CONSTRUCCIONES INMUNOGENICAS.
Un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptido ahpC,
una secuencia de polipéptido gsd, una secuencia de polipéptido p12 y una secuencia de polipéptido mpa, en donde
dicho polipéptido ahpC comprende la secuencia de SEQ ID NO: 2, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 2 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 2, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido gsd comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 6 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 6, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido p12 comprende la secuencia de SEQ ID NO: 10, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 10 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 10, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 que comprende un epítopo; y
dicho polipéptido mpa comprende la secuencia de SEQ ID NO: 14, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 14 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 14, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 14 que comprende un epítopo;
en donde dicho polipéptido es capaz de inducir una respuesta inmunitaria terapéutico o profiláctica contra Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP) en los seres humanos y en animales
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2006/002893.
Solicitante: HAV VACCINES LIMITED.
Nacionalidad solicitante: Reino Unido.
Dirección: 11 PARKSIDE AVENUE,WIMBLEDON LONDON SW19 5ES.
Inventor/es: HERMON-TAYLOR,JOHN, BULL,TIMOTHY,JOHN.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 5 de Mayo de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K39/04 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Mycobacterium, p. ej. Mycobacterium tuberculosis.
- C07K14/35 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Mycobacteriaceae (F).
Clasificación PCT:
- A61K39/04 A61K 39/00 […] › Mycobacterium, p. ej. Mycobacterium tuberculosis.
- C07K14/35 C07K 14/00 […] › de Mycobacteriaceae (F).
- C12N15/63 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
Fragmento de la descripción:
Construcciones inmunogénicas.
Campo de la invención
La presente invención se refiere al tratamiento o prevención de infecciones por Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP) y al tratamiento o prevención de trastornos asociados con tales infecciones.
Fundamento de la invención
El Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP) es un miembro del complejo de Mycobacterium avium (MAC) (complejo tuberculoso aviar). A diferencia de otros MAC medioambientales, el organismo MAP posee la capacidad específica de ocasionar inflamación crónica del intestino de una diversidad de tipos histopatológicos en muchos animales, con inclusión de primates. A pesar de su amplia patogenicidad, el MAP puede vivir en animales durante años sin causar enfermedad clínica. El MAP es mas tolerante al calor que el M. bovis y ha sido cultivado partiendo de leche pasteurizada de venta al por menor en el Reino Unido, la República Checa y EE.UU. Por consiguiente, es probable la transmisión desde el ganado a los seres humanos por esta vía. Existe, asimismo, un alto riesgo de transmisión procedente de fuentes de contaminación medioambiental tales como ríos y aguas superficiales utilizadas para usos domésticos.
El organismo MAP puede ocasionar la enfermedad de Crohn en los seres humanos, en particular en personas con una susceptibilidad heredada o adquirida. Estudios recientes han confirmado que el intestino inflamado de la mayor parte de las personas con enfermedad de Crohn está infectado con estos patógenos entéricos crónicos. Estudios adicionales han informado de que el MAP puede ser cultivado partiendo de la sangre de 50% de pacientes con enfermedad de Crohn poniendo de manifiestos que, como en los animales, la infección es con frecuencia sistémica. Además, una elevada proporción de personas con el Síndrome de Intestino Irritable están infectadas también por MAP.
Los organismos en los seres humanos son de crecimiento muy lento y son sumamente difíciles de aislar y pasar en cultivos convencionales. Estos organismos están presentes con abundancia baja y adoptan una forma negativa de tinción de Ziehl Neelsen (ZN) que no puede observarse en los tejidos mediante los microscopios ópticos ordinarios. Los organismos aparecen como capaces de minimizar el reconocimiento inmunitario y, a diferencia de los esferoplastos convencionales, su forma ZN-negativa es altamente resistente a los procedimientos químicos y enzimáticos de lisis, esenciales para la detección fidedigna por PCR.
Las infecciones por MAP son extremadamente difíciles de erradicar. Los MAP intracelulares ZN-negativos son muy resistentes in vivo a medicamentos estándar anti-TB. No obstante, una proporción sustancial de pacientes con enfermedad de Crohn que pueden tomar combinaciones de rifabutina/claritromicina, a las que los MAP son más sensibles, sanan a veces espectacularmente.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a moléculas, en particular polipéptidos y los polinucleótidos que pueden emplearse para expresarlos, que pueden ser usadas para inducir una respuesta inmunitaria terapéutica o profiláctica contra MAP en los seres humanos y en los animales.
