Una proteína de fusión de FGFR que comprende una pareja de fusión y un polipéptido FGFR,

en la que el polipéptido FGFR consta de un dominio extracelular de una proteína FGFR, en la que el dominio extracelular comprende un terminal C, en la que el terminal C comprende una variante de terminal C de un dominio extracelular de FGFR de tipo natural, en la que la variante comprende una eliminación de 1-22 residuos de aminoácido presentes en el terminal C de un dominio extracelular de FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4 de tipo natural, en la que la proteína de fusión de FGFR se une con, al menos, un ligando FGF o un fragmento biológicamente activo del mismo

Composiciones y procedimientos para tratar enfermedades con proteínas de fusión de FGFR.

Solicitudes relacionadas

La invención se refiere a las solicitudes 60/701.479, presentada el 22 de julio de 2005; 60/729.401, presentada el 21 de octubre de 2005; 60/757.398, presentada el 10 de enero de 2006; y 60/800.005, presentada el 15 de mayo de 2006.

Campo técnico

La presente invención se refiere a moléculas de fusión que comprenden un dominio extracelular de un receptor de factor de crecimiento fibroblástico (FGFR). Se refiere a secuencias de polipéptidos y polinucleótidos, vectores, células huésped, composiciones, equipos y animales que comprenden proteínas de fusión de FGFR. La invención también se refiere a procedimientos para fabricar y usar moléculas de fusión de FGFR, y variantes y fragmentos de las mismas, para diagnosticar, prevenir, determinar el pronóstico de y tratar enfermedades proliferativas, incluyendo el cáncer y los trastornos de la angiogénesis.

Antecedentes de la técnica

Los factores de crecimiento fibroblástico (FGF) y sus receptores (FGFR) son un grupo muy conservado de proteínas con papeles decisivos en la angiogénesis, la vasculogénesis y la cicatrización de heridas, así como en el modelado tisular y la formación de las extremidades en el desarrollo embrionario. Los FGF y los FGFR afectan a la migración, proliferación y supervivencia de las células, generando impactos de gran alcance sobre la salud y la enfermedad.

La familia de los FGFR comprende cuatro tipos principales de receptores: FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4. Estos receptores son proteínas transmembranosas que tienen un dominio extracelular, un dominio transmembrana y un dominio intracitoplasmático. Cada uno de los dominios extracelulares contiene bien dos o tres dominios de inmunoglobulina (Ig). Algunos FGFR existen en diferentes isoformas que difieren en segmentos específicos de la molécula, tales como FGFR1-IIIb y FGFR1-IIIc, que difieren en la región C-terminal del tercer dominio Ig. Los FGFR transmembranosos son receptores monoméricos de la tirosina quinasa, activados mediante dimerización, que tiene lugar en la superficie celular de un complejo de dímeros de FGFR, ligandos FGF y glicanos o proteoglicanos de heparina. La activación de los FGFR extracelulares mediante la unión de ligandos FGF con un FGFR inicia una cascada de señalizaciones en el interior de la célula, que comienza con la actividad tirosina quinasa del receptor.

Hasta la fecha, hay 23 FGF conocidos, cada uno con la capacidad de unirse a uno o más FGFR (Zhang et al., J. Biol. Chem. 281: 15, 694-15,700 (2006)). Varios FGF se pueden unir a y activar cada uno o más de los FGFR, a menudo, con grandes diferencias, diferencias en el orden de magnitud de sus afinidades por los diferentes FGFR. Muchos FGF se unen con sus respectivos FGFR con afinidades muy elevadas, algunas en el intervalo picomolar. En algunos casos, es necesaria la heparina para la unión de los FGF con los FGFR (Ornitz et al., Mol. Cell Biol. 12: 240 (1992)). Por ejemplo, se ha observado que la respuesta mitogénica a FGF-2 (también conocido como FGF básico (bFGF)) mediada por FGFR1 depende de la presencia de la heparina (Ornitz et al., Mol. Cell Biol. 12: 240 (1992)).

Los enfoques terapéuticos propuestos con anterioridad que usan anticuerpos específicos para bloquear la función de los FGF no abordan el problema de la redundancia en la familia de los FGF en cuanto a la activación de múltiples FGFR, pues los cánceres u otras células proliferativas pueden expresar niveles sobre-regulados de más de un FGF o FGFR. Las terapias con oligonucleótidos antisentido u otras terapias con ARNsi relacionadas tienen posibles problemas con la especificidad, la vida media en suero y la administración intracelular. Las terapias de transferencia de genes, incluyendo aquéllas que usan adenovirus, han motivado el cuestionamiento acerca de la seguridad de los pacientes, y se ha detenido un número de estudios clínicos sobre terapias génicas debido a la muerte de pacientes. Las terapias con inhibidores de la tirosina quinasa de molécula pequeña tienen los problemas de la especificidad de la diana, la toxicidad y las manifestaciones de la resistencia al fármaco. Hasta la fecha, no se ha autorizado ningún fármaco dirigido a una ruta de señalización de los FGFR para tratar enfermedades humanas.

