasitol. 74 (4) : 400-407.

Sin embargo, las vacunas que se basan en el uso de protefnas que pertenecen al patógeno, esten alteradas o no, no siempre son facilmente obtenibles. Las dificultades en la extracción, la purificación, el analisis cuantitativo y la modificación de tales protefnas son problemas habituales con este tipo de vacunas. Existen soluciones... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos VTVGDVTA que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

2. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos NFDAVMSKLG que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

3. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos VTVGDVTANFDAVMSKLG que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

4. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos VTVGDVTGGSDAVMSKLG que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

5. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos EKNSESKLTQ que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

6. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos IVREVDGDTMKTT que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

7. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos EKNSESKLTQIVREVDGDTMKTT que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

8. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos EKFSESKLTSDPTGIVREVDGATMKTT que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

9. Fragmentos de peptidos en los que el fragmento de peptido contiene la secuencia de aminoacidos EKFSESKLTFDGIVREVDGATMKTT que procede de una protefna de 14 kDa de Schistosoma mansoni (Sm14) o su recombinante (rSm14) .

10. Composiciones inmun6genas que consisten en uno o mas de los fragmentos de peptido definidos en las reivindicaciones anteriores y un vehículo farmaceutico, y dichas composiciones inmun6genas son capaces de conferir al menos protección parcial contra la infección por helmintos patógenos, y así servir como vacunas contra los mismos.

11. La composición inmun6gena segun la reivindicación 10 en la que los helmintos patógenos son Schistosoma mansoni y/o Fasciola hepatica.


 

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