Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España.

Inventos patentados en España en los últimos 80 años. Clasificación Internacional de Patentes CIP 2013.

Composiciones para tratar una afección auto-inmune inflamatoria.

Patente Europea. Resumen: Medicamento que comprende esencialmente al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

Solicitante: TXCELL.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: LES CARDOULINES ALLEE DE LA NERTIERE SOFIA ANTIPOLIS 06560 VALBONNE FRANCIA.

Inventor/es: Foussat,Arnaud, Brun,Valérie.

Fecha de Publicación de la Concesión: 2 de Enero de 2013.

Clasificación Internacional de Patentes: A61K39/00 (Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G 01 N 33/53) [2] Notas (1) Los grupos 39/002 a 39/295 cubren las preparaciones que contienen protozoos, bacterias, virus, o sus partes elementales, p. ej. partes de membranas. [3] (2) La preparación de composiciones que contienen antígenos o anticuerpos se clasifican igualmente en la subclase C 12 N si la etapa del cultivo del microorganismo tiene interés. [3]), A61K38/21 (....Interferones [6]), A61K45/06 (.Mezclas de ingredientes activos sin caracterización química, p. ej. compuestos antiflojísticos y para el corazón [2]), A61K35/12 (.Sustancias que provienen de mamíferos o de pájaros [2]), A61K38/16 (.Péptidos que tienen más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados [6]), C12N5/0784.

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Descripción:

Composiciones para tratar una afección auto-inmune inflamatoria

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de tratamiento de una afección autoinmune inflamatoria. La presente invención se refiere en particular a métodos para tratar una afección autoinmune inflamatoria y enfermedades inmunes relacionadas, usando un medicamento que comprende las células humanas Tr1 dirigidas contra la proteína humana de choque térmico.

Antecedentes

Las enfermedades inflamatorias autoinmunes afectan a millones de personas en todo el mundo y pueden tener efectos devastadores en la duración y la calidad de vida.

Las terapias convencionales para tratar las enfermedades inflamatorias autoinmunes en los seres humanos se basan en la inmunosupresión no específica, tales como, por ejemplo, aquellas mediadas por esteroides o agentes citotóxicos. Las estrategias más recientes incluyen el bloqueo de varias rutas de citocinas pro-inflamatorias, tales como las que involucran a TNF e IL-1. Sin embargo, ninguna de estas estrategias invierte el proceso pro-inflamatorio o cura la enfermedad. Cuando se suspende el tratamiento, se produce una reactivación de la inflamación por meses, provocando de ese modo un tratamiento de por vida con agentes inmunosupresores. Esto inevitablemente conduce a serios efectos secundarios.

Por lo tanto, existe una necesidad de nuevos tratamientos para las enfermedades autoinmunes inflamatorias.

Diversos estudios demostraron que las proteínas de choque térmico (HSPs) y, en particular, HSP60 y HSP70, constituyen un grupo de autoantígenos involucrados en la regulación de enfermedades autoinmunes inflamatorias.

Por lo tanto, se han propuesto terapias dirigidas a las HSPs para tratar enfermedades autoinmunes inflamatorias tales como la inmunización con lisado de E. coli o vacunas de ADN que comprenden una secuencia de ácido nucleico que codifica HSP60, HSP70 o HSP90 o su fragmento.

En la presente invención, el solicitante pretende proporcionar una alternativa de tratamiento para una enfermedad autoinmune inflamatoria basada en el uso de células Tr1 dirigidas a un HSP humano.

Zanin-Zhorov y otros J. Clin Invest. 116 : 2022-2032 (2006) describe que la proteína de choque térmico 60 mejora la función de la célula T reguladora cd4+ cd25+ a través de la señalización de TLh2 innato.

Sumario de la invención

Un objetivo de la invención es un medicamento que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano. Otro objetivo de la invención es una composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

Otro objetivo de la invención es el uso de una composición que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

De acuerdo con una modalidad de la invención, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección de artritis, preferentemente artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección de esclerosis múltiple. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria intestinal, preferentemente enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una vasculitis, preferentemente enfermedad de Wegener y aterosclerosis. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es el asma. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es el rechazo de trasplantes o enfermedad de injerto contra huésped. De acuerdo con otra modalidad, dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria del conducto biliar, preferentemente cirrosis biliar primaria y

Colangitis esclerosante primaria.

De acuerdo con otra modalidad, la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

De acuerdo con otra modalidad, la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigida contra un antígeno conocido que está involucrado en la afección autoinmune inflamatoria.

Otro objetivo de la invención es un proceso para tratar una afección autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita, dicho proceso comprende las etapas de:

obtener las células Tr1 dirigidas a un HSP humano, dichas células Tr1 se obtienen de una muestra de sangre de dicho sujeto,

clonar dichas células Tr1 dirigidas a un HSP humano,

expandir aún más los clones Tr1 obtenidos en la etapa anterior,

inyectar los clones Tr1 así obtenidos en dicho sujeto, preferentemente por vía intravenosa.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: producción IL-10 específica de clones Tr1 después de la activación de HSP60

La Figura 1 describe el incremento específico de la producción de IL-10 por los clones de células Tr1 en la presencia del antígeno específico HSP60. Los clones se activaron con o sin HSP60 en presencia de las células presentadoras de antígenos autólogas irradiadas. Después de 48 horas, la producción de IL-10 se midió por ELISA.

Figura 2: Perfil de secreción de citocinas de clones Tr1 específicos a HSP60

La secreción de IL-10, IL-4 e IFN de los clones de células Tr1 específicas a HSP60 se midieron en sobrenadantes de 48 horas de células activadas por anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28.

Figura 3: Actividad supresora in vitro de clones Tr1 HSP60

La actividad supresora de los clones Tr1 HSP60 se valoró evaluando la acción inhibidora de sus sobrenadantes en la proliferación de linfocitos T CD4+ autólogos. Los linfocitos T CD4+ se activaron usando anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28 e

Interleucina-2 en presencia o ausencia de los sobrenadantes de los clones Tr1 activados. La proliferación celular de las células T CD4+ autólogas se midió después de cinco días. Los resultados muestran que la adición de los sobrenadantes de células Tr1 a linfocitos T CD4+ inhibe la proliferación de células T.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Definición

El término "células Tr1" como se utiliza en la presente se refiere a las células que tienen en reposo el siguiente fenotipo CD4+CD25-FoxP3 y la capacidad de secretar altos niveles de IL-10 y niveles significativos de TGF-º en activación. Las células Tr1 se caracterizan, en parte, por su único perfil de citocinas: producen altos niveles de IL-10, niveles significativos de TGF-º y niveles intermedios de IFN-y, pero poco o nada de IL-4 o IL-2. La producción de citocinas típicamente se evalúa en cultivos de células después de la activación con activadores policlonales de linfocitos T tales como anticuerpos anti-CD3+ anti-CD28-o interleucina-2, PMA + ionomicina. Como alternativa, la producción de citocinas se evalúa en los cultivos de células después de la activación con el antígeno específico de células T presentado por las células presentadoras de antígeno. Los altos niveles de IL-10 corresponden con al menos aproximadamente 500 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, ó 20 000 pg/ml o más. Los niveles significativos de TGF-º corresponden con al menos aproximadamente 100 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 200, 300, 400, 600, 800, ó 1000 pg/ml o más.

