Métodos para el tratamiento, la evaluación pronóstica y la detección de cáncer de mama.

Un método para determinar el pronóstico de un sujeto que padece cáncer de mama,

que comprende la etapa de medir el nivel de expresión de receptor 1 de neurotensina (NTRS1) en células cancerosas de mama obtenidas de dicho sujeto, en el que una alta expresión de NTRS1 está asociada con un peor pronóstico.

Métodos para el tratamiento, la evaluación pronostica y la detección de cáncer de mama Sector de la técnica

La presente invención se refiere a métodos para el tratamiento, la evaluación pronostica y la detección de cáncer de mama.

Estado de la técnica

El cáncer de mama es la causa más frecuente de muertas relacionadas con cáncer entre las mujeres en los países occidentales. Entre estas pacientes, una de cada cuatro mujeres muere de cáncer de mama, a pesar de las mejoras en el diagnóstico, la cirugía, la quimioterapia y las nuevas terapias dirigidas. La muerte está asociada con el desarrollo metastásico de la enfermedad. El descubrimiento y caracterización de nuevos contribuyentes sigue siendo necesario para desarrollar tratamientos apropiados y altamente específicos dirigidos al inicio de la metástasis y los procesos de progresión.

Durante 1997, se diagnosticaron más de 36. nuevos casos de carcinoma ductal in situ (DCIS), que representa el 17% de todos los nuevos cánceres de mama, en los Estados Unidos. La mayoría de estos casos se diagnosticó por mamografía. Una mamografía de alta calidad es capaz de encontrar una gama de lesiones no invasivas asintomáticas que no puede palparse. Éstas a menudo son más pequeñas, de inferior grado nuclear, y muestran cambios mucho más sutiles que las lesiones detectadas con equipos mamográficos menos avanzados en el pasado. Una mamografía técnicamente buena requiere una atención excepcional al detalle. La necesidad de experta interpretación radiológica no puede enfatizarse lo suficiente. El hallazgo mamográfico más común es las microcalcificaciones, pero algunas lesiones pueden presentase como masas o distorsiones arquitectónicas con o sin microcalcificaciones. La imagen por resonancia magnética (MRI) de mama se ha aprobado por la U.S. Food and Drug Administration (FDA) desde 1991 para su uso como herramienta suplementaria, además de la mamografía, para ayudar a diagnosticar cáncer de mama. La MRI es útil para estadificar el cáncer de mama, lo que determina el tratamiento más apropiado, y para el seguimiento de los pacientes después del tratamiento del cáncer de mama. Como la MRI es más sensible que la mamografía, puede ayudar a detectar cánceres que pueden pasarse por alto por mamografía. Sin embargo, como esta sensibilidad aumentada también puede conducir a resultados falsos positivos, que requiere procedimientos de biopsia de mama, la American Cáncer Society no recomienda MRI para todas las mujeres.

La neurotensina (NTS) es un péptido de 13 aminoácidos formado a partir de un precursor grande, escindido por convertasas. La NTS es habitualmente conocida por su distribución a lo largo del tracto gastrointestinal. Las funciones fisiológicas típicas para NTS incluyen estimulación de secreciones pancreáticas y biliares, inhibición de la motilidad del intestino delgado y gástrica, y la facilitación de traslocación de ácidos grasos. Igualmente se informó de la NTS en funciones ligadas específicamente a progresión neoplásica, incluyendo proliferación de las células cancerosas de páncreas, próstata, colon, y pulmón. Se ha descrito previamente un papel potencial de NTS en progresión de tumor de mama (Souaze et al (26) Cáncer Res. 66:6243-6249).

Las funciones periféricas de NTS están mediadas a través de su interacción con NTSR1 (receptor 1 de neurotensina de alta afinidad). Cuando NTSR1 se estimula con NTS, los fosfatidil inositoles se hidrolizan conduciendo a movilización de Ca2+ y activación de PKC, ERK1/2, RhoGTPasas, NFkappa-B, y quinasa de adhesión focal (FAK).

El documento US 25/112678 y el documento WO 25/52194 describen métodos para el diagnóstico de cánceres en seres humanos utilizando NTSR1.

El documento WO 3/93828 proporciona ensayos para la identificación de compuestos útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades cancerosas.

El documento WO 25/963 describe métodos para detectar cáncer pulmonar no microcítico usando los genes expresados de forma diferencial KIF11, GHSRIb, NTSR1, y FOXM.

Somai et al: (22) Biochemical and Biophysical Research Communications 295:482-488 describe métodos para tratar cáncer de mama usando neurotensina.

Garcia-Garayoa (21) Nuclear Medicine and Biology 28:75-84 describe métodos para el diagnóstico de cáncer usando nuevos análogos de neurotensina.

La identificación de pacientes con fases iniciales patológicas pero con un alto riesgo de recidiva sería extremadamente útil, para adaptar individualmente el tratamiento adicional, en términos de seguimiento más estricto y/o tratamientos adyuvantes.