Resumen

La invención proporciona una proteína de fusión de FGFR que comprende un primer polipéptido que comprende un dominio extracelular de un polipéptido FGFR y una pareja de fusión, en el que el dominio extracelular comprende un terminal C, en el que el terminal C comprende una variante de un terminal C de un dominio extracelular de un FGFR de tipo natural, en el que la variante comprende la eliminación de 1-22 residuos de aminoácido presentes en un terminal C de un dominio extracelular de FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4 de tipo natural, y en el que la proteína de fusión de FGFR se une con, al menos, un ligando FGF o un fragmento biológicamente activo del mismo. En una realización, la eliminación es C-terminal con respecto a un residuo de valina situado en el terminal C del dominio IglII y, comúnmente, alineado entre los terminales C de los dominios extracelulares de FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 de tipo natural. Una proteína de fusión de FGFR puede ser menos susceptible a la escisión.

Se describe una proteína de fusión de FGFR que comprende un primer polipéptido que comprende un dominio extracelular de un polipéptido FGFR y una pareja de fusión, en el que el dominio extracelular comprende un terminal C, en el que el terminal C comprende una variante de un terminal C de un dominio extracelular de un FGFR de tipo natural, en el que la variante comprende, al menos, una mutación puntual en comparación con un terminal C de un dominio extracelular de FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4 de tipo natural; y en la que la mutación puntual vuelve la proteína de fusión de FGFR menos susceptible a la escisión.

Cualquiera de estas proteínas de fusión de FGFR puede comprender un polipéptido FGFR1, un polipéptido FGFR2, un polipéptido FGFR3 y/o un polipéptido FGFR4. Cualquiera de estas proteínas de fusión de FGFR puede comprender un polipéptido Fc.

El dominio extracelular de la proteína de fusión de FGFR puede comprender una secuencia de aminoácidos de cualquiera de entre SEC. ID. N.º 100, SEC. ID. N.º 97 a SEC. ID. N.º 99, SEC. ID. N.º 101 a SEC. ID. N.º 122, SEC. ID. N.º 127 a SEC. ID. N.º 132, SEQ ID N.º 137 a SEC. ID. N.º 141, SEC. ID. N.º 146 a SEC. ID. N.º 150, SEC. ID. N.º 162 a SEC. ID. N.º 166, SEC. ID. N.º 178 a SEC. ID. N.º 182, SEC. ID. N.º 199 a SEC. ID. N.º 203, SEC. ID. N.º 206 a SEC. ID. N.º 210, SEC. ID. N.º 230 a SEC. ID. N.º 234 y SEC. ID. N.º 238 a SEC. ID. N.º 242. Estas proteínas de fusión de FGFR pueden carecer de una secuencia líder nativa. En una realización, el polipéptido Fc comprende una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID N.º 171 a SEC ID N.º 173.

Se describe una proteína de fusión de FGFR producida en una célula CHO o una célula 293 que comprende un primer polipéptido que comprende un dominio extracelular de un polipéptido FGFR o una variante del mismo y una pareja de fusión, en la que la proteína de fusión de FGFR puede unirse con uno o más ligandos FGF. En una realización, esta proteína de fusión de FGFR comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera de entre SEC. ID. N.º 100, SEC. ID. N.º 95 a SEC. ID. N.º 99, SEC. ID. N.º 102 a SEC. ID. N.º 126, SEC. ID. N.º 156 a SEC. ID. N.º 157, SEQ ID N.º 162 a SEC. ID. N.º 166, SEC. ID. N.º 176 a SEC. ID. N.º 182, SEC. ID. N.º 198 a SEC. ID. N.º 202, SEC. ID. N.º 205 a SEC. ID. N.º 210, SEC. ID. N.º 228 a SEC. ID. N.º 234 y SEC. ID. N.º 236 a SEC. ID. N.º 242. En una realización, esta proteína de fusión de FGFR carece de una secuencia líder nativa. En una realización, se produce usando un sistema de expresión de CHEF.

La invención proporciona además el uso de una proteína de fusión de FGFR de la invención como un medicamento. Proporciona una composición que comprende una cantidad eficaz de una proteína de fusión de FGFR de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención proporciona un equipo que comprende esta composición en un envase y las instrucciones para su administración a un sujeto en necesidad de tal composición. En una realización, el equipo comprende bien una sola dosis o múltiples dosis de la proteína de fusión de FGFR.

La invención proporciona una molécula...

1. Una proteína de fusión de FGFR que comprende una pareja de fusión y un polipéptido FGFR, en la que el polipéptido FGFR consta de un dominio extracelular de una proteína FGFR, en la que el dominio extracelular comprende un terminal C, en la que el terminal C comprende una variante de terminal C de un dominio extracelular de FGFR de tipo natural, en la que la variante comprende una eliminación de 1-22 residuos de aminoácido presentes en el terminal C de un dominio extracelular de FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4 de tipo natural, en la que la proteína de fusión de FGFR se une con, al menos, un ligando FGF o un fragmento biológicamente activo del mismo.

