Composición para el tratamiento de infecciones bacterianas de la piel y mucosas.

La presente invención se refiere a una composición para el tratamiento y la profilaxis de infecciones bacterianas de la piel que comprenden la bacteriocina AS-48 en combinación con lisozima. Más concretamente, se trata de composiciones con los principios activos disueltos en extractos adecuados para las aplicaciones frente Propionibacterium acnes y Staphylococcus aureus, de forma estabilizada en un preparado farmacéuticamente aceptable.

COMPOSICiÓN PARA EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES BACTERIANAS DE

LA PIEL Y MUCOSAS

SECTOR DE LA TÉCNICA

La presente invención se encuentra dentro del sector farmacéutico, y más concretamente en el campo de las composiciones para el tratamiento de infecciones bacterianas de la piel con compuestos antibacterianos.

ESTADO DE LA TÉCNICA

La piel humana sana está colonizada por numerosos microorganismos que son responsables del mantenimiento de su equilibrio microbiano natural. De hecho, su microbiota normal está constituida por poblaciones residentes o transitorias de bacterias y diversas especies de hongos (en particular levaduras) , algunas de ellas muy estables. Los microorganismos residentes más habituales de la piel se limitan a algunos géneros de bacterias Gram+, cuyas especies pueden llegar a representar hasta el 50%. Entre ellos destacan las pertenecientes al Phylum Firmicutes con bajo contenido en G+C (géneros Streptococcus y Staphylococcus) y al Phylun Actinobacteria (géneros Cor y nebacterium y Propionibacterium) . Los restantes grupos bacterianos, incluidas las bacterias Gram-, son mucho más transitorios ya que alrededor del 70% sufren cambios con el paso del tiempo y las condiciones del individuo.

Hay, sin embargo, una serie de bacterias causantes de infecciones cutáneas como la mastitis y el acné, entre las que destacan por su frecuencia S. aureus y Propionibacterium acnes, respectivamente. La mastitis infecciosa de las glándulas mamarias se caracteriza por múltiples síntomas locales y sistémicos en madres lactantes. Es causada principalmente por S. aureus y especies de Streptococcus, que suelen ser multirresistentes a los antibióticos, por lo que el tratamiento mediante antibioterapia es, en muchos casos, insatisfactorio y el problema tiende a ser recurrente. Su incidencia oscila entre el 3-33% de ellas, y determina un alto porcentaje de cese de la lactancia. Por su parte, el acné común (acne vulgaris) es una infección de la piel, en particular de aquellas áreas con mayor densidad de folículos sebáceos. Se trata de la infección cutánea más común entre los seres humanos, debida a cambios de los folículos pilosos y las glándulas sebáceas asociadas, que tienen lugar principalmente en la pubertad (el 85% de los adolescentes padecen en algún grado este problema) , como una respuesta multifactorial que incluye mecanismos hormonales, microbiológicos e inmunológicos.

El empleo de péptidos antibacterianos producidos por bacterias (bacteriocinas) frente a infecciones bacterianas, se está consolidando como alternativa a la falta de quimioterápicos, debido a la resistencia a los antibióticos. Las bacteriocinas están hoy en el punto de mira de novedosos estudios sobre su aplicación frente a patógenos comunes en clínica, por lo que es ya una tendencia creciente en el campo de las composiciones farmacéuticas y en los métodos de tratamiento antibacterianos (revisado por Montalban-Lopez, M., Sanchez-Hidalgo, M., Valdivia, M., MartinezBueno, M., and Maqueda, M. 2011. Are bacteriocins underexploited? Novel applications for ancient antimicrobials. Curr. Pharm. Biotechnol. 12: 1205-1220) . Ejemplos de ello son las patentes existentes protegiendo el uso de péptidos antibióticos (W09957281, W02004082701, US5635594, CA2453112) o de bacteriocinas producidas por bacterias (Mutacin CA2268744 y S6521596, gallidermin CA 1338310 (C) -1996-05-07 y de la Enterocin L50A/B producida por E. faecalis SL-5 que ha sido registrada como Lactopadt™ Acne como ingrediente cosmético (INCI) (CTFA file No. 9082) por Cell Biotech Co. Ud. (KOSDAQ) con el objetivo de utilizarla con propósitos cosméticos, en las capas superiores de la piel) .