En particular, la presente invención proporciona un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptido ahpC, una secuencia de polipéptido gsd, una secuencia de polipéptido p12 y una secuencia de polipéptido mpa, en donde
dicho polipéptido ahpC comprende la secuencia de SEQ ID NO: 2, una variante de la misma que posee una identidad mayor del 70% con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 2, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido gsd comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6, una variante de la misma que posee una identidad mayor del 70% con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 6, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido p12 comprende la secuencia de SEQ ID NO: 10, una variante de la misma que posee una identidad mayor del 70% con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 10, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 10; que comprende un epítopo; y
dicho polipéptido mpa comprende la secuencia de SEQ ID NO: 14, una variante de la misma que posee una identidad mayor del 70% con la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 14 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 14, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 14 que comprende un epítopo.
Preferiblemente una variante tal mantiene la capacidad de generar una respuesta inmunitaria contra el polipéptido sin modificar. Un polipéptido ahpC variante, preferido, posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 4. Un polipéptido gsd variante, preferido, posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 8. Un polipéptido p12 variante, preferido, posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 12. Un polipéptido mpa variante, preferido, posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 16. Un polipéptido preferido de la invención comprende la secuencia de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 4, 8, 12 y 16. Una secuencia de aminoácidos particularmente preferida se da en la SEQ ID NO: 24.
La presente invención proporciona también polinucleótidos que codifican tales polipéptidos. Un polinucleótido de la invención puede comprender:
(a) el polinucleótido ahpC de la SEQ ID NO: 1 o una de sus variantes que tiene, al menos, una homología de 70% con la SEQ ID. NO: 1 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 1 ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 que codifica un epítopo;
(b) el polinucleótido gsd de la SEQ ID NO: 5 o una de sus variantes que tiene, al menos, una homología de 70% con la SEQ ID NO: 5 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 5 ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 5 que codifica un epítopo;
(c) el polinucleótido p12 de la SEQ ID NO: 9 o una de sus variantes que tiene, al menos, una homología de 70% con la SEQ ID NO: 1 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 9 o un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 9 que codifica un epítopo; y
(d) el polinucleótido mpa de la SEQ ID NO: 13 o una de sus variantes que tiene, al menos, una homología de 70% con la SEQ ID NO: 1 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 13 o un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 13 que codifica un epítopo.
Un polinucleótido de la invención puede codificar un polipéptido de la invención. En una realización una variante de un polinucleótido, según se ha definido anteriormente, puede diferir de la SEQ ID NO. dada en virtud de degeneración del código genético. En una realización, una variante de un polinucleótido puede estar optimizada en codones para la especie que se desee tratar.
La presente invención proporciona también
- Un vector que comprende un polinucleótido de la invención, o un vector capaz de expresar un polipéptido ahpC, un polipéptido gsd, un polipéptido p12 y un polipéptido mpa, según se ha definido anteriormente. Los tipos de vectores preferidos incluyen vectores de poxvirus, adenovirus y plásmidos.
- Una célula huésped que comprende un polipéptido, un polinucleótido o un vector de la invención, o una célula huésped capaz de expresar un polipéptido de la invención.
- Un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped de la invención para usar en terapia. En particular, el uso de un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped tal, para fabricar un medicamento para tratar o prevenir una infección por MAP o una condición o un síntoma asociados con infecciones por MAP.
- Un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped de la invención, para usar en un método de tratamiento o prevención de infecciones por MAP. Al sujeto sometido a tratamiento puede administrarse también un agente terapéutico adicional.
- Un kit para usar para tratar o prevenir infecciones por MAP o una condición o un síntoma asociado con infecciones por MAP, cuyo kit comprende (i) al menos un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped de la invención, y (ii) al menos otro agente terapéutico para uso simultáneo, sucesivo o separado.
Descripción breve de las figuras
Reivindicaciones:
1. Un polipéptido que comprende una secuencia de polipéptido ahpC, una secuencia de polipéptido gsd, una secuencia de polipéptido p12 y una secuencia de polipéptido mpa, en donde
dicho polipéptido ahpC comprende la secuencia de SEQ ID NO: 2, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 2 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 2, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido gsd comprende la secuencia de SEQ ID NO: 6, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 6 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 6, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 que comprende un epítopo;
dicho polipéptido p12 comprende la secuencia de SEQ ID NO: 10, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 10 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 10, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 10 que comprende un epítopo; y
dicho polipéptido mpa comprende la secuencia de SEQ ID NO: 14, una de sus variantes que posee más de 70% de identidad de secuencia de aminoácidos con la SEQ ID NO: 14 a través de la longitud total de la SEQ ID NO: 14, o un fragmento de al menos 8 aminoácidos de la SEQ ID NO: 14 que comprende un epítopo;
en donde dicho polipéptido es capaz de inducir una respuesta inmunitaria terapéutico o profiláctica contra Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP) en los seres humanos y en animales.
