Derivados de hidrobenzamida como inhibidores de la hsp90.

Una sal de adición ácida de un compuesto de la Fórmula (1) **Fórmula**

la cual es una sal formada con ácido láctico.

Derivados de hidrobenzamida como inhibidores de la Hsp90

Esta invención se relaciona con nuevas formas de sal y cristalina de los compuestos que inhiben o modulan la actividad de la proteína de choque térmico Hsp90 y el uso de los compuestos en el tratamiento o profilaxis de afecciones o estados de enfermedad mediados por la Hsp90. Se proporcionan además nuevos procesos para preparar los compuestos y nuevos intermedios químicos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

En respuesta al estrés celular que incluye calor, toxinas, radiación, infección, inflamación, y oxidantes, todas las células producen un conjunto común de proteínas de choque térmico (Hsps) (Macario & de Macario 2000) . La mayoría de las proteínas de choque térmico actúan como chaperonas moleculares. Las chaperonas unen y estabilizan las proteínas en etapas intermedias de plegado y permiten que las proteínas se plieguen a sus estados funcionales. La Hsp90 es la Hsp citosólica más abundante en condiciones normales. Existen dos tipos de isoformas humanas de Hsp90, una forma inducible mayor Hsp90α y una forma menor expresada constitutivamente Hsp90β y otras dos chaperonas estrechamente relacionadas las cuales están restringidas en su ubicación intracelular (GP96/GRP94 retículo endoplasmático; TRAP1 mitocondria) . El término HSP90 como se usa en la presente incluye todos esos análogos a menos que se declare. La Hsp90 une proteínas en una etapa tardía de plegado y se distingue de otras Hsps en la que la mayoría de sus sustratos de proteínas se involucran en la transducción de la señal. La Hsp90 tiene un sitio de unión del ATP distinto, incluyendo un pliegue Bergerat característico de la girasa bacteriana, topoisomerasas e histidina quinasas. Se ha demostrado que se hidroliza el ATP unido en el bolsillo N-terminal de la Hsp90. Esta actividad ATPasa resulta en un cambio conformacional en la Hsp90 que se necesita para permitir cambios conformacionales en la proteína del cliente.

Un dominio de dimerización y un segundo sitio de unión del ATP, que pueden regular la actividad ATPasa, se encuentra cerca del c-terminal de Hsp90. La dimerización de la HSP90 parece ser crítica para la hidrólisis de ATP. La activación de la Hsp90 se regula además a través de interacciones con una variedad de otras proteínas chaperonas y pueden aislarse en el complejo con otras chaperonas que incluyen Hsp70, Hip, Hop, p23, y p50cdc37. Muchas otras proteínas co-chaperonas han demostrado además unir la HSP90. Un modelo simplificado ha surgido en el que la unión de ATP al bolsillo amino terminal altera la conformación de la Hsp90 para permitir la asociación con un complejo multichaperona. Primero, la proteína cliente está unida a un complejo Hsp70/Hsp40. Este complejo se asocia después con la Hsp90 a través de Hop. Cuando ADP se sustituye por ATP, se altera la conformación de Hsp90, se liberan Hop y Hsp70 y un conjunto diferente de co-chaperonas se recluta incluyendo p50cdc37 y p23. La hidrólisis de ATP resulta en la liberación de estas co-chaperonas y la proteína cliente del complejo maduro. Los antibióticos ansamicina herbimicina, geldanamicina (GA) y 17-alilamino-17-desmetoxigeldanamicina (17-AAG) son inhibidores del sitio de unión del ATP que bloquean la unión de ATP y previenen la conversión al complejo maduro (Grenert y otros, 1997. J Biol Chem., 272:23834-23850) .

A pesar de que la Hsp90 se expresa ubicuamente, GA tiene una afinidad de unión superior para Hsp90 derivada de tumor contra las líneas celulares normales (Kamal y otros, Nature 2003; 425: 407-410) . GA muestra además actividad citotóxica más potente en las células tumorales y es secuestrada a concentraciones superiores dentro de los tumores en modelos de xenoinjertos en ratón. (Brazidec J. Med. Chem. 2004, 47, 3865-3873) . Además, la actividad ATP-asa de la Hsp90 es elevada en las células cancerosas y es una indicación del nivel aumentado de estrés en estas células. Se ha reportado además que la amplificación génica de Hsp90 ocurre en las etapas más avanzadas del cáncer (Jolly y Morimoto JNCI Vol. 92, núm. 19, 1564-1572, 2000) .