Los niveles intermedios de IFN-y corresponden a concentraciones comprendidas entre 0 pg/ml y al menos 400 pg/ml, típicamente mayor de aproximadamente 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800, ó 2000 pg/ml o más. Poco o ningún IL-4 ó IL-2 corresponden con menos de aproximadamente 500 pg/ml, preferentemente menos de aproximadamente 250, 100, 75, ó 50 pg/ml, o menos.

El término "antígeno", como se utiliza en la presente se refiere a una proteína o péptido para el cual las células de esta invención se usan para modular, o para usar en cualquiera de los métodos de esta invención. En una modalidad, el término "antígeno" puede referirse a una molécula de un derivado sintético, o una molécula de origen natural, que comparte homología de secuencia con un antígeno de interés, u homología estructural con un antígeno de interés, o una combinación de éstos. En una modalidad, el antígeno puede ser un mimétopo. Un "fragmento" del antígeno se refiere a cualquier subconjunto del antígeno, como un péptido más corto. Una "variante" del antígeno se refiere a una molécula sustancialmente similar ya sea al antígeno completo o un fragmento de éste. Las variantes de antígenos pueden prepararse convenientemente por síntesis química directa del péptido variante, usando métodos bien conocidos en la técnica.

El término "sujeto", como se utiliza en la presente se refiere a un ser humano.

El término "cantidad eficaz" como se utiliza en la presente se refiere a una cantidad suficiente para producir un resultado clínico beneficioso o deseado (por ejemplo, mejoría en la afección clínica) .

El término "clon" o "población del clon", como se utiliza en la presente se refiere a una población de células diferenciadas que se derivan de una única célula diferenciada.

El término "tratamiento" o "tratar" como se utiliza en la presente se refiere generalmente a una intervención clínica en un intento de alterar el curso natural del individuo que se trata, y se puede realizar durante el curso de la patología clínica. Los efectos deseables incluyen, pero no se limitan a, aliviar los síntomas, suprimir, disminuir o inhibir cualquiera de las consecuencias patológicas directas o indirectas de la enfermedad, disminuir la velocidad de progresión de la enfermedad, mejorar o suavizar el estado de enfermedad, y producir la remisión o pronóstico mejorado. En el contexto de la invención, se refiere a cualquier mejoría en los síntomas clínicos de la afección autoinmune, así como cualquier mejoría en el bienestar de los pacientes.

El término "enfermedad autoinmune", como se utiliza en la presente se refiere a una respuesta inmune dirigida contra un autoantígeno.

La presente invención

La presente invención se refiere a un método para tratar una afección autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita, que comprende la administración a dicho sujeto de una composición que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un medicamento que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

La presente invención pretende proporcionar también una composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

De acuerdo con la invención, la "población de células Tr1 humanas" se corresponde con las células Tr1 que se describen anteriormente en las definiciones de la presente y no incluye las células T reguladoras CD4+CD25+ o células T reguladoras FoxP3+ (Treg natural o convencional) , células Th3 que secretan TGF- o células reguladoras NKT.

De acuerdo con la invención, el término "HSP humano" se refiere a las familias de HSP10, HSP40, HSP60, HSP70, HSP90 y HSP100 humano, sus fragmentos y mezclas.

En una modalidad preferida de la invención, dichas células Tr1 se dirigen contra HSP60, HSP70, HSP90, sus fragmentos y mezclas.

En una modalidad más preferida de la invención, dichas células Tr1 se dirigen contra HSP60 y sus fragmentos.

Sin desear limitarse por una teoría, el solicitante asume que la población de células Tr1 inyectada y dirigida contra un

HSP humano puede activarse in vivo por las HSPs cuya expresión se regula positivamente en una afección autoinmune inflamatoria. En una modalidad de la invención, las células Tr1 se puede obtener:

a) aislando una población de células progenitoras a partir de un sujeto, b) obteniendo una población de células dendríticas mediante el cultivo de dicha población de células progenitoras en presencia de IL-10, c) contactando las células de la etapa b) con una población de linfocitos T CD4+ aislados a partir de dicho sujeto en la presencia de un HSP humano para permitir la diferenciación de células T CD4+ dirigidas a dicho antígeno en la población de células Tr1, y d) recuperando la población de células Tr1 de la etapa c) .

En la etapa b) , IL-10 está presente de 50 a 250 U/ml, preferentemente a 100 U/ml en el medio de cultivo. Dicho método para obtener las células Tr1 se describe en Wakkach y otros (Immunity 2003 May; 18 (5) :605-17) .

Dicho método se puede llevar a cabo también usando Dexametasona y Vitamina D3, o DCs inmaduras o tolerogénicas en lugar de las DC de la etapa b) .

En otra modalidad de la presente invención, las células Tr1 humanas se pueden obtener:

a) cultivando una población de células T CD4+ dirigida contra un HSP humano, aislada de un sujeto en unos medios con una cantidad apropiada de IFN-a, y b) recuperando la población de células Tr1.

El IFN-a, está presente preferentemente en los medios a 5 ng/ml. En la etapa a) , los medios pueden comprender además una cantidad apropiada de IL-10, preferentemente a 100 U/ml.

En la etapa b) , la población de células Tr1 se cultivó en unos medios que comprenden IL-15 para permitir la proliferación, siendo IL-15 preferentemente a 5 ng/ml en los medios. Dicho método para obtener las células Tr1 se describe en la patente US6746670.

En aún otra modalidad de la invención, las células Tr1 humanas se pueden obtener: a) activando in vitro una población de células T CD4+ en presencia de un HSP humano, presentada por las células presentadoras de antígeno artificial, y b) recuperando unas células T CD4+ activadas que comprenden al menos 10% de las células Tr1.

Preferentemente, las células presentadoras de antígeno artificial expresan una molécula del sistema de HLA II y una molécula LFA-3 humana y no expresan las moléculas de coestimulación B7-1, B7-2, B7-H1, CD40, CD23 e ICAM-1.

Dicho proceso, para obtener células Tr1 se describe en la solicitud de patente WO02/092793.