Las composiciones que integran bacteriocinas tienen la ventaja de evitar el desarrollo de resistencias por patógenos que colonizan e infectan la piel. Por este motivo hay algunas publicaciones sobre la habilidad de algunas bacteriocinas para inhibir a P. acnés, reduciendo las lesiones inflamatorias causadas por esta bacteria. Tal es el caso de las producidas por Lactococcus sp. HY 449 o Enterococcus faecalis SL-5 antes comentada. De forma similar se ha descrito la utilización de bacteriocinas, incluida AS48, frente a diferentes cepas MRSA de Staphylococcus, y/o aquéllas productoras de mastitis.

Aquí se propone el empleo de la bacteriocina AS-48 producida por especies de Enterococcus, en combinación con un agente potenciador, la lisozima, un enzima que hidroliza la pared celular de las bacterias, que incrementa la potencia de AS-48 con el fin de combatir especies patógenas causantes de infecciones en la piel, en concreto P. acnes y S. aureus. La posible explicación de esta sinergia es un efecto de barreras múltiples que se produce debido a que la aplicación simultánea, a dosis moderadas, de varios factores que actúan a diferentes niveles, resulta mucho más eficaz que la aplicación de uno sólo, que, al actuar a un solo nivel, requiere una dosis más alta (Leistner, L. 2000. Basic aspects of food preservation by hurdle technology. Int. J. Food Microbiol. 55: 181-186) .

La bacteriocina AS-48 es una proteína circular de síntesis ribosómica constituida por 70 aminoácidos naturales. Su naturaleza es fuertemente anfipática lo que le permite adaptarse a diferentes condiciones ambientales. Así en soluciones acuosas, AS-48 adopta una forma dimérica (DF-I) en la que expone dominios hidrófilos, pero esta asociación cambia en ambientes hidrofóbicos como sería el caso de la piel o la presencia de membranas celulares, adoptando una nueva forma dimérica (DF-II) en la que se exponen los dominios hidrófobos, lo que sin duda facilita su inserción en membranas fuertemente cargadas negativamente como ocurre en el caso de las bacteria, pero sin actividad frente a células eucariotas.

AS-48 ha sido reconocida como una de las bacteriocinas con mayor potencialidad, debido a su amplio espectro de acción frente a las membranas bacterianas de la mayoría de las bacterias Gram+ ensayadas y algunas bacterias Gram-. Favorece su actividad y por ende sus posibles aplicaciones biotecnológicas, la gran estabilidad que AS-48 presenta en amplios intervalos de pH, temperatura y tratamientos surfactantes, debido a sus características estructurales (una proteína circular) , lo que justifica el éxito que tiene su empleo en la bioconservación de alimentos.

La lisozima, también llamada 1, 4 N-acetil muramidasa, es un enzima hidrolítica que cataliza específicamente la hidrólisis de las uniones beta 1, 4 existentes entre los residuos de ácido N-acetilmurámico y N-acetil-D-glucosamina del peptidoglicano bacteriano, un compuesto mayoritario de la pared celular bacteriana, en particular de las bacterias Gram-positivas. Este enzima carece de actividad proteasa, quinasa, lipasa, amilasa o fosfatasa y se encuentra de forma natural en numerosas secreciones (lágrimas, mocos, saliva y leche) y en gran cantidad en la clara de huevo, que es su fuente de obtención para uso industrial (Sigma) .

