ANTICUERPOS TERAPÉUTICOS Y QUE INDUCEN TOLERANCIA.

La presente invención se refiere a anticuerpos terapéuticos así como a un método para reducir o eliminar su inmunogenicidad. La tolerancia a un antígeno o tejido extraño es un estado por el cual un sistema inmune de otro modo normal, maduro, es incapaz específicamente de responder de forma agresiva a tal antígeno/tejido, tratándolo por ello como a un componente normal (no enfermo) de tejido corporal. Al mismo tiempo, el sistema inmune es competente para responder agresivamente a antígenos/tejidos extraños o enfermos a los que no es específicamente tolerante, ya sea mediante el proceso natural de autotolerancia o mediante procedimientos terapéuticos de inducción de tolerancia. Una prueba de tolerancia requiere normalmente demostrar que el individuo tolerante deja de convertirse en inmune al antígeno/ tejido específico cuando se lleva a cabo un intento, o preferentemente varios, de inmunizarle en un momento posterior a cuando se demuestra que el mismo individuo responde a un antígeno/tejido irrelevante. Tal como se emplea aquí, la referencia a la inducción de tolerancia pretende abarcar también la inducción de tolerancia tanto completa como parcial o incompleta. La inducción de tolerancia completa implica la eliminación de la respuesta inmune al antígeno/tejido al cual se debe inducir tal tolerancia, mientras que la inducción de tolerancia parcial o incompleta implica una reducción significativa de esta respuesta inmune. TÉCNICA ANTERIOR Uno de los mayores problemas que conlleva utilizar anticuerpos en la terapia es la respuesta inmune que se produce contra los mismos. Debido a que el ser humano naturalmente presenta tolerancia a sus inmunoglobulinas, se han venido utilizando diversas estrategias con el fin de crear formas humanas de anticuerpos terapéuticos, estrategias tales como humanización, visualización de fagos cargados de anticuerpos (phage display) procedentes de librerías humanas o utilizar ratones portadores de repertorios de genes de inmunoglobulinas humanas. Aunque sean útiles, estos procedimientos no pueden garantizar que los pacientes no sigan reaccionando contra las características únicas del anticuerpo terapéutico, características tales como los determinantes alotípicos en las regiones constantes y los determinantes idiotípicos codificados por las regiones determinantes complementarias (CDRs). Chiller y Weigle (1970) PNAS 65:551 demostraron en roedores que la tolerancia a las inmunoglobulinas extrañas puede ser inducida por monómeros desagregados de aquellas inmunoglobulinas, mientras los agregados de dichas inmunoglobulinas eran potencialmente inmunogénicos. Benjamin y Waldmann y col., (1986) J. Exp. Med. 163:1539, demostraron que los anticuerpos de unión celular podrían ser también inmunogénicos en comparación con los anticuerpos de no-unión celular. Isaacs y Waldman (1994), Therapeutic Immunology 1:363-32, demostraron que la respuesta humoral contra los anticuerpos terapéuticos era dependiente de las células T CD4+. Para asegurar que los anticuerpos terapéuticos no son inmunogénicos, sería conveniente inducir tolerancia en la población de células T CD4+ a todos los determinantes potencialmente inmunogénicos de aquellos anticuerpos terapéuticos que las células huésped puedan reconocer. Gilliland y col., (1999) The Journal of Immunology 162:3663-3671, describieron una vía alternativa para impedir la respuesta inmune contra los anticuerpos terapéuticos mediante pre-tolerización del huésped con una preparación monomérica de mutantes de anticuerpos de no-unión celular. Específicamente, este estudio demostró que los mutantes del anticuerpo anti-CD52 CAMPATH-1H que no son de unión celular pierden su inmunogenicidad y, por ello, pueden inducir tolerancia a los anticuerpos de unión de tipo salvaje. CAMPATH-1 es el nombre genérico dado al antígeno de la glicoproteína CD52 y a la familia de anticuerpos que lo reconocen. CAMPATH es una marca comercial registrada. Así, la única capacidad de los anticuerpos CAMPATH-1H para matar linfocitos por medio tanto de la lisis mediada por complemento como de la lisis mediada por células ha conducido a un amplio uso de estos anticuerpos para la seroterapia de linfomas, transplante de médula y de órganos, así como en el tratamiento de enfermedades autoinmunes. La observación de que algunos pacientes desarrollan respuestas antiglobulina al anticuerpo terapéutico condujo a una investigación centrada en la abolición de la inmunogenicidad. Gilliland y col. demostraron en modelos murinos que la respuesta de la antiglobulina a una forma de unión celular del anticuerpo CAMPATH-1H podría ser abolida mediante inducción de tolerancia primero con un mutante de no-unión celular. Sin embargo, la utilización terapéutica de este método exigiría la aplicación de dos productos, el tolerógeno de no-unión y el presente anticuerpo terapéutico. Se trata de un proceso muy caro y tiene el inconveniente de que como los anticuerpos mutantes y terapéuticos difieren en algunos residuos de aminoácidos y que en ciertos casos la tolerancia puede no extenderse a la diferencia, todavía podría producirse una respuesta de la antiglobulina al anticuerpo de tipo salvaje (no-mutado). Por tanto, existe la necesidad de asegurar la tolerancia a la totalidad del anticuerpo terapéutico. Por tanto, un objetivo a largo plazo en inmunología consiste en encontrar un medio para abolir el potencial de desarrollar una respuesta inmune a ciertas proteínas terapéuticas que pueden tener secuencias de aminoácido diferentes del huésped. Esto tendría grandes implicaciones en un amplio rango de áreas terapéuticas que van desde el cáncer hasta la enfermedad autoinmune del transplante. 