Cepa de Lactobacillus rhamnosus.

Cepa de Lactobacillus rhamnosus que posee propiedades antimicrobianas, inmunomoduladoras y de adherencia específica a la manosa

, depositada en la CNCM con el número I-3690.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR2009/000284.

Solicitante: COMPAGNIE GERVAIS-DANONE.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 17, BOULEVARD HAUSSMANN 75009 PARIS FRANCIA.

Inventor/es: SAINT-DENIS,THIERRY, KHLEBNIKOV,ARTEM, CHAMBAUD,ISABELLE, VILLAIN,ANNE-CATHERINE, GROMPONE,GIANFRANCO.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que... > C12N1/20 (Bacterias; Sus medios de cultivo)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen sustancias... > A61K35/74 (Bacterias (uso terapéutico de una proteína de la bacteria A61K 38/00))
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > ALIMENTOS O PRODUCTOS ALIMENTICIOS; SU TRATAMIENTO,... > ALIMENTOS, PRODUCTOS ALIMENTICIOS O BEBIDAS NO ALCOHOLICAS... > Alimentos o productos alimenticios; Su preparación... > A23L1/30 (que contienen aditivos (A23L 1/308 tiene prioridad))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > SISTEMA DE INDEXACION ASOCIADO A LAS SUBCLASES C12C... > Microorganismos > C12R1/225 (Lactobacillus)

PDF original: ES-2544687_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Cepa de Lactobacillus rhamnosus.

La invención se refiere a una nueva cepa de Lactobacillus rhamnosus dotada de propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras.

Numerosos estudios científicos han descrito los efectos beneficiosos para la salud de ciertos microorganismos 5 presentes en los alimentos fermentados, principalmente productos lácteos. Estos microorganismos se denominan comúnmente «probióticos». Según la definición generalmente aceptada en la actualidad, los probióticos son: «microorganismos vivos que, cuando se consumen en cantidades adecuadas, tienen un efecto beneficioso sobre la salud del hospedante» (Informe de la FAO/OMS sobre la evaluación de las propiedades sanitarias y nutricionales de los probióticos en los alimentos, incluida la leche en polvo, que contienen bacterias lácticas vivas; Córdoba, 10 Argentina; 1-4 octubre 2001) .

Se ha demostrado que el consumo de productos alimenticios que contienen bacterias probióticas puede producir efectos favorables sobre la salud, por medio principalmente del reequilibrio de la flora intestinal, la mejora de la resistencia a las infecciones y la modulación de la respuesta inmunitaria.

Los microorganismos probióticos utilizados en la alimentación humana son generalmente bacterias lácticas, 15 pertenecientes principalmente a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium.

Los efectos beneficiosos sobre la salud no son sin embargo generalmente comunes al conjunto de bacterias de un mismo género ni incluso de una misma especie. Frecuentemente, no se encuentran más que en ciertas cepas; además, los efectos observados pueden variar cualitativa y/o cuantitativamente de una cepa probiótica a otra, dentro de una misma especie. 20

Para que un microorganismo pueda ser considerado potencialmente utilizable como probiótico, debe cumplir al menos uno, e idealmente varios, de los siguientes criterios:

- presentar una actividad inhibidora frente a microorganismos patógenos que puedan estar presentes en la flora intestinal, pudiendo resultar esta actividad bien de la capacidad de adherirse a las células intestinales, excluyendo o reduciendo así la adherencia de agentes patógenos, o bien de la capacidad de 25 producir sustancias inhibidoras de los agentes patógenos, o bien la combinación de estas dos características;

- presentar propiedades inmunomoduladoras y principalmente inmunoestimuladoras y/o anti-inflamatorias.

Además, si este microorganismo está destinado a ser incorporado en un producto lácteo, debe presentar preferiblemente un desarrollo satisfactorio en la leche. 30

Por último, debe conservar una buena viabilidad, durante la producción y conservación del alimento al que se incorpora, así como después de la ingestión de este alimento por el consumidor, de modo que pueda llegar al intestino y sobrevivir en el medio intestinal.

Sin embargo, ha de observarse que aunque la viabilidad sea esencial para responder a la definición actual de «probiótico», se ha demostrado que ciertos efectos beneficios asociados a las cepas probióticas se podrían obtener 35 incluso en ausencia de bacterias vivas y serían atribuibles a ciertas fracciones bacterianas o fracciones activas de sus líquidos sobrenadantes de cultivo. Por ejemplo, la Solicitud PCT WO2004/093898 describe una preparación inmunomoduladora obtenida por fraccionamiento del líquido sobrenadante de cultivo de la cepa CNCM I-2219.

Los autores de la presente invención han conseguido ahora aislar una cepa de Lactobacillus rhamnosus que responde a los criterios indicados anteriormente. 40

La presente invención tiene por objeto esta cepa, que ha sido depositada, según el Tratado de Budapest, en la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, París) , el 9 de noviembre de 2006 con el número I-3690.

Dicha cepa posee las siguientes características:

- Morfología: pequeños bacilos achaparrados a veces cocoides, aislados o en pequeñas cadenas. 45

- Fermentación de los azúcares siguientes (resultados obtenidos en una galería API 50 CH - Medio MRS API a 37ºC durante 48 horas) : ribosa, galactosa, D-glucosa, D-fructosa, D-manosa, L-sorbosa, ramnosa, manitol, sorbitol, metil-D-glucósido, N-acetilglucosamina, arbutina, esculina, salicina, maltosa, lactosa, trehalosa, melecitosa, beta-gentiobiosa, D-turanosa, D-tagatosa y gluconato.

