Composiciones y métodos para inhibir la expresión de genes pro-apoptóticos.

Un compuesto ARNip bicatenario que reduce o inhibe la expresión del gen TP53, para usar en la prevención o reducción de la función retardada del injerto en un receptor de un trasplante de riñón, dicho compuesto ARNip tiene la estructura:

5'

(N)x -Z 3' (cadena antisentido)

3' Z'-(N')y 5' (cadena sentido)

en donde cada uno de N y N' es un ribonucleótido que puede ser modificado o no modificado en su residuo azúcar; en donde cada uno de (N)x y (N')y es un oligonucleótido en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente;

en donde cada uno de x e y es un entero entre 18 y 40;

en donde cada uno de (N)x y (N')y los ribonucleótidos alternan entre ribonucléotidos modificados y ribonucléotidos no modificados, cada ribonucléotido modificado es un ribonucléotido modificado en 2'-O-metilo azúcar;

en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es 1-5 deoxiribonucleótidos covalentemente unidos al terminal 3' del oligonucleótido en la cual está presente;

en donde la secuencia de (N)x comprende la secuencia 5' UGAAGGGUGAAAUAUUCUC 3' (sec. con núm. de ident.:2) y la secuencia de (N')y comprende la secuencia 5' GAGAAUAUUUCACCCUUCA 3' (sec. con núm. de ident.:1); y en donde una dosis terapéuticamente eficaz de dicho compuesto ARNip es para administrar intravenosamente al receptor del trasplante de riñón entre 15 minutos y 4 horas después de la revascularización del riñón trasplantado, y de ese modo previene o reduce la función de retardo del injerto en el receptor.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IL2008/000874.

Solicitante: QUARK PHARMACEUTICALS, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 6501 DUMBARTON CIRCLE FREMONT, CALIFORNIA 94555 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: FEINSTEIN, ELENA, METT, IGOR, KALINSKI,HAGAR, ERLICH,SHAI DR.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K48/00 (Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica)

PDF original: ES-2474176_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Composiciones y mïtodos para inhibir la expresiïn de genes pro-apoptïticos Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de Estados Unidos nïm. 60/937318 presentada el 27, de junio de 2007 y la solicitud provisional de Estados Unidos nïm. 60/964325 presentada el 10 de agosto de 2007.

A travïs de esta solicitud se citan varias patentes y publicaciones cientïficas. Las descripciones de estas publicaciones se mencionan en la presente en su totalidad, para describir mïs ampliamente el estado de la tïcnica al cual pertenece esta invenciïn.

Campo de la invenciïn La presente descripciïn se relaciona a compuestos, composiciones farmacïuticas que comprenden los mismos y los mïtodos para usar en la inhibiciïn de ciertos genes pro-apoptïticos, ïtiles en el tratamiento de enfermedades y trastornos en los cuales la expresiïn gïnica es adversa. En modalidades particulares, la invenciïn provee oligonucleïtidos de ARNip, composiciones que los comprenden para usar en el tratamiento de varias enfermedades.

Antecedentes de la invenciïn Interferencia por ARN

La interferencia por ARN (iARN.) es un fenïmeno que involucra el silenciamiento gïnico postraduccional gen-especïfico dependiente del ARN bicatenario. Originalmente, los intentos iniciales de estudiar este fenïmeno y manipular experimentalmente las cïlulas de mamïferos se frustraron mediante un mecanismo de defensa antiviral activo y noespecïfico que se activï en respuesta a largas molïculas de ARNbc (ver Gil y otros, Apoptosis 2000, 5:107-114) . Posteriormente se descubriï que los ARN bicatenarios sintïticos cortos, de 21 nucleïtidos, podrïan mediar la iARN especïfica de gen en cïlulas de mamïferos, imposibilitando la estimulaciïn de los mecanismos de defensa antivirales genïricos (ver Elbashir y otros, Nature 2001, 411:494-498; Caplen y otros PNAS USA 2001, 98:9742-9747) . Como resultado, los ARNs de interferencia pequeïos (ARNip) se han convertido en herramientas poderosas en los esfuerzos para comprender la funciïn de genes.

La interferencia por ARN (RNAi) en mamïferos es mediada por pequeïos ARNs de interferencia (ARNips) (Fire y otros, Nature 1998, 391:806) o microARNs (miARNs) (Ambros, Nature 2004, 431 (7006) :350-355; Bartel, Cell 2004, 116 (2) : 281-97) . El proceso correspondiente en plantas se refiere comïnmente como silenciamiento gïnico post- transcripcional especïfico (PTGS) o silenciamiento de ARN y se refiere ademïs como represiïn en hongos.

Un ARNip es un ARN bicatenario o una molïcula de ARN modificado el cual regula descendentemente o silencia (previene) la expresiïn de un gen/ARNm de su contraparte endïgena (celular) . El mecanismo de la interferencia por ARN se detalla mïs abajo.