2   DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo terapéutico modificado tal como se define en la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo terapéutico modificado, en comparación con el anticuerpo no modificado, presenta una menor unión a su antígeno diana. Ésta es tal que aumenta con el tiempo la unión del anticuerpo a la diana. De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo terapéutico inductor de tolerancia que comprende un anticuerpo terapéutico, de efecto terapéutico específico, donde el anticuerpo se somete a una obstrucción temporal de su sitio de combinación, lo que reduce la unión del anticuerpo a su diana natural, y donde, después de la administración a un huésped, dicho anticuerpo es capaz de regenerar una forma funcional suficiente competente como anticuerpo terapéutico para conseguir dicho efecto terapéutico; con ello, la reducción de la unión del anticuerpo para su diana natural convierte al anticuerpo modificado en tolerogénico de sí mismo y de su forma funcionalmente competente. A este respecto, tolerogénico significa se refiere a una inhibición reducida en importancia y/o esencialmente eliminada de la respuesta inmune inmunogénica (una respuesta de anticuerpo) contra el anticuerpo. Utilizando este anticuerpo, la inmunogenicidad de los anticuerpos de unión celular se puede reducir o evitar, de forma que se puede aplicar una terapia con anticuerpos en todo su potencial. Sólo se utiliza un producto que es capaz de inducir tolerancia a sí mismo y producir el efecto terapéutico deseado. Esto elimina la necesidad de dos productos tal como se han venido empleando hasta la fecha. El bloqueo temporal del sitio de combinación del anticuerpo (ACS) debe producirse durante un tiempo suficiente como para inducir tolerancia dentro del sistema inmune del huésped; es decir, debe inhibir la respuesta inmune inmunogénica contra el anticuerpo pero, una vez lo ha logrado, el anticuerpo debería volver a o regenerar una forma capaz de interactuar con la diana terapéutica mediante el incremento de la cantidad de anticuerpo unido a la misma. Por tanto, se pueden dar anticuerpos inmunológicamente extraños para producir el efecto terapéutico deseado reduciendo y/o eliminando esencialmente la respuesta inmune inmunogénica del huésped a los mismos. Así, de acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un fármaco en forma de anticuerpo terapéutico modificado comprendiendo un anticuerpo de unión celular que incluye un sitio de combinación del anticuerpo que se une al antígeno diana unido a células, siendo modificado dicho anticuerpo con un péptido que inhibe la unión del anticuerpo al antígeno diana, donde el péptido comprende el antígeno diana o un dominio o mimotopo del mismo que está unido reversiblemente al sitio de combinación del anticuerpo, siendo eficaz dicho anticuerpo modificado para reducir la respuesta inmune contra el anticuerpo y para producir un efecto terapéutico mediante la unión al antígeno diana. Se modifica el anticuerpo terapéutico para incluir un compuesto que está... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo terapéutico modificado que comprende un anticuerpo de unión celular que incluye un sitio de combinación del anticuerpo que se une a un antígeno diana unido a células, siendo modificado dicho anticuerpo con un péptido que inhibe la unión del anticuerpo al antígeno diana, caracterizado porque el péptido comprende el antígeno diana o un dominio o mimotopo del mismo que está unido reversiblemente al sitio de combinación del anticuerpo, siendo eficaz dicho anticuerpo modificado para reducir una respuesta inmune contra el anticuerpo y para producir un efecto terapéutico mediante la unión al antígeno diana. 2. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el péptido unido al sitio de combinación del anticuerpo está enlazado también al anticuerpo. 3. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque sólo una de las cadenas del anticuerpo tiene un péptido enlazado al mismo que se une al sitio de combinación del anticuerpo. 4. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque la avidez del anticuerpo modificado combinado con el péptido es como mínimo 4 veces inferior a la avidez del anticuerpo no-modificado. 5. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo modificado tiene una avidez por la diana que es como mínimo 100 veces inferior a la avidez del anticuerpo no-modificado por la diana. 6. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo aglicosilado. 7. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 2, caracterizado porque la fracción Fc del anticuerpo está aglicosilada. 8. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 2, caracterizado porque la unión del anticuerpo al receptor Fc esencialmente se elimina. 9. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo no humano. 10. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo quimérico. 11. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1 que tiene un péptido unido reversiblemente al sitio de combinación del anticuerpo, por lo que dicho antígeno diana compite por y desplaza el péptido del sitio de combinación del anticuerpo, inhibiendo dicho péptido la unión del anticuerpo al antígeno diana, dicho anticuerpo modificado uniéndose inicialmente al antígeno diana en una cantidad que es inferior al anticuerpo no-modificado, aumentando dicha unión del antígeno diana como consecuencia del desplazamiento del péptido del sitio de combinación del anticuerpo a medida que el anticuerpo se va uniendo al antígeno diana. 12. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 2, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo alemtuzumab modificado (CAMPATH-1H). 13. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo comprende el mimotopo de CD52 que tiene la secuencia de aminoácido QTSSPSAD ligada a la región V de la cadena ligera del alemtuzumab (CAMPATH-1H) por el Enlazador flexible Glicina 4 Serina x 2 y la cadena pesada del alemtuzumab (CAMPATH-1H) con la región constante de la IgG1 humana de tipo salvaje. 14. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo comprende el Mimotopo de CD52 que tiene la secuencia de aminoácido QTSSPSAD ligada a la región V de la cadena ligera del alemtuzumab (CAMPATH-1H) por el Enlazador flexible Glicina 4 Serina x 2 y la cadena pesada del alemtuzumab (CAMPATH-1H) con la región constante de la IgG1 humana aglicosilada. 15. Anticuerpo terapéutico modificado según la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo comprende el Mimotopo de CD52 que tiene la secuencia de aminoácido QTSSPSAD ligada a la región V de la cadena ligera del alemtuzumab (CAMPATH-1H) por el Enlazador flexible Glicina 4 Serina x 2 y la cadena pesada del alemtuzumab (CAMPATH-1H) con la región constante de la IgG1 humana mutada en FcR. 21   16. Anticuerpo terapéutico modificado según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizado porque la cadena ligera del anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos según la SEQ ID NO: 2. 17. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo terapéutico modificado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16. 18. Anticuerpo terapéutico modificado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su utilización en terapia. 19. Anticuerpo terapéutico modificado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para su utilización en el tratamiento de una condición seleccionada de entre cáncer, enfermedades inflamatorias crónicas tales como artritis reumatoide, enfermedades autoinmunes tales como diabetes, psoriasis, esclerosis múltiple, lupus sistémico, enfermedades alérgicas tales como asma, enfermedades cardiovasculares tales como infarto de miocardio, derrame cerebral y enfermedades infecciosas. 20. Utilización de un anticuerpo terapéutico modificado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición seleccionada de entre cáncer, enfermedades inflamatorias crónicas tales como artritis reumatoide, enfermedades autoinmunes tales como diabetes, psoriasis, esclerosis múltiple, lupus sistémico, enfermedades alérgicas tales como asma, enfermedades cardiovasculares tales como infarto de miocardio, derrame cerebral y enfermedades infecciosas. 22 % de Unión a Células HUT 78   Anticuerpos Silenciosos de Unión a Células HUT 78 Concentración de anticuerpos Enlazador 23 Figura 1   IgG anti-humana IgG anti-humana No-tratado No-tratado 24 Figura 2   IgG humana IgG humana Bazo Bazo Sangre Clase II Figura 3 % células hCD52+ % células hCD52+ % células hCD52+   Comparación de la potencia del CAMPATH-1H y del MIM-IgG1 para reducir los linfocitos in vivo 24 horas 8 días 21 días % células hCD52+ 26 24 horas Ninguna Ninguna % células hCD52+ 8 días Ninguna Ninguna % células hCD52+ 21 días Ninguna Ninguna Figura 4   Título de la antiglobulina (dilución en suero = 1:20x2 n Comparación de la inmunogenicidad del CAMPATH-1H, del MIM-IgG1 y del AG-MIM-IgG1 27 Título de la antiglobulina (dilución en suero = 1:20x2 n Día 21 Día 28 Sin tratamiento Figura 5   Comparación de la capacidad tolerogénica del CAMPATH-1H, del MIM-IgG1 y del AG-MIM-IgG1 Título de la antiglobulina (dilución en suero = 1:20x2 n Título de la antiglobulina (dilución en suero = 1:20x2 n Día 90 Día 45 Día 120 Día 75 Sin tratamiento Sin tratamiento 28 Figura 6   Figura 7: Secuencia peptídica de: Cadena ligera de CD52 MIM / CP-1H 29   Enlazador Inicio Secuencia Líder de CP-1L Mimotopo   Región constante de cadena ligera Figura 8: Secuencia nucleotídica de: Región constante + región variable de CD52Mim-CP1L 31   32 Inicio Secuencia Líder de CP-1L Enlazador Gly4Serx2   Región constante de cadena ligera Figura 9: Secuencia nucleotídica de: Región constante + región variable del enlazador CP-1L 33   Figura 10: Secuencia peptídica de: Cadena ligera del enlazador CP-1H 34   Secuencia Líder de CP-1L Enlazador Gly4Serx2 Inicio   36 Región constante de cadena ligera Figura 11: Secuencia nucleotídica de: Región constante + región variable de P61-CP1L   Región constante de cadena ligera Figura 12: Secuencia peptídica de p61-L2.seq. comprobación: 678 de 1 a: 1085 (montaje de P61 enlazado a cadena L de CP1H-en pGEM9) 37