Un fragmento de anticuerpo que comprende un único brazo de unión a antígeno y una región Fc queaumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprendedicho brazo de unión a antígeno,

en el que la región Fc comprende un complejo de un primer y un segundopolipéptidos de Fc, en el que uno, pero no ambos de los polipéptidos de Fc, es una cadena pesada truncada delextremo N, y en el que dicho fragmento de anticuerpo se une específicamente a c-met.

Fragmentos de anticuerpos monovalentes útiles como agentes terapéuticos

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere generalmente a los campos de la biología molecular y los agentes terapéuticos de anticuerpos. Más específicamente, la invención se refiere a novedosas formas de fragmentos de anticuerpos monovalentes con características únicas para su uso como agentes terapéuticos y a usos de dichos fragmentos de anticuerpos.

ANTECEDENTES

En los últimos años se han observado cada vez más promesas de uso de anticuerpos como agentes de diagnóstico y terapéuticos para diversos trastornos y enfermedades. La importancia de los anticuerpos en general para fines de diagnóstico, investigación y terapéuticos se refleja en la cantidad significativa de esfuerzo que se ha gastado en estudiar y modificar secuencias de anticuerpos y estructuras de aquellas encontradas en los anticuerpos naturales para lograr características deseadas.

La opinión prevalente es que un anticuerpo terapéutico ideal poseería ciertas características mínimas que incluyen especificidad por diana, bioestabilidad y biodisponibilidad tras la administración a un paciente sujeto y afinidad de unión a diana suficiente para maximizar los efectos terapéuticos. Desafortunadamente, ha habido un éxito limitado en los esfuerzos para generar agentes terapéuticos de anticuerpos que posean todas, o incluso la mayoría, de estas características mínimas. Por ejemplo, los anticuerpos de longitud completa tales como IgG presentan farmacocinética deseable (por ejemplo, semividas sustanciales in vivo) y buenas afinidades de unión a diana debido a los efectos de avidez derivados de la presencia de dos brazos de unión a antígeno en una única molécula de anticuerpo. Sin embargo, tales anticuerpos de longitud completa sufren problemas de biodisponibilidad como consecuencia de su mayor tamaño molecular. Además, un anticuerpo de longitud completa puede presentar en algunos casos efectos agonistas (que no es deseable) tras la unión a un antígeno diana aún cuando sea un anticuerpo antagonista como un fragmento Fab. Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 6.468.529. Este fenómeno es desafortunado cuando el efecto antagonista es la función terapéutica deseada. En algunos casos, este fenómeno puede ser debido al efecto de “reticulación” de un anticuerpo bivalente que cuando se une a un receptor de la superficie celular promueve la dimerización de receptores que conduce a la activación de receptores.

Aunque no cabría esperar que un anticuerpo monovalente tuviera el efecto de “reticulación”, los anticuerpos monovalentes no han sido deseables hasta la fecha como agentes terapéuticos debido a ciertas limitaciones inherentes en su estructura/arquitectura. Por ejemplo, el anticuerpo monovalente en forma de Fab posee menor farmacodinámica (por ejemplo, inestable in vivo y rápida eliminación tras la administración) con respecto al uso como agentes terapéuticos. Además, en comparación con sus homólogos multivalentes, los anticuerpos monovalentes generalmente tienen menor afinidad de unión aparente debido a la ausencia de efectos de unión por avidez.

