Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España en los últimos 80 años. Clasificación Internacional de Patentes CIP 2013.

FRACCIONES DIFERENCIADAS DE YEMA DE HUEVO, SU PROCEDIMIENTO DE OBTENCION Y SUS USOS.

Patente de Invención. Resumen:

Fracciones diferenciadas de yema de huevo, su procedimiento de obtención y sus usos. La presente invención se refiere a un método para la separación de fracciones de la yema de huevo sin el empleo de disolventes orgánicos. También se refiere a distintas fracciones obtenidas según este método y al uso de las mismas en distintos tipos de procesos.

Además

, se refiere a la mayonesa y a un sustitutivo de huevo obtenidos a partir de alguna de las fracciones separadas.

De aplicación en diversos sectores industriales como el alimentario, el cosmético o el farmacéutico.

Solicitante: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Nacionalidad solicitante: España.

Provincia: ASTURIAS.

Inventor/es: PAREDES GARCIA-VINIEGRAS,BENJAMIN, DIAZ FERNANDEZ,MARIO, LACA PEREZ,AMANDA.

Fecha de Solicitud: 4 de Agosto de 2008.

Fecha de Publicación de la Concesión: 15 de Marzo de 2010.

Fecha de Concesión: 2 de Marzo de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes: A23L1/32 (.Productos a base de huevos [2]), A23L1/32H.

Clasificación PCT: A23L1/32 (.Productos a base de huevos [2]).

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Descripción:

Fracciones diferenciadas de yema de huevo, su procedimiento de obtención y sus usos.

La presente invención se refiere a un método para la separación de fracciones de la yema de huevo. También se refiere a distintas fracciones obtenidas según este método y al uso de las mismas en distintos tipos de procesos. Ademas, se refiere a la mayonesa y a un sustitutivo de huevo obtenidos a partir de alguna de las fracciones separadas.

El campo de la técnica es el de ingeniería bioquímica y la invención sería de aplicación en diversos sectores industriales como el alimentario, el cosmético o el farmacéutico.

Estado de la técnica

La yema de huevo se encuentra constituida fundamentalmente por una compleja asociación de lípidos y proteínas en agua. Esto le confiere una gran importancia, tanto desde un punto de vista nutritivo como funcional, siendo empleada con fines diversos, no sólo a nivel doméstico, sino también industrial, incluyendo campos tan amplios como la alimentación, la cosmética y la medicina.

Por ello, sobre todo a partir de los anos 70, se han ido desarrollando diversas investigaciones destinadas a purificar los componentes de la yema para ser utilizados con aplicaciones específicas.

Las lipoproteínas de baja densidad han sido separadas por técnicas de ultracentrifugación, diálisis y cromatografía, empleando en la mayoría de los casos disolventes orgánicos (Evans, R.J., Flegal, C.J. y Bauer, D.H. 1975. "Molecular sizes of egg yolk very low density lipoproteins fractionated by ultracentrifugation". Poult. Sci. 54: 889-895; Bengtsson, G., Marklund, S.E. y Olivecrona, T. 1977. "Protein components of very low density lipoproteins from hen's egg yolk". Eur. J. Biochem. 79: 211-223; Stadelman W.J. y Cotterill, O.J. 1986. "Egg science and technology". AVI Publications. pp. 118-129).

Los lípidos de la yema han sido separados por centrifugación y extracción con butanol (que es eliminado finalmente por diálisis) o alternativamente por ultracentrifugación (Meslar, H.W. y White, H.B. 1978. "Preparation of lipid-free protein extracts of egg yolk". Anal. Biochem. 91: 75-81).

Ha habido igualmente intentos de eliminar el colesterol, el componente de la yema considerado perjudicial para la salud, por tratamientos con dióxido de carbono subcrítico o supercrítico (Moros, J.E., Franco, J.M. y Gallegos, C. 2002. "Rheological properties of colesterol-reduced, yolk-stabilized mayonnaise". JAOCS 79: 837-842; Gallegos, C., Franco, J.M. y Partal, P. 2004. "Rheology of food dispersions". Rheology Reviews: 19-65).

