Composición para el tratamiento de una patología asociada a MSRV/HERV-W.

Utilización de por lo menos un anticuerpo seleccionado de entre (i) los anticuerpos anti-Env-SU MSRV/HERV-W capaces de unirse específicamente a la fracción soluble de la proteína Env de MSRV/HERV-W,

y (ii) los anticuerpos anti-TLR4 capaces de unirse específicamente al receptor TLR4 de dicha fracción soluble de la proteína Env de MSRV/HERV-W, teniendo los anticuerpos (i) un efecto inhibidor equivalente al de los anticuerpos (ii),

para la preparación de un medicamento destinado a tratar la esclerosis múltiple o la esquizofrenia, por inhibición de la cascada proinflamatoria que implica dicha fracción soluble de Env de MSRV/HERV-W y dicho receptor.

Composición para el tratamiento de una patología asociada a MSRV/HERV-W.

Desde hace varios años, numerosos estudios han puesto en evidencia la importante expresión de diversos retrovirus, en particular endógenos (HERV) , en patologías tales como la diabetes [1], la esclerosis múltiple (SEP) [2] y la esquizofrenia (SCZ) [3]. Los HERV poseen unas homologías con los retrovirus animales conocidos y provienen probablemente de su integración dentro de la línea germinal humana. Las secuencias de estos HERV en el genoma humano son en general incompletas, incluso si ya se han identificado unas secuencias provirales enteras.

Ya se han aislado unas partículas retrovirales en cultivos de células leptomeníngeas de pacientes que padecen SEP [4]. El estudio de estas partículas ha mostrado que poseían unas secuencias genéticas homólogas al ADN humano que definen una nueva familia de retrovirus endógenos (HERV-W) [2, 5, 6]. La presencia de MSRV en el suero y/o el líquido cerebro-raquídeo (LCR) de pacientes se ha confirmado ahora mediante diferentes equipos [7-9] y se ha puesto en evidencia una correlación entre la carga viral y la evolución de la enfermedad [10]. Se ha demostrado después que MSRV y su proteína de la envoltura poseían unas propiedades proinflamatorias mediadas por los linfocitos T, de tipo superantígeno (SAg) [11]. Se desarrolló un modelo animal (ratones SCID humanizados) , lo que confirma in vivo el potencial inmunopatogénico de dichas partículas y en particular su capacidad para inducir la secreción de citoquinas proinflamatorias, mediada por los linfocitos T [12].

A continuación en la descripción, los virus de la familia MSRV/HERV-W se denominarán indistintamente MSRV o MSRV/HERV-W.

Otras patologías presentan, como la SEP, un perfil de activación del sistema inmunitario, caracterizado por la presencia de grandes cantidades de IL-6. Entre ellas, la esquizofrenia (SCZ) , enfermedad neuropsiquiátrica relacionada con factores genéticos y ambientales, presenta según los casos unas cantidades séricas de IL-6 ampliamente superiores a la normal [13]. Por otra parte, se han identificado unas secuencias retrovirales similares a las de MSRV en unos pacientes SCZ [3]. Además, más recientemente, se ha demostrado que el LCR de pacientes SCZ nuevamente diagnosticados presenta unas secuencias retrovirales de la familia MSRV/HERV-W asociadas a partículas circulantes [14].

Dicha expresión es compatible con un papel para MSRV/HERV-W en diferentes patologías neurológicas por medio de los efectos proinflamatorios de su proteína de envoltura y de la vía de activación implicada. Este elemento retroviral (en sí mismo bajo la dependencia de cofactores de activación) y sus efectos asociados son muy pertinentes en el caso de enfermedades desmielinizantes inflamatorias [15]. En el caso de la esquizofrenia, dicha inflamación revelada a nivel sistémico por la sobreepxresión de IL-6, es asimismo pertinente, localmente a nivel de la sustancia gris del cerebro, frente a efectos neurotóxicos y excitotóxicos conocidos de la inflamación mediada por los microgliocitos/macrófagos del cerebro [16-30].

La expresión diferencial de secuencias ARN MSRV/HERV-W también se ha detallado en el tejido corticofrontal de pacientes esquizofrénicos, y no en los controles, que incluyen en particular unas psicosis maniaco-depresivas (trastornos bipolares) [31]. Además, el reflejo sistémico de este diferencial retroviral "MSRV/HERV-W" se ha puesto en evidencia en la sangre de gemelos homocigotos discordantes para la patología esquizofrénica, lo que corrobora así la existencia de una réplica "sistémica" que puede desempeñar en particular un papel en la hiperexpresión de IL6 circulante anteriormente detallada [3].

Los efectos de la proteína de la envoltura de MSRV/HERV-W en pacientes esquizofrénicos tienen su sitio en la cascada patogénica de la esquizofrenia, a nivel del papel de factores inflamatorios específicos en la génesis de señales neurotóxicas y/o excitotóxicas corticales o subcorticales.

Existe hoy día unas publicaciones concordantes de diferentes equipos independientes que muestran una asociación de los elementos de la familia MSRV/HERV-W con unas patologías tales como la SEP y la SCZ, pero otras enfermedades podrían también mostrarse relevantes.

