Uso del fragmento Fc como un vehículo de fármacos, en el que el fragmento Fc es un Fc de IgG,

en el que elfragmento Fc está unido covalentemente a un fármaco por un conector no peptídico, en el que

(i) el fragmento Fc tiene una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO. 8,

(ii) el conector no peptídico es polietilenglicol, y

(iii) el fármaco es un fármaco polipeptídico.

Fragmento fc de igg para un vehículo de fármacos y procedimiento para su preparación

Campo técnico

La presente invención se refiere al uso de un fragmento Fc de IgG como un vehículo de fármacos.

Antecedentes de la técnica [0002] En el pasado, un gran número de farmacólogos y químicos hicieron esfuerzos para alterar químicamente y/o modificar la actividad in vivo de moléculas fisiológicamente activas que existen en la naturaleza. Estos esfuerzos se centraron principalmente en el aumento o la prolongación de determinada actividad in vivo, reducción de la toxicidad, eliminación o reducción de efectos secundarios, o modificación de actividades fisiológicas específicas de las sustancias fisiológicamente activas. Cuando una sustancia fisiológicamente activa se modifica químicamente, en muchos casos pierde algo o la mayor parte de sus actividades fisiológicas. Sin embargo, en algunos casos, la modificación podía producir un aumento o cambio en la actividad fisiológica. En relación con esto, muchos estudios se han centrado en la modificación química capaz de lograr la actividad fisiológica deseada, y la mayoría de dichos estudios han implicado la unión covalente de una sustancia fisiológicamente activa (fármaco) a un vehículo fisiológicamente aceptable.

Por ejemplo, la publicación de patente internacional nº WO 01/93911 usa un polímero que tiene una pluralidad de restos ácidos como un vehículo de fármacos. La publicación de patente internacional nº WO 03/00778 describe copolímeros de bloques anfifílicos que contienen un grupo aniónico que, cuando se usan como un vehículo de fármacos para un fármaco catiónico, mejoran la estabilidad del fármaco. La patente europea nº 0681481 describe un procedimiento para mejorar las propiedades de fármacos básicos usando ciclodextrina y ácidos como vehículos. Por otra parte, los fármacos hidrófobos tienen una baja estabilidad in vivo debido principalmente a su baja solubilidad acuosa. Para mejorar la baja solubilidad acuosa de los fármacos hidrófobos, la publicación de patente internacional nº WO 04/064731 usa un lípido como vehículo. Sin embargo, hasta la fecha, no se ha descrito el uso de un fragmento Fc de inmunoglobulina como un vehículo de fármacos.

Típicamente, puesto que los polipéptidos son desnaturalizados de forma relativamente fácil debido a su baja estabilidad, degradados por enzimas proteolíticas en la sangre y eliminados fácilmente a través del riñón o el hígado, es necesario administrar con frecuencia a los pacientes los medicamentos proteínicos, que incluyen polipéptidos como componentes farmacéuticamente eficaces, para mantener el nivel, las concentraciones y valoraciones en sangre deseados. Sin embargo, esta administración frecuente de medicamentos proteínicos, en especial mediante inyección, puede producir dolor en los pacientes. Para resolver estos problemas, se han hecho muchos esfuerzos para mejorar la estabilidad en el suero de los fármacos proteínicos y mantener los fármacos en la sangre en niveles altos durante un periodo de tiempo prolongado, y por lo tanto maximizar la eficacia farmacéutica de los fármacos. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas con actividad sostenida necesitan aumentar la estabilidad de los fármacos proteínicos y mantener las valoraciones en niveles suficientemente altos sin causar respuestas inmunitarias en los pacientes.

Para estabilizar las proteínas y prevenir la degradación enzimática y eliminación por los riñones, se usó convenientemente un polímero que tiene una alta solubilidad, tal como polietilenglicol (en lo sucesivo denominado simplemente como "PEG") , para modificar químicamente la superficie de un fármaco proteínico. Mediante la unión a regiones específicas o diferentes regiones de una proteína objetivo, el PEG estabiliza la proteína y previene la hidrólisis, sin causar efectos secundarios graves (Sada y col., J. Fermentation Bioengineering 71: 137 - 139, 1991) . Sin embargo, a pesar de su capacidad para potenciar la estabilidad de proteínas, este acoplamiento con PEG tiene problemas tales como que reduce mucho las valoraciones de las proteínas fisiológicamente "activas". Además el rendimiento disminuye con el aumento del peso molecular del PEG, debido a la reducida reactividad con las proteínas.

