Composiciones y métodos de uso para anticuerpos de C-MET.

Un antígeno humano humanizado o una porción de enlazamiento a antígeno de los mismos que comprende unaregión en enlazamiento antígeno que es específico para una proteína diana c-Met,

en donde el anticuerpo o la porciónde enlazamiento a anticuerpo del mismo comprende los CDRs del VL y los dominios de:

(a) anticuerpo 5091 de SEQ ID NOs. 34 y 66

(b) anticuerpo 5097 de EQ ID NOs. 37 y 67;

(c) Anticuerpo 5098 de SEQ ID NOs. 38 y 68; o

(d) Anticuerpo 5185 de SEQ ID NOs. 53 y 71.

Composiciones y métodos de uso para anticuerpos de c-Met

La presente invención se relaciona con composiciones que contienen anticuerpos que específicamente se enlazan a la proteína objetivo c-Met, métodos para hacer estos anticuerpos, y métodos de uso para tratar condiciones proliferativas, tales como cánceres y metástasis, y condiciones inflamatorias.

El receptor del factor de crecimiento de hepatocitos, denominado aquí como c-Met, es un receptor tirosina quinasa que ha demostrado ser sobreexpresado y/o mutar en una variedad de enfermedades malignas, especialmente un cierto número de mutaciones c-Met se encuentran en diversos tumores en fase sólida. El ligando c-Met, el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) , también conocido como factor de dispersión (SF) , se enlaza a c-Met a una ruta que está implicada en la invención y metástasis de células tumorales (Ma et al., 2003 Cancer and Metastasis Reviews. 22:309-325) .

La interacción HGF con c-Met inicia una cascada de eventos intracelulares (Derman et al., 1996 J Biol Chem 23; 271 (8) :4251-4255) . El enlazamiento de HGF da como resultado la activación de la actividad intrínseca de la tirosina quinasa de c-Met y la autofosfoliración de varios residuos de tirosina sobre el dominio intracelular (Ma et al., 2003 Cancer and Metastasis Reviews. 22:309-325) . La interacción de la ruta HGF/c-Met da como resultado una amplia dispersión de respuestas celulares incluyendo la dispersión celular, angiogénesis, proliferación, motilidad celular potenciada, invasión y metástasis. El antagonismo puede actuar para inhibir la autofosforilación y/o para inducir la internalización del c-Met de la superficie y/o para subregular la actividad de c-Met. La WO 2005/016382 divulgas anticuerpos y porciones enlazantes de antígenos de los mismos que se enlazan a c-Met, y actúan predominantemente como antagonistas de c-Met. En el Ejemplo 1 se divulgan los anticuerpos IgG2 humanos a c-Met, los cuales tienen valores de KD de menos de 2.0 x 10-9 M.

Las células tumorales pueden invadir los bordes de un tejido, degradad y remodelar la matriz extracelular circundante, de tal manera que las células tumorales puedan migrar a través de los bordes del tejido de la matriz extracelular permitiendo la diseminación y formación de metástasis. La señalización de HGF/c-Met es una ruta que media el crecimiento normal y maligno invasivo. Las mutaciones en sentido equivoco de c-Met han sido identificadas en una variedad de cánceres, localizada la mayoría de estas mutaciones en el dominio de la quinasa. Los mutantes se caracterizan por actividad incrementada de la quinasa promoviendo por lo tanto las acciones biológicas de c-Met.

Hay necesidad de composiciones y métodos para tratar cánceres, metástasis de cánceres y condiciones inflamatorias, tales como agentes que interfieran con la señalización de HGF/c-Met en la cual la actividad de c-Met contribuye a la invasión y/o metástasis.