La aplicación de múltiples barreras en el control de los microorganismos puede tener un efecto inhibidor aditivo o incluso sinérgico, sobre todo si actúan sobre distintas dianas del microorganismo. Este es el caso que describimos en el que AS-48 forma poros en la membrana celular, y dicha actividad se favorecida por la acción de lisozima que al hidrolizar parcialmente la pared celular, facilita el acceso de AS-48 a su diana, la membrana citoplasmática bacteriana.

Actualmente hay un gran interés en la aplicación de bacteriocinas solas o en combinación con otros inhibidores y también con agentes físicos o químicos que actúan de forma sinérgica frente a bacterias patógenas y/o alterantes, permitiendo en algunos casos ampliar su espectro de acción a bacterias Gram-negativas. Así, la nisina se ha empleado conjuntamente con otras bacteriocinas y con conservantes químicos (nitritos) para el control de Clostridium. Las altas presiones han sido combinadas con diversas bacteriocinas y cepas productoras de las mismas (nisina, lacticina 3147, lacticina 481, AS-48, TAB 57, pediocina AcH y las enterocinas 1, A Y B) en diferentes alimentos para el control de la microbiota alterante y patógena. Se ha comprobado también que la nisina y la lisozima actúan sinérgicamente en el control de Lactobacillus y S. aureus y que su espectro puede ser ampliado a bacterias Grammediante la adición de agentes quelantes. De igual forma, AS-48 se ha combinado con éxito con otros antibacterianos, incluida la lisozima, para la eliminación de patógenos en alimentos.

No se puede dejar de mencionar... [Seguir leyendo]

1. Uso de una composición que comprende bacteriocina AS-48 y lisozima para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de infecciones bacterianas de la piel y mucosas.

2. Uso según la reivindicación 1 en el que las infecciones bacterianas de la piel y mucosas son causadas por Propionibacterium acnes o Staphylococcus aureus.

3. Uso según la reivindicación 2 en el que la cantidad de bacteriocina AS-48 es de al menos 10 Ilg/ml y la infección bacteriana es causada por P. acnes.

4. Uso según la reivindicación 2 en el que la cantidad de bacteriocina AS-48 es de al menos 100 Ilg/ml y la infección bacteriana es causada por S. aureus.

5. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que la cantidad de lisozima es de al menos 4 mg/ml.

6. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que la cantidad de lisozima es de al menos 8 mg/ml.

7. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 5 ó 6 en el que el medicamento es un gel neutro y la infección bacteriana es causada por P. acnes.

8. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 5 ó 6 en el que el medicamento es una solución acuosa y la infección bacteriana es causada por P. acnes.

9. Uso según la reivindicación 7 u 8 en el que la cantidad de bacteriocina AS-48 es de al menos 1 mg/ml.

10. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4 ó 6 en el que el medicamento es una crema tópica y la infección bacteriana es causada por S.

aureus.

11. Uso según la reivindicación 10 en el que la crema tópica es una emulsión estable de vaselina filante fundida con la bacteriocina AS-48 y la lisozima.

12. Uso según la reivindicación 10 u 11 en el que la cantidad de bacteriocina AS-48 es de al menos 1 mg/ml.

O 12 24 36 48 72 96 120 144 Tiempo (horas)

• CmImI • AS-48 0, 01 pgImI • AS-48 0, 1 pgImI

o AS-48 1 pgImI • AS-48 5 pgImI o AS-48 10 pgImI

Figura 1

-- E 6

u

::::J

~

O O U N ~ 48 72 % 120 144

T'iI!rmpo (horaS)

CooIroI -AS-48 O, 01J1!J1m1 .§. AS-480, 1J1!J1m1 [jS02ima 4mg/m 13 IJsozima+AS-480, 01¡.agIrD 8 üS02ima+AS-48 0, 1J1!J1m1

Figura 2

O +----r---.. --~, J-"'~, ~-'~¡~-, , 4;~...L I_', W

::J lisozima +AS-48 10 I1QIml Olisozima +AS-48 5 pglml

Figura 3