En aún otra modalidad de la invención, las células humanas Tr1 se pueden obtener: a) activando in vitro una población de células T CD4+ en presencia de un HSP humano y una cantidad apropiada de IL-10; y b) recuperando la población de células Tr1.

Preferentemente, la IL-10 está presente en los medios a 100 U/ml. Dicho método se describe en Groux y otros (Nature 1997, 389 (6652) :737-42) .

En aún otra modalidad de la invención, las células Tr1 humanas se pueden obtener:

a) estimulando una población de leucocitos o una población de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) con un HSP humano, b) recuperando la población de células Tr1 humanas HSP-específicas a partir de la población estimulada, c) opcionalmente expandir dicha población de células Tr1 humanas HSP-específicas.

Los leucocitos incluyen varios tipos de células, que se caracterizan por su importancia, su distribución, su número, su duración y su potencialidad. Estos tipos son los siguientes: los leucocitos polinucleares o granulares, entre los que se encuentran los leucocitos eosinófilos, los neutrófilos y los basófilos, y las células mononucleares o células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) , que son grandes células blancas de la sangre y consisten en los tipos de células del sistema inmune (linfocitos y monocitos) . Los leucocitos o los PBMCs se pueden separar de la sangre periférica mediante cualquier método conocido por los expertos en la técnica. Favorablemente, para la separación de las PBMC, se puede usar la centrifugación, preferentemente centrifugación en gradiente de densidad, centrifugación en gradiente de densidad preferentemente discontinuo. Una alternativa es el uso de anticuerpos monoclonales específicos. En determinadas modalidades las PBMC típicamente se aíslan a partir de la sangre entera por medio de Ficoll-Hypaque, usando procedimientos estándares. En otras modalidades, las PBMC se recuperan por medio de leucoféresis.

Dicho método se describe en la solicitud de patente WO2007/010406.

En aún otra modalidad, las células Tr1 humanas se pueden obtener:

a) cultivando una población de leucocitos o una población de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) con células madre mesenquimales en presencia de un HSP humano, b) recuperando la población de células Tr1.

Dicho método se puede llevar a cabo también con células T vírgenes o de memoria en lugar de PBMC o leucocitos.

La población de células Tr1 obtenidas así pueden además expandirse por cultivo en presencia de citocinas tales como interleucina-2 e interleucina-4. Como alternativa, la interleucina-15 e

La interleucina-13 se puede usar también en cultivos de expansión de células Tr1.

En los métodos descritos anteriormente, las células Tr1 humanas se pueden caracterizar por el método de identificación descrito en WO2005/000344. Dicho método de identificación de células Tr1 se basa en la detección de la presencia simultánea de los productos de expresión de genes que codifican la molécula CD4 y las moléculas del grupo que comprende CD18 y/o CD11a, y CD49b. Las células Tr1 se pueden identificar y/o purificar por Elisa, citometría de flujo, o métodos de inmunoafinidad con anticuerpos dirigidos contra dichos marcadores.

Las células Tr1 se pueden enriquecer también por la selección positiva o selección negativa usando citometría de flujo o perlas magnéticas. Dichos métodos se describen también en WO2005/000344.

En otra modalidad de la presente invención, las células Tr1 dirigidas a un antígeno de unión asociado se puede expandir por el método in vitro descrito en WO2006/108882. Dicho método comprende:

a) cultivar a una temperatura T1 inferior a 35°C, en un medio de cultivo Mf, las células de alimentación tales como células de alimentación de insectos, dicha temperatura T1 permitir la proliferación de las células de alimentación y dichas células de alimentación expresar los factores que interactúan con las siguientes proteínas de superficie celular:

- el complejo CD3/TCR, -la proteína CD28, -el receptor IL-2, -la proteína CD2, -el receptor IL-4,

b) contactar las células de alimentación obtenidas en la etapa a) despejadas o no de su medio de cultivo Mf, con la población de células Tr1 contenida en el medio de cultivo Mp, en donde dicho medio de cultivo Mp no contiene inicialmente los factores citados en la etapa a) , para obtener una mezcla que contiene la población de células Tr1, las células de alimentación y el medio de cultivo Mp, c) cultivar la mezcla obtenida en la etapa b) a una temperatura T2 que es al menos 35°C, dicha temperatura que se elige tal que la población de células Tr1 prolifera y las células de alimentación no proliferan, d) recuperar dicha población de células Tr1 expandida.

Los ejemplos de factores que interactúan con las proteínas de la superficie celular mencionadas anteriormente incluyen:

un anticuerpo anti-CD3 modificado, en donde el dominio intracitoplásmico de anti-CD3 de la cadena pesada de CD3 se sustituye con un dominio transmembrana,

la proteína CD80 o CD86,

la IL-2 secretada por las células de alimentación,

la proteína CD58,

una interleucina seleccionada del grupo que comprende IL-4 e IL-13.

En una modalidad preferida de la presente invención, dichas células Tr1 dirigidas a un HSP humano se pueden clonar usando métodos convencionales para clonar células T.

En una modalidad preferida de la presente invención, dicha composición comprendiendo al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano o al menos un clon de células Tr1 humanas dirigido contra un HSP humano se pueden congelar para almacenarse.

De acuerdo con una modalidad preferida, dicha población de células Tr1 humanas es una población del clon Tr1 humano.

Los vehículos farmacéuticamente aceptables útiles en la presente son convencionales. Remington's Pharmaceutical Sciences 16va edición, Osol, A. Editor (1980) describe la composición y formulaciones adecuadas para el suministro farmacéutico de la composición de la presente invención. En general, la naturaleza del vehículo dependerá del modo de administración que se emplea. Por ejemplo, las formulaciones parenterales normalmente comprenden fluidos inyectables que incluyen fluidos farmacéutica y fisiológicamente aceptables tales como agua, salina fisiológica, soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, aceite de sésamo, glicerol, etanol, combinaciones de estos, o similares, como vehículo. El vehículo y composición pueden ser estériles, y la formulación se adecua al modo de administración. Además de los vehículos biológicos neutros, las composiciones farmacéuticas que se administran pueden contener cantidades menores de sustancias no tóxicas auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsificantes, conservantes, y agentes tamponantes del pH y similares, por ejemplo acetato de sodio o monolaurato de sorbitán. La composición puede ser una solución líquida, suspensión, emulsión.

La presente invención se refiere al uso de al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica como se describió anteriormente en la presente para tratar una enfermedad autoinmune inflamatoria.

