Composición farmacéutica de una antraciclina.

Una composición que comprende clorhidrato de nemorubicina incorporado en un sistema de micro-esferas sin la adición de ningún adyuvante de liberación

, caracterizado porque el clorhidrato de nemorubicina se carga en micro- esferas de hidrogel N-Fil modificadas con sulfonato.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2008/055299.

Solicitante: NERVIANO MEDICAL SCIENCES S.R.L..

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: VIALE PASTEUR, 10 20014 NERVIANO (MI) ITALIA.

Inventor/es: GERONI, MARIA, CRISTINA, MARTINI, ALESSANDRO, VALOTA, OLGA, CAPPELLA,PAOLO ELIA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K9/00 (Preparaciones medicinales caracterizadas por un aspecto particular)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/535 (que tienen ciclos con seis eslabones con al menos un nitrógeno y al menos un oxígeno como heteroátomos de un ciclo, p. ej. 1,2-oxazinas)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/704 (unidos a un sistema carbocíclico condensado, p. ej. senósidos, tiocolcicósidos, escina, daunorubicina, digitoxina)
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Composición farmacéutica de una antraciclina.
Composición farmacéutica de una antraciclina.

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DESCRIPCIÓN

Composición farmacéutica de una antraciclina

Resumen de la invención

La presente invención pertenece al campo de la terapia de enfermedades neoplásicas. En particular, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que contiene clorhidrato de nemorubicina ligado a micro- esferas y su uso en el tratamiento locorregional de lesiones tumorales en pacientes.

Antecedentes de la invención

El clorhidrato de nemorubicina, cuyos nombres químicos son clorhidrato de (8S-cis,2”S)-7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11- trihidroxi-8-(hidroxiacetil)-1-metoxi-10{[2,3,6-trideoxi-3-(2-metoxi-4-morfolinil)-α-L-lixo-hexopiranosil]oxi}-5,12- naftacenediona y clorhidrato de 3'desamino-3'[2(S)metoxi-4-morfolinil]doxorubicina(referida a continuación únicamente como clorhidrato de nemorubicina) de fórmula es un derivado de doxorubicina obtenido con la sustitución del -NH2 en la posición 3' en la parte del glúcido con un grupo metoximorfolino. El compuesto se sintetizó en el transcurso de un programa de investigación dirigido a la identificación de nuevas antraciclinas con modos de actuación novedosos, al menos parcialmente, y que posean un amplio espectro de actividad, incluyendo actividad contra tumores resistentes a multitud de fármacos y toxicidad más baja que la doxorubicina en lo referente a cardiotoxicidad. La patente US nº 4672057 divulga y reivindica el clorhidrato de nemorubicina, el proceso de preparación, las composiciones farmacéuticas y los usos médicos del mismo.

De acuerdo con el documento WO 00/15203, se puede administrar clorhidrato de nemorubicina vía arteria hepática, por ejemplo, como una infusión de aproximadamente 15 min a aproximadamente 30 min cada 4 semanas, o preferentemente, como bolo de 5-10 min cada 4-8 semanas, a pacientes adultos con, por ejemplo, cáncer hepático metastásico, o bien pacientes con cáncer colorrectal que han progresado tras recibir quimioterapia intravenosa o quimioterapia intrahepática con 5-fluorouracilo o 5-fluorodeoxiuridina (FUDR), o pacientes con carcinoma primario de hígado tal y como, por ejemplo, carcinoma hepatocelular o colangiocarcinoma que involucre el hígado. De acuerdo con el documento WO 00/15203, el clorhidrato de nemorubicina se puede administrar a un paciente con una dosificación en un intervalo desde, p.ej. aproximadamente 100 mcg/m2 hasta aproximadamente 1000 mcg/m2, preferentemente desde 100 mcg/m2 hasta aproximadamente 800 mcg/m2, por ejemplo, en una dosificación de aproximadamente 200 mcg/m2.

El documento WO 04/75904 describe y reivindica el uso del clorhidrato de nemorubicina para la preparación de un fármaco para el tratamiento de un tumor hepático humano, que comprende la administración intrahepática de clorhidrato de nemorubicina vía arteria hepática con una dosificación que va desde, p.ej. aproximadamente 100 mcg/m2 hasta aproximadamente 800 mcg/m2, preferentemente desde aproximadamente 200 mcg/m2 hasta aproximadamente 600 mcg/m2, por ejemplo en una dosificación de aproximadamente 200, 400 o 600 mcg/m2 cada 6 semanas.

Se han evaluado dos programas de administración en el marco de Fase I: en un ensayo se administró clorhidrato de nemorubicina por la arteria intrahepática (IHA) como una infusión de 30 minutos en salino cada 4 semanas; en otro ensayo, se administró clorhidrato de nemorubicina mediante IHA en forma de infusión de 5 a 10 minutos con aceite yodado cada 6-8 semanas. Como se describe en los documentos WO 04/082579 y WO 00/066093, el clorhidrato de nemorubicina está indicado como componente terapéutico en combinación con radioterapia, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor de la topoisomerasa I/II o un derivado de platino. Suarato, A y col., ACS Symposium Series (1995), 574 (Anthracycline Antibiotics), páginas 142-55 y la patente US No. 5,304,687 divulgan intermedios clave y procesos para una síntesis mejorada del clorhidrato de nemorubicina.

