Composiciones y métodos para tratar la enfermedad del pulmón inflamado.

Un anticuerpo que se une específicamente a TL1A para uso en un método de tratamiento de asma,

en el que elanticuerpo bloquea la unión de TL1A a DR3 y disminuye la actividad de DR3, según lo cual disminuye la expresiónde IL- 13.

Composiciones y métodos para tratar la enfermedad del pulmón inflamado La invención se refiere a los campos de la medicina y la inmunología. Más en particular, la invención se refiere a anticuerpos para modular las respuestas implicadas en el asma.

Antecedentes de la invención El asma es una enfermedad reactiva de las vías respiratorias episódica caracterizada por hipersensibilidad a alergenos y otros estímulos, edema, constricción de las vías respiratorias y sobreproducción de mucosidad. Es frecuente en países industrializados, produciéndose en aproximadamente 4-5% de la población de EE.UU. Cada año es responsable de aproximadamente 3 millones de visitas a la consulta del médico, un par de cientos de miles de hospitalizaciones y varios miles de muertes. Lasley, M., Pediatrics en Review, 24: 222, 2.003. Su impacto económico se estima en casi 3 mil millones de dólares al año. Id.

La característica del asma es inflamación traqueobronquial provocada por diversos diferentes estímulos incluyendo alergenos, ejercicio, infecciones y tensión emocional. Exacerbando la situación, esta inflamación hace a las vías respiratorias hipersensibles a los estímulos que la provocan. La inflamación de las vías respiratorias crónica, no tratada, puede conducir a cambios anatómicos irreversibles y pérdida permanente de función pulmonar. Aunque los mecanismos bioquímicos y celulares responsables de provocar la inflamación asociada al asma no están completamente comprendidos, el tejido de las vías respiratorias asmáticas se caracteriza por niveles incrementados de mediadores inflamatorios tales como histamina, bradicinina, leucotrienos, factor activador de plaquetas, prostaglandinas tromboxano diversas citocinas (por ej., IL-4, IL-5, IL-8 e IL-13) y quimiocinas (por ej., LTB-4 y eotaxina) e infiltración de mastocitos, eosinófilos, linfocitos T, plaquetas y neutrófilos.

De las citocinas implicadas en la inflamación del pulmón, se ha reconocido IL-13 como un agente central en la enfermedad del pulmón inflamado e hiperreactividad de las vías respiratorias, alérgica (AHR, por sus siglas en inglés) (véase, por ejemplo, Mattes et al., J Immunol 167: 1.683, 2.001; Pinto et al., Sangre, 88: 3.299-3.305, 1.996; Pope et al., J Allergy Clin Immunol, 108: 594-601., 2.001. Por ejemplo, los estudios han demostrado (i) que se requiere producción de IL-13 por células CD4 tipo TH2 para hiperreactividad de las vías respiratorias y contracción, sobreproducción de mucosidad e hiperplasia de células caliciformes (Whittaker et al., Am J Respir Cell Mol Biol, 27: 593-602, 2.002) y (ii) que IL-13 contribuye a infiltración de células inflamatorias.

Los linfocitos T desempeñan una función central en la regulación de respuestas inmunitarias. Las células T auxiliares expresan el marcador superficial CD4 y proporcionan ayuda a las células B para la producción de anticuerpos y ayuda a las células T CD8 para desarrollar actividad citotóxica. Otras células T CD4 inhiben la producción de anticuerpos y la citotoxicidad. Las células T regulan el equilibrio entre ataque de células infectadas o tumorígenas y tolerancia a las células del cuerpo. El ataque inmunitario desregulado puede conducir a autoinmunidad, mientras que la sensibilidad inmunitaria disminuida da como resultado infección crónica y cáncer. CD30, como se desvela en la presente memoria, es un regulador tanto de la iniciación de la respuesta de las células T como también como finalizador de la respuesta en una fase posterior de la respuesta inmunitaria.

El receptor 3 de la muerte (DR3) (Chinnaiyan et al., Science 274: 990, 1.996) es un miembro de la familia de receptores TNF (TNFRSF25) . También se conoce como TRAMP (Bodmer et al., Immunity 6: 79, 1.997) , wsl-1 (Kitson et al., Nature 384: 372, 1.996) , Apo-3 (Marsters et al., Curr Biol 6: 1.669, 1996) y LARD (Screaton et al., Proc Natl Acad Sci U S A 94: 4.615, 1.997) y contiene un dominio de muerte típico. La transinfección de células 293 con DR3 humano (hDR3) indujo muerte celular programada y NF-κB activado. El ligando de origen similar para DR3 ha sido identificado recientemente como TL1A (Migone et al., Immunity 16: 479, 2.002) y ha demostrado que tiene actividad coestimuladora para DR3 en células T por la inducción de NF-κB y la supresión de muerte celular programada por expresión de cIAP2 (Wen et al., J Biol Chem 25: 25, 2.003) . TL1A también se une al receptor señuelo 3 (DcR3/TR-6) , que sugiere que el afinamiento de la accesibilidad de TL1A biológica es de importancia crítica. Se han observado múltiples formas generadas por corte y empalme de ARNm de DR3 humano, que sugiere la regulación en el nivel post-transcripcional (Screaton et al., Proc Natl Acad Sci U S A 94: 4.615, 1.997) .

