Composiciones farmacéuticas que comprenden paraoxonasa.

Paraoxonasa para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral.

Composiciones farmacéuticas que comprenden paraoxonasa.

Campo técnico

La presente invención se refiere a paraoxonasa (en lo sucesivo también denominada en la presente memoria PON) . Más precisamente, la presente invención se refiere a formulaciones farmacéuticas que comprenden PON, a métodos para la purificación y estabilización de la misma y a nuevos usos medicinales de la misma.

Técnica precedente La paraoxonasa (también denominada paraoxonasa sérica humana o PON1) es una glicoproteína dependiente de Ca2+ que tiene un peso molecular de aproximadamente 45 kDa que existe como uno de los componentes proteínicos que constituyen la lipoproteína de alta densidad (HDL) en la sangre. La PON es conocida como una enzima sérica que degrada oxona, compuestos organofosforosos y ácidos carboxílicos aromáticos tales como sarina, que es un gas neurotóxico, y se puede usar como un antídoto para estas sustancias. En los últimos años, se están esclareciendo las actividades fisiológicas de la PON. Por ejemplo, se han presentado una acción antiarteriosclerótica, una acción antioxidante y similares (Documentos no relacionados con las patentes 1 y 2, Documento de patente 1) .

En cuanto a la purificación de la PON, se presentaron métodos para emplear un tratamiento con agarosa azul y un tratamiento con intercambiadores aniónicos de tipo DEAE en combinación (Documentos no relacionados con las patentes 3 y 4) . Según estos informes, la PON se purificó bajo la coexistencia de glicerol y tensioactivos no iónicos de tipo alquil-fenil-éter de polioxietileno (específicamente, Emulgen y Nonidet P-40, ambos son nombres comerciales) . Sin embargo, los documentos no divulgan el uso de otras sustancias tales como, por ejemplo, 3-[ (3colamidopropil) dimetilamonio]-1-propanosulfonato (posteriormente en la presente memoria también denominado CHAPS) . Además, se presentó que el CHAPS se añadía en un espécimen de suero que contenía PON para mantener la actividad enzimática (Documento de patente 2) . Sin embargo, este informe no está relacionado con PON purificada.

Se realizaron algunos informes que sugieren aplicaciones medicinales de PON. Por ejemplo, se realizó un informe que sugiere relaciones entre una cantidad de PON in vivo y la angina de pecho, el infarto de miocardio y el infarto cerebral (Documento de patente 2) . El Documento de patente 3 es un informe que se refiere a un trastorno resultante de la isquemia-reperfusión en relación con Apo-A1. En el informe, se sugiere que la PON es eficaz para el trastorno resultante de la isquemia-reperfusión como Apo-A1, sin embargo, no se divulgaba específicamente el efecto de la misma.

Como se describió anteriormente, en la actualidad meramente se sugiere que la PON tenga alguna utilidad medicinal. Casi no se han realizado informes sobre medios para suministrar establemente PON para usos médicos.

Documento de patente 1: Publicación de Patente Internacional WO00/30425

Documento de patente 2: Publicación de Patente Japonesa No Examinada (KOKAI) nº 2000-333674

Documento de patente 3: Publicación de Patente Internacional W003/97696

Documento no relacionado con las patentes 1: J. Clin. Invest., Vol. 101, pp. 1581-1590, 1998

Documento no relacionado con las patentes 2: Nature, Vol. 394, pp. 284-287, 1998

Documento no relacionado con las patentes 3: Drug Metabolism and Disposition, Vol. 19, nº 1, pp. 100-106, 1991

Documento no relacionado con las patentes 4: Biochemistr y , Vol. 30, pp. 10133-10140, 1991

Documento no relacionado con las patentes 5: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 92, pp. 7187-7191, 1995

Documento no relacionado con las patentes 6: J. Lipid Research, Vol. 42, pp. 951-958, 2001

Documento no relacionado con las patentes 7: Stroke, Vol. 20, pp. 1037-1043, 1989

Documento no relacionado con las patentes 8: Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism, Vol. 20, pp. 13111319, 2000

Divulgación de la invención Objetivo a alcanzar por la invención Se esperaría que fuera difícil recuperar eficazmente una PON altamente purificada mediante los métodos convencionales. Además, los tensioactivos usados convencionalmente, p. ej., los tensioactivos no iónicos tipo alquilfenil-éter de polioxietileno, no eran satisfactorios para estabilizar las actividades de la PON. Además, entre estos tensioactivos, los que tienen un alto peso molecular no se pueden retirar mediante diálisis o similares. Según esto, si se concentra PON purificada mediante cromatografía para la administración a animales y similares, los tensioactivos también se concentran conjuntamente, y preocupan sus efectos adversos sobre los organismos vivos.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar medios técnicos para purificar y formular PON a fin que sea clínicamente aplicable. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar nuevos usos medicinales de la PON.

