ENSAYOS DE COMPLEMENTACION DE FRAGMENTOS PROTEICOS PARA DETECTAR INTERACCIONES BIOMOLECULARES.
DESBRIBIMOS UNA ESTRATEGIA PARA EL DISEÑO E IMPLEMENTACION DE ENSAYOS POR COMPLEMENTACION DE FRAGMENTOS PROTEICOS (PCAS) PARA DETECTAR INTERACCIONES BIOMOLECULARES IN VIVO E IN VITRO.
EL DISEÑO, IMPLEMENTACION Y ENORMES APLICACIONES DE ESTA ESTRATEGIA SE ILUSTRAN CON UN GRAN NUMERO DE ENZIMAS, PRESTANDO ESPECIAL ATENCION AL EJEMPLO DE DIHIDROFOLATO REDUCTASA DE MURINO (DHFR). SE EXPRESARON PEPTIDOS DE FUSION QUE CONSISTEN EN FRAGMENTOS N Y C - TERMINALES DE DHFR DE MURINO FUSIONADOS A SECUENCIAS DE CREMALLERA DE LEUCINA GCN4 EN ESCHERICHIA COLI CULTIVADA EN UN MEDIO MINIMO, EN QUE LA ACTIVIDAD DHFR ENDOGENA SE INHIBIO CON TRIMETROPRIMA. LA COEXPRESION DE LOS PRODUCTOS DE FUSION COMPLEMENTARIOS RESTUARO LA FORMACION DE COLONIAS. LA SUPERVIVENCIA SOLO OCURRIO CUANDO LOS DOS FRAGMENTOS DHFR SE ENCONTRABAN PRESENTES Y CONTENIAN SECUENCIAS FORMADORAS DE CREMALLERAS DE LEUCINA, DEMOSTRANDO QUE LA RECONSTITUCION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA REQUIERE LA AYUDA DE LA FORMACION DE CREMALLERAS DE LEUCINA. LAS MUTACIONES PUNTUALES FRAGMENTO DHFR - INTERFAZ DE SEVERIDAD CRECIENTE (ILE A VAL, ALA Y GLY) DIERON COMO RESULTADO UN AUMENTO SECUENCIAL DE LOS TIEMPOS DE DUPLICACION DE E. COLI LO QUE ILUSTRA LA REAGRUPACION ACERTADA DE FRAGMENTOS DHFR EN LUGAR DE INTERACCIONES NO ESPECIFICAS ENTRE FRAGMENTOS. ESTE ENSAYO SE PUDO UTILIZAR PARA ESTUDIAR EL EQUILIBRIO Y LOS ASPECTOS CINETICOS DE INTERACCIONES MOLECULARES INCLUIDAS LAS INTERACCIONES PROTEINA - PROTEINA, PROTEINA - ADN, PROTEINA - ARN, PROTEINA - HIDRATO DE CARBONO Y PROTEINA - MOLECULA PEQUEÑA, PARA SELECCIONAR LIBRERIAS DE CADN PARA LA UNION DE UNA PROTEINA DIANA CON PROTEINAS CONOCIDAS O LIBRERIAS DE PEQUEÑAS MOLECULAS ORGANICAS PARA OBTENER UNA ACTIVIDAD BIOLOGICA. LA SELECCION Y DISEÑO DE LOS CRITERIOS APLICADOS EN LA PRESENTE INVENCION SE DESARROLLARON PARA NUMEROSOS EJEMPLOS DE ENSAYOS DE SELECCION CLONAL, COLOROMETRICOS, FLUOROMETRICOS Y OTROS ENSAYOS BASADOS EN ENZIMAS CUYOS PRODUCTOS SE PUEDEN MEDIR. EL DESARROLLO DE TALES SISTEMAS DE ENSAYO DEMOSTRO SER SENCILLO Y PERMITE UNA SERIE DIVERSA DE APLICACIONES POR COMPLEMENTACION DE FRAGMENTOS PROTEICOS.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: UNIVERSITE DE MONTREAL.
Nacionalidad solicitante: Canadá.
Dirección: 6128, SUCCURSALE A,MONTREAL, QUEBEC H3C 3J7.
Inventor/es: MICHNICK, STEPHEN, WILLIAM, WATSON, PELLETIER, JOELLE, NINA, APARTMENT, REMY, INGRID.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 2 de Febrero de 1998.
Fecha Concesión Europea: 10 de Agosto de 2005.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/573 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para enzimas o isoenzimas.
- G01N33/58 G01N 33/00 […] › en los que intervienen sustancias marcadas (G01N 33/53 tiene prioridad).
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Mónaco, Irlanda, Finlandia, Oficina Europea de Patentes, Armenia, Azerbayán, Bielorusia, Ghana, Gambia, Kenya, Kirguistán, Kazajstán, Lesotho, República del Moldova, Malawi, Federación de Rusia, Sudán, Tayikistán, Turkmenistán, Uganda, Zimbabwe, Burkina Faso, Benin, República Centroafricana, Congo, Costa de Marfil, Camerún, Gabón, Guinea, Malí, Mauritania, Niger, Senegal, Chad, Togo, Organización Regional Africana de la Propiedad Industrial, Swazilandia, Organización Africana de la Propiedad Intelectual, Organización Eurasiática de Patentes.
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