Los documentos CN 101011341, CN 1923284, CN1857723, CN1846686 y CN1824319 (Jinan Kangquan Pharmaceutical Science and Technology Co., Ltd.) divulgan inyecciones de liberación lenta, las cuales comprendenmicro-esferas o microbalones que consisten en principios activos anticancerígenos (p.ej. amrubicina, taxano, antibióticos antitumorales) y adyuvantes de liberación lenta y disolventes.

Actividad antitumoral del clorhidrato de nemorubicina El clorhidrato de nemorubicina es un intercalador de ADN, diferente de las antraciclinas clásicas en que actúa primordialmente a través de las topoisomerasas I como se demuestra por el predominio de lesiones de ADN producidas siendo rupturas de ADN de cadena simple. El compuesto muestra eficacia en tumores resistentes a diferentes fármacos anticancerígenos tales como derivados de platino, agentes alquilantes, inhibidores de topoisomerasas I y II, taxanos, antraciclinas y alcaloides de la vinca. Adicionalmente, en contraste con los agentes alquilantes y los derivados de platino, es eficaz en células con un incremento de la ruta metabólica de reparación de la escisión de nucleótidos o con deficiencia en la reparación de bases desreguladas.

Se seleccionó el clorhidrato de nemorubicina para evaluación clínica basándose en su amplio espectro de actividad en modelos experimentales y por su menor cardiotoxicidad en comparación con la doxorubicina a iguales dosis mielotóxicas en animales.

Cuando se administró vía intravenosa (IV) el clorhidrato de nemorubicina como único agente a pacientes, en el marco de estudios clínicos en Fase I-II, se observó actividad anticancerígena en cánceres de cabeza y cuello, cérvix y colorrectal (en estudios en Fase I). En estudios en Fase I B, se informó de respuestas parciales (PRs) en cánceres de pulmón de células no pequeñas, cáncer renal y cáncer de origen desconocido. Se informó repetidamente de regresiones en lesiones de hígado de cáncer primario colorrectal y renal. En un estudio de Fase II en sarcomas, se informó de 2 PRs de entre 26 pacientes que podrían tenerse en cuenta. En las investigaciones en Fase II en pacientes con cáncer de mama con metástasis en hígado, se observaron en total 4 respuestas objetivas de entre 7 pacientes tratados. El nivel de actividad antitumoral alcanzado en este estudio fue fuertemente indicativo de la eficacia del clorhidrato de nemorubicina en lesiones de hígado y respalda la investigación adicional en cáncer primario y secundario de hígado.

Estudios clínicos como agente único por la ruta de la arteria intrahepática (IHA)

Los hallazgos de la eficacia presentada en lesiones hepáticas en estudios de Fase I-II por la ruta IV, juntamente con la evidencia de la eficacia antitumoral en el hígado en modelos preclínicos, proporcionaron la base lógica para la investigación específica en carcinoma hepatocelular (HCC). Se escogió el enfoque locorregional para disminuir la toxicidad sistémica observadatras la administración IV.

Un estudio de Fase I con salino como un vehículo se realizó por IHA en Europa en pacientes con HCC y con metástasis hepática de otros tumores sólidos primarios. Adicionalmente, un estudio de Fase I/II y un estudio aleatorio de Fase II/III por la ruta IHA, ambos con aceite yodado (Lipiodol ) como vehículo, se llevaron a cabo en China en pacientes con HCC no extirpable (Pacciarini, MA y col., Journal of Clinical Oncology, 2006 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 24, No. 18S, 2006:14116).

En conjunto, considerando la experiencia clínica colectiva recogida con el clorhidrato de nemorubicina administrado por la ruta IHA (con o sin aceite yodado) a pacientes con HCC, en Europa y China, 57 pacientes con HCC se tuvieron en cuenta para considerar la eficacia.

Centrándose en lesiones hepáticas perfundidas, había en conjunto 11/57 CR/PRs confirmados (p.ej. un RR de 19,3%, 95% c.i. 10,0-31,9%) durante 1 a más de 54 o meses. Se informó de estabilizaciones de la enfermedad que duraron ≥ 3 meses (duración media de 4,5 meses, en un intervalo de 3-12,5) en 17/57 pacientes, la mayoría de los cuales estaban en estados avanzados de la enfermedad (AJCC Estado III, IIIA y IVA). En cuanto a lo que se refiere a seguridad, el clorhidrato de nemorubicina mostró un perfil de seguridad manejable en términos de toxicidad hepática y hematológica, así como de nausea y vómitos. La buena tolerancia y el nivel de actividad antitumoral conseguido en estos estudios sugiere firmemente el uso de clorhidrato de nemorubicina en una aproximación locorregional para el tratamiento de lesiones tumorales.