Una afección autoinmune inflamatoria incluye pero no se limita a: tiroiditis autoinmune (de Hasimoto) , hipertiroidismo (enfermedad de Graves) , insuficiencia autoinmune suprarrenal (enfermedad de Addison) , ooforitis autoinmune, orquitis autoinmune, hepatitis autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, hemoglobinuria paroxística fría, trombocitopenia autoinmune, neutropenia autoinmune, anemia perniciosa, anemia de glóbulos rojos pura, coagulopatías autoinmunes, miastenia gravis, polineuritis autoinmune, esclerosis múltiple, pénfigo y otras enfermedades ampollosas, carditis reumática, síndrome de Goodpasture, síndrome poscardiotomía, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, síndrome de Sjorgen, polimiositis, dermatomiositis, esclerodermia, enfermedades inflamatorias del intestino: enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa; enfermedades pulmonares obstructivas crónicas, enfermedades inflamatorias crónicas, enfermedad celíaca, vasculitis, enfermedad de Wegener, síndrome de Churg-Strauss, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, enfermedad cardiovascular, artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, artritis idiopática juvenil, polidermatomiositis, shock séptico, enfermedad de injerto contra huésped, enfermedad de huésped contra injerto, asma, rinitis, psoriasis, caquexia asociada con cáncer, eczema, Vitiligo, síndrome de Reiter, enfermedad de Kawasaki, púrpura trombocitopénica idiopática, síndrome de Guillain-Barré, síndrome de del anticuerpo antifosfolípido (APS) , aterosclerosis, narcolepsia.

En una modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica como se describió anteriormente en la presente para tratar una enfermedad autoinmune inflamatoria, que no es diabetes.

Preferentemente, dicha enfermedad autoinmune inflamatoria se selecciona en el grupo que comprende la afección intestinal inflamatoria, tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa; afección de artritis, tales como artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil; esclerosis múltiple, enfermedad de Wegener, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, asma, rechazo de trasplante (enfermedad de huésped contra injerto) , enfermedad de injerto contra huésped.

Con mayor preferencia, dicha enfermedad autoinmune inflamatoria se selecciona del grupo de la artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, asma y rechazo de trasplante o enfermedad de injerto contra huésped.

En una modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar artritis, tales como artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar la esclerosis múltiple.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar la afección intestinal inflamatoria, preferentemente para tratar la enfermedad de Crohn, y colitis ulcerosa.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar vasculitis tales como la enfermedad de Wegener y aterosclerosis.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar la inflamación autoinmune del conducto biliar o el hígado tales como cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar trastornos relacionados con el trasplante tales como enfermedad de huésped contra injerto y enfermedad de injerto contra huésped.

En otra modalidad preferida, la presente invención se refiere al uso de una composición como se describió anteriormente en la presente para la preparación de un medicamento o una composición farmacéutica para tratar el asma.

Un objetivo de la presente invención es también un método para tratar una enfermedad autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz del medicamento o composición farmacéutica como se describió anteriormente en la presente.

La composición se puede formular para uso parenteral, intramuscular, intravenoso, intraperitoneal, inyección, inhalación intranasal , inhalación pulmonar, intradérmica, intraarticular, intratecal.

Preferentemente, el medicamento o composición farmacéutica de la invención se puede administrar por inyección intramuscular, intraperitoneal o intravenosa, o por inyección directa en los ganglios linfáticos del paciente, con mayor preferencia por inyección intravenosa.

La cantidad de células Tr1 dirigidas a un HSP humano eficaz en el tratamiento de una afección autoinmune inflamatoria dependerá de la naturaleza de la inflamación, y se puede determinar por técnicas clínicas estándares. La dosis precisa a ser empleada en la formulación también dependerá de la vía de administración, y la seriedad de la enfermedad o trastorno, y debe ser decidida de acuerdo al criterio del médico y de las circunstancias de cada individuo. Las dosis efectivas pueden extrapolarse a partir de las curvas de dosis-respuesta derivadas de los sistemas de prueba del modelo animal o in vitro.

En una modalidad de la presente invención, se administran al sujeto de 104/kg a 109/kg de células. Preferentemente se administran al sujeto de 105/kg a 107/kg de células y con mayor preferencia aproximadamente 106/kg de células.

En una modalidad de la invención, el sujeto se administra con el medicamento en el momento cuando se demuestra el recrudecimiento por una disminución en el estado clínico del sujeto.

En una modalidad de la invención, el sujeto se administra una vez con el medicamento o la composición farmacéutica de la presente invención.

En una segunda modalidad de la invención, el sujeto se administra una vez al mes con el medicamento o la composición farmacéutica de la presente invención.

En una tercera modalidad de la invención, el sujeto se administra una vez al trimestre con el medicamento o la composición farmacéutica de la presente invención.

En una cuarta modalidad de la invención, el sujeto se administra una o dos veces al año con el medicamento o la composición farmacéutica de la presente invención.

En otra modalidad de la presente invención, el medicamento o composición farmacéutica a administrar a un sujeto que lo necesita comprende células Tr1 humanas autólogas de las células de dicho sujeto.

Esto significa que las células Tr1 se administrarán al sujeto del que provienen o que los precursores usados para la producción de células Tr1 provienen del sujeto que se le administrarán las células Tr1.

La presente invención se refiere también a un proceso para tratar una afección autoinmune inflamatoria un sujeto que lo necesita, dicho proceso que comprende las etapas de:

obtener una muestra de sangre de dicho sujeto,

obtener las células Tr1 dirigidas a un HSP humano,

clonar dichas células Tr1 dirigidas a un HSP humano,

expandir aún más los clones de Tr1 obtenidos en la etapa anterior,

inyectar los clones Tr1 así obtenidos en dicho sujeto, preferentemente por vía intravenosa.

Preferentemente, la clonación y expansión de los clones Tr1 dirigidos a un HSP humano se llevan a cabo con el siguiente método:

a) cultivar a una temperatura T1 inferior a 35°C, en un medio de cultivo Mf, las células de alimentación tales como células de alimentación de insectos, dicha temperatura T1 permitir la proliferación de las células de alimentación y dichas células de alimentación expresar los factores que interactúan con las siguientes proteínas de superficie celular: -el complejo CD3/TCR, -la proteína CD28, -el receptor IL-2, -la proteína CD2, -el receptor IL-4,

b) contactar las células de alimentación obtenidas en la etapa a) despejadas o no de su medio de cultivo Mf, con la población de células Tr1 contenida en el medio de cultivo Mp, en donde dicho medio de cultivo Mp no contiene inicialmente los factores citados en la etapa a) , para obtener una mezcla que contiene la población de células Tr1, las células de alimentación y el medio de cultivo Mp, c) cultivar la mezcla obtenida en la etapa b) a una temperatura T2 que es al menos 35°C, dicha temperatura se elige de modo que la población de células Tr1 prolifera y las células de alimentación no proliferan, d) recuperar dicha población de células Tr1 expandida

Los ejemplos de factores que interactúan con las proteínas de superficie celular anteriormente mencionadas incluyen:

un anticuerpo anti-CD3, modificado, en donde el dominio intracitoplásmico anti-CD3 de la cadena pesada de CD3 se sustituye con un dominio transmembrana,

la proteína CD80 o CD86,

la IL-2 secretada por las células de alimentación,

la proteína CD58,

una interleucina seleccionada del grupo que comprende IL-4 e IL-13.