Las proteínas solubles de la yema de huevo han sido separadas por cromatografía de filtración en gel, previa separación por ultracentrifugación. (Burley, R.W. y Valdehra, D.V. 1979. "Chromatographic separation of the soluble proteins of hen's egg yolk: an analytical and preparative study". Anal. Biochem. 94: 53-59). Las proteínas de la yema de huevo se han separado, libres de lípidos, por cromatografía líquida de alta presión, usando ácido fórmico, isopropanol y acetonitrilo (Sheumack, D.D. y Burley, R.W. 1988. "Separation of lipid-free egg yolk proteins by high-pressure liquid chromatography using solvents containing formic acid". Anal. Biochem. 174: 548-551). La fosvitina ha sido obtenida con gran pureza, empleando sulfato magnésico que debe ser eliminado en tratamientos posteriores para mantener las propiedades de la proteína (Castellani, O., David-Briand, E., Guerin-Dubiard, C. y Anton, M. 2005. "Effect of aggregation and sodium salt on emulsifying properties of egg yolk phosvitin". Food Hydrocolloids 19: 769-776).

Se ha desarrollado un proceso de extracción que utiliza un método basado en la fuerza jónica, separando por centrifugación la yema de huevo en dos fracciones, una acuosa y otra granular. Los cambios de pH producen una ligera desnaturalización de las proteínas al aproximarse a sus respectivos pI, limitando en parte su posterior empleo en determinados usos industriales. En una etapa posterior la fase acuosa es aditivada con el fin de separar por una nueva centrifugación los fosfolípidos. Los fosfolípidos obtenidos son fraccionados en sus distintos componentes mediante cromatografía y utilizando cloroformo, metanol, y KCl. (Merkle, J.A. Y Ball, H.R. Jr. 2001. Aqueous extraction process to selectively remove phospholipid from egg yolks., U.S. Pat. Appl. Publ. 45 pp.).

Dada su gran importancia desde un punto de vista farmacológico, las inmunoglobulinas de la yema (IgY) han sido purificadas por diversas técnicas cromatográficas que conllevan complejas técnicas preparativas (Kwan, L., Li-Chan, E., Helbig, N. y Nakai, S. 1991. "Fractionation of water-soluble and -insoluble components from egg yolk with minimum use of organic solvents". J. Food Sci. 56: 1537-1541; Fichtali, J., Charter, E.A., Lo, K.V., Nakai, S. 1993. "Purification of antibodies from industrially separated egg yolk". J. Food Sci. 58(6): 1282-1290; Chiou, V. 2006. "Isolation of IgY antibodies from egg yolk of anseriform birds". U.S. Pat. Appl. Publ. 19 pp.).

Todos los métodos citados anteriormente obtienen compuestos con una pureza muy elevada pero, sin embargo, plantean ciertos inconvenientes tales como el uso de disolventes orgánicos que puede dañar la estructura y, por tanto, las propiedades de los compuestos purificados. Además muchos de los reactivos empleados no están autorizados en la industria alimentaria o cosmética. Otro de los problemas es que las técnicas empleadas son complejas y costosas, y, como consecuencia, poco o nada aplicables a nivel industrial. Así pues, en los procesos conocidos para la obtención de fracciones de yema de huevo, existe un antagonismo entre obtener compuestos altamente purificados y la sencillez del proceso utilizado y, en muchos casos, la calidad del producto final.

Descripción de la invención

La presente invención se refiere a un método para la separación de fracciones de la yema de huevo sin el empleo de disolventes orgánicos. También se refiere a distintas fracciones obtenidas según este método, y al uso de las mismas en procesos alimentarios, la elaboración de productos cosméticos y para la separación de la IgY. Además se refiere a la mayonesa y a un sustitutivo de huevo obtenidos a partir de alguna de las fracciones separadas.

El método de separación de fracciones de yema de huevo comprende las siguientes etapas:

    a) Separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas.
    b) Añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema.
    c) Mezclar las yemas con el agua.
    d) Ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH.
    e) Dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC.
    f) Centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos.
    g) Separar el sedimento, que a efectos de la presente invención se denomina fracción GR, y el sobrenadante.
    h) Añadir alginato de sodio en disolución al sobrenadante hasta una concentración final de alginato de sodio entre el 0.08% (p/v) y el 0.12% (p/v), y mezclar.
    i) Centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 15 y 30ºC y un tiempo mínimo de 10 minutos.
    j) Separar las dos fases obtenidas: una fase acuosa y una fase lipídica, que a efectos de la presente invención se denomina fracción CL.
    k) Eliminar, de la fase acuosa de la etapa anterior, las partículas lipídicas en suspensión para obtener lo que a efectos de la presente invención se denomina la fracción CA.