2. Un polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido ahpC posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 4.
3. Un polipéptido según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho polipéptido gsd posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 8.
4. Un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho polipéptido p12 posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 12.
5. Un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho polipéptido mpa posee la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 16.
6. Un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho polipéptido mpa comprende la secuencia de aminoácidos GFAEINPIA.
7. Un polipéptido según la reivindicación 1, que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID Nos: 4, 8, 12 y 16.
8. Un polipéptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos dada en SEQ ID NO: 24.
9. Un polipéptido que codifica un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
10. Un polinucleótido según la reivindicación 9, que comprende
(a) el polinucleótido ahpC de SEQ ID NO: 1 o una de sus variantes que posee al menos 70% de homología con la SEQ ID NO: 1 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 1, ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 1 que codifica un epítopo;
(b) el polinucleótido gsd de SEQ ID NO: 5 o una de sus variantes que posee al menos 70% de homología con la SEQ ID NO: 5 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 5, ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 5 que codifica un epítopo;
(c) el polinucleótido p12 de SEQ ID NO: 9 o una de sus variantes que posee al menos 70% de homología con la SEQ ID NO: 1 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 9, ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 9 que codifica un epítopo; y
(d) el polinucleótido mpa de SEQ ID NO: 13 o una de sus variantes que posee al menos 70% de homología con la SEQ ID NO: 1 a través de la longitud total de SEQ ID NO: 13, ó un fragmento de al menos 24 nucleótidos de la SEQ ID NO: 13 que codifica un epítopo.
11. Un polinucleótido según la reivindicación 10, en el que dicho polinucleótido ahpC posee la secuencia dada en SEQ ID NO: 3.
12. Un polinucleótido según la reivindicación 10 ú 11, en el que dicho polinucleótido gsd posee la secuencia dada en SEQ ID NO: 7.
13. Un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en el que dicho polinucleótido p12 posee la secuencia dada en SEQ ID NO: 11.
14. Un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en el que dicho polinucleótido mpa posee la secuencia dada en SEQ ID NO: 15.
15. Un polinucleótido según la reivindicación 10, que comprende las secuencias de ácidos nucleicos de las SEQ ID Nos: 3, 7, 11 y 15.
16. Un polinucleótido según la reivindicación 10, que comprende la secuencia de ácidos nucleicos dada en SEQ ID NO: 24.
17. Un vector que comprende un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16.
18. Un vector capaz de expresar un polipéptido ahpC, un polipéptido gsd, un polipéptido p12 y un polipéptido mpa, según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
19. Un vector según la reivindicación 17 ó 18, que es un vector de poxvirus, un vector de adenovirus o un plásmido.
20. Una célula huésped que comprende un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16 o un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19.
21. Una célula huésped que es capaz de expresar un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
22. Un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19 o una célula huésped según la reivindicación 20 ó 21, para usar en terapia.
23. Un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19 o una célula huésped según la reivindicación 20 ó 21, para usar en un método de tratamiento o prevención de una infección por MAP.
24. Un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped según la reivindicación 23, en la que dicho uso es en un método de tratamiento o prevención de una inflamación crónica del intestino, la enfermedad intestinal inflamatoria, el Síndrome del Intestino Irritable, la enteritis crónica, la enfermedad de Johne o la enfermedad de Crohn.
25. Un polipéptido, polinucleótido, vector o célula huésped según la reivindicación 23 ó 24, en la que dicho uso es en un método que comprende administrar al individuo que esta siendo tratado un agente terapéutico adicional que posee actividad contra MAP.
26. El uso de un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19 o una célula huésped según la reivindicación 20 ó 21 para fabricar un medicamento para tratar o prevenir una infección por MAP.
27. Un kit para usar para tratar o prevenir una infección por MAP, cuyo kit comprende (i) al menos un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, un vector según una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, o una célula huésped según la reivindicación 20 ó 21, y (ii) al menos otro agente terapéutico para uso simultáneo, sucesivo o separado.
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