Fármacos pegilados reversibles.

Un compuesto de la fórmula:

(X) n - Y

en donde

Y es una porción de un droga que contiene al menos un grupo funcional que se selecciona de amino libre,

carboxilo, fosfato, hidroxilo y/o mercapto, y

X es un radical de la fórmula:**Fórmula**

en donde:

R1 es un radical que contiene una porción de polietilenglicol (PEG) lineal o ramificada con un peso molecular en el intervalo de 5000 a 40000 Da;

R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8)alquilo, (C1-C8) alcoxi, (C1-C8)alcoxialquilo, (C6-C10)arilo, (C1-C8)alcarilo, (C6-C10)ar(C1-C8)alquilo, halógeno, nitro, -SO3H, -SO2NHR, amino, amonio, carboxilo, PO3H2, y OPO3H2;

R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8)alquilo y (C6-C10)arilo;

R3 y R4, iguales o diferentes, se seleccionan del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8)alquilo y (C6- C10)arilo;

A es un enlace covalente cuando el radical se une a un grupo carboxilo, fosfato o mercapto del fármaco Y o A es -OCO- cuando el radical se une a un grupo amino o hidroxilo del fármaco Y;

n es un entero de al menos uno,

y sales farmacéuticamente aceptables de éste.

Fármacos pegilados reversibles Campo de la invención La presente invención se relaciona con la pegilación reversible de fármacos y con fármacos pegilados que se convierten lentamente en fármacos en condiciones fisiológicas.

Abreviaturas: ANP, péptido natriurético atrial; t-Boc, terc-butiloxicarbonilo; BSA, albúmina de suero bovino; DCC, N, N'diciclohexilcarbodiimida; DCU, diciclohexilurea; DMF, dimetilformamida; DTNB, 5, 5-dithiobis (2-ácido nitrobenzoico) ; ESMS, espectros de masas por ionización por electrospray; Fmoc, 9-fluorenilmetoxicarbonilo; Fmoc-OSu, Fmoc-Nhidroxisuccinimida éster; FMS, 2-sulfo-9-fluorenilo-metoxicarbonilo; GSH, glutatión reducido; hGH, hormona del crecimiento humano; HOSu, N-hidroxi-succinimida; HPLC, cromatografía en liquido de alto rendimiento; IFN-α2, interferón-α2 humano; ifnar2-EC, parte extracelular del receptor IFN-α2; MAL-FMS-NHS, N-[2- (maleimido-propionilo amino) -7-sulfo-fluoren-9-ilmetoxi -carboniloxi]succinimida. (Precursor 8) ; MAL-FMS-OSu, MAL-FMS-NHS; NHS, N-hidroxi-succinimida; PBS, solución salina tamponada con fosfato; PEG, polietilenglicol;PEG5000, 5, 000 Da-PEG; PEG40 o PEG40000, 40, 000 Da-PEG ramificado; PEG40-SH, a 40 kDa-PEG ramificado que contiene una porción sulfhidrilo; PEG40-OSu, PEG40-N-hidroxisuccinimida éster; SC, subcutáneo; TFA, ácido trifluoacético; TNBS, ácido 2, 4, 6-trinitrobencenosulfónico.

Antecedentes de la invención La mayoría de los fármacos peptídicos y proteicos son de vida corta y frecuentemente tienen una vida media circulatoria corta in vivo. Esto es particularmente válido para proteínas no glicosiladas de una masa molecular menor que 50 kDa. El corto tiempo de vida de las proteínas in vivo se atribuye a varios factores, que incluyen filtración glomerular en el riñón y proteólisis. Teniendo en cuenta que los fármacos peptídicos y proteicos no se absorben por vía oral, el mantenimiento prolongado de fármacos terapéuticamente activos en la circulación es una característica deseable de importancia clínica evidente. Las proteínas con masas moleculares por encima de ∼60 kDa evaden grandemente la filtración glomerular y no son, en su parte principal filtradas en el riñón. Por lo tanto ellas permanecen en la circulación por más tiempo que las proteínas más pequeñas.

