Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.

Un conjugado de fórmula general (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: en la que

,**Fórmula**

R se elige de entre alquilo C1-4 lineal o ramificado, preferiblemente metilo o etilo, más preferiblemente metilo; R1 y R2 se eligen cada uno independientemente de entre hidrógeno o alquilo C1-4 lineal o ramificado;

preferiblemente hidrógeno, metilo o etilo;

X se elige de entre O, S, NH,**Fórmula**

I es un número entero elegido de entre 1 - 20, preferiblemente de entre 1 - 10, más preferiblemente de entre 1 - 5; m es un número entero elegido de entre 50 - 2.500, preferiblemente de entre 100 - 1.000;

n es un número entero elegido de entre 1 - 20, preferiblemente de entre 1 - 10, más preferiblemente de entre 1 - 5; el G-CSF se elige de entre el G-CSF natural, el G-CSF recombinante o el producto de una mutación génica que tenga la función del G-CSF.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2008/070320.

Solicitante: Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd.

Nacionalidad solicitante: China.

Dirección: 145 Renmin Eastern Road Xinpu District Lianyungang, Jiangsu 222002 CHINA.

Inventor/es: JIANG,TAO, WANG,RUIJUN, SUN,CHANGAN, WANG,YALI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P35/00 (Agentes antineoplásicos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales caracterizadas por los... > A61K47/48 (estando el ingrediente no activo químicamente unido al ingrediente activo, p. ej. conjugados polímero-medicamento)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P37/00 (Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos o alérgicos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos,... > A61P31/18 (para el VIH)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen péptidos... > A61K38/19 (Citoquinas; Linfoquinas; Interferones)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/04 (Compuestos nitrados)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/535 (CSF de granulocitos; CSF de granulocitos-macrófagos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos fijados sobre un soporte o inmovilizados;... > C07K17/08 (siendo el soporte un polímero sintético)

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Ilustración 1 de Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.
Ilustración 2 de Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.
Ilustración 3 de Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.
Ilustración 4 de Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.
Ilustración 5 de Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.
Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble.

Fragmento de la descripción:

Un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble Campo de la invención La presente invención se refiere a un conjugado del G-CSF modificado por un polímero hidrosoluble con la fórmula (I) : un polímero hidrosoluble-grupo conector-N-terminal del G-CSF, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo, al procedimiento de preparación del mismo y a la composición farmacéutica que comprende el mismo. En particular, se refiere a un conjugado del G-CSF de fórmula general (II) .

Antecedentes de la invención El factor estimulante de las colonias de granulocitos (G-CSF) es producido por las células mononucleares y los fibroblastos. Puede estimular a los granulocitos para que formen colonias, y tiene un efecto estimulante sobre los neutrófilos. Mediante su combinación con los receptores de la membrana de la célula objetivo, el G-CSF estimula principalmente la hematopoyesis de los granulocitos y también promueve que las células madre hematopoyéticas multipotenciales entren en el ciclo celular; promueve la proliferación, la diferenciación y la maduración de los precursores hematopoyéticos mieloides, e impulsa la liberación de los neutrófilos en la sangre, mientras que aumenta el número de neutrófilos periféricos y mejora su función, tal como la fagocitosis, la actividad citotóxica celular dependiente de anticuerpo frente a células tumorales, etc. [Metcalf, Blood 67: 257 (1986) ; Yan y col., Blood 84 (3) : 795 -799 (1994) ; Bensinger, y col., Blood 81 (11) : 3158 -3163 (1993) ; Neben, y col., Blood 81 (7) : 1960 1967 (1993) ]. Por lo tanto, el factor estimulante de las colonias de granulocitos recombinante se usa habitualmente en pacientes oncológicos sometidos a radioterapia o a quimioterapia, y en pacientes de leucemia tras un trasplante de médula ósea, como un tratamiento coadyuvante.

Los G-CSFs humanos usados habitualmente en el mercado son Neupogen y Neutrogin, y el derivado del G-CSF humano, es decir Neu-wp. Los derivados del G-CSF o las proteínas variantes también son mencionados en numerosa literatura [tales como el documento US5581476, el documento US5214132, el documento US5362853, el documento US4904584]. Estas proteínas variantes tienen múltiples sustituciones de aminoácidos que se han diseñado para explorar un G-CSF que es más estable, más activo y más adecuado para su uso clínico.