En una realización preferida, la yema es de huevo de gallina.

En otra realización preferida, el NaOH y el alginato de sodio son de grado alimentario. En el caso de la Unión Europea estos aditivos se corresponden con los siguientes números E: E-524 para el NaOH y E-401 para el alginato de sodio.

En una realización más preferida, el método además comprende una etapa de pasteurización previa a la etapa e). En una realización aún más preferida, el método además comprende una etapa de liofilización de la fracción GR obtenida en la etapa g).

En otra realización preferida, el método además comprende una etapa de liofilización de la fracción CL obtenida en la etapa j).

En otra realización preferida, el método además comprende una etapa de liofilización de la fracción CA obtenida en la etapa k).

Otro aspecto de la presente invención es la fracción GR obtenida a partir del método anterior, empleando yema de huevo de gallina y utilizando NaOH y alginato de sodio de grado alimentario. Esta fracción tiene a pH 3 una capacidad emulsionante de al menos el doble que la de la yema de huevo de gallina nativa. Además, esta fracción contiene como máximo el 6% (p/p) del colesterol inicial de la yema, y como mínimo el 40% (p/p) de sus proteínas.

Otro aspecto de la presente invención es la fracción GR obtenida a partir del método anterior, pasterizada pero liofilizada o no, empleando yema de huevo de gallina, y utilizando NaOH y alginato de sodio de grado alimentario. La capacidad emulsionante de esta fracción a pH 3 es de al menos el doble que la de yema de huevo de gallina nativa y contiene como máximo el 6% (p/p) del colesterol inicial de la yema y como mínimo el 40% (p/p) de sus proteínas.

Otro aspecto de la presente invención es la fracción CL obtenida según el método anterior, pasterizada o no y/o liofilizada o no. En la obtención de esta fracción se emplea yema de huevo de gallina y, en el caso de que el método incluya además una etapa de pasteurización, se utiliza NaOH y alginato de sodio de grado alimentario. Esta fracción contiene como mínimo el 60% (p/p) de los lípidos de la yema de huevo de gallina inicial.

Otro aspecto de la presente invención es la fracción CA obtenida según el método anterior, pasterizada o no. En la obtención de esta fracción se emplea yema de huevo de gallina y, en el caso de que el método incluya además una etapa de pasteurización, se utiliza NaOH y alginato de sodio de grado alimentario. Esta fracción contiene como mínimo el 80% (p/p) de las livetinas de la yema de huevo de gallina inicial.

Otro aspecto de la presente invención es la fracción CA obtenida según el método anterior, liofilizada, empleando yema de huevo de gallina. Esta fracción contiene como mínimo el 80% (p/p) de las livetinas de la yema de huevo de gallina inicial.

Otro objeto de la invención es el uso de la fracción GR obtenida según el método anterior, empleando yema de huevo de gallina y aditivos de grado alimentario, como agente emulsionante en procesos alimentarios.

Otro objeto de la invención es el uso de la fracción GR obtenida a partir del método anterior, pasterizada pero liofilizada o no, empleando yema de huevo de gallina, y utilizando NaOH y alginato de sodio de grado alimentario, como agente emulsionante en procesos alimentarios. En una realización preferida, el proceso alimentario es la preparación de mayonesa.

Otro objeto de la invención es la mayonesa con un contenido máximo de 1/6 del contenido en colesterol de una mayonesa que utilice como emulsionante la yema de huevo nativa, y cuya preparación se realiza a partir del uso como emulsionante de la fracción GR obtenida a partir del método anterior, pasterizada pero liofilizada o no, empleando yema de huevo de gallina, y utilizando aditivos de grado alimentario.

Otro objeto de la invención es el uso de la fracción GR obtenida según el método anterior empleando yema de huevo de gallina y aditivos de grado alimentario, como ingrediente en la elaboración de un sustitutivo de huevo.