Una estrategia atractiva para mejorar las propiedades clínicas de pequeños fármacos proteicos ha llegado a ser llamado como PEGilación (o pegilación, como se usa de aquí en adelante) . Mediante esta estrategia varias cadenas hidrofílicas de polietilenglicol (PEG) se unen covalentemente a la proteína para incrementar su masa molecular efectiva. Ventajas clínicas importantes se obtienen mediante la pegilación. Por ejemplo, el tiempo de vida in vivo se puede prolongar en algunos casos desde minutos a horas, debido a la interferencia estérica que protege los conjugados de la proteólisis in vivo y el incremento de la masa molecular, que imposibilita la filtración por el riñón. La pegilación de proteínas también disminuye la inmunogenicidad, presumiblemente mediante la protección de conjugados de ser reconocidos como antígenos extraños por el sistema inmune.

A pesar de las profundas ventajas frecuentemente obtenidas por la pegilación de proteínas terapéuticas, esta tecnología tiene de un inconveniente principal. Por un lado, la unión covalente de cadenas de PEG a las proteínas prolonga su tiempo de vida in vivo, mediante la protección de los conjugados de la proteólisis y escudándolos del sistema inmune. Por otro lado, la interferencia estérica de las cadenas de PEG frecuentemente conduce a una pérdida drástica o incluso suprime las potencias biológicas y farmacológicas de las proteínas en los conjugados (Fuertges y Abuchowski, 1990; Katre, 1993; Bailon y Berthold, 1998; Nucci y otros, 1991; Delgado y otros, 1992; Fung y otros, 1997; Reddy, 2000; Veronese, 2001) . En principio, esta deficiencia puede superarse mediante la introducción de las cadenas de PEG a través de un enlace químico que es sensible a la hidrólisis, o se puede escindir enzimáticamente por las proteasas séricas o esterasas. Claramente, una velocidad constante de hidrólisis es crucial. Por tanto, una condición de requisito previo es que la hidrólisis de las cadenas de PEG del conjugado tenga lugar a una velocidad lenta, y de una manera homogénea in vivo.

Sería altamente deseable diseñar derivados de PEG de proteínas o péptidos o pequeñas moléculas de fármacos de la que el PEG puede ser liberado por hidrólisis. Un conjugado de PEG reversible adecuado tendría que ser hidrolizado lentamente y espontáneamente en condiciones fisiológicas y permitiría la reactivación dependiente del tiempo de proteínas y péptidos pegilados inactivos.

Se propusieron varios métodos para pegilación reversible (Greenwald y otros, 1999, 2000; Lee y otros, 2001; Garman y Kalindjian, 1987; Zalipsky y otros, 1999) . Ellos adolecen, sin embargo, de los principales inconvenientes potenciales. Por

ejemplo, la dependencia de desprendimiento enzimático como una etapa determinante de la velocidad (Greenwald y otros, 1999, 2000; Lee y otros, 2001) de PEGs de los conjugados por proteasas séricas y/o esterasas podría no producir perfiles farmacocinéticos deseables in situ. Además, es dependiente de la disponibilidad de las enzimas. El conjugado unido por disulfuro no se escinde en el medio ambiente no reductor de los fluidos corporales (Zalipsky y otros, 1999) . Un conjugado pegilado reversible que todavía conserva una porción activa capaz de reaccionar con las funciones SH libres puede resultar en entrecruzamiento complejo no deseado (Garman y Kalindjian, 1987) . Sería muy deseable diseñar una versión de pegilación reversible que pudiera superar estas deficiencias.