En otra modalidad de la invención, el proceso para tratar una enfermedad autoinmune inflamatoria comprende las etapas adicionales, tales como administración combinada de uno o más agentes terapéuticos tales como los descritos en la presente con posterioridad y/o la administración combinada de una cantidad eficaz de un medicamento o composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un antígeno conocido por estar involucrado en la afección autoinmune inflamatoria autoinmune tal como se describe en la presente con posterioridad.

En otra modalidad de la presente invención, el método para tratar una enfermedad autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

La presente invención se refiere al uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar una afección autoinmune inflamatoria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria.

Los ejemplos de agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar una afección artrítica inflamatoria son los siguientes:

corticoides (prednisona) ,

agentes de bloqueo del TNF tales como Infliximab, Adalimumab, Etanercept;

anti-interleucinas tales como Anakinra, AMG108, Iguratimod, Actemra

anti-linfocitos B tales como Rituximab, Epratuzumab;

moléculas anti-coestimuladoras tales como Abatacept, Belimumab;

agentes tolerogénicos (moléculas sintéticas dirigidas a receptores ADN de superficie de linfocito B) tales como LJP 394 o TV-4710;

proteína anti-complemento tal como Eculizumab;

Inhibidores de moléculas de señalización de células T tal como CP690550

Inhibidores de la migración celular tal como antagonistas de receptores de quimocina (Maraviroc, INCB3284)

leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, minociclina, Dpenicilamina,

terapia de combinación de estas tales como metotrexato + sulfasalina, metotrexato + hidroxicloroquina, metotrexato + azatioprina, metotrexato + infliximab, metotrexato + leflunomida, metotrexato + etanercept, ciclosporina + hidroxicloroquina, ciclosporina + metotrexato, metotrexato + sulfasalazina + hidroxicloroquina.

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar una afección artrítica inflamatoria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de corticoides, agentes de bloqueo del TNF, anti-interleucinas, anti-linfocitos B, moléculas anti-coestimuladoras, agentes tolerogénicos, proteínas anti-complemento, inhibidores de moléculas de señalización de células T, inhibidores de la migración celular, metotrexato, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, minociclina, D-penicilamina.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar una afección artrítica inflamatoria en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de corticoides, agentes de bloqueo del TNF, anti-interleucinas, anti-linfocitos B, moléculas anti-coestimuladoras, agentes tolerogénicos, proteínas anti-complemento, inhibidores de moléculas de señalización de células T, inhibidores de la migración celular, metotrexato, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, minociclina, D-penicilamina.

Los ejemplos de los agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar la esclerosis múltiple son los siguientes:

interferones, por ejemplo, interferón beta-la humano (por ejemplo, AVONEX® o Rebif®) e interferón beta-Ib (BETASERON) ; interferón beta humano sustituido en la posición 17; Berlex/Chiron) ;

acetato de glatiramer (además llamado Copolímero 1, Cop-1; COPAXONE) ; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.) ; y derivados,

fumaratos, por ejemplo, dimetil fumarato (por ejemplo, Fumaderm®) ;

Rituxan® (rituximab) u otro anticuerpo anti-CD20, por ejemplo, uno que compite con o se une a un epítopo superpuesto con rituximab;

mitoxantrona (NOVANTRONE®, Lederle) ;

un quimioteapéutico, por ejemplo, clabribina (LEUSTATIN®) , azatioprina (IMURAN®) , ciclofosfamida (CYTOXAN®) , ciclosporina-A, metotrexato, 4-aminopiridina, y tizanidina;

un corticosteroide, por ejemplo, metilprednisolona (MEDRONE®, Pfizer) , prednisona;

una inmunoglobulina, por ejemplo, Rituxan® (rituximab) ; CTLA4 Ig; alemtuzumab (MabCAMPATH®) o daclizumab (un anticuerpo que se une a CD25) ;

estatinas;

inmunoglobulina G intravenosa (IgGIV) ,

Nataluzimab (Tysabri) anticuerpo anti-integrina alfa-4,

el antagonista BX471 (ZK811752) del receptor 1 de quimocina CC oral ,

FTY720 (fingolimod) ,

anticuerpos o antagonistas de citocinas humanas o factores de crecimiento, por ejemplo, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-23, EMAP-11, GM-CSF, FGF, y PDGF.

anticuerpos contra moléculas de superficie celular tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 u otros ligandos.

FK506, rapamicina, mofetil micofenolato, leflunomida, fármacos no esteroidales anti-inflamatorios (NSAIDs) , por ejemplo, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores del complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización mediante citocinas proinflammatorias como se describe en la presente invención, inhibidores de la enzima convertidora de ILI[beta] (por ejemplo, Vx740) , anti-P7, PSGL, inhibidores TACE, inhibidores de la señalización de las células T

tales como inhibidores quinasa, inhibidores metaloproteinasa, sulfasalazina, azatioprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina,

amantadina, baclofeno, papaverina, meclizina, hidroxizina, sulfametaxazol, ciprofloxacina, docusato, pemolina, dantroleno, desmopresina, dexametasona, tolterodina, fenitoína, oxibutinina, bisacodilo, venlafaxina, amitriptilina, metenamina, clonazepam, isoniazida, vardenafil, nitrofurantoína, muciloide hidrofílico de psyllium, alprostadil, gabapentina, nortriptilina, paroxetina, bromuro de propantelina , modafinil, fluoxetina, fenazopiridina, metilprednisolona, carbamazepina, imipramina, diazepam, sildenafil, bupropión, y sertralina.

Los ejemplo de terapias de combinación usadas actualmente son:

acetato de glatiramer y albuterol,

acetato de glatiramer y minociclina,

interferón-beta 1a y mofetil micofenolato,

BHT-3009 y atorvastatina,

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar la esclerosis múltiple en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con uno o más agentes terapéuticos en el grupo de interferón-beta, acetato de glatiramer, mitoxantrona, ciclofosfamida, metotrexato, aziatropina o natalizumab.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar la esclerosis múltiple, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de interferón-beta, acetato de glatiramer, mitoxantrona, ciclofosfamida, metotrexato, aziatropina o natalizumab.