Medios para conseguir el objetivo Los inventores de la presente invención efectuaron diversas investigaciones teniendo en cuenta las circunstancias que se describen anteriormente. Como resultado, han encontrado que la pureza, la expresión, la recuperación y la estabilidad de las actividades de PON se mejoraban satisfactoriamente mediante la adición de CHAPS en el momento de la purificación y/o el almacenamiento de PON.

Además, los inventores de la presente invención verificaron que la PON era eficaz en un modelo animal de isquemia-reperfusión.

Las presentes invenciones son como sigue:

(1) Una formulación farmacéutica que comprende PON, que contiene PON para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral y CHAPS a la concentración de 0, 001 a 0, 1% p/v.

(2) La formulación farmacéutica según (1) , que además contiene un poliol.

(3) La formulación farmacéutica según (2) , en la que el poliol es glicerol.

(4) PON para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral.

(5) PON para uso en el tratamiento terapéutico según (4) , que se usa para mejorar el pronóstico, los síntomas neurológicos o la disfunción motora resultantes del infarto cerebral.

(6) PON como un agente para uso en el tratamiento terapéutico de una enfermedad resultante de la isquemiareperfusión y/o el infarto cerebral, que además comprende CHAPS.

(7) El agente según (6) , que se usa para mejorar el pronóstico, los síntomas neurológicos o la disfunción motora resultantes del infarto cerebral.

(8) El agente según (6) o (7) , que además contiene un poliol.

(9) El agente según (8) , en el que el poliol es glicerol.

(10) Un método para mejorar el pronóstico, los síntomas neurológicos o la disfunción motora resultantes del infarto cerebral, que comprende administrar una cantidad eficaz de PON.

(11) Uso de PON para la fabricación del agente para mejorar el pronóstico, los síntomas neurológicos o la disfunción motora resultantes del infarto cerebral.

Efecto de la invención Se puede proporcionar un nuevo medicamento útil para el tratamiento del infarto cerebral.

Breve descripción de los dibujos La Fig. 1 muestra los cambios con el tiempo en las mejoras de los síntomas neurológicos de un animal de un modelo de isquemia-reperfusión, cuando se administraba inicialmente PON inmediatamente después de la reperfusión. El eje horizontal representa los días de observación, esto es, los días después de la reperfusión (día) , y el eje vertical representa puntuaciones de los síntomas neurológicos. Los símbolos, º, º y º, utilizados en la gráfica representan puntuaciones de síntomas neurológicos cada día de observación. Cada dato está representado como media ± EEM. Entre las combinaciones de símbolos y líneas poligonales, la combinación de º y una línea de puntos representa los resultados de un grupo de referencia (grupo normal) , la combinación de º y una línea de puntos representa los resultados de un grupo tratado con vehículo (grupo con enfermedad) y la combinación de º y una línea continua representa un grupo con administración de PON. El símbolo * significa la presencia de una diferencia significativa con una tasa crítica menor de 5% en comparación con el grupo tratado con vehículo determinada mediante la prueba de Wilcoxon.

La Fig. 2 muestra los cambios con el tiempo en las mejoras de la función motriz de un animal de un modelo de isquemia-reperfusión, cuando se administraba inicialmente PON inmediatamente después de la reperfusión. Las definiciones del eje horizontal, los esquemas de indicación de datos y las combinaciones de símbolos y líneas poligonales son iguales que los de la explicación de la Fig. 1. El eje vertical... [Seguir leyendo]

1. Paraoxonasa para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral.

2. Paraoxonasa para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral según la reivindicación 1, que se usa para mejorar el pronóstico, los síntomas neurológicos o la disfunción motora resultantes del infarto cerebral.

3. Una formulación farmacéutica que comprende (a) paraoxonasa para uso en el tratamiento terapéutico del infarto cerebral; y (b) 3-