2. La proteína de fusión de FGFR de la reivindicación 1, en la que la eliminación es C-terminal con respecto a un residuo de valina situado en el terminal C del dominio IgIII y, comúnmente, alineado entre los terminales C de los dominios extracelulares de FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 de tipo natural.

3. La proteína de fusión de FGFR de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en la que la pareja de fusión comprende un polipéptido Fc.

4. La proteína de fusión de FGFR de la reivindicación 1, en la que la proteína de fusión de FGFR comprende una cualquiera entre:

5. La proteína de fusión de FGFR de la reivindicación 3, en la que el polipéptido Fc comprende una secuencia de aminoácidos de cualquiera entre SEC ID N.º 171 a SEC ID N.º 173.

6. La proteína de fusión de FGFR de la reivindicación 5, en la que la proteína de fusión de FGFR comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 100 (R1Mut4 de FGFR1-IIIc).

7. La proteína de fusión de FGFR de la reivindicación 4 o la reivindicación 6, en la que la proteína de fusión carece de una secuencia líder nativa.

8. Una proteína de fusión de FGFR según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso como un medicamento.

9. Una composición que comprende una cantidad eficaz de la proteína de fusión de FGFR de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una molécula de ácido nucleico que comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión de FGFR de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

11. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 10 y un promotor que regula la expresión de la molécula de ácido nucleico.

12. Una célula huésped recombinante que comprende la proteína de fusión de FGFR de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 10 o el vector de la reivindicación 11, en la que la célula huésped recombinante es bien una célula huésped recombinante no humana o una célula huésped recombinante aislada.

13. La célula huésped recombinante de la reivindicación 12, en la que la célula huésped es una célula eucariota.

14. Un procedimiento para producir una proteína de fusión de FGFR que comprende:

15. La composición de la reivindicación 9 para su uso en la inhibición de la viabilidad o la proliferación de una célula proliferativa.

16. La composición según la reivindicación 15, en la que la célula proliferativa está presente en un sujeto y un tejido del sujeto expresa un nivel más elevado de lo normal de un ligando FGF.

17. La composición según la reivindicación 15, en la que la célula proliferativa está presente en un sujeto y un tejido del sujeto expresa un nivel más elevado de lo normal del polipéptido FGFR.

18. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en la que la célula proliferativa es una célula cancerosa, una célula displástica y/o una célula endotelial.

19. La proteína de fusión de FGFR de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el tratamiento del cáncer.

20. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 19, en la que el cáncer comprende, al menos, una subpoblación de células que depende de o es sensible a la estimulación del crecimiento por un ligando FGF.

21. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 19, en la que el cáncer comprende, al menos, una subpoblación de células que depende de o es sensible a un factor angiogénico para la producción de vasos sanguíneos para el crecimiento.

22. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 19, en la que el cáncer es resistente a la inhibición de la ruta de señalización del VEGF.

23. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 19, en la que tal uso es en combinación con un segundo agente terapéutico anticancerígeno.

24. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 23, en la que el segundo agente terapéutico anticancerígeno comprende un agente citostático, un agente citotóxico o un agente antiangiogénico.

25. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 23, en la que el segundo agente terapéutico anticancerígeno comprende una segunda proteína de fusión de FGFR, un inhibidor de la señalización del PDGF, un inhibidor de la señalización del VEGF o un inhibidor de la señalización del EGF.

26. La proteína de fusión de FGFR de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en la inhibición de la angiogénesis.

27. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 26, en la que dicha proteína de fusión de FGFR es para su administración en combinación con un segundo agente terapéutico.

28. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 27, en la que el segundo agente terapéutico comprende un agente citostático, un agente citotóxico o un segundo agente antiangiogénico.

29. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 26 ó 27 para su uso en el tratamiento de la degeneración macular.

30. La proteína de fusión de FGFR según la reivindicación 27, en la que el segundo agente terapéutico comprende una segunda proteína de fusión de FGFR, un inhibidor de la señalización del PDGF, un inhibidor de la señalización del VEGF, un inhibidor de la señalización del EGF, un anticuerpo o un ARNsi.

31. Uso de una proteína de fusión de FGFR según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

32. Uso de una proteína de fusión de FGFR como en la reivindicación 31, en la que la enfermedad comprende cáncer.

33. Uso de una proteína de fusión de FGFR como en la reivindicación 32, en la que el cáncer comprende un cáncer hematológico o un cáncer sólido.

34. La composición de la reivindicación 9, en la que la composición es adecuada para ser administrada intravenosamente, intramuscularmente, subcutáneamente, tópicamente, oralmente, intraperitonealmente, intraorbitalmente, por implantación, por inhalación, intratecalmente, intraventricularmente y/o intranasalmente.