La publicación internacional PCT núm. WO 98/05361 de los presentes solicitantes describe un nuevo enfoque conceptual para prolongar la vida media de los fármacos por derivatización de un fármaco que tiene al menos un amino libre, carboxilo, hidroxilo y/o grupos mercapto con una porción que es altamente sensible a bases y es removible en condiciones básicas suaves. El profármaco obtenido es inactivo, pero se somete a transformación en el fármaco activo bajo condiciones fisiológicas en el cuerpo. Los ejemplos de dichas porciones son los radicales 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) y 2-sulfo-9fluorenilmetoxicarbonilo (FMS) . De acuerdo con este concepto, los derivados de Fmoc y FMS de fármacos peptídicos tales como la insulina y la hormona del crecimiento humano, así como de los fármacos no peptídicos, tales como propanolol, cefalexina y piperacilina se han descrito en dicho documento WO 98/05361. Más tarde, los derivados FMS de citocinas se han descrito en el documento WO 02/36067, y derivados FMS de encefalina, doxorubicina, anfotericina B, gentamicina y hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) se divulgaron en el documento WO 02/7859.

La patente de Estados Unidos núm. 6, 433, 135 divulga un derivado pegilado de un análogo de la hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH o GnRH) en el que la porción de PEG está unida covalentemente a un residuo de serina de dicho análogo de LHRH. En el proceso de preparación de dicho análogo de LHRH-PEG mediante síntesis de péptidos en fase sólida, un residuo de serina pegilado tales como Fmoc-Ser (PEG) -OH o tBoc-Ser (PEG) -OH se introduce en el análogo de LHRH, y el análogo de LHRH-PEG producido se recupera (sin el grupo protector Fmoc o t-Boc) .

La solicitud de patente de Japón JP 3148298 describe conjugados de PEG-péptido, por ejemplo, el conjugado PEG-GnRH, obtenido al reaccionar el grupo guanidino de un residuo de arginina con PEG, mientras se protegen los grupos amino presentes en las moléculas.

La cita de cualquier documento en la presente no se debe pretender como una admisión de que tal documento sea técnica anterior pertinente o material considerado para la patentabilidad de cualquier reivindicación de la presente solicitud. Cualquier declaración acerca del contenido o una fecha de cualquier documento se basa en la información disponible por los solicitantes en el momento de la presentación y no constituye una admisión acerca de la exactitud de dicha declaración.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Se ha encontrado ahora, de acuerdo con la presente invención, que por la combinación de la tecnología de pegilación de proteínas con la tecnología de la derivatización con Fmoc o FMS o porciones similares removibles en condiciones básicas suaves, las principales deficiencias de la tecnología de pegilación de proteínas, principalmente la pérdida de potencias biológicas y farmacológicas en los conjugados de PEG in vivo, se puede superar.

Es así un objeto... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de la fórmula:

(X) n – Y

en donde Y es una porción de un droga que contiene al menos un grupo funcional que se selecciona de amino libre, carboxilo, fosfato, hidroxilo y/o mercapto, y X es un radical de la fórmula:

en donde: R1 es un radical que contiene una porción de polietilenglicol (PEG) lineal o ramificada con un peso molecular

en el intervalo de 5000 a 40000 Da; R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo, (C1-C8) alcoxi, (C1-C8) alcoxialquilo, (C6-C10) arilo, (C1-C8) alcarilo, (C6-C10) ar (C1-C8) alquilo, halógeno, nitro, -SO3H, -SO2NHR, amino, amonio, carboxilo, PO3H2, y OPO3H2; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo y (C6-C10) arilo; R3 y R4, iguales o diferentes, se seleccionan del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo y (C6C10) arilo; A es un enlace covalente cuando el radical se une a un grupo carboxilo, fosfato o mercapto del fármaco Y o A es -OCO-cuando el radical se une a un grupo amino o hidroxilo del fármaco Y; n es un entero de al menos uno,

y sales farmacéuticamente aceptables de éste.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R2, R3 y R4 cada uno es hidrógeno y A es -OCO- (de aquí en adelante "Fmoc") .

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R2 es -SO3H en la posición 2 del anillo de fluoreno, R3 y R4cada uno es hidrógeno, y A es -OCO- (de aquí en adelante "FMS") .

