Una vacuna que comprende un miembro aislado de la familia de proteínas Als de Candida que tenga actividad deadhesión celular,

o un fragmento inmunógeno del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de unainfección por Staphylococcus aureus en un organismo humano o animal.

Composiciones farmacéuticas y métodos para vacunar contra la candidiasis diseminada y otros agentes infecciosos.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a proteínas adhesinas de superficie de Candida albicans y a vacunas para la prevención y/o el tratamiento de una infección por Staphylococcus aureus.

En años recientes ha tenido lugar un aumento dramático en la incidencia de infecciones nosocomiales provocadas por especies de Candida. La incidencia de infecciones por Candida diseminadas hematógenamente aumentó 11 veces de 1980 a 1989. Esta incidencia creciente ha continuado en la década de 1990. Las infecciones por especies de Candida son actualmente la cuarta causa más común de septicemia nosocomial, igualan a la provocada por Escherichia coli y superan la incidencia provocada por especies de Klebsiella. Además, las especies de Candida son la causa más común de infecciones fúngicas arraigadas profundamente en pacientes que tienen quemaduras extensas. Hasta el 11 % de individuos que se han sometido a un transplante de médula ósea y el 13 % de los que tienen un transplante de hígado ortotópico desarrollarán una infección invasiva por Candida.

La Candida albicans, el patógeno principal de este género, puede variar entre dos morfologías: la fases de blastospora (levadura en formación) y filamentosa (hifa y pseudohifa) . Se ha comunicado que los mutantes de Candida que son deficientes en genes que regulan la filamentación tienen una virulencia reducida en modelos animales. Esta virulencia reducida sugiere que la capacidad de cambiar de una blastospora a un filamento es un factor de virulencia clave de C. albicans. Hasta la fecha no se han identificado efectores esenciales de estas rutas de filamentación en C. albicans. Véase Caesar-TonThat, T.C. y J.E. Cutler, "A monoclonal antibody to Candida albicans enhances mouse neutrophil candidacidal activity, " Infect. Immun. 65:5354-5357, 1997.

Las infecciones por Staphylococcus aureus son también comunes y dan como resultado de forma creciente una resistencia a fármacos antibióticos. Por ejemplo, el S. aureus es una causa común de infecciones de la piel y de la estructura de la piel, endocarditis y bacteremia en Estados Unidos y en todo el mundo. Las infecciones por S. aureus extrahospitalarias (CA-S. aureus) anteriores eran casi uniformemente susceptibles a beta lactamas resistentes a penicilinasas tales como cefazolina, oxacilina, meticilina, penicilina y amoxicilina. No obstante, durante la década pasada, las epidemias por infecciones por S. aureus resistente a beta-lactama (MRSA) se han observado en múltiples localizaciones en todo el mundo, especialmente la MRSA extrahospitalaria (CA-MRSA) . En muchos sitios la MRSA se ha convertido en la cepa predominante de S. aureus que provoca infecciones extrahospitalarias. Un estudio reciente prospectivo basado en la población de tres estados de Estados Unidos estimó que la incidencia de infecciones por CA-MRSA es de 500 casos por cada población de 100.000 personas, lo que se traduce en aproximadamente 1, 5 millones de casos sólo en Estados Unidos. La frecuencia creciente de infecciones por S. aureus resistente a fármacos destaca la necesidad de nuevos formas de prevención y tratamiento de estas infecciones.

La identificación de efectores en las rutas reguladoras del organismo que contribuyen a la virulencia ofrece la oportunidad de una intervención terapéutica con métodos o composiciones con un efecto superior a los agentes antifúngicos existentes. La identificación de proteínas de superficie celular que afectan una ruta reguladora implicada en la virulencia es particularmente prometedora debido a la caracterización de la proteína que permite técnicas inmunoterapéuticas con un efecto superior a los agentes antifúngicos existentes cuando se combate una infección por Candida.

La virulencia de Candida albicans está regulada por diversos factores de virulencia putativos de los que la adherencia a constituyentes del huésped y la capacidad para transformarse de levadura a hifa están entre los más críticos en la determinación de patogenicidad. Aunque existen agentes antifúngicos potentes que son microbicidas para Candida, la mortalidad atribuible a candidemia es aproximadamente el 38 %, incluso con el tratamiento con agentes antifúngicos potentes tales como anfotericina B. Además, los agentes existentes tales como la anfotericina B tienden a mostrar una toxicidad no deseada. Aunque pueden desarrollarse agentes antifúngicos adicionales que son menos tóxicos que la anfotericina B, es improbable que se desarrollen agentes que sean más potentes. Por lo tanto, la inmunoterapia, bien pasiva o bien activa, para tratar o prevenir la candidiasis diseminada es una alternativa prometedora a la terapia antifúngica estándar.

Mamo y col. (Microbiol. Immunol. 2000;44 (5) :381-4) informa de la protección inducida en ratones vacunados con proteína de unión a colágeno recombinante (CnBP) y alfa-toxoide contra la infección provocada intramamariamente por Staphylococcus aureus.

Además, Sheppard y col., (J. Biol. Chem. 2004 Jul 16;279 (29) :30480-9) informa de la diversidad funcional y estructural en la familia de proteínas Als de Candida albicans.

Adicionalmente, Nilsson y col. (J. Clin. Invest, 15 de junio de 1998;101 (12) :2640-9) informa que la vacunación con un fragmento recombinante de adhesión a colágeno proporciona protección contra la muerte séptica mediada por

Staphylococcus aureus.

