Composición de vacuna.

Un vector de adenovirus que comprende un polinucleótido o polinucleótidos que codifican al menos los antígenos de VIH RT

, Nef y Gag o fragmentos inmunógenos de los mismos, dispuestos de forma que son transcritos en el orden Gag, RT, Nef, de modo que la porción Gag se encuentre en el extremo N terminal de la proteína de fusión resultante, caracterizado porque el virus es un adenovirus de primate no humano y el virus es un adenovirus de chimpancé seleccionado de Pan 5, Pan 6 y Pan 7.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2006/004854.

Solicitante: GLAXO GROUP LIMITED.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: 980 GREAT WEST ROAD BRENTFORD, MIDDLESEX TW8 9GS REINO UNIDO.

Inventor/es: ERTL,PETER,FRANZ, TITE,John Philip, VAN WELY,Catherine Ann.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/16 (VIH-1)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/21 (Retroviridae, p. ej. virus de la anemia infecciosa equina)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen sustancias... > A61K35/76 (Virus; Partículas subvirales; Bacteriófagos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/861 (Vectores adenovirales)

PDF original: ES-2546330_T3.pdf

 

google+ twitter facebook

Fragmento de la descripción:

Composición de vacuna Campo de la invención

La presente invención se refiere a vectores de virus que comprenden oligonucleótidos que codifican polipéptidos de VIH, más en particular, aquellos en los que el vector de virus es un adenovirus. En particular, tales adenovirus son adenovirus de primate no humano tales como adenovirus de simios, más en particular adenovirus de chimpancé. En particular, la invención se refiere a vectores de adenovirus que comprenden secuencias polinucleotídicas de VIH que codifican múltiples antígenos diferentes del VIH, por ejemplo dos o tres o más antígenos del VIH. La invención se refiere además a procedimientos para preparar los vectores de virus, a los vectores de virus producidos por los procedimientos y al uso de los vectores en medicina, en especial para la vacunación profiláctica o terapéutica.

El VIH-1 es la causa principal del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) que se considera como uno de los mayores problemas mundiales de salud. Aunque se ha llevado a cabo una extensiva investigación en todo el mundo, los esfuerzos por producir una vacuna no han tenido éxito hasta la fecha.

El VIH-1 es un virus ARN de la familia Retroviridiae. El genoma del VIH codifica al menos nueve proteínas que se dividen en tres clases: las principales proteínas estructurales Gag, Pol y Env, las proteínas reguladoras Taty Rev, y las proteínas accesorias Vpu, Vpr, Vif y Nef. El genoma del VIH presenta la organización 5'LTR-gag-pol-env-LTR3' de todos los retrovirus.

El adenovirus es un virus ADN de doble cadena con un tamaño de genoma de aproximadamente 36 kb que se ha usado extensamente para aplicaciones de transferencia génica debido a su capacidad para alcanzar una transferencia génica de alta eficacia en una diversidad de tejidos diana y una gran capacidad del transgén. Convencionalmente, los genes E1 de adenovirus se eliminan o reemplazan por un casete transgénico consistente en el promotor de elección, secuencia de ADNc del gen de Interés y una señal de pollA, dando lugar a un virus recombinante de replicación defectuosa.

Los adenovirus tienen una morfología característica con una cápside icosaédrica consistente en tres proteínas principales, hexón (II), base pentón (III) y una fibra con protuberancias (IV), junto con una serie de otras proteínas minoritarias, VI, VIII, IX, Illa y IVa2 (Russell W.C. 2, Gen Virol, 81:2573-264). El genoma del virus es un ADN de doble cadena lineal con una proteína terminal unida covalentemente al extremo 5, que tiene repeticiones terminales invertidas (ITR). El virus ADN está íntimamente asociado con la proteína altamente básica Vil y un pequeño péptldo denominado mu. Otra proteína, V, está compactada con este complejo ADN - proteína y proporciona una unión estructural a la cápside a través de la proteína VI. El virus también contiene una proteasa codificada por el virus que es necesaria para procesar parte de las proteínas estructurales para producir virus infecciosos maduros.

Se han aislado más de 1 serotlpos distintos de adenovirus que Infectan diversas especies de mamíferos, 51 de los cuales son de origen humano. Ejemplos de tales adenovirus de origen humano son Ad1, Ad2, Ad4, Ad5, Ad6, Ad11, Ad24, Ad34, Ad35. Los serotlpos humanos se han clasificado en seis subgéneros (A-F) basándose en una serie de criterios biológicos, químicos, inmunológicos y estructurales, [página 1, documento WO 418627]

Aunque los vectores basados en Ad5 se han usado extensamente en una serie de ensayos de terapia génica, pueden existir limitaciones sobre el uso de Ad5 y otros vectores de adenovirus del grupo C debido a la Inmunidad preexistente en la población general debida a la Infección natural. El Ad5 y otros miembros del grupo C tienden a estar entre los serotipos más seroprevalentes. Se puede desarrollar Inmunidad a vectores existentes como resultado de exposición al vector durante el tratamiento. Estos tipos de Inmunidad preexistente o desarrollada a vectores seroprevalentes pueden limitar la eficacia de la terapia génica o los esfuerzo de vacunación. Serotlpos de adenovirus alternativos constituyen de este modo Importantes dianas en la búsqueda del sistema de liberación génica capaces de evadir la respuesta ¡nmunltarla del huésped.

Una de tales áreas de serotlpos alternativos son los de primates no humanos, en especial adenovirus de chimpancé. Véase la patente de Estados Unidos 6.83.716 que describe el genoma de dos adenovirus de chimpancé.