Por otra parte dicha cepa posee propiedades antimicrobianas, que se traducen en una fuerte capacidad de inhibir el 50 desarrollo en cultivo de microorganismos patógenos.

Además dicha cepa presenta propiedades de adherencia a la manosa. Se sabe que glicoconjugados ricos en manosa presentes en la superficie de las células epiteliales intestinales desempeñan un papel en la unión de bacterias patógenas, tales como Escherichia coli enterotóxicas, las salmonelas, Vibrio cholerae o Pseudomonas aeruginosa, y se ha descrito que las propiedades de adherencia a la manosa de ciertas bacterias probióticas les permitían competir con estos agentes patógenos e inhibir su adherencia a la mucosa intestinal, confiriéndoles así 5 propiedades anti-infecciosas (MICHAIL et ABERNATHY, Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 35, 350-355, 2002; MANGELL et al., Dig Dis Sci., 47, 511-506, 2002) . Estas propiedades, sin embargo, se habían observado principalmente en bacterias de la especie Lactobacillus plantarum (principalmente la cepa L. plantarum 229v, descrita en la Solicitud EP0817640 y la cepa L. plantarum WCFS1) , pero no en las bacterias de la especie Lactobacillus rhamnosus.

La cepa CNCM I-3690 posee igualmente propiedades inmunomoduladoras y principalmente anti-inflamatorias. 10

La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de obtención de una cepa de Lactobacillus rhamnosus, caracterizado por que comprende la mutagénesis o la transformación genética de la cepa CNCM I-3690, así como cualquier cepa de Lactobacillus rhamnosus susceptible de ser obtenida por este procedimiento, y que conserve las propiedades antimicrobianas y las propiedades inmunomoduladoras de la cepa CNCM I-3690. Se puede tratar de cepas en las que uno o varios de los genes endógenos de la cepa CNCM I-3690 han sido mutados, 15 por ejemplo con el fin de modificar ciertas de sus propiedades metabólicas (por ejemplo, la capacidad de esta cepa de metabolizar azúcares, su resistencia al tránsito intestinal, su resistencia a la acidez, su post-acidificación o su producción de metabolitos) . Se puede tratar igualmente de cepas resultantes de la transformación genética de la cepa CNCM I-3690 con uno o varios genes de interés, permitiendo, por ejemplo, conferir a dicha cepa características fisiológicas complementarias o expresar proteínas de interés terapéutico o vacunal, que se desea administrar por 20 medio de dicha cepa.

Estas cepas se pueden obtener a partir de la cepa CNCM I-3690 por técnicas clásicas de mutagénesis aleatoria o dirigida y de transformación genética de lactobacilos, tales como las descritas por ejemplo, por GURY et al., (Arch Microbiol., 182, 337-45, 2004) o por VÉLEZ et al., (Appl Environ Microbiol., 73, 3595-3604, 2007) , o por la técnica denominada «barajado del genoma» (genome shuffling) (PATNAIK et al., Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002; WANG, 25 Y. et al., J Biotechnol., 129, 510-15, 2007) .

La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de obtención de fracciones celulares que poseen propiedades inmunomoduladoras y antimicrobianas, caracterizado por que dichas fracciones se obtienen a partir de una cepa de Lactobacillus rhamnosus de acuerdo con la invención. Dicha invención trata principalmente de preparaciones de ADN o preparaciones de paredes bacterianas obtenidas a partir de cultivos de dicha cepa.... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Cepa de Lactobacillus rhamnosus que posee propiedades antimicrobianas, inmunomoduladoras y de adherencia específica a la manosa, depositada en la CNCM con el número I-3690.

2. Procedimiento de obtención de una cepa de Lactobacillus rhamnosus, caracterizado por que comprende la mutagénesis o la transformación genética de la cepa CNCM I-3690. 5

3. Cepa de Lactobacillus rhamnosus, caracterizada por que es susceptible de ser obtenida por el procedimiento según la reivindicación 2 y por que posee las propiedades antimicrobianas y las propiedades inmunomoduladoras de la cepa CNCM I-3690.

4. Composición que comprende una cepa de Lactobacillus rhamnosus según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3. 10

5. Composición según la reivindicación 4, caracterizada por que se trata de un producto alimenticio.

6. Cepa de Lactobacillus rhamnosus según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3, para la utilización como medicamento.

7. Cepa de Lactobacillus rhamnosus para la utilización como medicamento según la reivindicación 6, caracterizada por que dicho medicamento está destinado al tratamiento de una infección microbiana. 15

8. Cepa de Lactobacillus rhamnosus para la utilización como medicamento según la reivindicación 6, caracterizada por que dicho medicamento es anti-inflamatorio.

9. Procedimiento de obtención de una fracción celular que posee propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras, caracterizado por que dicha fracción se obtiene a partir de un cultivo de una cepa de Lactobacillus rhamnosus según una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3. 20

10. Procedimiento según la reivindicación 9, caracterizado por que dicha fracción celular se elige entre:

- una preparación de ADN o una preparación de paredes bacterianas;

- un líquido sobrenadante de cultivo o una fracción de dicho líquido sobrenadante.

11. Procedimiento de obtención de una composición que posee propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras, caracterizado por que comprende la obtención de una fracción celular por un procedimiento 25 según una cualquiera de las reivindicaciones 9 o 10, y la incorporación de dicha fracción en dicha composición.

12. Procedimiento según la reivindicación 11, caracterizada por que dicha composición es un producto alimenticio.