Quimioembolización En el campo de terapias locorregionales la quimioembolización es un enfoque mínimamente invasivo para el tratamiento paliativo de tumores no extirpables. Los tumores referidos son cánceres primarioso metastásicos, sarcomas o carcinosarcomas encontrados en el cerebro, el sistema nervioso central, riñones, hígado, vesícula biliar, cabeza y cuello, cavidad oral, tiroides, piel, membranas mucosas, órganos glandulares, vasos sanguíneos, tejido óseo, nódulos linfáticos, pulmones, esófago, estómago, glándulas lácteas, páncreas, ojos, nasofaringe, matriz, ovarios, endometrio, cérvix, glándula prostática, vejiga, colon y recto.

La quimioembolización se emplea también como terapia adjunta a la resección hepática o como puente al trasplante de hígado, así como anterior a la ablación por radiofrecuencia (Aoki, T y col., Arch Surg. 2004 Jul; 139(7):766-74; Bruix, J y col. Gastroenterology. 2004 Nov; 127:S179-88). La quimioembolización se ha convertido en uno de los procedimientos realizados más habitualmente en radiología intervencionista.

La quimioembolización implica típicamente la inyección de agentes quimioterapéuticos, con o sin lipiodol y/o agentes embólicos, en los vasos sanguíneos que alimentan el tumor, p. ej. en la rama de la arteria hepática que alimenta las lesiones tumorales a nivel de hígado (Geschwind, J.Vasc Interv Radiol. 2002;13(10):991-4), en la arteria pulmonar izquierda o derecha que alimenta las lesiones tumorales a nivel de pulmón (Vogl TJ. y col.

Radiology 2005;234:917-22). Los agentes embólicos mantienen el agente quimioterapéutico en el tumor mediante el bloqueo del flujo en otras áreas del cuerpo.

Actualmente, hay una intensa actividad investigadora en el área de la nanotecnología y los sistemas de liberación de fármacos. Los portadores ideales cargados de fármaco deberían entregar el agente de forma precisa, liberando el contenido de una forma controlada y constantey conseguir una alta concentración de fármaco intratumoral durante un periodo suficiente, sin dañar los tejidos normales circundantes. Muchos sistemas de liberación de fármacos para tratamientos locorregionales de tumores, tales como micro-esferas, han sido probados recientemente (Constantin, M y col., Int J Pharm. 2004 Nov 5;285(1-2):87-96). Las micro-esferas son esencialmente partículas sólidas porosas (50-1200 micrometros de diámetro), las cuales pueden localizar su carga de fármaco mediante captura física en vasos sanguíneos (quimioembolización) y mantener la acción del agente terapéutico mediante liberación controlada.

Las micro-esferas se pueden fabricar a partir de una amplia variedad de materiales poliméricos, tales como alcohol polivinílico (PVA), ácido 2-acrilamido-2-metil-1-1-propano-sulfónico (AMPS), poli(láctido-co-glicólido) (PLCG).

En los documentos WO2004/071495 y WO2005/087193, se cargaron micro-esferas con un único agente quimioterapéutico, como la doxorubicina, y se infundió intra-arterialmente para actuar selectivamente sobre el tumor.

Micro-esferas de hidrogel N-Fil modificadas con sulfonato (alcohol polivinílico), nombre comercial micro-esferas DC Bead™ (Biocompatibles) y así denominadas de aquí en adelante, se han descrito como capaces de cargar doxorubicina en un artículo de Lewis y col. (J. Vasc. Interv. Radiology; 2006; 17-335-442).

Micro-esferas de trisacrilgelatina recubierta de colágeno, nombre comercial micro-esferas Embosphere® (BioSphere Medical), y micro-esferas expandibles, nombre comercial HepaSphere™ (BioSphere Medical), así denominadas de aquí en adelante, se han descrito como capaces de cargar agentes anticancerígenos (Vallée JN y col. J Vasc Interv Radiol 2003;14:621-8; Osuga K y col. JVIR 2002;13:929-34).

Los determinantes críticos para definir la actividad farmacológica de quimioembolización realizada con micro- esferas se representan mediante: - conservación de la conformación nativa de las micro-esferas (en términos de tamaño, forma esférica y plasticidad), para garantizar la oclusión adecuada del lumen del vaso, evitando la embolización distal.

- velocidad de carga de los agentes quimioterapéuticos en las micro-esferas, para garantizar la administración de la dosis terapéutica.

- velocidad de liberación de los agentes quimioterapéuticos desde las micro-esferas, para garantizar la disponibilidad de los agentes quimioterapéuticos de una manera constante y conseguir una alta concentración intratumoral delfármaco durante un periodo suficiente de tiempo, sin dañar el tejido normal circundante.

- cinéticas de liberación de los agentes quimioterapéuticos desde las micro-esferas, para garantizar una liberación completa y prolongada de los agentes quimioterapéuticos.

- uso de una cantidad apropiada de micro-esferas para garantizar la administración de una dosis precisa de agente quimioterapéutico.