Recientemente, se han sugerido los conjugados de polímero-fármaco proteínico. Por ejemplo, como se describe en la patente de EE.UU. nº 5.738.846, se puede preparar un conjugado mediante la unión de un fármaco proteínico idéntico a ambos extremos del PEG para mejorar la actividad del fármaco proteínico. También, como se describe en la publicación de patente internacional nº WO 92/16221, se pueden unir dos fármacos proteínicos diferentes a ambos extremos del PEG para proporcionar un conjugado que tiene dos actividades diferentes. Sin embargo, los procedimientos anteriores no eran muy satisfactorios para mantener la actividad de los fármacos proteínicos.

Por otra parte, Kinstler y col. describieron que una proteína de fusión preparada por acoplamiento del factor estimulador de colonias de granulocitos (G-CSF) a albúmina humana, mostraba una estabilidad mejorada (Kinstler y col., Pharmaceutical Research 12 (12) : 1883 - 1888, 1995) . Sin embargo, en esta publicación puesto que el fármaco modificado que tiene una estructura de G-CSF-PEG-albúmina sólo mostraban un aumento de aproximadamente 4 veces el tiempo de permanencia en el cuerpo y un ligero aumento de la semivida en el suero comparado con la administración de solo el G-CSF, no se ha industrializado como una formulación de acción prolongada eficaz para fármacos proteínicos.

Un procedimiento alternativo para mejorar la estabilidad in vivo de proteínas fisiológicamente activas es mediante la unión de un gen de proteína fisiológicamente activa a un gen que codifica una proteína que tiene una alta estabilidad en el suero por tecnología de recombinación genética y cultivo de las células transfectadas con el gen recombinante para producir una proteína de fusión. Por ejemplo, se puede preparar una proteína de fusión conjugando albúmina, una proteína que se sabe que es la más eficaz para potenciar la estabilidad de las proteínas, o su fragmento, a una proteína fisiológicamente activa de interés por recombinación genética (publicaciones de patentes internacionales nº WO 93/15199 y WO 93/15200, publicación de patente europea nº 413.622) . Una proteína de fusión de interferón alfa y albúmina desarrollada por la Human Genome Science Company y comercializada con el nombre comercial de "Albuferon™", aumentaba la semivida de 5 h a 93 h en monos, pero se sabía que era problemática porque disminuía la actividad in vivo a menos de 5 % del interferón alfa no modificado (Osborn y col., J. Phar. Exp. Ther. 303 (2) : 540 - 548, 2002) . No se ha descrito una buena tecnología que potencie tanto la duración de la acción in vivo como la estabilidad de los fármacos proteínicos, así como que mantenga la actividad fisiológica de los fármacos in vivo.

Por otra parte, las inmunoglobulinas y sus fragmentos se han usado para potenciar la estabilidad de fármacos proteínicos. Por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 5.045.312 describe un procedimiento de aumento de la actividad de una hormona de crecimiento comparada con una hormona de crecimiento no modificada, conjugando la hormona de crecimiento humana a albúmina del suero o inmunoglobulina de rata, usando un agente de reticulación. También se han hecho otros intentos de fusionar un fármaco proteínico a un fragmento Fc de inmunoglobulina. Por ejemplo, el interferón (publicación de patente coreana abierta a consulta por el público nº 2003-9464) , y el receptor de interleuquina-4, receptor de interleuquina-7 o receptor de eritropoyetina (EPO) (Registro de patente coreana nº 249572) se expresaron previamente en mamíferos en una forma fusionada a un fragmento Fc de inmunoglobulina. La publicación de patente internacional nº WO 01/03737 describe una proteína de fusión que comprende una citoquina o factor de crecimiento unido a un fragmento Fc de inmunoglobulina por enlace peptídico. Además la patente de EE.UU. nº 5.116.964 describe una proteína fusionada al extremo amino o carboxilo terminal de un fragmento Fc de inmunoglobulina por recombinación genética. La patente de EE.UU. nº 5.349.053 describe una proteína de fusión que comprende la IL-2 fusionada a un fragmento Fc de inmunoglobulina por un enlace peptídico.

Otros ejemplos de proteínas de fusión de Fc preparadas por recombinación genética incluyen una proteína de fusión de interferón... [Seguir leyendo]

1. Uso del fragmento Fc como un vehículo de fármacos, en el que el fragmento Fc es un Fc de IgG, en el que el fragmento Fc está unido covalentemente a un fármaco por un conector no peptídico, en el que 5

(i) el fragmento Fc tiene una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID NO. 8,

(ii) el conector no peptídico es polietilenglicol, y

(iii) el fármaco es un fármaco polipeptídico.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc se produce por expresión de un gen que codifica el fragmento Fc.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el gen tiene una secuencia de nucleótidos representada por la SEQ ID NO. 4. 15

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, en el que el gen es parte de un vector recombinante.

5. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc se expresa por un transformante transformado

con el vector recombinante definido en la reivindicación 4. 20

6. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el fragmento Fc se prepara por cultivo del transformante definido en la reivindicación 5.