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R1 es un radical de la fórmula:

-R5-R6-PEG

en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en -NH-, -S-, -CO-, -COO-, -CH2-, -SO2-, -SO3-, -PO2-, y -PO3-, y R6 es un enlace o un radical a través del cual la porción de polietilenglicol (PEG) se une covalentemente a R5.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R5 es -NH-;

R6 se selecciona del grupo que consiste en -CO-, -COO-, -CH2-, -CH (CH3) -, -CO-NH-, -CS-NH-, -CO-CH2-NH-CO-, -CO-CH (CH3) -NH-CO-, -CO-CH2-NH-CO-NH,

Z es O, S o NH que se une a la porción PEG; y R7 se selecciona del grupo que consiste de un alquileno C1-C18 lineal o ramificado, un fenileno, un radical oxialquileno que tiene 3-18 átomos de carbono en la cadena principal, un residuo de un péptido que contiene 2-10 residuos de aminoácidos, y un residuo de un sacárido que contiene 1-10 residuos de un monosacárido.

6. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 5, en donde el radical R1 contiene una 25 porción ramificada de PEG que tiene un peso molecular de 40000 Da o de 5000 Da.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde Y es una porción de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, tal como un aminoglucósido antibiótico, preferentemente gentamicina o anfotericina; un fármaco antineoplásico, preferentemente ácido aminolevulínico, daunorrubicina o doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, tal como la insulina, preferentemente la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de las exendinas, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humano (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti

TNF-α.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 de la fórmula: en donde R2 es H o -SO3H en la posición 2 del anillo de fluoreno,

Y es el residuo de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, y

PEG es una porción lineal o ramificada de PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de 5000 a 40000 Da,

preferentemente la porción PEG es una molécula ramificada de 40000 Da o 5000 Da.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, en donde R2 es H, que se designa en la presente invención como conjugado (PEG-Fmoc) n-fármaco.

10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en donde n es un entero de 1 a 3, preferentemente 1 o 2.

11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el fármaco es un fármaco aminoglucósido antibiótico como la gentamicina o la anfotericina B; un fármaco antineoplásico tal como el ácido aminolevulínico, la daunorrubicina o la doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio tal como la insulina, preferentemente

la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de la exendina, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humano (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, en donde R2 es -SO3H, que se designa en la presente invención como (PEG-FMS) n-fármaco.

13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en donde n es un entero de 1 a 3, preferentemente 1 o 2.

14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 o 13, en donde la porción PEG es una molécula ramificada con un peso molecular de 40000 Da o 5000 Da.

15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el fármaco es un fármaco aminoglucósido antibiótico tal como la gentamicina o anfotericina B; un fármaco antineoplásico tal como el ácido aminolevulínico, la daunorrubicina o la doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, tal como la insulina, preferentemente la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de las exendinas, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humana (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora

de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

16. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15, en donde dicho péptido o fármaco proteico es la insulina humana, que se identifica en la presente invención como el conjugado PEG40-FMS-insulina; el IFN-α2, que se identifica en la presente invención como el conjugado PEG40-FMS-IFN-α2 o (PEG40-FMS) 2-IFN-α2; el PYY3-36 [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:12], que se identifica en la presente invención como el conjugado PEG40-FMS-PYY3-36; la hormona de crecimiento humano (hGH) , que se identifica en la presente invención como el conjugado PEG40-FMS-hGH o el (PEG40FMS) 2-hGH; el péptido natriurético atrial (ANP) [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:13], que se identifica en la presente invención como el conjugado PEG40-FMS-ANP; la exendina-4 [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:1], que se identifica en la 45 presente invención como el conjugado PEG40-FMS-exendina-4; la exendina-3 [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:2]; o dicho agonista de la exendina se selecciona del grupo que consiste de [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:3], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:4], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:5], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:6], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:7], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:8], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:9], y [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:10].

17. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 de la fórmula: en donde R2 es H o -SO3H en la posición 2 del anillo de fluoreno,

Y es el residuo de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, y

El PEG es una porción lineal o ramificada de PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de 5000 a 40000 Da,

preferentemente la porción PEG es una molécula ramificada de 40000 Da o 5000 Da.