El G-CSF recombinante humano disponible comercialmente debe ser inyectado con frecuencia, y es difícil conseguir buenos efectos clínicos debido a su baja biodisponibilidad, a su corta semivida en el cuerpo humano y a su vulnerabilidad a las proteasas in vivo. La investigación muestra que la posibilidad de que las proteínas con aplicaciones terapéuticas se transformen en fármacos está muy aumentada tras ser modificadas con polietilenglicol para pasar a ser un conjugado de PEG -proteína. Este tipo de proteínas PEGiladas se han aplicado completamente en la práctica clínica [tal como Katre, Advanced Drug Deliver y Systems, 10: 91 (1993) ; Inada; y col.; J. Bioact y Compatible Polymers; 5: 343 (1990) ]. Los conjugados de proteína modificada con polietilenglicol no sólo tienen una mejor estabilidad física y química, sino también una mejor resistencia a las proteasas; además, al aumentar el peso molecular de los conjugados, se amplía la semivida de los conjugados in vivo. La toxicidad se reducirá debido a la baja posibilidad de producir anticuerpos in vivo y al reducido volumen de distribución de los conjugados en comparación con las proteínas originales. Las proteínas variantes del G-CSF o del G-CSF modificadas con PEG se han desvelado en numerosaliteratura, tales como en el documento EP0335423, en el documento EP0401384, en el documento US5824778, en el documento US5985265, en el documento WO0044785, en el documento WO2001051510, en el documento US5824784, etc. Específicamente, de entre los conjugados modificados con polietilenglicol del G-CSFs desvelados por la patente US5985265, los conjugados modificados en el N terminal del G-CSF tiene las mejores actividades biológicas tanto in vitro como in vivo. Pero la selectividad del grupo amino es baja cuando la modificación con polietilenglicol se realiza a través de una reacción de acilación, por lo que generalmente se obtiene una forma mixta de la modificación en varias posiciones (grupo amino) del G-CSF por el polietilenglicol. Se requiere una separación y una purificación para obtener cada monómero con un bajo rendimiento, y son difíciles de aplicar en la elaboración industrial. En la patente US5824784, se usó aldehído de polietilenglicol con un elevado peso molecular para modificar directamente el G-CSF. Controlando estrictamente el pH de la reacción, pueden obtenerse conjugados modificados con PEG N-terminales relativamente específicos. Indiscutiblemente, sin embargo, la reacción con elevada selectividad se consigue mediante los diferentes Pka entre el grupo amino de la cadena lateral y el grupo amino N-terminal, lo que es muy difícil de controlar en la escala de producción. Además, debido al contenido variable en cada lote de aldehídos del aldehído de polietilenglicol con un elevado peso molecular, es difícil controlar la proporción de suministro entre los aldehídos macromoleculares y las proteínas, lo que afectará definitivamente al rendimiento de la reacción y a los costes de producción. Mientras tanto, la diferente actividad biológica de los conjugados producidos mediante aldehídos macromoleculares acoplados con diferentes grupos amino afectará también a la homogeneidad y a la actividad del producto final.

El documento WO 2005/0055946 (D1) describe un GCSF glucopegilado.

El documento WO 2007/019331 (D2) describe conjugados de una fracción del GCSF y un polímero.

Descripción de la invención En vista de las deficiencias de la técnica anterior, el propósito de la presente invención es proporcionar un conjugado del G-CSF con una nueva estructura, de fórmula general (II) , o sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Otro propósito de la presente invención es proporcionar un procedimiento para la preparación del conjugado de fórmula general (II) o de sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Otro propósito de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que contiene dichos conjugados o sales farmacéuticamente aceptables y usos de los mismos.

La presente invención se refiere a un conjugado de fórmula general (I) o a sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

El G-CSF se elige de entre el G-CSF natural, el G-CSF recombinante o el producto de una mutación génica que tenga la función del G-CSF, preferiblemente el G-CSF es un derivado del G-CSF establecido en las ID. SEC. Nº : 1 10, más preferiblemente el G-CSF es la secuencia del G-CSF humano natural o Met-G-CSF establecida en la ID. SEC. Nº : 1.

en la que,

R se elige de entre alquilo C1-4 lineal o ramificado, preferiblemente R es metilo o etilo, más preferiblemente R es metilo; R1 y R2 se eligen cada uno independientemente de entre hidrógeno o alquilo C1-4 lineal o ramificado;

preferiblemente R1, R2 son hidrógeno, metilo o etilo; X se elige de entre O, S, NH,

es un número entero elegido de entre 1 -20, preferiblemente 1 es un número entero elegido de entre 1 -10, más preferiblemente 1 es un número entero elegido de entre 1 -5;

m es un número entero elegido de entre 50 -2.500, preferiblemente m es un número entero elegido de entre 100 -1.000;

n es un número entero elegido de entre 1 -20, preferiblemente n es un número entero elegido de entre 1 -10, más preferiblemente n es un número entero elegido de entre 1 -5;

el G-CSF se elige de entre el G-CSF natural, el G-CSF recombinante o los productos de una mutación génica con la función del G-CSF.