El principio activo incorporado en el sistema influye habitualmente de forma significativa en el rendimiento clínico de las micro-esferas mediante alteración o modificación de sus parámetros físico-químicos, tales como, por ejemplo la distribución del tamaño de partícula, afectando, por tanto, a la oclusión esperada del lumen de los vasos, evitando la embolización distal (p.ej. si la micro-esfera se contrae por la presencia del fármaco, los riesgos de embolización distal se incrementan), la cinética de liberación del principio activo desde la formulación y estabilidad del fármaco.

Sorprendentemente, hemos encontrado una forma de superar estos inconvenientes.

Breve descripción de las figuras

La invención también se ilustra mediante las figuras adjuntas descritas a continuación.

FIG. 1 muestra los exámenes microscópicos de micro-esferas DC Bead™ (tamaño 100-300 µm), preparadas en suspensión en el Ejemplo 1 con 1 hora de carga (fotografías A, B y C), tras la elución el día uno (fotografías D, E y F) y tras la elución el día 7 (fotografías G, H e I) en una solución salina de tampón fosfato (PBS).

Las figuras codificadas A, D y G son controles, micro-esferas sin fármaco; las figuras codificadas B, E y H muestran micro-esferas cargadas con clorhidrato de nemorubicina, 1 mg/mL y las figuras codificadas C, F e I muestran micro-esferas cargadas con doxorubicina, 25 mg/mL.

FIG. 2 muestra los exámenes microscópicos de la suspensión de micro-esferas DC Bead™ preparada en el Ejemplo 2, después de 1h cargando diferentes cantidades de clorhidrato de nemorubicina (sin fármaco, 0,1, 0,5 y 1 mg/mL).

FIG. 3 muestra el gráfico obtenido del análisis HPLC/MS de la cinética de liberación de clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina desde micro-esferas DC Bead™ preparadas en el Ejemplo 3, que fueron cargadas respectivamente con 1 mg de clorhidrato de nemorubicina / mL de micro-esferas DC Bead™ o 1 mg de doxorubicina / mL de micro- esferas DC Bead™ en una solución salina de tampón fosfato (PBS). En el eje Y se indican las cantidades de clorhidrato de nemorubicina (●) y doxorubicina (■) eluídos en mg de fármaco / mL de micro-esferas DC Bead™, en el eje X los tiempos de elución en horas.

FIG. 4 muestra los exámenes microscópicos de la suspensión de micro-esferas DC Bead™ 16 días después de la liberacióndel clorhidrato de nemorubicina (N) o doxorubicina (D); CND no controla ningún fármaco.

Descripción detallada de la invención

El primer objeto de esta invención es una composición que comprende clorhidrato de nemorubicina incorporada en un sistema de micro-esferas sin la adición de ningún adyuvante de liberación, caracterizada porque el clorhidrato de nemorubicina se carga en micro-esferas de hidrogel N-Fil modificadas con sulfonato.

Se debe advertir que no hay cambios físico-químicos en las micro-esferas cargadas con clorhidrato de nemorubicina, permitiendo así una administración del fármaco más reproducible y segura que las que se pueden conseguir con otros fármacos oncológicamente activos previstos para este uso. Dichas micro-esferasse pueden preparar como se describe previamente en el citado artículo de Lewis y col.

Preferentemente, el clorhidrato de nemorubicina se carga en una concentración en el intervalo de 0,1 a 10 mg de fármaco / mL de micro-esferas. Esta carga se puede llevar a cabo de manera reproducible en ambos términos de carga y liberación del clorhidrato de nemorubicina desde la propia formulación.

Lo que se ha encontrado de forma sorprendente es que, haciendo análisis de tamaños al microscopio mediante una técnica de análisis de imágenes, las micro-esferas cargadas con clorhidrato de nemorubicina presentan características únicas con respecto a lo conocido previamente en la técnica. De hecho, las micro-esferas no sólo mantienen su forma esférica, sino que mantienen su forma original como antes de la carga. No se observa agregación en las micro-esferassin carga. Estas características se mantienen durante todo el tiempo estimado de liberación de la formulación que puede durar desde unas pocas horas hasta 15 días.

Todas las características anteriores no son sólo inesperadas, sino que ofrecen una gran ventaja para la administración de la formulación de clorhidrato de nemorubicina en micro-esferasfrente a otros fármacos en términos de facilidad, reproducibilidad y resultados cuantitativos en lo que respecta al proceso de carga; en términos de perfiles de liberación reproducibles y predecibles de las esferas cargadas (p.ej. siendo la superficie de liberación constante, la cinética de liberación de la sustancia activa de la formulación se puede predecir fácilmente); y una administración y control de la formulación más reproducible a lo largo del entorno clínico.

No se necesita recalcular la cantidad y volumen de las micro-esferas para ser administradas a los pacientes durante la administración del sistema clorhidrato de nemorubicina/micro-esferas, ni tampoco ninguna manipulación a lo largo de la práctica de administración que es necesaria para otros sistemas fármaco/micro- esferas,contrayéndose el material por la presencia del fármaco activoy siendo necesario el uso de cálculos empíricos para predecir con antelación el impacto de la contracción de la formulación en la cantidad de micro- esferas y el tamaño de las micro-esferasque deben ser administradas para obtener una embolización correcta.