La inestabilidad genética aumentada asociada con el fenotipo del cáncer conduce a un aumento en la producción de proteínas no nativas o mutantes. La vía ubiquitina sirve además para proteger a la célula de proteínas no nativas o mal plegadas, dirigiendo estas proteínas a la degradación proteasomal. Las proteínas mutantes son no nativas por su naturaleza, y por lo tanto tienen el potencial para mostrar inestabilidad estructural y una necesidad aumentada para el sistema de chaperona. (Giannini y otros, Mol Cell Biol. 2004; 24 (13) :5667-76) .

Existe alguna evidencia de que principalmente la Hsp90 se encuentra dentro de los complejos multichaperona "activados" en las células tumorales en comparación con los complejos "latentes" en las células normales. Uno de los componentes del complejo multichaperona es la co-chaperona cdc37. Cdc37 une Hsp90 en la base del sitio de unión de ATP y podría afectar las tasas de disociación de los inhibidores unidos a Hsp90 en el estado "activado" (Roe y otros, Cell 116, (2004) , págs. 87-98) . Se cree que la proteína cliente unida a la forma Hsp90-Hsp70 del complejo chaperona es más susceptible a la ubiquitinación y que dirige al proteasoma para la degradación. Las ligasas ubiquitina E3 se han identificado con motivos de chaperonas que interactúan y una de estas (CHIP) demostró promover la ubiquitinación y degradación de las proteínas cliente de Hsp90 (Connell y otros, 2001. Xu y otros, 2002) .

Proteínas cliente de Hsp90

El número de proteínas cliente de Hsp90 reportadas ahora superan 100. Ya que muchas de sus proteínas clientes se involucran en la señalización de la proliferación celular y supervivencia, Hsp90 ha despertado mayor interés como un objetivo de oncología. Dos grupos de proteínas clientes, proteínas quinasas de la señalización celular y factores de transcripción, particularmente sugieren que la regulación de Hsp90 puede tener beneficios potenciales como una terapia contra el cáncer.

Las proteínas clientes de la proteína quinasa Hsp90 implicadas en la proliferación celular y la supervivencia incluyen las siguientes:

c-Src

El Src celular (c-Src) es un receptor de tirosina quinasa necesario para la mitogénesis iniciada por múltiples receptores de factor de crecimiento, incluyendo los receptores para el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) , receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) , factor-1 estimulante de colonias (CSF-1R) , y el factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGFR) . El C-Src se sobreexpresa y activa además en muchos de los mismos carcinomas humanos que sobreexpresan EGFR y ErbB2. El Src se necesita además para el mantenimiento de la homeostasis normal de los huesos a través de su regulación de la función osteoclástica.

p185erbB2

El ErbB2 (Her2/neu) es un receptor tirosina quinasa sobreexpresado en una variedad de malignidades que incluyen cánceres de mama, ovario, próstata, y gástrico. ErbB2 se identificó originalmente como un oncogén y la inhibición de Hsp90 resulta en la poliubiquitinación y degradación de erbB2.

Quinasa mitótica Polo Las quinasas tipo Polo (PIk) son reguladores importantes de la progresión del ciclo celular durante la fase-M. Las PIk se involucran en el ensamblaje del aparato del huso mitótico y en la activación de complejos CDK/ciclina. Las Plk1 regulan la desfosforilación de tirosina de las CDK a través de la fosforilación y activación de Cdc25C. La activación de CDK1 a su vez conduce a la formación del huso y entrada en la fase M.

Akt (PKB)

Akt se involucra en las vías que regulan el crecimiento celular estimulando la proliferación celular y suprimiendo la apoptosis. La inhibición de Hsp90 por ansamicinas resulta en una reducción en la vida media de Akt a través de la ubiquitinación y degradación proteasomal. La unión de cdc37 a Hsp90 se necesita además para la regulación hacia bajo de Akt. A continuación del tratamiento con ansamicina las células de cáncer se detienen en la fase G2/M del ciclo celular de 24 horas después del tratamiento y continúan a la apoptosis 24-48 horas más tarde Las células normales se detienen además 24 horas después del tratamiento con ansamicina, pero no continúan adelante a la apoptosis

c-Raf, B-RAF, Mek

La vía de la quinasa RAS-RAF-MEK-ERK-MAP media las respuestas celulares a señales de crecimiento. RAS se muta a una forma oncogénica en aproximadamente 15% de los cánceres humanos. Los tres genes RAF son serina/treonina quinasas que se regulan uniendo RAS.

EGFR

El receptor del factor de crecimiento... [Seguir leyendo]

1. Una sal de adición ácida de un compuesto de la Fórmula (1)

la cual es una sal formada con ácido láctico.

2. Una sal de adición ácida de acuerdo con la reivindicación 1 la cual es una sal formada con ácido L-láctico.

3. Una sal de adición ácida en forma sustancialmente cristalina de acuerdo con reivindicación 1 en donde la forma cristalino se selecciona de las formas:

FL1: caracterizada por un patrón de XRPD con un ángulo de difracción (2θ/°) pico a 16.81, y FL2: caracterizada por un patrón de XRPD con un ángulo de difracción (2θ/°) pico a 22.34.

4. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (2) :

en donde R1 es C1-4 alquilo; el proceso comprende: someter a hidrogenación catalítica un compuesto de la Fórmula (3) :

en donde PG es un grupo protector removible bajo condiciones de hidrogenación y A-B es CH-CH3 o C=CH2, y5 después de eso, donde el compuesto de la Fórmula (2) se prepara en forma de una base libre, opcionalmente convertir la base libre a una sal de adición ácida; o (a-i) la reacción de un compuesto de la fórmula (4) , o una forma activada o derivado del mismo con un compuesto de la fórmula (5) :

bajo condiciones de formación de amida para dar un compuesto de la Fórmula (3) ;

en donde R1, PG, A-B son como los definidos anteriormente; y

(b) someter el compuesto de la Fórmula (3) a hidrogenación catalítica para eliminar los grupos protectores PG y, cuando A-B es C=CH2, reducir el grupo A-B a un grupo isopropilo y después de eso, donde el compuesto de la Fórmula (2) se prepara en forma de una base libre, convertir opcionalmente la base libre a una sal de adición ácida.

5. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (3) : en donde R1, PG, A-B son como se definió en la reivindicación 4; el proceso comprende:

(a-i) la reacción de un compuesto de la Fórmula (4) , o una forma activada o derivado del mismo con un compuesto de la Fórmula (5) :

bajo condiciones de formación de amida; o la reacción de un compuesto de la Fórmula (3a) :

con un reactivo de Wittig u otro reactivo adecuado para convertir el grupo -C (=O) -CH3 en un grupo -C (=CH2) -CH3.

6. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (6) :

en donde R2 y R3 son iguales o diferentes y cada uno es C1-4 alquilo o NR2R3 forma un anillo heterocíclico saturado de 4 a 7 miembros que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O, N y S y opcionalmente sustituido por uno o dos grupos C1-4 alquilo; y R4 se selecciona de grupos hidrógeno, halógeno, C1-5 alquilo y C3-4 cicloalquilo; cuyo proceso comprende:

(a-ii) la reacción de un compuesto de la Fórmula (7) :

en donde PG es un grupo protector removible bajo condiciones de hidrogenación y R4' se selecciona de grupos hidrógeno, halógeno, C1-5 alquilo, C2-5 alquenilo y C3-4 cicloalquilo; con un compuesto de la Fórmula (8) :

en presencia de un catalizador de metal de transición para dar un compuesto de la fórmula (9) ;

y

(b) someter el compuesto de la Fórmula (9) a hidrogenación catalítica para eliminar los grupos protectores PG y, cuando R4' es C2-5 alquenilo, reducir el grupo R4' a C2-5 alquilo; y después de eso, donde el compuesto de la Fórmula (6) se prepara en forma de una base libre, convertir opcionalmente la base libre a una sal de adición ácida.

7. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (9) :

en donde R2, R3, R4' y PG son como se definió en la reivindicación 6; el proceso comprende: (a-ii) la reacción de un compuesto de la Fórmula (7) :

en donde PG es un grupo protector removible bajo condiciones de hidrogenación y R4' se selecciona de grupos hidrógeno, halógeno, C1-5 alquilo, C2-5 alquenilo y C3-4 cicloalquilo; con un compuesto de la Fórmula (8) :

en presencia de un catalizador de metal de transición.

8. Un oroducto intermedio químico de la fórmula (3) como se definió en la reivindicación 4 y 5, (7) como se definió en la reivindicación 6 y 7, y (9) como se definió en la reivindicación 7 y 8.

9. Una sal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para el uso en medicina

10. Una sal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para el uso:

i. como un inhibidor de Hsp90; o ii. en el tratamiento de una enfermedad o afección que comprende o surge a partir del crecimiento anormal de la célula en un mamífero; o iii. en un método para inhibir la Hsp90, el método comprende contactar la Hsp90 con el compuesto inhibidor de Hsp90, forma cristalina o sal de adición ácida; o

iv. para usar en el tratamiento de trastornos proliferativos seleccionados de un carcinoma de vejiga, mama, colon, riñón, epidermis, hígado, pulmón, esófago, vesícula, ovario, páncreas, estómago, útero, tiroides, prostata, sistema gastrointestinal, o piel; un tumor hematopoyético de linaje linfoide; un tumor hematopoyético de linaje mieloide; cáncer folicular de tiroides; un tumor de origen mesenquimal; un tumor del sistema nervioso central o periférico; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xerodermia pigmentosa; keratoacantoma; cáncer folicular de tiroides; o sarcoma de Kaposi; o