En general, la elección de la forma de anticuerpo para su uso como agentes terapéuticos ha estado gobernada por una aceptación de la realidad de que cada uno tiene limitaciones no deseables. Sin embargo, es evidente que la forma de anticuerpo de longitud completa ha sido la forma de elección en los últimos años, probablemente debido al menos en parte a su bioestabilidad in vivo. Los anticuerpos monovalentes pueden ser aceptables cuando, a fin de cuentas, la bioestabilidad no sea un factor tan crítico para la eficacia terapéutica como la biodisponibilidad. Por ejemplo, debido en parte a la mejor penetración en tejido en comparación con anticuerpos de longitud completa, los anticuerpos monovalentes Fab pueden ser mejores vehículos para la administración de moléculas heterólogas tales como toxinas a las células o tejidos diana en los que la molécula heteróloga ejerce una función terapéutica. Véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 5.169.939. Otros ejemplos de intentos por desarrollar anticuerpos monovalentes como agentes terapéuticos incluyen parámetros en los que la monovalencia es crítica para obtener un efecto terapéutico, por ejemplo, cuando hay preocupaciones de que la bivalencia de un anticuerpo pueda inducir una célula diana para que experimente modulación antigénica que, por consiguiente, podría proporcionar un medio para que la célula diana evitara agentes citotóxicos, efectores y complemento. Ejemplos de tales anticuerpos se describen en Cobbold & Waldmann, Nature (1984) , 308:460-462; documento EP 0131424; Glennie & Stevenson, Nature (1982) , 295:712-714; Nielsen & Routledge, Blood (2002) , 100:4067-4073; Stevenson y col., Anticancer Drug Des. (1989) , 3 (4) :219-230; Routledge y col., Transplantation (1995) , 60:847-853; Clark y col., Eur. J. Immunol. (1989) , 19:381-388; Bolt y col., Eur. J. Immunol. (1993) , 23:403-411; Routledge y col., Eur. J. Immunol. (1991) , 21:2717-2725; Staerz y col., Nature (1985) , 314:628-631; y la patente de EE.UU. nº

5.968.509. Notablemente, estos fragmentos de anticuerpos monovalentes contienen secuencias de Fc funcionales que están incluidas debido a que sus funciones efectoras (tales como lisis mediada por complemento de linfocitos T) son necesarias para la función terapéutica. A diferencia de los escenarios descritos, parece que la materia no ha reconocido una necesidad o utilidad que incluya una región Fc en anticuerpos monovalentes que se usan y/o se han desarrollado como agentes terapéuticos. La reticencia a incluir una región Fc en anticuerpos monovalentes en los que la región Fc no es necesaria para la función terapéutica se ha puesto de relieve por las dificultades prácticas para obtener tales anticuerpos. La tecnología de producción de anticuerpos existente no proporciona un procedimiento eficiente para obtener en altas cantidades y en forma suficientemente purificada heterodímeros que comprendan un único componente de unión a antígeno (es decir, monovalencia) y una región Fc.

Notablemente, se han hecho algunos esfuerzos para aumentar la estabilidad in vivo de fragmentos de anticuerpos con grados variables de éxito. Por ejemplo, un fragmento Fab puede unirse a restos de estabilidad tales como polietilenglicol u otras moléculas estabilizantes tales como péptidos heterólogos. Véanse, por ejemplo, Dennis y col., J. Biol. Chem. (2002) , 277:35035-35043; publicación PCT nº WO01/45746.

En vista de lo anterior, existe una necesidad significativa de formas de anticuerpo mejoradas y procedimientos de producción y uso de tales anticuerpos, por ejemplo, como agentes terapéuticos o profilácticos. La invención descrita en este documento trata esta necesidad y proporciona otros beneficios.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona una forma de anticuerpo que proporciona diversas ventajas con respecto a la utilidad terapéutica, funcionalidad y procedimientos de producción del mismo. La invención proporciona un fragmento de anticuerpo que se une específicamente a c-met según la reivindicación adjunta 1. En un aspecto, un anticuerpo de la invención proporciona una característica monovalente que es esencial para ciertas respuestas no inmunitarias basadas en esquemas terapéuticos. Por ejemplo, en afecciones patológicas que requieren una función antagonista, y cuando la bivalencia de un anticuerpo produce un efecto agonista no deseable, el rasgo monovalente de un anticuerpo de la invención produce y/o garantiza una función antagonista tras la unión del anticuerpo a una molécula diana. Además, un anticuerpo de la invención se caracteriza por atributos farmacocinéticos superiores (tales como una semivida potenciada y/o tasa de eliminación reducida in vivo) en comparación con formas de Fab que tienen características de unión a antígeno similares/sustancialmente idénticas, venciéndose así un inconveniente importante en el uso de anticuerpos monovalentes Fab convencionales. En un aspecto, un anticuerpo de la invención comprende de poca a ninguna función efectora inmunitaria, un rasgo que es particularmente útil en el tratamiento de afecciones patológicas en las que una respuesta efectora inmunitaria es perjudicial. En otro aspecto, un anticuerpo de la invención se caracteriza por alteraciones que mejoran enormemente el rendimiento de producción. Además, a diferencia de ciertos procedimientos convencionales para producir fragmentos de anticuerpos monovalentes (por ejemplo,... [Seguir leyendo]