Los ejemplos de agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar una afección intestinal inflamatoria son los siguientes:

anticuerpos o antagonistas de citocinas humanas o factores de crecimiento, particularmente, anti-TNF tales como infliximab, adalimumab, anti-IL1, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-17 y anti-IL-23; análogos del antagonista del receptor de IL-1 (anakinra) , y agentes de bloqueo del TNF tal como etanercept,

anticuerpos contra moléculas de la superficie celular tales como anti-integrina a4 (natalizumab) , CD2, CD3 (visiluzumab) , anti-CCR9, anti-LFA1 y anti-ICAM1;

ácido 5 aminosalicílico y análogos tales como mesalazina, sulfazalina, olsalazina, balsalazida;

corticoides tales como prednisona, budesonida, hidrocortisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, bedometasona, tixocortol;

probióticos tales como saccharomyces boulardii;

metotrexato, talidomida, leflunomida, y análogos de purinas tales como Azatioprina y 6-mercaptopurina.

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar una afección intestinal inflamatoria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de anti-TNF o agentes de bloqueo del TNF, natalizumab, anti-ILl, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-17 y anti-IL-23; análogos del antagonista del receptor de IL-1 (anakinra) ; ácido 5 aminosalicílico y análogos tales como mesalazina, sulfazalina, olsalazina, balsalazida; corticoides tales como prednisona, budesonida, hidrocortisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, bedometasona, tixocortol.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar una afección intestinal inflamatoria en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de anti-TNF o agentes de bloqueo del TNF, natalizumab, anti-IL1, anti-IL-6, antiIL-12, anti-IL-17 y anti-IL-23; análogos del antagonista del receptor de IL-1 (anakinra) ; ácido 5 aminosalicílico y análogos tales como mesalazina, sulfazalina, olsalazina, balsalazida; corticoides tales como prednisona, budesonida, hidrocortisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, bedometasona, tixocortol.

Los agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar la vasculitis tales como aterosclerosis y enfermedad de Wegener son estatinas, aspirina, coagulantes de la sangre tales como heparina, cumadina para aterosclerosis y corticoides, aziatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, anticuerpos anti-linfocitos B (Rituximab) , anticuerpos anti-TNF (Etanercept, Remicade) y globulina anti-timocito para la enfermedad de Wegener.

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar la vasculitis tal como aterosclerosis y enfermedad de Wegener en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con estatinas, aspirina, coagulantes de la sangre tales como heparina, cumadina para aterosclerosis y corticoides, aziatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, anticuerpos anti-linfocitos B (Rituximab) , agentes de bloqueo del TNF (Etanercept, Remicade) y globulina anti-timocito para la enfermedad de Wegener.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar la vasculitis tal como aterosclerosis y enfermedad de Wegener en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con estatinas, aspirina, coagulantes de la sangre tales como heparina, cumadina para aterosclerosis y corticoides, aziatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, anticuerpos anti-linfocitos B (Rituximab) y agentes de bloqueo del TNF (Etanercept, Remicade) y globulina anti-timocito para la enfermedad de Wegener.

Los agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar la inflamación autoimmune del conducto biliar o del hígado tal como cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria es el ácido ursodeoxicólico (Ursodiol) .

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar la inflamación autoimmune del conducto biliar o del hígado tal como la cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con el ácido ursodeoxicólico (Ursodiol) .

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar la inflamación autoimmune del conducto biliar o del hígado tal como la cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con el ácido ursodeoxicólico (Ursodiol) .

Los agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar la inflamación relacionada con el rechazo de trasplante (enfermedad de huésped contra injerto) o enfermedad de injerto contra huésped son inhibidores de calcineurinas (ciclosporina, tacrolimus) , inhibidores mTOR (sirolimus, everolimus) , agentes anti-proliferativos (azatioprina, ácido micofenólico) , anticuerpos monoclonales dirigidos a CD25 (Dacluzimab, Basiliximab) o preparaciones de globulina antitimocito y anti-linfocito.

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar la inflamación relacionada con el rechazo de trasplante (enfermedad de huésped contra injerto) o enfermedad de injerto contra huésped en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con inhibidores de calcineurinas (ciclosporina, tacrolimus) , inhibidores mTOR (sirolimus, everolimus) , agentes anti-proliferativos (azatioprina, metotrexato, ácido micofenólico) , anticuerpos monoclonales dirigidos a CD25 (dacluzimab, basiliximab) o preparaciones globulina anti-timocito y anti-linfocito.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar la inflamación relacionada con el rechazo de trasplante (enfermedad de huésped contra injerto) o enfermedad de injerto contra huésped en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con inhibidores de calcineurinas (ciclosporina, tacrolimus) , inhibidores mTOR (sirolimus, everolimus) , agentes anti-proliferativos (azatioprina, ácido micofenólico) , anticuerpos monoclonales dirigidos a CD25 (dacluzimab, basiliximab) o preparaciones globulina antitimocito y anti-linfocito.

Los agentes terapéuticos usados comúnmente para tratar el asma son de acción corta, agonistas selectivos de adrenoceptor beta2, tales como salbutamol (albuterol USAN) , levalbuterol, terbutalina y bitolterol y otros agonistas adrenérgicos tales como epinefrina inhalada y tabletas de efedrina, medicamentos anticolinérgicos tales como bromuro de ipratropio, glucocorticoides inhalados.

En una modalidad preferida de la presente invención, el método para tratar el asma en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con agonistas selectivos de adrenoceptor beta2, de acción corta, tales como salbutamol (albuterol USAN) , levalbuterol, terbutalina y bitolterol y otros agonistas adrenérgicos tales como epinefrina inhalada y tabletas de efedrina, medicamentos anticolinérgicos tales como bromuro de ipratropio, glucocorticoides inhalados.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar el asma en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con agonistas selectivos de adrenoceptor beta2, de acción corta, tales como salbutamol (albuterol USAN) , levalbuterol, terbutalina y bitolterol y otros agonistas adrenérgicos tales como epinefrina inhalada y tabletas de efedrina, medicamentos anticolinérgicos tales como bromuro de ipratropio, glucocorticoides inhalados.

En otra modalidad de la presente invención, el método para tratar una afección autoinmune inflamatoria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con uno más medicamento o composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un antígeno conocido que se involucra en la afección autoinmune inflamatoria.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con uno más medicamento o composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un antígeno conocido que se involucra en la afección autoinmune inflamatoria.