Se ha mostrado que los vectores adenovírlcos del chimpancé ("Pan" o "C") inducen potentes respuestas inmunitarias a productos transgénicos de forma tan eficaz como los vectores adenovíricos humanos (Fltzgerald y col. J. Immunol. 17:1416).

Las proteínas de VIH Tat y Nef son proteínas tempranas, es decir, éstas son expresadas tempranamente en la infección y en ausencia de proteína estructural.

El gen Nef codifica una proteína de VIH accesoria temprana que ha demostrado poseer diversas actividades. Por ejemplo, la proteína Nef se conoce por causar la supresión de CD4, el receptor de VIH, de la superficie celular, aunque la Importancia biológica de esta función se está debatiendo. Además, Nef interacciona con la vía de señalización de los linfocitos T e Induce un estado activo, que a su vez puede promover una expresión génica más eficiente. Algunos aislados de VIH tienen mutaciones en esta región, lo que causa que éstos no codifiquen proteína

funcional y están gravemente comprometidos en su replicación y patogénesis in vivo.

El gen Gag se traduce desde el ARN de longitud completa proporcionando una poliproteína precursora que seguidamente se escinde en las proteínas de la cápside 3 - 5; la proteína de matriz, proteína de cápslde y proteína de unión a ácido nucleico y proteasa. (Fundamental Virology, Fields BN, Knlpe DM y Howley M 1996 2. Flelds Vlrology vol 2 1996).

El gen Gag da lugar a la proteína precursora Gag de 55 kilodalton (kD), también denominada p55, que se expresa a partir del ARNm vírico sin ayustar. Durante la traducción, el extremo terminal N de p55 se mlrlstoíla, desencadenando su asociación con el aspecto citoplásmico de las membranas celulares. La poliproteína Gag asociada a la membrana recluta dos copias del ARN genómico vírico junto con otras proteínas víricas y celulares que desencadenan la generación de la partícula vírica de la superficie de una célula infectada. Después de generar, el p55 se escinde por la proteasa codificada víricamente (un producto del gen Pol) durante el proceso de maduración vírica en cuatro proteínas más pequeñas denominadas MA (matriz [p17]), CA (cápslde [p24]), NC (nucleocápslde [p9]) y p6.(4).

Además de las 3 proteínas Gag principales (p17, p24 y p9), todos los precursores Gag contienen otras reglones diferentes, que se escinden y permanecen en el virión como péptidos de diversos tamaños. Estas proteínas tienen diferentes funciones, por ejemplo, la proteína p2 tiene una función propuesta en la regulación de la actividad de la proteasa y contribuye a la correcta programación del procesado proteolítico.

El polipéptido MA deriva del extremo N-termlnal miristoilado de p55. La mayoría de moléculas MA permanece unida a la superficie interna de la bicapa lipídica del virión, estabilizando la partícula. Un subgrupo de MA es reclutado en el interior de capas más profundas del virión en las que forma parte del complejo que escolta el ADN vírico al núcleo. Estas moléculas de MA facilitan el transporte nuclear del genoma vírico debido a que una señal cariofílica en MA es reconocida por la maquinaria de importación nuclear celular. Este fenómeno permite al VIH infectar células no divisibles, una propiedad Inusual para un retrovlrus.

... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un vector de adenovirus que comprende un polinucleótido o polinucleótidos que codifican al menos los antígenos

de VIH RT, Nef y Gag o fragmentos inmunógenos de los mismos, dispuestos de forma que son transcritos en el

orden Gag, RT, Nef, de modo que la porción Gag se encuentre en el extremo N terminal de la proteína de fusión

resultante, caracterizado porque el virus es un adenovirus de primate no humano y el virus es un adenovirus de chimpancé seleccionado de Pan 5, Pan 6 y Pan 7.

2. El adenovirus de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el RT está truncado.

3. El adenovirus de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el Nef está truncado.

4. El adenovirus de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el Gag es solamente p17 y p24.

5. El vector de adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el tamaño del polinucleótido o polinucleótidos de VIH es tal que el tamaño total del vector es del 9 al 1 % del tamaño del virus.

6. El vector de adenovirus de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el adenovirus es pan 6.

7. El vector de adenovirus de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el adenovirus es pan 7.

8. El vector de adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el virus es defectuoso en la replicación.

9. El vector de adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el virus tiene delaciones en las regiones E1 y E3.

1. El vector de adenovirus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las secuencias de polinucleótidos que codifican los antígenos de VIH están dispuestas como una fusión.

11. El vector de adenovirus de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende las construcciones de polinucleótidos siguientes: p17, p24 (codón optimizado) Gag - p66 RT (codón optimizado) - Nef truncado;

12. Un vector de adenovirus de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el Adenovirus es Pan 6 o Pan 7.

13. Una composición inmunógena que comprende el vector de virus de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un vehículo o coadyuvante farmacéuticamente aceptable.

14. El uso de un vector de adenovirus de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de infección por VIH.

15. Un procedimiento de preparación de un vector de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 que comprende las etapas de: a) proporcionar un vector de adenovirus; b) proporcionar un plásmido que porte las secuencias de antígeno del VIH unidas de forma operativa a un promotor adecuado; c) transfectar células con el plásmido y el vector; d) dejar que pase tiempo suficiente para que se produzca la recomblnaclón; y e) recuperar el vector de virus recombinante que porta las secuencias de antígenos del VIH.

16. Un procedimiento de producción de una respuesta inmunitaria en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento administrar a un mamífero una cantidad adecuada de una composición inmunógena de acuerdo con la reivindicación 13.

17. Una proteína de fusión expresada por el vector de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.

18. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 17 producida dentro del cuerpo humano.