Otro aspecto de la invención es un método para la elaboración de un sustitutivo de huevo que comprende las siguientes etapas:

    a) Mezclar la fracción GR, obtenida a partir del método anterior empleando yema de huevo de gallina y NaOH y alginato de sodio de grado alimentario, con clara de huevo en una proporción p/p de entre 2 y 3 g de clara por 1 g de fracción GR.
    b) Homogenizar la mezcla.
    c) Pasterizar la mezcla.

Otro objeto de la invención es el sustitutivo de huevo, obtenido a partir del método anterior para su elaboración, con un contenido máximo de 1/6 del contenido en colesterol de la misma masa de huevo natural.

Otro objeto de la invención es el uso de la fracción CL obtenida según el método anterior, pasterizada o no y/o liofilizada o no, y empleando yema de huevo de gallina, en la elaboración de productos cosméticos.

Otro objeto de la invención es el uso de la fracción CA obtenida según el método anterior, pasterizada o no, y empleando yema de huevo de gallina y, en el caso de que el método incluya además la etapa de pasteurización utilizando aditivos de grado alimentario, en la separación de la IgY por cromatografía de intercambio iónico.

La invención propone un método para obtener fracciones diferenciadas a partir de la yema de huevo. Además de económico y sencillo, este método es fácilmente escalable a nivel industrial, dado que se basa en la separación por centrifugación (método utilizado ampliamente en la industria). El método no emplea disolventes orgánicos y no produce cambios bruscos de pH, de modo que las fracciones obtenidas mantienen sus propiedades funcionales. Además el método propuesto permite el aprovechamiento íntegro de las fracciones obtenidas, logrando así una revalorización de la yema de huevo. El método tiene como ventaja adicional que genera escasos residuos que, por ser inocuos, pueden ser aprovechados como materias primas en otras industrias.

En las fracciones así obtenidas se concentran los distintos componentes que conforman la yema de huevo, pero en diferente proporción. Cada fracción, por tanto, tiene una composición característica que le confiere además unas propiedades funcionales específicas sin perder valor nutritivo ni propiedades.

Así pues a partir de la yema, se obtienen fracciones cuyas aplicaciones pueden extenderse a diversos sectores industriales, sirviendo como base para el desarrollo de nuevos productos de valor añadido. Algunas de las posibles aplicaciones se citan a continuación:

    - su empleo en la industria alimentaria, en la obtención por ejemplo de emulsiones alimentarias, así como en la obtención de un sustitutivo de huevo con un contenido en colesterol muy inferior al de los huevos naturales, o en la elaboración de otros productos alimentarios de características diferenciadas.
    - su empleo en la industria cosmética en la obtención de productos cosméticos.
    - su empleo en el sector de la química y farmacia, en la obtención de las IgY por cromatografía de intercambio iónico.

De este modo se consiguen fracciones que incrementan el campo de aplicación del huevo en la industria, ya que son fracciones suficientemente purificadas y de alta calidad, en contra de las que se obtienen con otros procesos, más complejos y de alto coste.

Explicación de una forma de realización preferente

Para una mejor comprensión de la presente invención, se exponen los siguientes ejemplos de realización preferente, descritos en detalle, que deben entenderse sin carácter limitativo del alcance de la invención.

Ejemplo 1

Separación de fracciones de yema de huevo

Se separaron manualmente las yemas y las claras de una docena de huevos de gallina y se eliminaron las membranas vitelinas con unas pinzas, recuperándose las yemas. Se añadieron 180 mL de agua a 120 mL de yema y se homogeneizó la mezcla con un agitador de imán, ajustándole el pH a 7.0 con NaOH 1M. Se dejó la mezcla a 4ºC durante 18 horas. Transcurrido ese tiempo se centrifugó a una velocidad de 10000 g, a 4ºC de temperatura durante un tiempo de 45 minutos. Se obtuvieron dos fases que se separaron por decantación, un sedimento (fracción GR) y un sobrenadante. A 243 mL de sobrenadante se le añadieron 27 mL de una disolución de alginato de sodio al 1% (p/v) y se mezcló. Se centrifugó la mezcla a una velocidad de 10000 g, a 20ºC de temperatura durante un tiempo de 15 minutos. Se obtuvieron dos fases que se separaron por decantación, una fase lipídica (fracción CL) y una fase acuosa. La fase acuosa se filtró por papel y se obtuvo la fracción CA. Finalmente las tres fracciones obtenidas (GR, CL y CA) se liofilizaron durante 24 horas a -70ºC y a 0.1 mbar.