Estas características únicas de la formulación de clorhidrato de nemorubicina/micro-esferas cargadas son evidentes cuando los datos se comparan con los del artículo descrito en el artículo de bibliografía de Lewis y col.

citado anteriormente, donde la carga de doxorubicina (un fármaco de la misma clase química de antraciclinas como es el clorhidrato de nemorubicina) en las micro-esferas DC Bead™ no sólo es dependiente de la dosis (p.ej.

El tiempo de carga y la eficacia varían de acuerdo a la relación entre fármaco y micro-esferas), sino que también induce una contracción severa de las micro-esferas DC Bead™ e influye en la propia cinética de velocidad de liberación del fármaco desde el sistema de entrega tanto in vitro como in vivo.

Adicionalmente, el efecto antitumoral extendido del clorhidrato de nemorubicina durante la administración mediante las micro-esferas fue sorprendente, siendo el principio activo químicamente estable únicamente durante 24 horas a temperatura ambiente y siendo sus productos de degradación inactivos en lo que se refiere a citotoxicidad y eficacia antitumoral.

Es evidente que la formulación de clorhidrato de nemorubicina/micro-esferas es químicamente más estable que el principio activo per cuando se administra como terapia locorregional y que el sistema de micro-esferas ejerce un efecto protector en cuanto a la estabilidad química del clorhidrato de nemorubicina, permitiendo por tanto la liberación de un modo controlado y continuo exclusivamente de la parte activa.

La composición farmacéutica que contiene clorhidrato de nemorubicina ligado a micro-esferas permite una velocidad de liberación del clorhidrato de nemorubicina desde las micro-esferas que permite garantizar la disponibilidad del clorhidrato de nemorubicina de forma continua y lograr una concentración de fármaco capaz de matar células tumorales.

Adicionalmente, la cinética de liberación de clorhidrato de nemorubicina desde las micro-esferas garantiza una velocidad de liberación elevada y prolongada de clorhidrato de nemorubicina.

La carga de clorhidrato de nemorubicina, en todas las concentraciones clínicamente útiles, tuvo como resultado el mantenimiento sin cambios del tamaño promedio de las micro-esferas. Esto permite una embolización precisa de los vasos tumorales. Contrariamente, las micro-esferas comerciales cargadas con doxorubicina presentan una disminución en su tamaño promedio; esto puede influir en la precisión de la liberación del fármaco en la región objetivo, pudiendo reducir la eficacia contra el tumore incrementar el riesgo de complicaciones.

En articular, la composición conteniendo clorhidrato de nemorubicina ligado a micro-esferas preserva la conformación nativa de las micro-esferas (en términos de tamaño, forma esférica y plasticidad) y garantiza la oclusión apropiada del lumen del vaso, evitando la embolización distal.

En resumen, las micro-esferas pueden cargarse con facilidad con clorhidrato de nemorubicina en dosificaciones de uso clínico. Los datos de elución y carga de clorhidrato de nemorubicina/micro-esferas apoyan la consideración del clorhidrato de nemorubicina como fármaco adecuado para la quimioembolización mediante micro-esferas.

La carga de una cantidad de clorhidrato de nemorubicina clínicamente eficaz en las micro-esferas ha sido comprobada en el intervalo entre 0,1 y 10 mg de fármaco / mL de micro-esferas y ocurre de una forma tan reproducible que el mismo procedimiento y estándar de tiempo de carga se puede aplicar independientemente de la concentración del fármaco en el vehículo de carga. Esta característica ofrece también una ventaja única en términos de capacidad de distribución del sistema, garantizando no sólo una titulación precisa, exacta y reproducible del fármaco en el ámbito clínico, sino incluso una embolización más precisa y reproducible.

Las micro-esferas cargadas con clorhirato de nemorubicina son un tratamiento de quimioembolización más seguro en comparación con los conocidos actualmente. Otras micro-esferas comerciales cargadas por ejemplo con doxorubicina permanecen cargadas con altos niveles de fármaco durante varios días y, debido a la contracción severa de las micro-esferas cargadas con doxorubicina, la doxorubicina puede ser liberada muy lejos del área del tumor incrementando los efectos adversos.

La presente invención proporciona también una composición tal y como se describe anteriormente para utilizar en el tratamiento de pacientes que sufren un tipo de cáncer compatible con el tratamiento locorregional, preferentemente un tumor primario confinado en el hígado, tal y como p. ej. Un carcinoma hepatocelular o un colangiocarcinoma o metástasis hepática.

La composición que se administra al paciente necesitado de emboloterapia que padece un tumor, por ejemplo un carcinoma hepatocelular, es una suspensión acuosa de partículas hinchadas que contienenel fármaco. Frecuentemente es deseable que la suspensión se mezcle antes de su administración con un agente de contraste de imagen, tal como un agente radio-opaco convencional, como el que se usa para composiciones embólicas de tipo gel.

Se administra el clorhidrato de nemorubicina en una dosificación en el intervalo de aproximadamente 0,1 a 10 mg/m2. Más preferentemente, el curso de terapia empleado es de 0,1 a 5 mg/m2.

