Fracción plaquetaria derivada de sangre placentaria.

Procedimiento para preparar una fracción plaquetaria, que comprende:

• preparar sangre placentaria

,

• centrifugar la sangre placentaria a una rotación que oscila de 300 a 900 g durante un periodo que varía de 5 a 20 minutos;

• centrifugar la sangre placentaria a una rotación que oscila de 50 a 200 g durante un periodo que varía de 5 a 15 minutos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2009/006239.

Solicitante: FONDAZIONE IRCCS "CA' GRANDA - OSPEDALE MAGGIORE POLICLINICO".

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: VIA FRANCESCO SFORZA, 28 20122 MILANO ITALIA.

Inventor/es: REBULLA,PAOLO, LAZZARI,LORENZA, PARAZZI,VALENTINA, GREPPI,NOEMI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P7/00 (Medicamentos para el tratamiento de trastornos de la sangre o del fluido extracelular)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas dermatológicos > A61P17/02 (para tratar heridas, úlceras, quemaduras, cicatrices, queloides o similares)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/02 (Propagación de células individuales o de células en suspensión; Su conservación; Medios de cultivo para este fin)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen sustancias... > A61K35/16 (Plasma sanguíneo; Suero sanguíneo (sangre del cordón umbilical A61K 35/51))

PDF original: ES-2548454_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Fracción plaquetaria derivada de sangre placentaria

La presente invención se refiere a las fracciones plaquetarias que se pueden obtener a partir de sangre placentaria, con concentraciones altas de factores plaquetarios, así como geles y lisados derivados de las mismas. La invención se refiere adicionalmente a los procedimientos para preparar dichas fracciones plaquetarias a partir de sangre placentaria y a los usos de las mismas como tales o como geles plaquetarios o como lisados.

En la técnica se sabe que la sangre humana o animal contiene una fracción plaquetaria. Dicha fracción plaquetaria contiene plaquetas y otros factores o proteínas asociadas a las mismas y puede estar en forma de una suspensión, tal como p.ej. plasma plaquetario, o en una forma sólida, tal como p.ej. plasma liofilizado.

En particular, la fracción plaquetaria se puede encontrar en la parte sanguínea más ligera (plasma) y se puede dividir en dos porciones, es decir, plasma pobre en plaquetas (PPP) y plasma rico en plaquetas (PRP). La división se puede obtener mediante centrifugación adicional.

En el contexto de la presente invención, el término plasma pobre en plaquetas (PPP) se refiere a la porción plasmática más ligera e incluye plaquetas en una concentración por debajo de un millón por microlitro.

En el contexto de la presente invención, el término plasma rico en plaquetas (PRP) se refiere a la porción plasmática menos ligera e incluye plaquetas en una concentración por encima de un millón por microlitro.

La fracción plaquetaria, preferentemente la porción de PRP, se conoce en la técnica por ser útil tanto in vivo como in vitro.

La fracción plaquetaria se puede usar in vivo como un agente hemostático. Usando dicha fracción plaquetaria como agente hemostático cuando se lisan las plaquetas, también se puede observar un efecto terapéutico y estimulante en lesiones relacionadas con cirugía. Esto adicionalmente dio como resultado una segunda aplicación in vivo, es decir, la preparación de medicamentos para tratar lesiones y heridas o para incrementar el nuevo crecimiento de una variedad de tejidos dañados.

La fracción plaquetaria también se puede usar in vitro como parte de un medio de cultivo celular para mantener vitales los cultivos celulares in-vitro y/o para estimular el crecimiento de cultivos celulares in vitro. Dicho medio de cultivo se conoce en la técnica y se usa en la expansión o mantenimiento de protocolos para cultivos celulares, entre los que las células madre (p.ej. células madre mesenquimatosas o células madre hematopoyéticas). Dicho medio puede incluir la fracción plaquetaria, preferentemente Usada, tanto en forma de una solución como de un gel, que se mezcla con las células durante el cultivo celular.