Muchos miembros de la familia de receptores TNF tienen la capacidad para inducir muerte celular por muerte celular programada o inducir señales coestimuladoras para función de células T. La regulación de estas rutas opuestas se ha clarificado recientemente para TNF-R1, el receptor que contiene dominio de muerte prototípico que puede causar muerte celular programada o proliferación de células T positivas receptoras (Micheau and Tschopp. Cell 114: 181, 2.003) . Activación de NF-κB por un complejo de señalización que consta de TNF-R1 vía TRADD, TRAF2 y RIP induce asociación de FLIPL con un segundo complejo de señalización que consta de TNFRI, TRADD y FADD, evitando la activación de la caspasa 8 siempre que persista la señalización de NF-κB. Se ha demostrado que DR3 puede inducir la muerte celular programada en células transinfectadas e inducir NF-κB y las tres rutas MAP-cinasa (Chinnaiyan et al., Science 274: 990, 1.996; Bodmer et al., Immunity 6: 79, 1.997; Kitson et al., Nature 384: 372, 1.996; Marsters et al., Curr Biol 6: 1.669, 1.996; Screaton et al., Proc Natl Acad Sci U S A 94: 4.615, 1.997; Wen et al., J Biol Chem 25: 25, 2.003) . El bloqueo de NF-KB, pero no de MAP-cinasa y la inhibición de síntesis de proteínas dio como resultado muerte celular mediada por DR3, que sugiere que las señales NF-κB median efectos

anti-apoptóticos por la síntesis de proteínas anti-apoptóticas.

La expresión de DR3 humano es pronunciada en tejidos linfoides, principalmente en el bazo, ganglios linfáticos, timo e intestino delgado, que sugiere una función importante para DR3 en los linfocitos. El DR3 murino se ha suprimido por recombinación homóloga en células madre embriónicas (Wang et al., Mol Cell Biol 21: 3.451, 2.001) . Los ratones DR3-/- muestran selección negativa disminuida por anti-CD3 en el timo pero selección negativa normal por superantígenos y selección positiva perfecta de timocitos. Las células T periféricas maduras no fueron afectadas por deficiencia de DR3. A pesar de una cantidad significativa de investigación preliminar, la función fisiológica de DR3 queda deficientemente caracterizada.

La patente internacional WO 0135995 desvela agentes de unión específicos de TR3 biológicamente activos y métodos para su uso. Los agentes de unión específicos de TR3 biológicamente activos son útiles para inhibir la proliferación de células que expresan TR3. Estos agentes biológicamente activos son útiles en particular para tratar enfermedades mediadas por células T tales como enfermedad del injerto contra el hospedador, rechazo de órganos, crecimiento de tumores, autoinmunidad e inflamación.

La patente internacional WO 0064465 desvela nuevas proteínas del Dominio de Muerte que contiene Receptor (DR3 y DR3-V1) que son miembros de la familia de los receptores de factor de necrosis tumoral (TNF, por sus siglas en inglés) . En particular, se proporcionan moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican las proteínas DR3 y DR3-V1 humanas. También se proporcionan polipéptidos DR3 y DR3-V1 ya que son vectores, células huésped y métodos recombinantes para producir los mismos. Se describen además métodos de detección sistemática para identificar agonistas y antagonistas de actividad de DR3 y DR3-V1.

La patente de EE.UU. 2003129189 desvela polipéptidos TNF-gamma-alfa y TNF-gamma-beta humanos y ADN (ARN) codificando dichos polipéptidos y un procedimiento para producir dichos polipéptidos por técnicas recombinantes. También se desvelan métodos para utilizar dichos polipéptidos para inhibir el crecimiento celular, por ejemplo en un tumor o cáncer, para facilitar la curación de heridas, para proporcionar resistencia contra infección, inducir actividades inflamatorias y estimular el crecimiento de ciertos tipos de células para tratar enfermedades, por ejemplo reestenosis. También se desvelan métodos de diagnóstico para detectar una mutación en las secuencias de ácidos nucleicos de TNF-gamma-alfa y TNF-gamma-beta... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une específicamente a TL1A para uso en un método de tratamiento de asma, en el que el

anticuerpo bloquea la unión de TL1A a DR3 y disminuye la actividad de DR3, según lo cual disminuye la expresión 5 de IL- 13.

2. El anticuerpo según la reivindicación 1, para uso en un método de tratamiento de asma según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

3. El anticuerpo según la reivindicación 1, para uso en un método de tratamiento del asma según la reivindicación 1,

en el que el asma se caracteriza por infiltración de eosinófilos en el pulmón y el anticuerpo reduce el número de 10 eosinófilos en el pulmón.