La composición farmacéutica que contiene el clorhidrato de nemorubicina ligado a las micro-esferas permite una carga rápida (aproximadamente 1-2 horas de incubación) y una velocidad de carga de clorhidrato de nemorubicina en las micro-esferas (>99%) capaz de garantizar una fácil administración de dosis terapéuticas de clorhidrato de nemorubicina a los pacientes.

En una realización más específica de la presente invención, la dosis apropiada de clorhidrato de nemorubicina, preferentementedisuelta previamente en una solución adecuada, se mezcla con una cantidad adecuada de micro- esferas.

La selección del tamaño de las micro-esferas se base en el tamaño del vaso vascular objetivo. La siguiente tabla ilustra el intervalo de tamaños disponibles de las micro-esferas: Tamaño de las micro-esferas 50 - 100 µm 100 - 300 µm 300 - 500 µm 500 - 700 µm 700 - 900 µm 900 - 1200 µm La solución reconstituida de clorhidrato de nemorubicina se debe añadir a las micro-esferas y agitar suavemente para facilitar la mezcla.

La carga requiere un mínimo de 20 minutos para los tamaños de micro-esferas más pequeños y hasta 3 horas para los tamaños más grandes de micro-esferas.

El catéter para su administración debe ser introducido en el vaso objetivo de acuerdo con el estándar de técnicas de intervención radiológica para quimioembolización. La embolización se debe monitorizar bajo visualización fluoroscópica mediante la adición de la cantidad deseada de medio de contraste (como un agente convencional radio-opaco tal y como se utiliza para composiciones embólicas de tipo gel) al fluido en suspensión, por ejemplo en cantidades en el intervalo de 1:5 a 2:1, preferentemente en el intervalo de 1:2 a 1:1 en volumen.

El clorhidrato de nemorubicina/micro-esferas se debe inyectar lentamente en el catéter de administración bajo visualización fluoroscópica mientras se observa la velocidad del flujo del contraste.

Tras completar el tratamiento, se debe retirar el catéter mientras se mantiene una succión suave para no desplazar las micro-esferas que aún permanecen en el lumen del catéter.

La composición embólica tal y como se administra al paciente necesitado de terapia de embolización, se puede administrar como una sola dosis. La embolización se monitoriza mediante el seguimiento del agente de contraste utilizando técnicas convencionales. Se podría considerar conveniente para posteriores dosificaciones de una composición embólica útil en la invención, la administración en un intervalo de tiempo tras la dosis previa, por ejemplo para embolizar nuevos vasos sanguíneos formados que suministran el tumor p.ej. después de 4 a 10 semanas desde el tratamiento previo para una composición que contiene clorhidrato de nemorubicina.

La presente invención se ilustra en los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Evaluación del tamaño y la forma esférica de micro-esferas DC Bead en la composición farmacéutica que contiene clorhidrato de nemorubicina

Apariencia y tamaño de las micro-esferas DC Bead

Se diluyó clorhidrato de nemorubicina a una concentración en el intervalo de 0,1 a 2,0 mg de fármaco / mL DC Bead que representan dosis aplicables clínicamente. En los siguientes ejemplos se utilizaron micro-esferas de 100 - 300 µm de diámetro (DC Bead ). Se obtuvieron resultados similares cuando se utilizaron micro-esferas DC Bead de 300 - 500 µm de diámetro.

El tamaño y forma esférica de las micro-esferas se analizó después de cargar con clorhidrato de nemorubicina y en la liberación del fármaco durante 16 días. Como comparación se cargaron micro-esferas DC Bead con doxorubicina en una dosificación utilizada clínicamente de 25 mg de fármaco / mL DC Bead .

Carga del fármaco: se condicionaron micro-esferas DC Bead en agua durante 10 min. Se descartó entonces el agua y se añadió clorhidrato de nemorubicina o doxorubicina.

Liberación del fármaco: se incubaron micro-esferas DC Bead con o sin fármaco en tampón fosfato salino (PBS) o plasma humano de donantes sanos durante 16 días. Se midió a diferentes tiempos el tamaño y la forma esférica de las micro-esferas DC Bead .

Apariencia y tamaño de las micro-esferas DC Bead -clorhidrato de nemorubicina durante la carga de el fármaco y su elución se determinó mediante un microscopio Leica DM IRB (Leica) equipado con una cámara Evolution MP Color CCD (Media Cybernatics). Se utilizaron micro-esferas (PMMA 90-125µm, Bangs Laboratories, Fisher, IN) de 108 µm como referencia para la calibración del tamaño. Se analizaron al menos cuatro imágenes de campo para muestras para apoyar el análisis estadístico.

Resultados

Tal y como se informa en la Tabla 1 y FIG 1, sorprendentemente lo que se encontró fue que haciendo el análisis de tamaños al microscopio mediante una técnica de análisis de imagen las micro-esferas DC Bead presentaban características únicas con respecto a lo que se conoce en la técnica. De hecho, no sólo mantienen su forma esférica, sino que incluso mantienen su tamaño original como sin carga tanto antes como después de liberar el fármaco. No se observó agregación para las micro-esferas DC Bead sin carga. Estas características se mantuvieron durante todo el periodo de observación de 16 días.