El receptor de tirosina quinasa c-Met está involucrado en los procesos de migración, invasión y morfogénesis que acompañan la embriogénesis y la regeneración de tejidos. Varias líneas de evidencia han indicado que el c-Met también juega un papel en la patogénesis tumoral. La activación de mutaciones de la línea del germen dentro del dominio de la quinasa de c-Met están asociadas con el desarrollo de carcinoma de las células renales papilares hereditario (PRCC) . Las mutaciones dentro del dominio de la quinasa también se han reportado aunque raramente, en formas esporádicas de PRCC, en carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello y en carcinoma gástrico. Niveles elevados de c-Met, junto con si ligando único HGF/SF, se observan con amplia frecuencia en tumores múltiples clínicamente relevantes. Una correlación entre la expresión incrementada y la progresión de la enfermedad, metástasis y mortalidad de los pacientes se ha reportador en varios cánceres, incluyendo de vejiga, seno, y carcinoma gástrico en leimiosarcoma y glioblastoma.

Los anticuerpos de la invención se enlazan específicamente a c-Met con alta afinidad y modulan el efecto de c-Met de la enfermedad. Los anticuerpos que antagonizan con los niveles o actividad de c-Met se contemplan para el tratamiento e enfermedades proliferativas o enfermedades inflamatorias. Las enfermedades proliferativas que se consideran tratables por los anticuerpos de la invención incluyen especialmente cánceres. Los anticuerpos que agonizan los niveles o actividad de c-Met se consideran para la regeneración de órganos, curación de heridas, regeneración de tejidos.

Se divulga aquí un anticuerpo que se enlaza selectivamente a la proteína de c-Met, o una porción inmunológicamente activa de este anticuerpo o un fragmento funcional del anticuerpo. El anticuerpo o porción inmunológicamente activa de este anticuerpo es de un mamífero, que tiene un origen tal como un roedor, humano o camélido, o es un anticuerpo humanizado. En particular, el anticuerpo anti-c-Met se caracteriza por tener una región de enlazamiento de antígenos que se específica para la proteína objetivo c-Met y el fragmento anticuerpo funcional se enlaza a c-Met o un fragmento de c-Met. El anticuerpo puede ser policlonal o monoclonal, en particular, el anticuerpo o porción inmunológicamente activa de este anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. Aspectos adicionales de la solicitud incluyen, por ejemplo, un fragmento funcional, tal como una porción de enlazamiento al antígeno, o un fragmento tal provisto sobre un andamio o marco no tradicional o no basado en la inmunoglobulina.

El anticuerpo o fragmento funcional de este anticuerpo se enlaza a la proteína objetivo, c-Met, con un KD de 2.0 x 10-5 M

o menos, 2.0 x 10-6 M o menos, 2.0 x 10-7 M o menos, 2.0 x 10-8 M o menos, o 2.0 x 10-9 M o menos. En un aspecto relacionado, el anticuerpo o fragmento funcional de este anticuerpo tiene una rata de salida (Koff) para la proteína objetivo c-Met de 1.0 x 10-2 por segundo o más pequeño, 1.0 x 10-3 por segundo o más pequeño, 1 x 10-4 por segundo o más pequeño, o 1.0 x 10-5 por segundo o más pequeño. En un aspecto relacionado, el anticuerpo o fragmento funcional de este anticuerpo se enlaza a la proteína objetivo c-Met con un KD de 2.0 x 10-5 M o menos, 2.0 x 10-6 M o menos, 2.0 x 10-7 M o menos, 2.0 x 10-8 M o menos, o 2.0 x 10-9 M o menos, e inhibe el enlazamiento de HGF a c-Met. En un aspecto relacionado, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo antagoniza con la actividad de c-Met.

En ciertos aspectos, el anticuerpo o fragmento funcional de este anticuerpo se enlaza a la proteína objetivo c-Met y modula, esto es, bien sea activa (agoniza) o inhibe (antagoniza) la actividad de c-Met, incluyendo pero no limitándose a la fosforilación, especialmente la autofosforilación.

El agonismo o activación de la fosforilación de c-Met estimula al menos una de las actividades seleccionadas del grupo de regeneración de órganos, curación de heridas y regeneración de tejidos, particularmente donde el órgano es riñón, hígado, páncreas, pulmón, estómago, intestino, piel, timo o tiroides.