Las fuentes de las fracciones plaquetarias que se conocen en la técnica son sangre de mamífero, en particular, sangre humana. Para el uso como un medio de cultivo, se usa una fracción plaquetaria que deriva de suero sanguíneo bovino. Para los usos in vivo, la fracción plaquetaria deriva de sangre periférica humana.

Dichas fuentes de componentes plaquetarios Implican desventajas y problemas bastante pertinentes.

No se puede usar la sangre periférica de un ser humano (sangre alogénica, de origen no autólogo, pero de un sujeto que pertenezca a la misma especie), puesto que el sistema inmunitario de un ser humano no reconoce dicha fracción plaquetaria como autóloga y dicho reconocimiento da como resultado diversas complicaciones médicas y clínicas que son bien conocidas en la técnica en lo que respecta a procedimientos y dispositivos para trasplantes.

En general, la disponibilidad de sangre autóloga es baja, puesto que puede ser peligroso extraer una cantidad suficiente de un paciente que no pueda tolerar dicha extracción, p.ej. debido a su edad avanzada, debilidad, complicaciones médicas y clínicas asociadas a dicha extracción. La sangre alogénica puede Implicar riesgos de infecciones y, como es bien conocido, la sangre alogénica compatible es difícil de encontrar.

El uso de la fracción plaquetaria que deriva de suero sanguíneo bovino o de ternera está limitado a las aplicaciones in vitro que no posibiliten los usos para tratamientos o interacciones con el cuerpo humano por motivos de salud obvios relacionados con la posible transmisión de infecciones de animales o contaminaciones a partir de tejidos biológicos animales.

El documento D1 enseña un procedimiento para preparar PRP que Implica las etapas de obtener sangre de vena umbilical a partir de recién nacidos a término; mezclar 9 volúmenes de sangre con 1 volumen de un 3,8 % de cltrato de sodio; y centrifugar la sangre cifrada en 250 g durante 12 minutos a temperatura ambiente.

El documento D2 se refiere a procedimientos para usar PRP, derivado de sangre de adulto, y/o células de fibroblasto y sus Usados para usos dermatológicos, en particular, para el tratamiento de la piel.

El documento D3 se refiere a composiciones que comprenden complejos de células humanas, fibras poliméricas y plaquetas (a partir de adultos), y se refiere a su uso para promover la cicatrización y para el tratamiento de hemorragias.

El documento D4 enseña un procedimiento para preparar concentrados plaquetarios a través de dos centrifugaciones (3000 g, 13 min y, a continuación, 170 g, 5 min), produciendo dicho procedimiento plasma rico en plaquetas y pobre en plaquetas. Se observa que el producto resultante contiene aproximadamente 0,37-106 leucocitos/ml (tabla 1, página 28).

El documento D5 enseña un procedimiento de una etapa para el aislamiento de plaquetas a partir de sangre para análisis. De acuerdo con el documento D5 "es una norma general que el número de centrifugaciones se mantenga en un mínimo para evitar la activación de las plaquetas".

Por lo tanto, todavía existe el problema de encontrar una fracción plaquetaria que pueda superar los problemas divulgados anteriormente, manteniendo, e incluso incrementando, su aplicación potencial.

Sorprendentemente, el solicitante ha descubierto que las fracciones plaquetarias derivadas de la sangre placentaria humana pueden satisfacer las necesidades referidas anteriormente y son más eficaces para los mismos usos.

Un primer aspecto de la presente invención, se refiere a un procedimiento para preparar una fracción plaquetaria que comprende las etapas de preparar sangre placentaria; centrifugar la sangre placentaria a una rotación que oscila de 300 a 900 g durante un periodo que varía de 5 a 20 minutos; y centrifugar la sangre placentaria, a una rotación que oscila entre 50 a 200 g durante un periodo que varía de 5 a 15 minutos.

Preferentemente, el procedimiento de la invención comprende adicionalmente una etapa de centrifugación llevada a cabo a una rotación en el intervalo de 1500 a 2500 g durante un periodo en el intervalo de 10 a 20 minutos.