Diversos estudios han revelado que las terapias con ARNip es eficaz in vivo en mamïferos y en humanos. Bitko y otros, mostraron que las molïculas de ARNip especïficos dirigidos contra el gen de la nucleocïpsida N del virus sincitial respiratorio (RSV) son eficaces en el tratamiento de los ratones cuando se administran por vïa intranasal (Nat. Med 2005, 11 (1) :50-55) . Recientes revisiones que discuten la terapïutica del ARNip estïn disponibles (Barik, y otros, J. Mol. Med 2005, 83:764-773; Dallas y Vlassov, Med. Sci. Monitor 2006, 12 (4) :RA67-74; Chakraborty Current Drug Targets 2007, 8 (3) ;469-82) .

Mucke (IDrugs 2007 10 (1) :37-41) presenta una revisiïn de las terapïuticas actuales, incluyendo ARNip para varios objetivos en el tratamiento de enfermedades oculares, por ejemplo, la degeneraciïn macular relacionada con la edad (AMD) y el glaucoma.

Genes pro-apoptïticos Los genes pro-apoptïticos son genes que juegan un papel en la muerte celular apïptotica. Una lista no limitante de genes pro-apoptïticos son: la proteïna de tumor p53 (P53 o TP53 los cuales son tïrminos que se usan intercambiablemente en la presente descripciïn) ; la peplidasa serina 2 HtrA (HTRA2) ; la proteïna 1 asociada a ECH tipo Kelch (KEAP1) ; el dominio 2 con homologïa Src que contiene la proteïna 1 transformadora (SHC1-SHC, p66) ; el dedo zinc tipo HIT (ZNHIT1) ; la lectina soluble aglutinante de galactosa 3 (LGALS3) ; y la sestrina 2 (HI95, SESN2) .

La inhibiciïn de uno o mïs de los genes anteriores es ïtil en el tratamiento y/o prevenciïn de al menos una de las siguientes enfermedades o trastornos y de otras enfermedades descritas en la presente: pïrdida de audiciïn, en particular ototoxicidad inducida por productos quïmicos, insuficiencia renal aguda (ARF) , enfermedad pulmonar obstructiva crïnica (COPD) , lesiïn de isquemia-reperfusiïn despuïs de un trasplante de pulmïn, cïncer de pulmïn, sïndrome de enfermedad respiratoria aguda (ARDS) , lesiïn de la mïdula espinal, llagas por presiïn, osteoartritis, retinopatïa diabïtica, mucositis oral, sïndrome del ojo seco, afecciones isquïmicas oculares, lesiones asociadas con el trasplante de ïrganos y funciïn de retardo del injerto (DGF) en un receptor de trasplante de riïïn. La funciïn de HI95 se describiï en Budanov y otros, 2002, 21 (39) :6017-31.

Insuficiencia renal aguda La insuficiencia renal aguda (ARF) es un sïndrome clïnico caracterizado por el rïpido deterioro de la funciïn renal que ocurre en dïas. La caracterïstica principal de ARF es un declive brusco en la velocidad de filtraciïn glomerular (GFR) , resultando en la retenciïn de desechos nitrogenados (urea, creatinina) A nivel mundial, la ARF severa se produce en aproximadamente 170-200 personas por millïn de habitantes al aïo. Hasta hoy, no hay un tratamiento especïfico para la ARF establecido. Varios fïrmacos se han encontrado que mejoran la ARF experimental tïxica e isquïmica, que se manifiesta por los niveles inferiores de creatinina sïrica, daïo histolïgico reducido y una recuperaciïn mïs rïpida de la funciïn renal en diferentes modelos animales. Estos incluyen antioxidantes, bloqueadores de los canales de calcio, diurïticos, sustancias vasoactivas, factores de crecimiento, agentes anti-inflamatorios y mïs. No obstante, los fïrmacos evaluados en ensayos clïnicos no muestran beneficio, y su uso en ARF clïnico no ha sido aprobado.

En la mayorïa de los pacientes hospitalizados con ARF, la ARF es causada por la necrosis tubular aguda (ATN) , que resulta de insultos isquïmicos y/o nefrotïxicos. La hipoperfusiïn renal es causada por un choque sïptico, cardiogïnico, hipovolïmico, por la administraciïn de fïrmacos vasoconstrictores, lesiïn renovascular o trasplante de riïïn. Las nefrotoxinas incluyen toxinas exïgenas tales como medio de contraste, aminoglicïsidos y cisplatino y compuestos tipo cisplatino, asï como toxinas endïgenas tales como la mioglobina. Cualquier sustancia quïmica, biolïgica u otro agente el cual causa ARF u otra enfermedad o desorden del riïïn puede considerarse una nefrotoxina. Estudios recientes, no obstante, soportan la teorïa que la apoptosis en tejidos renales es prominente en la mayorïa de lo casos humanos de ARF. El sitio principal de la muerte celular apoptïtica es la nefrona distal. Durante la fase inicial de la lesiïn isquïmica, la pïrdida de la integridad del citoesqueleto de actina conduce al aplanamiento del epitelio, con pïrdida del borde en cepillo, pïrdida de cïlulas contactos focales, y posterior separaciïn de la cïlula del sustrato subyacente. Ha sido sugerido que la muerte apoptïtica de la cïlula de tïbulo puede ser mïs predictiva de cambios funcionales que la muerte necrïtica de las cïlulas (Komarov y otros, Science 1999, 10;285 (5434) :1733-7) ; Supavekin y otros, Kidney Int. 2003, 63 (5) :1714-24) .