Las características de las fracciones en fresco obtenidas por este método se muestran en la tabla 1 y las de las fracciones liofilizadas en la tabla 2. La capacidad emulsionante de la fracción GR se muestra en la tabla 3 en comparación con yema nativa.

TABLA 1
Características de las fracciones frescas obtenidas a partir de yema de huevo de gallina (se muestran los valores medios ± SD)

TABLA 2
Características de las fracciones liofilizadas obtenidas a partir de yema de huevo de gallina (se muestran los valores medios ± SD)

TABLA 3
Capacidad emulsionante de la fracción GR, tanto fresca como liofilizada, comparada con la capacidad emulsionante de la yema de huevo nativa

Ejemplo 2

Elaboración de mayonesa baja en colesterol

Se disolvieron 0.94 g de sal (NaCl) y 1.34 g de azúcar en 9 mL de vinagre de vino de 5º de acidez. Se añadieron a la disolución anterior como emulsionante 6 g de la fracción GR obtenida a partir del método que incluye la etapa de pasteurización. Inmediatamente, se añadieron 69 mL de aceite de girasol del siguiente modo: 19 mL a razón de 3 mL/min, y posteriormente los 50 mL restantes de 10 en 10 mL cada minuto. Simultáneamente se agitó a 8000 rpm con un homogenizador durante un tiempo total de 15 min desde el inicio de la adición del aceite.

El producto así obtenido mostró cualidades organolépticas semejantes a las de una mayonesa típica, pero su contenido en colesterol fue de sólo un 1/6 del contenido de una mayonesa elaborada utilizando como emulsionante yema de huevo. La tabla 4 muestra los resultados obtenidos en una prueba diferenciadora de graduación, a partir de las puntuaciones de un panel de cata para la mayonesa elaborada por el método descrito. La mayonesa elaborada según el ejemplo 2, obtuvo una puntuación global de 3.9 respecto a la mayonesa comercial empleada como referencia, cuyos atributos tenían un valor de referencia de 5.

TABLA 4
Valores medios para la mayonesa elaborada según el ejemplo 2 obtenidos en una prueba diferenciadora de graduación. Se comparó con una mayonesa comercial de referencia cuyos atributos tenían un valor de referencia de 5. Entre paréntesis se indica el peso estadístico de cada uno de los atributos evaluados

Ejemplo 3

Elaboración de un sustitutivo de huevo

Se mezclaron 15 g de la fracción GR con 35 g de clara de huevo. La mezcla se agitó a la vez que se pasterizaba durante 3 min a 55ºC en un baño de agua.

Ejemplo 4

Elaboración de una crema cosmética

Se preparó una mezcla (Fase A) con una masa final de 26.5 g, conteniendo 5 g de aceite de vaselina, 4 g de miristato de isopropilo, 3 g de ácido pirrolidoncarboxílico, 4 g de aceite de germen de trigo, 3 g de ácido esteárico, 5 g de sorbitan monooleato, 2 g de lanolina, 0.3 g de conservante y 0.2 g de antioxidante. Los ingredientes se mezclaron bien y se calentó la mezcla a 70ºC durante 10 minutos.

Por otro lado, se preparó una mezcla (Fase B) de 73.2 g de masa final, conteniendo 59.3 g de agua, 0.3 g de sal sódica de carboximetilcelulosa, 7 g de propilenglicol, 0.5 g de trietanolamina, 0.3 g de palmitato de vitamina A, 5.5 g de la fracción CL y 0.3 g de conservante. Los ingredientes se mezclaron bien y se calentó la mezcla a 70ºC durante 10 minutos.

La fase A se añadió lentamente sobre la fase B agitando a 8000 rpm con un homogenizador hasta formar una emulsión. El producto se dejó enfriar a 45ºC y se añadieron 0.3 g de perfume, homogenizando suavemente.




Reivindicaciones:

1. Uso de la fracción GR obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH de grado alimentario;
    e) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    f) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    g) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;

y con una capacidad emulsionante a pH 3 de al menos el doble que la de yema nativa y que contiene como máximo el 6% (p/p) del colesterol inicial de la yema y como mínimo el 40% (p/p) de sus proteínas, como agente emulsionante en procesos alimentarios.