1. Un fragmento de anticuerpo que comprende un único brazo de unión a antígeno y una región Fc que aumenta la estabilidad de dicho fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprende dicho brazo de unión a antígeno, en el que la región Fc comprende un complejo de un primer y un segundo polipéptidos de Fc, en el que uno, pero no ambos de los polipéptidos de Fc, es una cadena pesada truncada del extremo N, y en el que dicho fragmento de anticuerpo se une específicamente a c-met.

2. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1, en el que el fragmento de anticuerpo está aglicosilado.

3. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1 ó 2, en el que el fragmento de anticuerpo tiene de pocas a ninguna propiedad inmunosupresora.

4. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 3, en el que dichas propiedades inmunosupresoras comprenden capacidad para efectuar el agotamiento de linfocitos T.

5. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-4 que no posee función efectora sustancial distinta de la unión a FcRn.

6. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 5, en el que dicha función efectora es lisis del complemento.

7. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el fragmento de anticuerpo se une a FcRn.

8. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el fragmento de anticuerpo comprende un primer polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena ligera, un segundo polipéptido que comprende un dominio variable de la cadena pesada y dicho primer polipéptido de Fc, y un tercer polipéptido que comprende dicho segundo polipéptido de Fc.

9. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el primer polipéptido comprende un dominio variable de la cadena ligera no humana fusionado con un dominio constante de la cadena ligera humana.

10. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el primer polipéptido comprende una CDR de una especie no humana fusionada con una secuencia de la región estructural humanizada o humana.

11. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el segundo polipéptido comprende un dominio variable de la cadena pesada no humana fusionado con un dominio constante de la cadena pesada humana.

12. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el segundo polipéptido comprende una CDR de una especie no humana fusionada con una secuencia de la región estructural humanizada o humana.

13. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el tercer polipéptido comprende una cadena pesada truncada del extremo N que comprende al menos una parte de la secuencia bisagra en el extremo

N.

14. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que los dos polipéptidos de Fc están covalentemente unidos.

15. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que los dos polipéptidos de Fc están unidos mediante enlaces disulfuro intermoleculares en la región bisagra.

16. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que el fragmento de anticuerpo cuando se une a una molécula diana inhibe la multimerización de moléculas diana.

17. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que el fragmento de anticuerpo cuando se une a una molécula diana inhibe la unión de un componente de unión afín a la molécula diana.

18. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en el que el primer polipéptido de Fc y el segundo polipéptido de Fc se encuentran en una superficie de separación, y la superficie de separación del segundo polipéptido de Fc comprende una protuberancia que es posicionable en una cavidad en la superficie de separación del primer polipéptido de Fc.

19. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en el que el segundo polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de un polipéptido molde/original para codificar la protuberancia o el primer polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de un polipéptido molde/original para codificar la cavidad, o ambos.

20. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-19, en el que el segundo polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de un polipéptido molde/original para codificar la protuberancia y el primer polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de un polipéptido molde/original para codificar la cavidad, o ambos.

21. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-20, en el que el primer polipéptido de Fc y el segundo polipéptido de Fc se encuentran en una superficie de separación, en el que la superficie de separación del segundo polipéptido de Fc comprende una protuberancia que es posicionable en una cavidad en la superficie de separación del primer polipéptido de Fc, y en el que la cavidad o protuberancia, o ambos, se han introducido en la superficie de separación del primer y segundo polipéptidos de Fc, respectivamente.

22. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 19-21, en el que la protuberancia y la cavidad se han introducido en la superficie de separación de los polipéptidos de Fc respectivos.

23. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 19-22, en el que la protuberancia y la cavidad comprenden cada una un residuo de aminoácido natural.

24. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 19-23, en el que el polipéptido de Fc que comprende la protuberancia se genera reemplazando un residuo original de la superficie de separación de un polipéptido molde/original por un residuo de importación que tiene un volumen de cadena lateral mayor que el residuo original.

25. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 19-24, en el que el polipéptido de Fc que comprende la protuberancia se genera mediante un procedimiento que comprende una etapa en la que ácido nucleico que codifica un residuo original de la superficie de separación de dicho polipéptido se reemplaza con ácido nucleico que codifica un residuo de importación que tiene un volumen de cadena lateral mayor que el original.

26. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 24 ó 25, en el que el residuo original es treonina.

27. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, en el que el residuo de importación es arginina (R) .

28. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, en el que el residuo de importación es fenilalanina (F) .

29. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, en el que el residuo de importación es tirosina (Y) .

30. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, en el que el residuo de importación es triptófano (W) .

31. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-23, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad se genera reemplazando un residuo original en la superficie de separación de un polipéptido molde/original por un residuo de importación que tiene un volumen de cadena lateral más pequeño que el residuo original.

32. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-23 y 31, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad se genera mediante un procedimiento que comprende una etapa en la que el ácido nucleico que codifica un residuo original de la superficie de separación de dicho polipéptido se reemplaza por ácido nucleico que codifica un residuo de importación que tiene un volumen de cadena lateral más pequeño que el original.

33. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 31 ó 32, en el que el residuo original es treonina.

34. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 31 ó 32, en el que el residuo original es leucina.

35. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 31 ó 32, en el que el residuo original es tirosina.

36. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el residuo de importación no es cisteína (C) .

37. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el residuo de importación es alanina (A) .

38. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el residuo de importación es serina (S) .

39. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el residuo de importación es treonina (T) .

40. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el residuo de importación es valina (V) .

41. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 40, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende la sustitución de dos o más aminoácidos originales seleccionados del grupo que consiste en treonina, leucina y tirosina.

42. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 41, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende dos o más residuos de importación seleccionados del grupo que consiste en alanina, serina, treonina y valina.

43. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicacione.

3. 42, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende la sustitución de dos o más aminoácidos originales seleccionados del grupo que consiste en treonina, leucina y tirosina, y en el que dichos aminoácidos originales se reemplazan por residuos de importación seleccionados del grupo que consiste en alanina, serina, treonina y valina.

44. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-43, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende la sustitución de treonina en la posición 366 por serina, numeración de aminoácidos según el esquema de numeración de EU de Kabat.

45. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-43, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende la sustitución de leucina en la posición 368 con alanina, numeración de aminoácidos según el esquema de numeración de EU de Kabat.

46. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-45, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende la sustitución de tirosina por valina.

47 El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-46, en el que el polipéptido de Fc que comprende la cavidad comprende dos o más sustituciones de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en T366S, L368A y Y407V.

48. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-47, en el que el polipéptido de Fc que comprende la protuberancia comprende la sustitución de treonina en la posición 366 por triptófano, numeración de aminoácidos según el esquema de numeración de EU de Kabat.

49. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-48, en el que el primer y segundo polipéptidos de Fc comprenden cada uno un dominio constante de anticuerpo.

50. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 49, en el que el dominio constante de anticuerpo es un dominio CH2 y/o CH3.

51. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 49 ó 50, en el que el dominio constante de anticuerpo es de una IgG.

52. El fragmento de anticuerpo de la reivindicación 51, en el que la IgG es IgG1 humana.

53. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-52 que es monoespecífico.

54. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-53 que es una inmunoadhesina monoespecífica.

55. El fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-54 que es una quimera de anticuerpo-inmunoadhesina.

56. Una composición que comprende una población de inmunoglobulinas en la que al menos el 75% de

las inmunoglobulinas es el fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-55.

57. Un procedimiento de preparación del fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 155 que comprende las etapas de:

(a) cultivar una célula huésped que comprende ácido nucleico que codifica el fragmento de anticuerpo; y

(b) recuperar el fragmento de anticuerpo del cultivo de células huésped.

58. El procedimiento de la reivindicación 57, en el que los ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos están operativamente ligados a regiones de iniciación de la traducción (TIR) de fuerza aproximadamente igual.

59. El procedimiento de la reivindicación 57 ó 58, en el que dicha célula huésped es procariota.

60. El procedimiento de la reivindicación 59, en el que la célula huésped es E. coli.

61. El procedimiento de la reivindicación 60, en el que la E. coli es de una cepa deficiente en actividades de proteasas endógenas.

62. El procedimiento de la reivindicación 57 ó 58, en el que dicha célula huésped es eucariota.

63. El procedimiento de la reivindicación 62, en el que la célula huésped es CHO.

64. El procedimiento de cualquiera de las reivindicacione.

5. 63, en el que el fragmento de anticuerpo se recupera de medio de cultivo.

65. El procedimiento de cualquiera de las reivindicacione.

5. 63, en el que el fragmento de anticuerpo se recupera de lisado celular.

66. Un procedimiento de preparación del fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 18-55 que comprende las etapas de:

(a) cultivar una célula huésped que comprende ácido nucleico que codifica el fragmento de anticuerpo, en el que el ácido nucleico que codifica la superficie de separación del segundo polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de ácido nucleico que codifica la superficie de separación original del segundo polipéptido de Fc para codificar la protuberancia, o el ácido nucleico que codifica la superficie de separación del primer polipéptido de Fc ha sido alterado a partir de ácido nucleico que codifica la superficie de separación original del primer polipéptido de Fc para codificar la cavidad o ambos; y

(b) recuperar el fragmento de anticuerpo del cultivo de células huésped.

67. El procedimiento de la reivindicación 66, en el que el ácido nucleico que codifica el segundo polipéptido de Fc ha sido alterado a partir del ácido nucleico original para codificar la protuberancia y el ácido nucleico que codifica el primer polipéptido ha sido alterado a partir del ácido nucleico original para codificar la cavidad.

68. El procedimiento de la reivindicación 66, en el que la etapa (a) va precedida de una etapa en la que el ácido nucleico que codifica un residuo de aminoácido original de la superficie de separación del segundo polipéptido de Fc se reemplaza por ácido nucleico que codifica un residuo de aminoácido de importación que tiene un volumen de cadena lateral mayor que el residuo de aminoácido original, en el que el residuo de importación con el volumen de cadena lateral mayor comprende la protuberancia.

69. El procedimiento de la reivindicación 66, en el que la etapa (a) va precedida de una etapa en la que el ácido nucleico que codifica un residuo de aminoácido original en la superficie de separación del primer polipéptido de Fc se reemplaza por ácido nucleico que codifica un residuo de aminoácido de importación que tiene un volumen de cadena lateral más pequeño que el residuo de aminoácido original de manera que se forme la cavidad.

70. El procedimiento de la reivindicación 66, en el que la etapa (a) va precedida de una etapa en la que el ácido nucleico que codifica el primer y segundo polipéptidos de Fc se introduce en la célula huésped.