Los ejemplos de medicamento o composición farmacéutica que se pueden usar para tratar una afección artrítica, tal como artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, artritis idiopática juvenil y artritis psoriásica, son los medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno de unión asociado. Dicho antígeno de unión asociado es, por ejemplo, citrulina-cíclica sustituída y péptidos lineales de filagrina, péptidos de colágeno tipo II , péptidos de glicoproteína 39 de cartílago humano (HCgp39) , péptidos A2 de ribonucleoproteína nuclear heterogénea (hnRNP) , hnRNP B1, hnRNP D, Ro60/52, BiP, queratina, vimentina, fibrinógeno, cardiolipina, péptidos de colágeno tipo I, III, IV y V, anexina V, Glucosa 6 fosfato isomerasa (GPI) , acetilcalpastatina, piruvato deshidrogenasa (PDH) , aldolasa, topoisomerasa I, RNPnp, PARP, Scl-70, Scl-100, antígeno de fosfolípido que incluyen fosfatidilserina aniónica, fosfatidiletanolamina y fosfatidilcolina cargadas neutralmente , matriz metaloproteinasa, fibrilina, agrecano, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

En una modalidad preferida, dicha población de células Tr1 humanas o clon se dirige contra un antígeno de unión asociado seleccionado entre el colágeno tipo II, HCgp39, sus fragmentos y variantes.

En una modalidad preferida de la invención, el método para tratar una afección artrítica en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con una cantidad eficaz de un medicamento o una composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 humano dirigido contra un antígeno de unión asociado, preferentemente contra el colágeno tipo II, HCgp39, sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar una afección artrítica en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con una cantidad eficaz del medicamento o composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno de unión asociado, preferentemente contra el colágeno tipo II, HCgp39, sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

Los ejemplos de medicamento o composición farmacéutica que se pueden usar para tratar una afección de esclerosis múltiple son los medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno asociado a esclerosis múltiple. Dicho antígeno asociado a esclerosis múltiple es por ejemplo la proteína básica de la mielina, glicoproteína asociada a la mielina, proteína mielina de oligodendrocito, proteína proteolipídica, oligoproteína mielina de oligodendrocitos, proteína básica de oligodendrocitos asociada a mielina, proteína específica de oligodendrocitos, proteínas específicas de oligodendrocitos, NOGO A , glicoproteína Po, proteína mielina periférica 22, 2'3' nucleótido cíclico -3'-fosfodiesterasa, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

En una modalidad preferida, dicha población de células Tr1 humanas o clon se dirige contra una antígeno asociado la esclerosis múltiple seleccionado entre la proteína básica de la mielina (MBP) , proteína proteolipídica (PLP) y la proteína mielina de oligodendrocito (MOG) y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

En una modalidad preferida de la invención, el método para tratar una afección de esclerosis múltiple en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con una cantidad eficaz de un medicamento o una composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno asociado a esclerosis múltiple, preferentemente contra la proteína básica de la mielina (MBP) , proteína proteolipídica (PLP) y proteína mielina de oligodendrocito (MOG) y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar

una afección de esclerosis múltiple en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con una cantidad eficaz de un medicamento o una composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno asociado a esclerosis múltiple, preferentemente contra la proteína básica de la mielina (MBP) , proteína proteolipídica (PLP) y proteína mielina de oligodendrocito (MOG) y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

Los ejemplos de medicamentos o composiciones farmacéuticas que se pueden usar para tratar una afección intestinal inflamatoria, tal como la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, son los medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común. Dicho antígeno alimenticio de la dieta humana común es por ejemplo antígenos bovinos, SIOO unido a Ca, alfa-lactoalbúmina, lactoglobulinas, albúmina de suero bovino, inmunoglobulina o caseínas, antígenos de salmón del Atlántico, antígenos de pollo, ovoalbúmina, Ag22, con albúmina, lisozima o albúmina del suero de pollo, antígenos de camarón, antígenos de trigo, antígenos de apio, antígenos de zanahoria, antígenos de manzana, proteína de transferencia de lípidos de manzana, profilina de manzana, antígenos de pera, isoflavona reductasa, antígenos de aguacate, antígenos de albaricoque, antígenos de melocotón, antígenos de soya, cacahuetes, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

En una modalidad preferida, dicha población de células Tr1 humanas o clon se dirige contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común seleccionado entre ovalbúmina, caseína, beta-lactoglobulina, proteína de soya, gliadina, cacahuetes, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

En una modalidad preferida de la invención, el método para tratar una afección intestinal inflamatoria en un sujeto que lo necesita comprende la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención en conjunto con una cantidad eficaz de un medicamento o una composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común, preferentemente contra ovoalbúmina, caseína, beta-lactoglobulina, proteína de soya, gliadina, cacahuetes, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

La presente invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica o medicamento de la invención para tratar una enfermedad intestinal inflamatoria en un sujeto que lo necesita, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica de la invención es en conjunto con una cantidad eficaz de un medicamento o una composición farmacéutica que comprende al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común, preferentemente contra ovoalbúmina, caseína, betalactoglobulina, proteína de soya, gliadina, cacahuetes, y sus fragmentos, variantes y mezclas de estos.

EJEMPLOS

En la siguiente descripción, todos los experimentos para los que no se presenta protocolo detallado se realizan de acuerdo con el protocolo estándar.

Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar las modalidades preferidas de la invención. Se debe apreciar por aquellos expertos en la técnica que los procedimientos descritos en los ejemplos que siguen representan procedimientos descubiertos por el inventor para funcionar bien en la práctica de la invención, y así pueden considerarse que constituyen modos preferidos para su práctica. Sin embargo, aquellos expertos en la técnica deben apreciar, a la luz de la presente descripción, que pueden hacerse muchos cambios en las modalidades específicas que se describen y aún obtener un resultado igual o similar sin apartarse del espíritu y alcance de la invención.

Procedimientos experimentales

Aislamiento de células TR1

Las muestras de sangre de pacientes sanos se recogieron y las células blancas de la sangre se separaron usando centrifugación en gradiente de densidad. Las células se cultivaron después en presencia de HSP60 humana para inducir la proliferación específica de células Tr1 dirigidas contra este antígeno. Después de 13 días de cultivo, las poblaciones celulares se clonaron por el método de dilución limitante.

Los clones se valoraron después por su especificidad para HSP60 humana y por el perfil característico de producción de citocinas Tr1.

Ensayos de citocina

Para la determinación de la especificidad de antígeno, se realizaron ELISA sándwich en sobrenadantes de 48 horas de clones de células Tr1 estimuladas en presencia de células presentadoras de antígeno (4.105) y en presencia o ausencia del antígeno específico (HSP60) . Para la determinación del perfil de producción de citocinas, los clones de células Tr1 HSP60 se estimularon con anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28 y los sobrenadantes se recogieron después de 48 horas. Los ELISA se realizaron usando anti-IL-4 (11B11) , anti-IL-10 (2A5) , anti-IFN-y (XGM1.2) , anti-IL-4 (24G2) biotina, anti-IL-10 (SXC1) , anti-IFN-y (R4-6A2) (Pharmingen Becton Dickinson) .