Los presentes inventores han mostrado ahora de manera inesperada que la proteína Env de MSRV/HERV-W tiene otra actividad proinflamatoria, independiente de la mediada por los linfocitos T, esta nueva actividad proinflamatoria que pasa por células diferentes de las células T y por un receptor distinto del receptor de las células T (TCR) y que resulta de la activación de una vía proinflamatoria distinta de la que resulta de la activación de TCR por un superantígeno. Esta nueva actividad proinflamatoria es por lo tanto diferente de la activación proinflamatoria causada por una función superantigénica que, por definición, pasa por una unión al TCR de los linfocitos T. Los inventores han encontrado que es precisamente el dominio de la fracción soluble (Env-SU) de la proteína de la envoltura de MSRV/HERV-W que es responsable de estos nuevos efectos proinflamatorios mediados por unas células presentadoras de antígenos (macrófagos, monocitos, células dendríticas y microgliocitos) y un receptor no identificado, hasta hoy día, por su papel en la activación de los efectos proinflamatorios mediados por Env-SU MSRV/HERV-W. Así, Env-SU, naturalmente presente en la superficie de las partículas retrovirales, tiene como objetivo las células presentadoras de antígenos (APC) , las activan e inducen a la secreción de grandes cantidades de TNF-a, de IL-1β y de IL-6. Estos efectos proinflamatorios se han estudiado en pacientes que padecen SEP y después se han comparado con los obtenidos de donantes. Los inventores han mostrado así que la producción de IL-6 inducida por Env-SU estaba aumentada en los pacientes SEP y estaba correlacionada con su resultado clínico (EDSS) . Se supone que la presencia elevada de IL-6 en el suero, el LCR y las lesiones de pacientes SEP [32-37] desempeña un papel importante en el desarrollo y la persistencia de las lesiones observadas a nivel del sistema nervioso central de los pacientes SEP.

Los presentes inventores han encontrado por lo tanto, de manera sorprendente, que el receptor de Env-SU implicado en estos nuevos efectos proinflamatorios es la proteína TLR4 humana (Toll-like Receptor 4) . El gen que codifica para TLR4 está localizado en el cromosoma 9 (9q32-q33) . La proteína está constituida de 839 aminoácidos y presenta un peso molecular de 95679 Da. Se conocía que TLR4 cooperaba con otra molécula denominada MD-2 y que junto con CD14, este complejo está implicado en el reconocimiento de los lipopolisacáridos (LPS) bacterianos que llevan a la activación del factor NF-kappa-b, a la secreción de citoquinas y a la respuesta inflamatoria, pero su papel de receptor de la fracción soluble de la proteína de la envoltura (Env-SU) de MSRV/HERV-W no era conocido antes de la presente invención. Al no estar expresada la proteína TLR4 sobre los linfocitos T, estos últimos no son las dianas primarias de los efectos puestos en evidencia en este caso con el receptor TLR4. Los inventores han demostrado también que las partículas retrovirales MSRV asociadas al ARN circulante detectado en los fluidos biológicos de pacientes son, fuera de cualquier replicación retroviral, inductoras de esta nueva vía de activación proinflamatoria precoz que pasa por el receptor TLR4 presente en células presentadoras de antígenos, tales como macrófagos, monocitos, células dendríticas y microgliocitos. Para ello, han activado los viriones MSRV purificados a partir de sobrenadantes de cultivo productores [4] y ensayado su actividad relacionada con la presencia de la proteína Env de MSRV/HERV-W. Los resultados presentados en la parte experimental confirman que la vía precoz de activación de la inmunidad innata por el receptor TLR4 está dirigida por la proteína de la envoltura en forma soluble Env-SU y en forma membranaria por la superficie de los viriones MSRV.

Los resultados obtenidos en el ámbito de la presente invención permiten por lo tanto establecer unas estrategias de inmunoterapia en patologías, en particular neurológicas, tales como la SEP y la SCZ y han permitido en particular identificar los vectores capaces de transportar uno o más agentes terapéuticos a través de la barrera hematoencefálica. Uno de los aspectos primordiales de los resultados de la invención, en el ámbito de la terapia, es que han permitido tener como objetivo un componente inflamatorio relacionado con la activación de los microgliocitos/macrófagos cerebrales, con una especificidad única en este dominio gracias a la identificación... [Seguir leyendo]

1. Utilización de por lo menos un anticuerpo seleccionado de entre (i) los anticuerpos anti-Env-SU MSRV/HERV-W capaces de unirse específicamente a la fracción soluble de la proteína Env de MSRV/HERV-W, y (ii) los anticuerpos anti-TLR4 capaces de unirse específicamente al receptor TLR4 de dicha fracción soluble de la proteína Env de MSRV/HERV-W, teniendo los anticuerpos (i) un efecto inhibidor equivalente al de los anticuerpos (ii) ,

para la preparación de un medicamento destinado a tratar la esclerosis múltiple o la esquizofrenia, por inhibición de la cascada proinflamatoria que implica dicha fracción soluble de Env de MSRV/HERV-W y dicho receptor.

2. Utilización según la reivindicación 1, de por lo menos dos anticuerpos, un primer anticuerpo seleccionado de entre los anticuerpos (i) y un segundo anticuerpo seleccionado de entre los anticuerpos (ii) .

3. Utilización según la reivindicación 1 o 2, según la cual el o los anticuerpos están asociados a un vehículo 15 farmacéuticamente aceptable.

4. Utilización según la reivindicación 3, caracterizada porque la composición comprende un vector farmacéuticamente aceptable que permite atravesar la barrera hematoencefálica.

5. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la cascada proinflamatoria induce la formación de citoquinas seleccionadas de entre IL-6, IL-1 y el TNF-a.

6. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque los anticuerpos (i) se seleccionan de entre los capaces de unirse a por lo menos una de las regiones siguientes de SEC ID nº 1: la región que empieza en el aminoácido 122 y que se termina en el aminoácido 131, la región que empieza en el aminoácido 181 y que se termina en el aminoácido 186, la región que empieza en el aminoácido 312 y que se termina en el aminoácido 316.

7. Utilización según la reivindicación 6, caracterizada porque dichos anticuerpos (i) son susceptibles de ser

obtenidos a partir de un hibridoma de células de ratones inmunizados por la fracción soluble de la envoltura HERV30 W.