71. Un procedimiento de preparación del fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 155 que comprende las etapas de:

(a) preparar polipéptidos que forman el fragmento de anticuerpo; y

(b) permitir que se produzca la heteromultimerización;

mediante lo cual se forma el fragmento de anticuerpo.

72. El procedimiento de cualquiera de las reivindicacione.

5. 71, en el que la etapa (b) comprende acoplar el primer polipéptido de Fc y el segundo polipéptido de Fc in vitro.

73. El procedimiento de cualquiera de las reivindicacione.

5. 71, en el que la secuencia de aminoácidos de la superficie de separación original ha sido alterada de manera que se genera la protuberancia y la cavidad en la superficie de separación manipulada.

74. Ácido nucleico aislado que codifica el fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1

55.

75. Una composición que comprende dos o más ácidos nucleicos recombinantes que codifican conjuntamente el fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-55.

76. Una célula huésped que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 74 ó 75.

77. La célula huésped de la reivindicación 76, en la que el ácido nucleico que codifica el brazo de unión a antígeno está presente en un único vector.

78. La célula huésped de la reivindicación 76, en la que el ácido nucleico que codifica el brazo de unión a antígeno está presente en vectores separados.

79. La célula huésped de la reivindicación 76, en la que el ácido nucleico que codifica el brazo de unión a antígeno y la cadena pesada truncada del extremo N estás presentes en un único vector.

80. Un procedimiento de preparación del fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 155 que comprende cultivar una célula huésped que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 74 ó 75 de manera que se expresen polipéptidos, y recuperar el fragmento de anticuerpo del cultivo celular.

81. El procedimiento de la reivindicación 80, en el que el fragmento de anticuerpo se recupera del lisado celular.

82. El procedimiento de la reivindicación 80, en el que el fragmento de anticuerpo se recupera del medio de cultivo celular.

83. El procedimiento de la reivindicación 80, en el que la célula huésped es una célula procariota.

84. El procedimiento de la reivindicación 81, en el que la célula huésped es E. coli.

85. El procedimiento de la reivindicación 80, en el que la célula huésped es de mamífero.

86. Una composición que comprende el fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 155 y un vehículo.

87. Un procedimiento de generación de un fragmento de anticuerpo que comprende un único brazo de unión a antígeno y una región Fc que aumenta la estabilidad del fragmento de anticuerpo en comparación con una molécula de Fab que comprende dicho brazo de unión a antígeno, comprendiendo dicho procedimiento expresar en una célula huésped adecuada ácido nucleico que codifica el brazo de unión a antígeno y un primer y segundo polipéptidos de Fc en condiciones que permitan la formación del brazo de unión a antígeno y dimerización del primer y segundo polipéptidos de Fc para formar dicha región Fc, en el que uno, pero no ambos de los polipéptidos de Fc, es una cadena pesada truncada del extremo N, y en el que dicho fragmento de anticuerpo se une específicamente a c-met.

88. Uso de un fragmento de anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 55 para la preparación de un medicamento para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de una enfermedad o trastorno, en el que dicha enfermedad o trastorno es cáncer; tumores malignos o benignos; tumores malignos no leucémicos o linfoides; o trastornos relacionados con la angiogénesis.

89. Uso según la reivindicación 88, en el que dicha enfermedad o trastorno es cáncer, y en el que dicho cáncer es linfoma, blastoma, sarcoma, leucemia, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer rectal, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer gastrointestinal, cáncer de ovario o mieloma múltiple.

90. Un fragmento de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 55 para su uso en el

tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno, en el que dicha enfermedad o trastorno es cáncer; tumores malignos o benignos; tumores malignos no leucémicos o linfoides; o trastornos relacionados con la angiogénesis.

91. Un fragmento de anticuerpo según la reivindicación 90, en el que dicha enfermedad o trastorno es cáncer, y en el que dicho cáncer es linfoma, blastoma, sarcoma, leucemia, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer rectal, cáncer de próstata, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer gastrointestinal, cáncer de ovario o mieloma múltiple.