Por lo tanto, existe la necesidad de inmunógenos eficaces que proporcionen protección inmunitaria al huésped e inmunoprotección pasiva contra Candida, S. aureus y otros patógenos relacionados inmunógenamente. La presente invención satisface esta necesidad y proporciona también ventajas relacionadas.

Sumario de la invención

La invención proporciona una vacuna que incluye un miembro de la familia de proteínas Als que tiene actividad de adhesión celular, o un fragmento inmunógeno del mismo, opcionalmente con un coadyuvante en un medio farmacéuticamente aceptable.

El miembro de la familia de proteínas Als puede estar derivado de una cepa de Candida seleccionada del grupo que consta de Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida glabrata y Candida parapsilosis y el miembro de la familia de proteínas Als incluye Als1p, Als3p, Als5p, Als6p, Als7p o Als9p. También se proporciona un miembro aislado de la familia de proteínas Als de Candida que tiene adhesión celular, o un fragmento inmunógeno del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de una infección por Staphylococcus aureus en un organismo humano o animal. El método incluye administrar una cantidad inmunógena de una vacuna de un miembro de la familia de proteínas Als que tiene actividad de adhesión celular, o un fragmento inmunógeno del mismo, en un medio farmacéuticamente aceptable.

Breve descripción de las figuras

La figura 1A, 1B muestra la mediación de la adherencia de Als1p de C. albicans a células endoteliales de la vena umbilical humana. Los valores representan la media ± DT de al menos tres experimentos independientes, cada una de ellos realizado por triplicado. (A) Adherencia de células endoteliales de mutantes complementados con ALS1l/als2 alsl/alsl y ALS1 y de CAI12 (30) de tipo silvestre (B) Adherencia a células endoteliales del mutante PADHI-ALS1 que sobreexpresa ALS1, en comparación con C. albicans de tipo silvestre. El tratamiento estadístico se obtuvo mediante la prueba de suma de rangos de Wilcoxon y se corrigió para comparaciones múltiples con la corrección de Bonferroni. *P<0, 001 para todas las comparaciones.

La figura 2A-D muestra la ubicación en la superficie celular de Als1p en filamentos de C. albicans mediante inmunofluorescencia indirecta. La filamentación de C. albicans se indujo incubando células de levadura en medio RPMI 1640 con glutamina durante 1, 5 horas a 37 °C. Se detectó Als1p mediante incubación de organismos primeramente con anticuerpo monoclonal (mAb) de ratón anti-Als1p seguido de IgG anti-ratón de cabra etiquetada con FITC. La superficie celular de C. albicans se tiñó también con anticuerpo (Ab) policlonal anti-C. albicans conjugado con Alexa 594 (Molecular Probes, Eugene, OR, Estados Unidos) . Las áreas con tinción amarilla representa la ubicación de Als1p. (A) C. albicans de tipo silvestre. (B) cepa mutante als1/als1. (C) als1/als1 complementada con ALS1 de tipo silvestre (D) mutante de sobreexpresión PADHI-ALS1.

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1. Una vacuna que comprende un miembro aislado de la familia de proteínas Als de Candida que tenga actividad de adhesión celular, o un fragmento inmunógeno del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de una infección por Staphylococcus aureus en un organismo humano o animal.

2. La vacuna para su uso según la reivindicación 1, en la que dicho miembro de la familia de proteínas Als comprende una proteína Als derivada de una cepa de Candida seleccionada del grupo que consta de Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida glabrata y Candida parapsilosis.

3. La vacuna para su uso según la reivindicación 1, en la que dicho miembro de la familia de proteínas Als está seleccionado de Als1p o Als3p.

4. La vacuna para su uso según la reivindicación 1, en la que dicho fragmento inmunógeno comprende un fragmento de la región N-terminal de un miembro de la familia de proteínas Als.

5. La vacuna para su uso según la reivindicación 1, en la que dicha administración comprende inmunización activa, inmunización pasiva o una combinación de las mismas.

6. La vacuna para su uso según la reivindicación 4, en la que dicho fragmento inmunógeno es un fragmento de la región N-terminal de dicha proteína Als3 o Als1 de Candida.

7. La vacuna para su uso según la reivindicación 6, en la que el fragmento inmunógeno comprende una secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº: 2.

8. La vacuna para su uso según la reivindicación 6, en la que el fragmento inmunógeno comprende una secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº: 1.

9. Un miembro aislado de la familia de proteínas Als de Candida que tenga actividad de adhesión celular, o un fragmento inmunógeno del mismo, para su uso en el tratamiento o la prevención de una infección por Staphylococcus aureus en un organismo humano o animal.

10. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida para su uso según la reivindicación 9, en la que dicho miembro de la familia de proteínas Als comprende una proteína Als derivada de una cepa de Candida seleccionada del grupo que consta de Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida glabrata y Candida parapsilosis.

11. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida para su uso según la reivindicación 9, en el que dicho miembro de la familia de proteínas Als está seleccionado de Als1p o Als3p.

12. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida para su uso según la reivindicación 9, en el que dicho fragmento funcional comprende un fragmento de la región N- terminal de un miembro de la familia de proteínas Als.

13. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida para su uso según la reivindicación 12, en el que dicho fragmento inmunógeno es un fragmento de la región N- terminal de dicha proteína Als3 o Als1 de Candida.

14. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida según la reivindicación 13, en el que el fragmento inmunógeno comprende una secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº: 2.

15. El miembro aislado de la familia de las proteínas Als de Candida para su uso según la reivindicación 13, en el que el fragmento inmunógeno comprende una secuencia de aminoácidos mostrada como SEC ID Nº: 1.