De acuerdo con un modo de realización preferente, el procedimiento de la invención comprende una etapa de

activación de la fracción plaquetaria.

En particular, la etapa de activación comprende añadir y mezclar de 0,1 a 2 mi de gluconato de calcio y de 0,1 a 2 unidades NIH trombínicas de batroxobina por 5,5 mi de la fracción plaquetaria.

De acuerdo con un modo de realización preferente adicional, el procedimiento de la invención comprende adicionalmente una etapa de lisis de la fracción plaquetaria, preferentemente PRP, mediante centrifugación a una rotación de al menos 1700 g, preferentemente a una rotación en el intervalo de 1700 a 2500 g, durante un periodo en el intervalo de 5 a 20 minutos.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a una fracción plaquetaria obtenible/obtenida mediante el procedimiento... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Procedimiento para preparar una fracción plaquetaria, que comprende:

preparar sangre placentaria,

centrifugar la sangre placentaria a una rotación que oscila de 300 a 900 g durante un periodo que varía de 5 a 20 minutos;

centrifugar la sangre placentaria a una rotación que oscila de 50 a 200 g durante un periodo que varía de 5 a 15 minutos.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende adicionalmente una etapa de centrifugación llevada a cabo a una rotación en el intervalo de 1500 a 2500 g durante un periodo en el intervalo de 10 a 20 minutos.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que comprende adicionalmente una etapa de activación de la fracción plaquetaria.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicha etapa de activación compone añadir y mezclar de 0,1 a 2 mi de gluconato de calcio y de 0,1 a 2 unidades NIH trombínicas de batroxobina por 5,5 mi de la fracción plaquetaria.

5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 4, que comprende adicionalmente una etapa de lisis de la fracción plaquetaria, preferentemente PRP, mediante centrifugación a una rotación de al menos 1700 g, preferentemente a una rotación en el intervalo de 1700 a 2500 g, durante un periodo en el intervalo de 5 a 20 minutos.

6. Una fracción plaquetaria obtenible mediante el procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, conteniendo dicha fracción menos de 5x103 linfocitos/ml, preferentemente menos de 1x103 linfocitos/ml.

7. Un plasma pobre en plaquetas obtenible mediante el procedimiento de acuerdo con la reivindicación 2.

8. Un gel plaquetario obtenible mediante el procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3 o 4.

9. Un lisado plaquetario obtenible mediante el procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5.

10. El Usado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9 adsorbido sobre una matriz biocompatible, preferentemente, dicha matriz biocompatible es parte de una tirita o venda.

11. Un biorreactor que comprende la fracción plaquetaria de acuerdo con la reivindicación 6, el plasma pobre en plaquetas de acuerdo con la reivindicación 7, el gel plaquetario de acuerdo con la reivindicación 8 o el Usado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9.

12. La fracción plaquetaria de acuerdo con la reivindicación 6, el plasma pobre en plaquetas de acuerdo con la reivindicación 7, el gel plaquetario de acuerdo con la reivindicación 8 o el Usado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9 para su uso como un medicamento.

13. La fracción plaquetaria de acuerdo con la reivindicación 6, el plasma pobre en plaquetas de acuerdo con la reivindicación 7, el gel plaquetario de acuerdo con la reivindicación 8 o el lisado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9 para su uso en el tratamiento de un tejido animal dañado, preferentemente un tejido cutáneo ulcerado.

14. La fracción plaquetaria de acuerdo con la reivindicación 6, el plasma pobre en plaquetas de acuerdo con la reivindicación 7, el gel plaquetario de acuerdo con la reivindicación 8 o el lisado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9 para su uso en el tratamiento de una hemorragia.

15. Uso de la fracción plaquetaria de acuerdo con la reivindicación 6, el plasma pobre en plaquetas de acuerdo con la reivindicación 7, el gel plaquetario de acuerdo con la reivindicación 8 o el lisado plaquetario de acuerdo con la reivindicación 9 para la expansión in vitro y la maduración de células eucariotas, preferentemente células eucariotas humanas, más preferentemente células madre eucariotas humanas.