Estudios de supresión

Para los estudios de supresión, linfocitos T CD4 positivos autólogos se co-cultivaron con o sin los sobrenadantes de los clones Tr1 activados específicos a HSP-60. Los cultivos se estimularon con anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28 e interleucina-2. Después de 5 días la proliferación celular total se evaluó usando el estuche de proliferación WST-1 de Roche.

Resultados

La Figura 1 muestra la producción de IL-10 de cuatro poblaciones distintas de células Tr1 específicas para HSP60 en la presencia o ausencia del antígeno. Los resultados muestran que la estimulación con HSP60 induce un aumento en la producción de IL-10. Estos resultados demuestran la especificidad de las poblaciones de células hacia HSP60.

Para determinar además el perfil de secreción de citocinas de estas poblaciones de células Tr1 específicas para HSP60, las células se estimularon en presencia de anticuerpos monoclonales anti-CD3 + anti-CD28. Los ELISA se realizaron en sobrenadantes de 48 horas para medir la producción de IL-4, IL-10 e IFNy. La Figura 2 muestra que el perfil de secreción de citocina observado para estas poblaciones específicas a HSP60 corresponde con un perfil Tr1 de secreción de citocinas, es decir, producción alta de IL-10, producción de IFN y sin producción de IL-4.

La actividad supresora de estas poblaciones Tr1 HSP60 se evaluó después. Los linfocitos T CD4 positivos autólogos se co-cultivaron con o sin los sobrenadantes de clones Tr1 activados específicos a HSP-60. Después de 5 días de estimulación, se midió la proliferación celular. La Figura 3 muestra los resultados de los sobrenadantes de las cuatro poblaciones Tr1 y confirma la actividad supresora de estas células Tr1.




Reivindicaciones:

1. Medicamento que comprende esencialmente al menos una población de células Tr1 humanas dirigida contra un HSP humano.

2. Composición farmacéutica que comprende al menos una población de células Tr1 humana dirigida contra un HSP humano en conjunto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

3. Un medicamento de acuerdo con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicha población de células Tr1 humanas es una población del clon Tr1 humano.

4. Un medicamento o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha población de células Tr1 humanas se dirige contra HSP60, HSP70, HSP90 y mezclas de estos.

5. Un medicamento o una composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para usar en el tratamiento de una afección autoinmune inflamatoria.

6. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la enfermedad autoinmune inflamatoria es una afección de la artritis, preferentemente artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante y artritis idiopática juvenil.

7. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha enfermedad autoinmune inflamatoria es una esclerosis múltiple.

8. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección intestinal inflamatoria , preferentemente la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa.

9. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una vasculitis, preferentemente la enfermedad de Wegener y la aterosclerosis.

10. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha enfermedad autoinmune inflamatoria es el asma.

11. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es el rechazo de trasplante o enfermedad del injerto contra el huésped.

12. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en donde dicha afección autoinmune inflamatoria es una afección inflamatoria del coducto biliar, preferentemente cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria.

13. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de la reivindicaciones 5 a 12, en donde el medicamento o composición farmacéutica que se administra a un sujeto que lo necesita comprende células humanas Tr1 autólogas a las células de dicho sujeto.

14. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 13, en donde se administran 104/kg a 109/kg de células Tr1 al sujeto que lo necesita.

15. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos usados para tratar una afección autoinmune inflamatoria .

16. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar una afección artrítica, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de corticoides, agentes de bloqueo del TNF, anti-interleucinas, anti-linfocitos B, moléculas anti-coestimuladoras, agentes tolerogénicos, proteínas anti-complemento, inhibidores de moléculas de señalización de células T, inhibidores de la migración celular, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, minociclina, D-penicilamina.

17. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar una afección de esclerosis múltiple, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la

composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de interferón-beta, acetato de glatiramer, mitoxantrona, ciclofosfamida, metotrexato, azatioprina o natalizumab.

18. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar una afección intestinal inflamatoria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo de agentes de bloqueo del TNF, natalizumab, anti-ILI, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-17 y anti-IL-23; análogos de antagonista de receptor IL-1 (anakinra) ; 5 ácido aminosalicílico y análogos tales como mesalazina, sulfazalina, olsalazina, balsalazida; corticoides tales como prednisona, budesonida, hidrocortisona, prednisolona, metilprednisolona, betametasona, bedometasona, tixocortol.

19. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar la vasculitis, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de estatinas, aspirina, coagulantes de sangre, cumadina y corticoides, azatioprina, metotrexato, ciclofosfamida, anticuerpos antilinfocitos B, anticuerpos anti-TNF alfa y globulina anti-timocito.

20. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar el Asma, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de acción corta, agonistas selectivos de adrenoceptor beta2 , levalbuterol, terbutalina y bitolterol y otros agonistas adrenérgicos, medicamentos anticolinérgicos y glucocorticoides inhalados.

21. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 para tratar la enfermedad del injerto contra huésped y rechazo al trasplante, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de inhibidores de calcineurinas, inhibidores mTOR, agentes antiproliferativos, anticuerpos monoclonales dirigidos a CD25 o preparaciones de globulina anti-timocito y antilinfocito.

22. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15para tratar la inflamación autoinmune del conducto biliar o del hígado tal como la cirrosis biliar primaria y colangitis esclerosante primaria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más agentes terapéuticos seleccionados en el grupo de los ácidos ursodeoxicólicos.

23. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno conocido que se involucra en la afección autoinmune inflamatoria.

24. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23 para tratar una afección artrítica, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno de unión asociado, preferentemente contra colágeno de tipo II, HCgp39, variantes y mezclas de estos.

25. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23para tratar una afección de esclerosis múltiple, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno asociado a esclerosis múltiple, preferentemente contra la proteína básica de mielina, proteína de proteolípido, proteína mielina de oligodendrocitos, variantes y mezclas de estos.

26. El medicamento o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 23 para tratar una afección intestinal inflamatoria, en donde la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz del medicamento o la composición farmacéutica es en conjunto con uno o más medicamentos o composiciones farmacéuticas que comprenden al menos una población o clon de células Tr1 dirigido contra un antígeno alimenticio de la dieta humana común, preferentemente contra ovoalbúmina, caseína, beta-lactoglobulina, proteína de soya, gliadina, cacahuetes, variantes y mezclas de estos.

Figura 1 Figura 2 Figura 3






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