Tabla 1: tamaño de micro-esferas DC BeadTM después de la carga del fármaco y a diferentes tiempos de elución en PBS (evaluación del diámetro mediante análisis de imagen al microscopio).

Tiempo (h) Micro-esferas de Micro-esferas + Micro-esferas + control + PBS Clorhidrato de Doxorubicina 25 mg de nemorubicina 1 mg de fármaco / mL DC fármaco / mL DC BeadTM BeadTM Media ( CV % Media ( CV % Media ( CV µm) µm) µm) % Carga 1 254 19 299 14 85 31 1 266 19 258 94 32 24 286 24 291 22 98 28 Elución 48 271 18 251 16 107 33 72 260 14 230 24 122 27 96 250 13 221 19 125 34 Como se muestra en la Tabla 1 y FIG 1, la carga de clorhidrato de nemorubicina proporciona tamaños y aspectos como el diámetro de las micro-esferassin carga (intervalo de tamaños 250-286 µm para el control y 230-291 µm para nemorubicina). En cambio, la doxorubicina mostró una reducción de tamaño (intervalo de tamaños de 85-125 µm para la doxorubicina) y una gran heterogeneidad (aumento de CV%, coeficiente de variación %).

Como se muestra en la FIG. 1, los resultados anteriores apoyan la administración de la formulación de clorhidrato de nemorubicina en micro-esferasDC Bead como ventajosa respecto a otros fármacos en términos de facilidad y mayor reproducibilidad de administración y control de la formulación a lo largo del ensayo clínico.

Ejemplo 2. Carga de micro-esferasDC Bead con clorhidrato de nemorubicina Se cargaron micro-esferasDC Bead con el principio activo mediante un protocolo estándar que se aplica también en el ámbito clínico. Se retiró la disolución de embalaje de las micro-esferas. A continuación, se acondicionaron las micro-esferasDC Bead una vez con agua y se añadió el volumen requerido de solución de clorhidrato de nemorubicina a las micro-esferasDC Bead . La dosis de clorhidrato de nemorubicina utilizada para el estudio experimental fue de 0,5 y 2 mg de fármaco / mL micro-esferasDC Bead . Los volumenes de carga añadidos estaban de acuerdo con lo conocido previamente en la técnica y con lo especificado en la guía descriptiva de las micro-esferasDC Bead .

La mezcla se agitó suavemente en un mezclador de rodillos y se mantuvo a 37ºC durante diferentes periodos de tiempo, hasta 2 horas. Al final del tiempo de carga, se lavaron las micro-esferasDC Bead con agua y se recogieron todas las fracciones para cuantificar el clorhidrato de nemorubicina. La carga de clorhidrato de nemorubicina se calculó por medición de la concentración de fármaco remanente en la solución a lo largo del tiempo.

Las mediciones de clorhidrato de nemorubicina en el medio de elución se llevaron a cabo con análisis HPLC- MS/UV ejecutado con un equipo Finnigan MAT/LCQ Deca XP trampa de iones MS equipado con una fuente de iones ESI, directamente conectado a un sistema HPLC Surveyor (Thermo Electron Corporation). Las separaciones HPLC-MS/UV se llevaron a cabo en Phenomenex Gemini Phenyl, 3 µm, 50 4,6 mm con tampón acetato:acetonitrilo 1:9. La detección UV se realizó a 480 nm y para el análisis ESI-MS se aplicó un capilar calentado a 275ºC y un voltaje de spray a 4 kV.

Las mediciones se llevaron a cabo con análisis HPLC-MS/UV frente a una curva estándar de clorhidrato de nemorubicina. La eficacia de carga se calculó sustancialmente tal y como se describe a continuación: Eficacia de carga (%) = 100 (Cantidad inicial de fármaco - fármaco residual encontrado) / Cantidad inicial de fármaco.

Resultados

La eficacia de carga de clorhidrato de nemorubicina en micro-esferasDC Bead fue superior al 99% hasta 2 mg de fármaco / mL micro-esferasDC Bead en una solución no iónica (agua). El análisis de micro-esferasDC Bead al microscopio mostró que la cinética de carga es muy rápida, dependiente de la dosis, y se completa siempre por encima del 99% (ver Tabla 2 y FIG 2).

Tabla 2. Eficiencia de carga de micro-esferasDC Bead (tamaño 100-300 µm) expuestas a diferentes concentraciones de nemorubicina Tiempo de incubación 1 h 2 h 1 h Clorhidrato de Clorhidrato de Fármaco en el medio de nemorubicina 1 mg de Clorhidrato de nemorubicina nemorubicina 2 incubación (agua) fármaco / mL micro- 1 mg de fármaco / mL micro- mg de fármaco / esferas esferas mL micro- esferas % Carga de fármaco 99,8 99,6 99,8 Ejemplo 3. Liberación de clorhidrato de nemorubicina desde micro-esferasDC Bead La liberación de clorhidrato de nemorubicina desde micro-esferasDC Bead se evaluó en PBS y en plasma humano. Al final del tiempo de carga y en cada punto de elución, las micro-esferasDC Bead cargadas con clorhidrato de nemorubicina se lavaron con agua caliente y finalmente se incubaron en PBS caliente o plasma humano a 37ºC.