2. Uso de la fracción GR obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH de grado alimentario;
    e) pasteurizar;
    f) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    g) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    h) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;

o según el método anterior que además comprende una etapa de liofilización de la fracción GR obtenida en la etapa h), y con una capacidad emulsionante a pH 3 de al menos el doble que la de yema nativa y que contiene como máximo el 6% (p/p) del colesterol inicial de la yema y como mínimo el 40% (p/p) de sus proteínas, como agente emulsionante en procesos alimentarios.

3. Uso según la reivindicación 2 donde el proceso alimentario es la preparación de mayonesa.

4. La mayonesa obtenida según la reivindicación 3 caracterizada porque su contenido en colesterol es como máximo 1/6 del contenido en colesterol de una mayonesa que utilice como emulsionante la yema de huevo nativa.

5. Uso de la fracción GR obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH de grado alimentario;
    e) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    f) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    g) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;

y con una capacidad emulsionante a pH 3 de al menos el doble que la de yema nativa y que contiene como máximo el 6% (p/p) del colesterol inicial de la yema y como mínimo el 40% (p/p) de sus proteínas, en la elaboración de un sustitutivo de huevo.

6. Método para la elaboración de un sustitutivo de huevo que comprende las siguientes etapas:

1) mezclar la fracción GR obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH de grado alimentario;
    e) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    f) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    g) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;

con clara de huevo en una proporción p/p de entre 2 y 3 g de clara por 1 g de fracción GR;

2) homogenizar la mezcla;

3) pasterizar la mezcla.

7. El sustitutivo de huevo obtenido según la reivindicación 6 caracterizado porque su contenido en colesterol es como máximo de 1/6 del contenido en colesterol de la misma masa de huevo natural.

8. Uso de la fracción CL obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) añadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH;
    e) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    f) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    g) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;
    h) añadir alginato de sodio en disolución al sobrenadante hasta una concentración final de alginato de sodio entre el 0.08% (p/v) y el 0.12% (p/v) y mezclar;
    i) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 15 y 30ºC y un tiempo mínimo de 10 minutos;
    j) separar las dos fases obtenidas: una fase acuosa y una fase lipídica (fracción CL);

o según el método anterior que además comprende una etapa de pasteurización previa a la etapa e) y donde se utiliza NaOH y alginato de sodio de grado alimentario;

o según el método anterior que además comprende una etapa de liofilización de la fracción CL obtenida en la etapa j);

que contiene como mínimo el 60% (p/p) de los lípidos de la yema inicial, en la elaboración de productos cosméticos.

9. Uso de la fracción CA obtenida según el método de separación de fracciones de la yema de huevo de gallina que comprende las siguientes etapas:

    a) separar las yemas y eliminar las membranas vitelinas;
    b) afiadir entre 1 y 2 volúmenes de agua por un volumen de yema;
    c) mezclar las yemas con el agua;
    d) ajustar el pH de la mezcla entre 6.5 y 7.5 con NaOH;
    e) dejar reposar la mezcla entre 6 y 20 horas a una temperatura entre 2 y 10ºC;
    f) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 2 y 10ºC y un tiempo mínimo de 30 minutos;
    g) separar el sedimento (fracción GR) y el sobrenadante;
    h) añadir alginato de sodio en disolución al sobrenadante hasta una concentración final de alginato de sodio entre el 0.08% (p/v) y el 0.12% (p/v) y mezclar;
    i) centrifugar la mezcla como mínimo a una velocidad de 10000 g, a una temperatura entre 15 y 30ºC y un tiempo mínimo de 10 minutos;
    j) separar las dos fases obtenidas: una fase acuosa y una fase lipídica (fracción CL);
    k) eliminar, de la fase acuosa de la etapa anterior, las partículas lipídicas en suspensión para obtener la fracción CA;

o según el método anterior que además comprende una etapa de pasteurización previa a la etapa e) y donde se utiliza NaOH y alginato de sodio de grado alimentario;

que contiene como mínimo el 80% (p/p) de las livetinas de la yema inicial, en la separación de la IgY por cromatografia de intercambio iónico.


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