En un aspecto, el anticuerpo de la aplicación antagoniza c-Met, donde el antagonismo da como resultado en al menos una actividad selecciona de: inhibición de la proliferación celular, inhibición de la migración celular, inhibición de la supervivencia celular, inhibición de la metástasis y/o inhibición del enlazamiento de HGS o de la inducción de la internalización de c-Met. En la mayoría de la realizaciones, el antagonista del anticuerpo c-Met de la invención puede utilizarse en el tratamiento de una enfermedad proliferativa, especialmente un cáncer o una enfermedad inflamatoria.

El enlazamiento está determinado por uno o más ensayos que pueden utilizarse para medir la actividad en la cual se trata bien de antagonismo o de agonismo por parte del anticuerpo. Los ensayos miden al menos uno de los efectos del anticuerpo sobre un ligando c-Met que incluye al menos: inducción de una actividad de la enzima de la ruta de transducción de la seña de c-Met; inducción de la expresión de un gen de la ruta de la transducción de la señal de c-Met; enlazamiento directo basado en electroquimioluminisencia a c-Met; ensayo inmunosorbente enlazado con enzima del enlazamiento de c-Met; y proliferación, supervivencia, migración o metástasis de una célula. Si el anticuerpo tiene un efecto antagonistico esto se determina comparando los resultados de los controles que carecen del ligando natural HGF. Así, un anticuerpo antagonistico bloquea... [Seguir leyendo]

1. Un antígeno humano humanizado o una porción de enlazamiento a antígeno de los mismos que comprende una región en enlazamiento antígeno que es específico para una proteína diana c-Met, en donde el anticuerpo o la porción de enlazamiento a anticuerpo del mismo comprende los CDRs del VL y los dominios de:

(a) anticuerpo 5091 de SEQ ID NOs. 34 y 66

(b) anticuerpo 5097 de EQ ID NOs. 37 y 67;

(c) Anticuerpo 5098 de SEQ ID NOs. 38 y 68; o

(d) Anticuerpo 5185 de SEQ ID NOs. 53 y 71.

2. El anticuerpo o porción de enlace al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo la porción de enlace al antígeno del mismo inhibe el enlace de HGF a c-Met.

3. El anticuerpo o porción de enlace al antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, donde el anticuerpo o la porción de enlace a antígeno del mismo se enlaza a la proteína objetivo c-Met y activa o inhibe la fosforilación de c-Met.

4. El anticuerpo aislado de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, el cual es una IgG humana.

5. El anticuerpo aislado de acuerdo con la reivindicación 4, el cual es una IgG1, una IgG2, una IgG3 o una IgG4.

6. El anticuerpo aislado de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la IgG4 es codificada por una secuencia de nucleótidos y una secuencia de aminoácidos respectivamente de SEQ ID NO: 85 y 89; o SEQ ID NO: 88 y 92; o SEQ ID NO: 87 y 91; o SEQ ID NO: 86 y 90, y variantes conservadoras de las mismas.

7. Un anticuerpo humano humanizado aislado o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para uso como un medicamento.

8. El anticuerpo aislado o la porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, el cual es un fragmento de anticuerpo Fab o scFv.

9. El anticuerpo aislado o porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18, el cual se enlaza a un epítopo conformacional.

10. Una composición farmacéutica que comprende al -1 anticuerpo o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. Un animal transgénico no humano que porta un gen que codifica un anticuerpo o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9.

12. Un anticuerpo o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1-9 para uso en el tratamiento de cáncer o de una condición inflamatoria.

13. Uso del anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1-9, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de cáncer o una condición inflamatoria.

14. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 12 o el uso de acuerdo con la reivindicación 13, donde el cáncer se selecciona The antibody according to claims 12 or the use according to claim 13, wherein the cancer is selected from the group consisting of brain cancer, stomach cancer, genital cancer, urinar y cancer, del grupo consistente de cáncer de cerebro, cáncer de estómago, cáncer genital, cáncer urinario, cáncer de próstata, cáncer de vejiga (superficial e invasivo de los músculos) , cáncer de seno, cáncer cervical, cáncer de colon, cáncer colo rectal, glioma (incluyendo glioblastoma, anaplastic astrocytoma, oligoastrocytoma, oligodendroglioma) , cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer gastrointestinal, cáncer de hígado, carcinoma hepatocellular (HCC) incluyendo HCC infantil, cáncer de cabeza y cuello (incluyendo carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, carcinoma nasofaríngeo, carcinoma de células de Hurthle, cáncer epitelial, cáncer de piel, melanoma incluyendo melanoma maligno, mesotelioma, linfoma, mieloma incluyendo mieloma múltiple, leucemias, cáncer de pulmón incluyendo cáncer de células pulmonares no pequeñas (incluyendo todos los subtipos histológicos: adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma broncoalveolar, carcinoma de células grandes, tipo mixto adenoescamosos) , cáncer de células pulmonares pequeños, cáncer de ovarios, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer del riñón, cáncer renal incluyendo cáncer hereditario y esporádico de las células renales papilares, Tipo I y Tipo II, cáncer renal de las células claras; sarcomas, en particular osteosarcomas, sarcoma de las células claras, y sarcomas de los tejidos blandos (incluyendo rabdomiosarcomas alveolares y embrionales, sarcomas de partes alveolares blandas) ; carcinoma de tiroides (papilar y de otros subtipos) .

15. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el cáncer se selecciona del grupo de cánceres que consisten de hígado, renal y esofágico.

16. El anticuerpo de acuerdo con las reivindicacione.

12. 15, para uso en combinación con un agente quimioterapéutico.

17. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el agente quimioterapéutico es un agente anti cáncer

agent.

18. Un anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, para uso como una herramienta de diagnóstico.

19. El anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el anticuerpo

o una porción de enlace a antígeno del mismo comprende adicionalmente un marcador que es radioactivo, fluorescente, magnético, paramagnético, o quimioluminiscente.

20. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende adicionalmente un agente terapéutico adicional.

21. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el agente terapéutico adicional se selecciona del grupo consistente de un agente anti cáncer; un antibiótico; un agente antiinflamatorio; un factor de crecimiento; y una citoquina.

22. Un inmunoconjugado que comprende un primer componente que es un anticuerpo o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-9.

23. El inmunoconjugado de acuerdo con la reivindicación 22, que comprende un segundo componente que tiene una segunda secuencia de aminoácidos.

24. El inmunoconjugado de acuerdo con la reivindicación 23, donde la 2ª secuencia es una citotoxina.

25. El inmunoconjugado de acuerdo con la reivindicación 23, donde la segunda secuencia es una proteína de enlace o anticuerpo que tiene una especificidad de enlace para un objetivo que es diferente de c-Met.

26. El inmunoconjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicacione.

23. 25, el cual es un anticuerpo biespecífico.

27. Un kit que comprende un anticuerpo o una porción de enlace a antígeno del mismo de acuerdo con 1-9, en donde el anticuerpo es una dosis unitaria y comprende adicionalmente instrucciones.

28. El kit de acuerdo con la reivindicación 27, que comprende adicionalmente un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables del mismo.

29. El anticuerpo humano o humanizado aislado o porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo comprende los CDRs dominios VL y VH de: Anticuerpo 5091 de SEQ ID NOs. 34 y 66.

30. El anticuerpo humano o humanizado aislado o porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo comprende los CDRs dominios VL y VH de: Anticuerpo 5097 de SEQ ID NOs. 37 y 67.

31. El anticuerpo humano o humanizado aislado o porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo comprende los CDRs dominios VL y VH de: Anticuerpo 5098 de SEQ ID NOs. 38 y 68.

32. El anticuerpo humano o humanizado aislado o porción de enlace a antígeno del mismo de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo o porción de enlace a antígeno del mismo comprende los CDRs dominios VL y VH de: Anticuerpo 5185 de SEQ ID NOs. 53 y 71