Además,... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un conjugado de fórmula general (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

en la que,

R se elige de entre alquilo C1-4 lineal o ramificado, preferiblemente metilo o etilo, más preferiblemente metilo; R1 y R2 se eligen cada uno independientemente de entre hidrógeno o alquilo C1-4 lineal o ramificado; preferiblemente hidrógeno, metilo o etilo; X se elige de entre O, S, NH,

I es un número entero elegido de entre 1 -20, preferiblemente de entre 1 -10, más preferiblemente de entre 1 -5; m es un número entero elegido de entr.

50. 2.500, preferiblemente de entr.

100. 1.000; n es un número entero elegido de entre 1 -20, preferiblemente de entre 1 -10, más preferiblemente de entre 1 -5; el G-CSF se elige de entre el G-CSF natural, el G-CSF recombinante o el producto de una mutación génica que tenga la función del G-CSF.

2. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que el G-CSF se elige de entre derivados del G-CSF de una proteína establecida en la ID. SEC. Nº : 1 -10.

3. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que la secuencia de dicho G-CSF es la secuencia del G-CSF humano natural.

4. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que dicho G-CSF es el 20 Met-G-CSF mostrado en la ID. SEC. Nº : 1.

5. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que dicho conjugado incluye:

m es un número entero elegido de entre 400 -500; o m es un número entero elegido de entre 400 -500.

6. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, en el que dicho conjugado reacciona con un ácido para formar una sal, en los que el ácido se elige de entre ácidos orgánicos o inorgánicos.

7. Un conjugado o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 6, en el que dicho ácido orgánico se elige de entre ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido butírico, ácido maleico o ácido ptoluensulfónico o mezclas de los mismos, preferiblemente acético ácido o ácido trifluoroacético; el ácido inorgánico se elige de entre ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico o ácido metansulfónico, o mezclas de los mismos, preferiblemente ácido clorhídrico.

8. Un procedimiento de preparación de un conjugado de la reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas de:

1) hacer reaccionar compuestos de fórmula general (III) con el grupo amino N-terminal del G-CSF mediante una aminación reductora para obtener los compuestos de fórmula general (IV) :

2) eliminar el grupo protector del mercapto de los compuestos de fórmula general (IV) para obtener los compuestos de fórmula general (V) :

3) hacer reaccionar los compuestos de fórmula general (V) con mPEG-MAL mediante una reacción de adición de Michael para obtener los compuestos (II) :

en las que, R, R1, R2, G-CSF, X, I, m y n son según se define en la reivindicación 3; Z es un grupo protector de mercapto elegido de entre un grupo formilo, acetilo, propionilo, tritilo o terc-butilo, preferiblemente un grupo acetilo.

9. El uso de un conjugado o de una sal farmacéutica del mismo de la reivindicación 1 en la preparación de medicamentos para el tratamiento de la leucopenia causada por radioterapia o por quimioterapia, SIDA y de otras enfermedades inmunodeficitarias, de infecciones bacterianas.

10. Un conjugado o una sal farmacéutica del mismo de la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de la leucopenia causada por radioterapia o por quimioterapia, SIDA y otras enfermedades inmunodeficitarias, de 25 infecciones bacterianas.

11. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz del conjugado o de una sal farmacéutica del mismo de la reivindicación 1, y vehículos farmacéuticos aceptables.

12. El uso de la composición farmacéutica de la reivindicación 10 en la preparación de los medicamentos para el tratamiento de la leucopenia causada por radioterapia o por quimioterapia, SIDA y otras enfermedades inmunodeficitarias, de infecciones bacterianas.

13. Una composición farmacéutica de la reivindicación 11 para su uso en el tratamiento de la leucopenia causada por radioterapia o por quimioterapia, del SIDA y de otras enfermedades de inmunodeficencia, de infecciones bacterianas.