En el tiempo de elución deseado se recogió el sobrenadante cuidadosamente con una jeringa, evitando la aspiración de micro-esferas. Entonces se filtraron las soluciones con filtros filcon de 70 µm de nylon (BD Biosciences) para evitar contaminaciones cruzadas, se recogieron en tubos Eppendorf y se almacenaron finalmente a -20ºC para análisis posterior.

Se ensayó la doxorubicina en comparación.

Las muestras se separaron para: - evaluación de la citotoxicidad del clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina frente a células tumorales (dosis capaz de inhibir el crecimiento celular un 50%; IC50).

- evaluación de la cantidad liberada de clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina mediante análisis HPLC-MS/UV (el método utilizado se cita en el Ejemplo 2).

Actividad antitumoral in vitro

El efecto citotóxico de fracciones de elución se investigó en células de adenocarcinoma mamario humano (MCF-7, fuente ECACC). Se hizo crecer las células en E-MEM/medio Glutamax (Invitrogen), 10% FBS (EuroClone), y 1% de aminoácidos no esenciales (Invitrogen) y se mantuvo a 37 ºC a un 5% de CO2. Para las pruebas de citotoxicidad se colocaron en placa con una densidad de 5000 células/pocillo en placas de 96 pocillos (Corning) y se hicieron crecer durante 24 h previamente al tratamiento. Las células se trataron durante 72 h con diluciones incrementales de las fracciones de elución. Al final del tratamiento las células se incubaron en sustrato TS (ATPLite ). Las placas se leyeron por quimioluminescencia (480/540 nm) en lector de placas Perkin Elmer Envision . Se calculó el valor IC50 mediante ajuste de curva por LSW Data Analysis . El valor IC50 del clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina en el medio eluido de micro-esferasDC Bead se comparó con el estándar de las soluciones recién preparadas de clorhidrato de nemorubicina o doxorubicina.

Resultados

Como se muestra en la Tabla 3, las fracciones que contiene el fármaco eluido muestran un efecto citotóxico comparable al del clorhidrato de nemorubicina o doxorubicina estándar hasta 96 h. Después de este periodo de tiempo, las soluciones de clorhidrato de nemorubicina-micro-esferasDC Bead o doxorubicina-micro-esferasDC Bead fueron menos citotóxicas.

Tabla 3: dependencia del tiempo de los valores IC50 de clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina eluidos desde micro-esferasDC Bead en células cancerosas MCF-7.

IC50 Tiempo (h) 1 24 48 72 96 120 144 Estándar Nemorubicina 0,045 0,035 0,048 0,043 0,066 5 5 0,05 Doxorubicina 0,3 0,25 0,18 0,14 0,20 0,45 1,5 0,25

Cinética de liberación del clorhidrato de nemorubicina desde micro-esferasDC Bead

en comparación con

doxorubicina.

Tal y como se muestra en la FIG 3, la liberación de clorhidrato de nemorubicina fue más rápida que la de doxorubicina. La comparación de la liberación en PBS de clorhidrato de nemorubicina y doxorubicina muestra un tiempo de vida media de 1085 h y 1487 h, respectivamente.

Sorprendentemente, en plasma humano el fármaco total liberado desde clorhidrato de nemorubicina-micro- esferasDC Bead fue muy elevado (>90%). Por contra, la doxorubicina permaneció atrapada en las micro-esferas (fármaco total liberado 2,5%). Estos resultados están completamente contrastados por el análisis microscópico que muestra que las micro-esferas cargadas con clorhidrato de nemorubicina estaban descargadas después de 96 h, en cambio las micro-esferas cargadas con doxorubicina mostraron una gran cantidad de fármaco atrapado (FIG 4).

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende clorhidrato de nemorubicina incorporado en un sistema de micro-esferas sin la adición de ningún adyuvante de liberación, caracterizado porque el clorhidrato de nemorubicina se carga en micro- esferas de hidrogel N-Fil modificadas con sulfonato.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el clorhidrato de nemorubicina se carga/mezcla en una concentración en el intervalo de 0,1 a 10 mg de fármaco/mL micro-esferas.

3. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en el tratamiento de pacientes aquejados de un cáncer apto para tratamiento locorregional.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, donde los pacientes sufren un tumor hepático que es un tumor primordialmente confinado en el hígado tal y como p.ej. un carcinoma hepatocelular o un colangiocarcinoma o metástasis de hígado.

5. Una composición de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4, donde se administra el clorhidrato de nemorubicina en una dosis que oscila p.ej. desde aproximadamente 0,1 a 10,0 mg/m2.

6. Una composición de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizada porque el clorhidrato de nemorubicina se administra en una dosis en el intervalo de 0,1 a 5 mg/m2.