Objeto de la invención

La presente invención se refiere a un método para determinar el pronóstico de un sujeto que padece cáncer de mama, que comprende la etapa de medir el nivel de expresión de NTRS1 en células cancerosas de mama obtenidas de dicho sujeto.

Por "medir el nivel de expresión de NTRS1", se entiende medir el porcentaje de las células cancerosas de mama que expresan NTRS1.

Una alta expresión de NTRS1 (tal como al menos el 5% o al menos el 6%, o al menos el 7% o al menos el 8% de las células cancerosas de mama expresan NTRS1) está asociada con un peor pronóstico, es decir, una tasa más baja de supervivencia.

Típicamente la expresión de NTSR1 puede medirse por ejemplo por RT-PCR o inmunohistoquímica realizada sobre una muestra obtenida por biopsia.

En la biopsia de cáncer de mama, sea un cáncer invasivo o ¡n situ, la NTSR1 se cuantifica en las células cancerosas.

La presente Invención también posibilita la evaluación del riesgo de recidiva de un sujeto que se ha tratado quirúrgicamente y posteriormente ha recibido el tratamiento apropiado (tal como radioterapia, quimioterapia y/o terapia hormonal).

Puede usarse un método de pronóstico de acuerdo con la invención en combinación con cualquier otro método ya usado para la evaluación pronostica de cáncer de mama, incluyendo fase, demográfica y parámetros antropométricos, resultados de examen clínico o de laboratorio rutinario, Incluyendo el tamaño del tumor, clasificación histopronóstica, receptores hormonales, oncotipo, mammaprint, uPA/PAI-1...

A continuación se ¡lustrará la invención mediante el siguiente ejemplo así como las tablas y figuras.

Descripción de las figuras

Figura 1: Expresión de neurotensina en tejido de mama normal

A) Izquierda, se transcribió de forma inversa un mg de ARN total de HBEC o glándula completa y se realizó un experimento de PCR específico para NTS. Derecha, se transcribió de forma Inversa un mg de ARN total de células HBEC (control, tratado trató con estradiol (E2) 1 nM con o sin ICI 18278 1 p.M). Se realizó un experimento de PCR usando cebadores específicos para NTS y GAPDH.

B) Ducto normal expuesto a anticuerpo contra NTS a dilución 1/5 (1), después de pre-incubaclón con el péptido antigénico durante 2 h a 1 nM (2), o sin anticuerpo primario (3), y lóbulo expuesto a anticuerpo contra NTS (4). Tejido normal expuesto a anticuerpo contra NTS a dilución 1/5 adyacente a ducto tumoral (5), lóbulo (6). El aumento original fue 2X.

Figura 2: Expresión de neurotensina en IDC.

A) Se realizó inmunohistoquímica de NTS sobre IDC, componentes ductal (1) e Invasivo (2), aumento 2X para (1) y 4X para (2). B) Transcritos de NTS y NTSR1 en IDC. Se transcribió de forma Inversa un mg de ARN total de 11 pacientes con IDC, y se realizó PCR específica para NTS, receptor NTSR1, o GAPDH (control). El grado SBR se Indica debajo de cada línea. C) Ejemplo de co-locallzación regional de NTS y NTSR1 por Inmunohistoquímica para NTS (derecha) y NTSR1 (izquierda) al aumento original 4X.

Figura 3: Expresión de NTSR1 en IDC y duración de supervivencia global.

Análisis de Kaplan-Meier de la duración de supervivencia global en ambos grupos con baja (< 8%) y alta (> 8%) expresión de NTSR1. Probabilidad de muerte global para pacientes con alta expresión de NTSR1 (n=38) frente a pacientes con baja expresión de NTSR1 (n=68).

Figura 4: Caracterización de clones MCF-7 que sobre-expresan NTS

A) Análisis de transcritos para NTS, NTSR1, ER-alfa, y PR para clones de sobre-expresión, NTS-h con alta expresión de NTS, y NTS-1 con baja expresión de NTS, se comparan con células de tipo silvestre, MCF-7.

B) Tasa de proliferación celular para MCF-7 y NTS-h. El porcentaje de células para cada momento puntual se comparó con la cantidad de células originalmente sembradas.

Figura 5: Imágenes planas de ratones desnudos hembra injertados con células NTS-h. Inyectados con un análogo DTPA(111ln)-NTS

A) Imagen de un ratón que alberga un tumor grande. Fotografía (1),... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar el pronóstico de un sujeto que padece cáncer de mama, que comprende la etapa de medir el nivel de expresión de receptor 1 de neurotensina (NTRS1) en células cancerosas de mama obtenidas de

dicho sujeto, en el que una alta expresión de NTRS1 está asociada con un peor pronóstico.

2. El método de la reivindicación 1, en el que la expresión de NTSR1 se mide por RT-PCR o inmunoquimica

realizada sobre una muestra obtenida por biopsia.

3. El método de la reivindicación 1 o 2, en el que el cáncer es un cáncer invasivo.

4. El método de la reivindicación 1 o 2, en el que el cáncer es un cáncer in situ.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el método se usa para evaluar el riesgo de recidiva 15 de un sujeto que se ha tratado quirúrgicamente.