US 2006/0069056 describe el uso de siRNA dirigidos a p53 para el para tratamiento de la insuficiencia renal aguda isquïmica.

En conclusiïn, no hay formas actualmente satisfactorias de terapia... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un compuesto ARNip bicatenario que reduce o inhibe la expresiïn del gen TP53, para usar en la prevenciïn o reducciïn de la funciïn retardada del injerto en un receptor de un trasplante de riïïn, dicho compuesto ARNip tiene la estructura:

5' (N) x -Z 3' (cadena antisentido) 3' Z'- (N') y 5' (cadena sentido)

en donde cada uno de N y N' es un ribonucleïtido que puede ser modificado o no modificado en su residuo azïcar; en donde cada uno de (N) x y (N') y es un oligonucleïtido en el cual cada N o N' consecutivo se une al siguiente N o N' por un enlace covalente; en donde cada uno de x e y es un entero entre 18 y 40; en donde cada uno de (N) x y (N') y los ribonucleïtidos alternan entre ribonuclïotidos modificados y ribonuclïotidos no modificados, cada ribonuclïotido modificado es un ribonuclïotido modificado e.

2. O-metilo azïcar; en donde cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si estï presente es 1-5 deoxiribonucleïtidos covalentemente unidos al terminal 3' del oligonucleïtido en la cual estï presente; en donde la secuencia de (N) x comprende la secuencia 5' UGAAGGGUGAAAUAUUCUC 3' (sec. con nïm. de ident.:2) y la secuencia de (N') y comprende la secuencia 5' GAGAAUAUUUCACCCUUCA 3' (sec. con nïm. de ident.:1) ; y en donde una dosis terapïuticamente eficaz de dicho compuesto ARNip es para administrar intravenosamente al receptor del trasplante de riïïn entre 15 minutos y 4 horas despuïs de la revascularizaciïn del riïïn trasplantado, y de ese modo previene o reduce la funciïn de retardo del injerto en el receptor.

2. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en la reivindicaciïn 1, en donde la funciïn de retardo del injerto es la funciïn de retardo del injerto asociada con isquemia frïa.

3. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en la reivindicaciïn 1, en donde dicho trasplante de riïïn es de un donante muerto.

4. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en la reivindicaciïn 3, en donde el donante muriï de muerte cerebral o cardiaca.

5. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde x=y=19.

6. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, dicho compuesto ARNip tiene la estructura:

5' UGAAGGGUGAAAUAUUCUC 3' (cadena antisentido) 3' ACUUCCCACUUUAUAAGAG 5' (cadena sentido)

en donde cada A, C, U y G es un ribonuclïotido no modificado o un ribonuclïotido modificado en el azïcar 2'O-metilo) y cada ribonuclïotido consecutivo estï unido al prïximo ribonuclïotido por un enlace covalente; en donde en la cadena antisentido el primer, tercer, quinto, sïptimo, noveno, onceno, decimotercero, decimoquinto, decimosïptimo y decimonoveno ribonuclïotido es un ribonuclïotido modificado en el azïcar 2'O-metilo; y en donde en la cadena sentido el segundo, cuarto, sexto, octavo, dïcimo, duodïcimo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo ribonuclïotido es un ribonuclïotido modificado en el azïca.

2. O-metilo.

7. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la cadena antisentido y la cadena sentido no estïn fosforiladas en ambos terminales 3' y 5'.

8. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la cadena antisentido y la cadena sentido estïn fosforiladas en el terminal 3'.

9. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde ambos Z y Z' estïn ausentes.

10. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la dosis de dicho compuesto ARNip estï entre 0.1-50 mg/kg de peso corporal del receptor.

11. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la dosis de dicho compuesto ARNip estï entre 0.5-10 mg/kg de peso corporal del receptor.

12. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la dosis de dicho compuesto ARNip es 10 mg/kg de peso corporal del receptor.

13. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde la administraciïn intravenosa comprende un solo bolo intravenoso lento.

14. El compuesto ARNip bicatenario para usar como en cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde dicho compuesto ARNip es para administrar como una sal farmacïuticamente aceptable del mismo.