v. en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o afección fúngico, protozoárico o parasítico, distinto de un estado de enfermedad o afección debido al Plasmodium falciparum; o

vi. en la fabricación de un medicamento para la coadministración con un agente anti-fúngico, agente antiprotozoo o agente anti-parasítico, preferentemente un agente anti-fúngico, para prevenir, reducir o invertir el desarrollo de resistencia al agente anti-fúngico, agente antiprotozoo o agente anti-parasítico; o vii. en un método para prevenir o reducir el desarrollo de resistencia a un agente anti-fúngico en un paciente, el método comprende administrar al paciente una combinación de un agente anti-fúngico, agente antiprotozoo o agente anti-parasítico y el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida; o viii. en la fabricación de un medicamento para usar en la reducción o eliminación del dolor en un paciente que padece de dolor; o

ix. en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una cualquiera o más de nocicepción, dolor somático, dolor visceral, dolor agudo, dolor crónico, hiperalgesia, alodinia, dolor post operativo, dolor debido a hipersensibilidad, dolor de cabeza, dolor inflamatorio, dolor neurológico, dolor musculoesquelético, dolor relacionado con cáncer o dolor vascular; o

x. en un método para prevenir o reducir el daño neuronal en un paciente que padece de apoplejía, el método comprende administrar al paciente una cantidad neuroprotectora eficaz del compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida; o

xi. en la fabricación de un medicamento para la prevención o reducción del riesgo de apoplejía en pacientes con riesgo de apoplejía; o xii. en la profilaxis o tratamiento de una infección viral o enfermedad viral; o xiii. para usar en bloquear o inhibir la replicación viral en un organismo huésped; o xiv. en un método para bloquear o inhibir la replicación viral en un organismo huésped, el método comprende administrar al organismo huésped el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida; o xv. en un método para: (i) sensibilizar las células malignas a un fármaco anticancerígeno; (ii) aliviar o reducir la incidencia de resistencia a un fármaco anticancerígeno; (iii) revertir la resistencia a un fármaco anticancerígeno;

(iv) potenciar la actividad de un fármaco anticancerígeno; (v) retardar o prevenir la aparición de la resistencia a un fármaco anticancerígeno, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida; o xvi. en un método para el tratamiento de un cáncer el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida, el método se caracteriza por la ausencia de resistencia al fármaco; o xvii. en un método para la profilaxis o tratamiento o alivio o reducción de la incidencia de un estado de enfermedad o afección mediada por Hsp90 en un sujeto que se somete a tratamiento con un agente terapéutico, el método comprende administrar al sujeto el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida, en donde estado de enfermedad o afección mediada por Hsp90 es el desarrollo de resistencia a dicho agente terapéutico; o xviii. en un método para: (i) sensibilizar las células malignas a un agente contra el cáncer ; (ii) aliviar o reducir la incidencia de resistencia a un agente contra el cáncer; (iii) revertir la resistencia a un agente contra el cáncer;

(iv) potenciar la actividad de un agente contra el cáncer; (v) retardar o prevenir la aparición de la resistencia a un agente contra el cáncer, el método comprende administrar al sujeto que se somete al tratamiento con dicho 5 agente contra el cáncer el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida; o xix. en un método para el tratamiento de un cáncer en un sujeto que se somete al tratamiento con un agente contra el cáncer, el método comprende administrar a un sujeto que lo necesita el compuesto, forma cristalina o sal de adición ácida, el método se caracteriza por la ausencia de resistencia al fármaco para el agente contra el cáncer.

11. El uso de una sal de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno como se define en las reivindicación 10.

12. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (13) :

cuyo proceso comprende:

(i) la reacción de un compuesto de la Fórmula (11) :

25 con (a) anhídrido acético en presencia de 4-dimetilaminopiridina, seguido por (b) ácido

trifluorometanosulfónico y opcionalmente cloruro de acetilo; o (ii) la reacción de un compuesto de la Fórmula (11) con cloruro de acetilo en presencia de una resina de intercambio de iones catiónicos.

30 13. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (15) :

35 reaccionando un compuesto de la fórmula (14) con un reactivo de Wittig MePPh3Br en presencia de tercbutóxido de potasio en THF.

14. Un proceso para la preparación de un compuesto de la Fórmula (5) como se define en la reivindicación 4, proceso comprende: el

40 (i) la reacción de un compuesto de la Fórmula (24) :

en donde PG es un grupo protector y LG1 es un grupo saliente, con un compuesto de la Fórmula (22) ; o (ii) la reacción de un compuesto de la Fórmula (25) :

en donde PG es un grupo protector, con un compuesto de la Fórmula (22) como se definió anteriormente bajo condiciones de aminación reductora; y después eliminar el grupo protector PG.