18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 17, en donde Y es una porción de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, tal como un aminoglucósido antibiótico, preferentemente gentamicina o anfotericina B; un fármaco antineoplásico, preferentemente el ácido aminolevulínico, la daunorrubicina o la doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, tal como la insulina, preferentemente la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de las exendinas, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humana (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde: R5 es -S-; y R6 se selecciona del grupo que consiste de

en donde Z es O, S o NH.

20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R5 es -CO-; R6 se selecciona del grupo que consiste en -O-, -NH-, -NH-R7-COO-, -NH-R7-NH-, -NH-R7-CO-NH-,

Z es O, S o NH; y R7 se selecciona del grupo que consiste de un alquileno C1-C18 lineal o ramificado, un fenileno, un radical oxialquileno que tiene 3-18 átomos de carbono en la cadena principal, un residuo de un péptido que contiene 2-10

residuos de aminoácidos, y un residuo de un sacárido que contiene 1-10 residuos de monosacárido.

21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R5 es -CH2-; y R6 es - (CH2) n-S-o - (CH2) n-NH-, en donde n es 0 a 18.

22. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R5 es -SO2-; y R6 es -O-; -NH-o -CH2-CH2-S-.

23. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en donde:

R5 es -PO2-; y R6 es -O-o -NH-.

24. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 19 a la 23, en donde el radical R1 contiene una porción PEG ramificada que tiene un peso molecular de 40000 Da o 5000 Da.

25. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 24, en donde Y es una porción de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, tal como un aminoglucósido antibiótico, preferentemente gentamicina o anfotericina B; un fármaco antineoplásico, preferentemente el ácido aminolevulínico, la daunorrubicina o la doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, tal como la insulina, preferentemente la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de las exendinas, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humano (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

26. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula:

(X) n-Y

en donde Y es una porción de un droga que contiene al menos un grupo funcional que se selecciona entre el amino libre, el carboxilo, el fosfato, el hidroxilo y/o el mercapto, y X es un radical de la fórmula:

en donde: R1 es un radical que contiene una porción de polietilenglicol (PEG) ;

R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo, (C1-C8) alcoxi (C1-C8) alcoxialquilo, (C6C10) arilo, (C1-C8) alcarilo, (C6-C10) ar (Cl-C8) alquilo, halógeno, nitro, -SO3H, -SO2NHR, amino, amonio, carboxilo, PO3H2, y OPO3H2; R se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo y (C6-C10) arilo;

R3 y R4, iguales o diferentes, se seleccionan del grupo que consiste en hidrógeno, (C1-C8) alquilo y (C6-C10) arilo; A es un enlace covalente cuando el radical se une a un grupo carboxilo, fosfato o mercapto del fármaco Y, o A es -OCO-cuando el radical se une a un grupo amino o hidroxilo de la droga Y; y n es un número entero de al menos uno,

o una sal farmacéuticamente aceptable de ella, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

27. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 26, en donde R1 es un radical de la fórmula:

-R5-R6-PEG

en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en -NH-, -S-, -CO-, -COO-, -CH2-, -SO2-, -SO3-, -PO2-, y -PO3-; y R6 es un enlace o un radical a través del cual la porción PEG se une covalentemente a R5.

28. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 27, en donde R5 es -NH-; R6 se selecciona del grupo que consiste en -CO-, -COO-, -CH2-, -CH (CH3) -, -CO-NH-, -CS-NH-, -CO-CH2-NH CO-, -CO-CH (CH3) -NH-CO-, -CO-CH2-NH-CO-NH,

Z es O, S o NH que se une a la porción PEG; y R7 se selecciona del grupo que consiste de un alquileno C1-C18 lineal o ramificado, un fenileno, un radical oxialquileno que tiene 3-18 átomos de carbono en la cadena principal, un residuo de un péptido que contiene 2-10 residuos de aminoácidos, y un residuo de un sacárido que contiene 1-10 residuos de monosacárido.

29. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 28, en donde dicho compuesto tiene la fórmula:

en donde R2 es H o -SO3H en la posición 2 del anillo de fluoreno, Y es el residuo de un fármaco que contiene al menos un grupo amino, y El PEG es una porción PEG lineal o ramificada con un peso molecular en el intervalo de 200 a 200000 Da, preferentemente en el intervalo de 5000 a 40000 Da, con mayor preferencia la porción PEG es una molécula ramificada de 40000 Da o 5000 Da.

30. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 27 que comprende un compuesto que se designa en la presente invención como conjugado (PEG-FMS) n-fármaco, en donde R2 es -SO3H; n es un entero del 1 al 3, preferentemente 1 o 2; el PEG es preferentemente una molécula ramificada de 40000 Da o de 5000 Da; y el fármaco es un aminoglucósido antibiótico, fármaco tal como la gentamicina o la anfotericina B; un fármaco antineoplásico, tal como el ácido aminolevulínico, la daunorrubicina o la doxorrubicina; o un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, tal como la insulina, preferentemente la insulina humana, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de las exendinas, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humano (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

31. Un conjugado FMS pegilado de insulina de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en el tratamiento de la 35 diabetes mellitus y la hiperglicemia.

32. Un conjugado FMS pegilado de IFN-α2, preferentemente el PEG40-FMS-IFN-α2 o el (PEG40-FMS) 2-IFN-α2, de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en el tratamiento de una enfermedad viral tal como la hepatitis B o la hepatitis C, o para el tratamiento del cáncer, como el cáncer de vejiga, el cáncer de ovario, el melanoma, el cáncer de páncreas, el linfoma no Hodgkin, la leucemia de células peludas, o el sarcoma de Kaposi que se relaciona con el SIDA.

33. Un conjugado FMS pegilado de PYY3-36, preferentemente el PEG40-FMS-PYY3-36, de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en la reducción de la ingesta de alimentos y para el tratamiento de la obesidad y las enfermedades, afecciones o trastornos que se pueden aliviar mediante la reducción de la ingesta de alimentos tales como la

hipertensión, la dislipidemia, el riesgo cardiovascular, la resistencia a la insulina, y la diabetes mellitus.

34. Un conjugado FMS pegilado de la hGH, preferentemente el PEG40-FMS-hGH o el (PEG40-FMS) 2-hGH, de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en el tratamiento de niños de baja estatura patológicamente, o para el tratamiento anti-envejecimiento.

35. Un conjugado FMS pegilado de ANP, preferentemente el PEG40-FMS-ANP, de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares, la insuficiencia cardíaca congestiva, la hipertensión, la insuficiencia renal aguda o el síndrome de dificultad respiratoria del adulto (ARDS) .

36. Un conjugado FMS pegilado de una exendina o agonista de la exendina, preferentemente [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:1], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:2], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:3], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:4], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:5], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:6], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:7], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:8], [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:9] o [SEC. CON NÚM. DE IDENT.:10], de acuerdo con la reivindicación 16, para su uso en el tratamiento de la diabetes mellitus dependiente de la insulina, la diabetes mellitus no dependiente de insulina, o la Diabetes mellitus gestacional, o para la prevención de la hiperglucemia.

37. Un compuesto intermedio de la fórmula:

en donde:

R1es un radical de la fórmula:

- R5-R6-B;

R2 es H o -SO3H en la posición 2 del anillo de fluoreno;

25 B es maleimido, -S-CO-CH3 o una porción PEG; -

R5 se selecciona del grupo que consiste en -NH-, -S-, -CO-, -COO-, -CH2-, -SO2-, -SO3-, -PO2-, y -PO3-; y

R6 es un enlace o un radical por el cual el maleimido, -S-CO-CH3. o porción PEG se une a R5.

38. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 37, en donde:

R5 es -NH-;

R6 se selecciona del grupo que consiste en-CO-, -COO-, -CH2-, -CH (CH3) -, CO-NH-, -CS-NH-, -CO-CH2;NH-CO-, -

CO-CH (CH3) -NH-CO-, -CO-CH2-NH-CO-NH,

35

45 y -CO-R8-;

Z es O, S o NH;

R7 se selecciona del grupo que consiste en un alquileno C1-C18 lineal o ramificado, un fenileno, un radical

oxialquileno que tiene 3-18 átomos de carbono en la cadena principal, un residuo de un péptido que contiene 2-10

residuos de aminoácidos, y un residuo de un sacárido que contiene 1-10 residuos de monosacárido; y

R8 es un alquileno C1-C8 lineal o ramificado, preferentemente etileno, cuando B es maleimido o -S-CO-CH3.

39. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 38 identificado en la presente descripción como Precursores 1-8 de la

fórmulas:

55

40. Un conjugado en la presente invención identificado por la fórmula: (MAL-FMS) n-Y

en donde Y es una porción de un péptido o fármaco proteico que se selecciona del grupo que consiste de insulina, IFN-α2, PYY3-36, exendina-4, hGH y ANP, n es un número entero de al menos uno, preferentemente 1 o 2, y Y se une al radical FMS través de un grupo amino, y MAL-FMS es 2- (maleimido-propionil amino) -7-sulfo-fluoreno-9-il

metoxi-carboniloxi.

41. Un método para la preparación de un conjugado designado en la presente invención como (PEG-FMS) n-fármaco de la reivindicación 13, en donde el FMS es el 2-sulfo -9 radical-fluorenilmetoxicarbonilo, n es un entero del 1 al 3, preferentemente 1 o 2, más preferentemente 1, y el fármaco es un péptido o un fármaco proteico de peso molecular

bajo o medio, que comprende:

(i) hacer reaccionar un péptido o fármaco proteico de peso molecular bajo o medio con al menos un equivalente de MAL-FMS-NHS, obteniendo así un conjugado (MAL-FMS) n-péptido/fármaco proteico; y

(ii) hacer reaccionar el conjugado (MAL-FMS) n-péptido/fármaco proteico con el PEG-SH, para obtener así el 15 conjugado (PEG -FMS) n-péptido/fármaco proteico.

42. Un método de acuerdo con la reivindicación 41, en donde dicho péptido o proteína es la insulina, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de la exendina, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humana (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) o un análogo de ella, la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.

43. Un método para la preparación de un conjugado que se designa en la presente invención como (PEG-FMS) n-fármaco de la reivindicación 13, en donde el FMS es el 2-sulfo-9 radical-fluorenilmetoxicarbonilo, n es un entero del 1 al 3, preferentemente 1 o 2, más preferentemente 1, y el fármaco es un péptido o un fármaco proteico de peso molecular bajo o medio, que comprende:

(i) hacer reaccionar el MAL-FMS-NHS con el PEG-SH, para obtener así un conjugado PEG-FMS-NHS; y

(ii) hacer reaccionar un péptido o fármaco proteico de peso molecular bajo o medio con al menos un equivalente de conjugado PEG-FMS-NHS, para obtener así el conjugado (PEG-FMS) n-péptido/fármaco proteico.

44. Un método según la reivindicación 41 o 43, en donde la porción PEG tiene un peso molecular en el intervalo de 5000 a 40000 Da, preferentemente la porción PEG es una molécula ramificada de 40000 Da o 5000 Da.

45. Un método según la reivindicación 43, en donde dicho péptido o proteína es la insulina, un interferón tal como el IFN-α2, un agonista de PYY tal como el péptido PYY3-36, una exendina tal como la exendina-3 y la exendina-4 y los análogos y agonistas de la exendina, el péptido natriurético atrial (ANP) , la hormona de crecimiento humana (hGH) , la eritropoyetina, el TNF-α, la calcitonina, la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) , la hirudina, el glucagón, o un fragmento de anticuerpo monoclonal tal como el fragmento de anticuerpo monoclonal anti-TNF-α.