ANTICUERPOS RETICULADOS.

Un compuesto seleccionado de la fórmula (I) o (II):

en las que:

A, A1 y A2 representan independientemente el resto de un anticuerpo o su fragmento seleccionado del grupo que comprende anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y F(ab'), o un fragmento de unión a epítopo de un anticuerpo o dichos fragmentos;

L, L1 y L2 son succinimida;

R representa un grupo reactivo que es adecuado para unirse a una molécula efectora pero que no reacciona con ninguno de A, A1 ni A2, en el que R se selecciona de:

R10 representa arilo o heteroarilo;

Y representa un enlace covalente o -(CH2)y-;

B, B1 y B2 representan independientemente -CONH-, -NHCO- o -CO-;

V, V1 y V2 representan independientemente un enlace covalente o -(CH2)V-;

X, X1 y X2 representan independientemente CR1 o N;

W, W1 y W2 representan independientemente -(CH2)wO-;

T, T1 y T2 representan independientemente un grupo ligador seleccionado de -(CH2)t-, -(CH2)tNHCO(CH2)n-, - (CH2)tNHCO(CH2)xNHCO(CH2)n-, -(CH2)t,NHCO(CH2)p(OCH2CH2)zNHCO(CH2)n-, -(CH2)rNHCO(CH2)m-, o t es 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10;

n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6;

x es 2, 3, 4, 5 ó 6;

z es 1 a 500;

p es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6;

m es 1, 2, 3, 4, 5, ó 6;

r es 2, 3, 4 ó 5;

Q representa CO2Ra o CONRaRb;

Ra representa hidrógeno o alquilo de C1-4;

Rb representa hidrógeno o alquilo de C1-4;

R1 representa hidrógeno o alquilo de C1-4;

v es 1, 2, 3 ó 4;

w es 1, 2, 3 ó 4; y

y es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6.

Anticuerpos reticulados La presente invención se refiere a compuestos para uso para unir moléculas efectoras a anticuerpos. Más específicamente, la invención se refiere a moléculas que comprenden anticuerpos reticulados a los que se puede unir una molécula efectora. También se proporcionan métodos para la producción de tales moléculas, y composiciones farmacéuticas que las contienen.

La especificidad de unión de los anticuerpos se puede usar para suministrar moléculas efectoras, tales como fármacos, a dianas terapéuticas específicas tales como células tumorales. Las moléculas efectoras se pueden unir a anticuerpos usando diversos métodos, incluyendo, por ejemplo, la unión directa (véanse, por ejemplo, los documentos US 5.677.425; EP 0948544) o la unión vía un ligador (documento US 5.218.128) .

Los anticuerpos reticulados son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, el documento US 5.262.524) . Se ha demostrado que ciertos anticuerpos reticulados tienen capacidades de unión mejoradas, un aclaramiento sanguíneo in vivo mejorado, y una distribución tisular mejorada en comparación con las inmunoglobulinas naturales. Véase, por ejemplo, el documento WO 92/22583 que describe proteínas de unión a antígenos monoespecíficas tri-y tetravalentes que comprenden fragmentos Fab' unidos entre sí mediante una estructura conectora. El documento WO 92/22583 también describe el uso de la estructura conectora como un sitio para la unión de moléculas efectoras.

La presente invención proporciona compuestos que consisten esencialmente en los siguientes elementos: uno o más grupos reactivos; y dos o más anticuerpos reticulados o sus fragmentos; caracterizados porque el o cada grupo reactivo es adecuado para unirse a una molécula efectora pero no reacciona con ninguno de los anticuerpos o sus fragmentos.

Por lo tanto, la presente invención proporciona nuevos ligadores para reticular anticuerpos a los que se pueden unir moléculas efectoras. Ventajosamente, las moléculas ligadoras comprenden un único grupo reactivo que es adecuado para la unión específica del sitio de una molécula efectora, pero que no reacciona con los anticuerpos unidos al ligador. Además, el grupo reactivo está distante de los sitios de unión a antígenos. Estas características permiten que se unan moléculas efectoras a los anticuerpos reticulados sin destruir la capacidad de unión a antígenos de los anticuerpos. Además, los compuestos de la presente invención son más eficientes de preparar y versátiles de usar que los compuestos de la técnica anterior. Uniendo las moléculas efectoras a los anticuerpos reticulados preformados, en lugar de a la inversa (uniendo en primer lugar un ligador a una molécula efectora, y después uniendo los anticuerpos) , se minimizan reacciones secundarias indeseadas, creando un producto más uniforme. Además, puesto que los anticuerpos reticulados se preparan en ausencia de la molécula efectora, se pueden seleccionar moléculas efectoras menos estables para la unión posterior. Una reserva de anticuerpo reticulado preformado permitirá también que se una un intervalo virtualmente ilimitado de moléculas efectoras sin la necesidad de sintetizar todo el compuesto ab initio cada vez que se necesite un compuesto diferente.

Preferiblemente, los compuestos de la presente invención comprenden uno o dos grupos reactivos, más preferiblemente un grupo reactivo.

La presente invención también proporciona por lo tanto compuestos que consisten esencialmente en los siguientes elementos: un grupo reactivo; y dos o más anticuerpos reticulados o sus fragmentos; caracterizados porque el grupo reactivo es adecuado para unirse a una molécula efectora pero no reacciona con ninguno de los anticuerpos o sus fragmentos.

Los ejemplos particulares de la presente invención se proporcionan en la fórmula (I) o (II) : en las que:

A, A1 y A2 representan independientemente el resto de un anticuerpo o su fragmento seleccionado del grupo que comprende anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y F (ab') , o un fragmento de unión a epítopo de un anticuerpo o dichos fragmentos;

L, L1 y L2 son succinimida;

R representa un grupo reactivo que es adecuado para unirse a una molécula efectora pero que no reacciona con ninguno de A, A1 ni A2, en el que R se selecciona de:

R10 representa arilo o heteroarilo;

Y representa un enlace covalente o - (CH2) y-; B, B1 y B2 representan independientemente -CONH-, -NHCO-o -CO-; V, V1 y V2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) V-; X, X1 y X2 representan independientemente CR1 o N;

W, W1 y W2 representan independientemente - (CH2) wO-;

T, T1 y T2 representan independientemente un grupo ligador seleccionado de - (CH2) t-, - (CH2) tNHCO (CH2) n-, (CH2) tNHCO (CH2) xNHCO (CH2) n-, - (CH2) t, NHCO (CH2) p (OCH2CH2) zNHCO (CH2) n-, - (CH2) rNHCO (CH2) m-, o t es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10;

n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6; x es 2, 3, 4, 5 ó 6; z es 1 a 500; p es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6; m es 1, 2, 3, 4, 5, ó 6;

r es 2, 3, 4 ó 5; Q representa CO2Ra o CONRaRb;

Ra representa hidrógeno o alquilo de C1-4; Rb representa hidrógeno o alquilo de C1-4; R1 representa hidrógeno o alquilo de C1-4;

v es 1, 2, 3 ó 4; w es 1, 2, 3 ó 4; y y es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6. También se proporcionan mediante la presente invención anticuerpos reticulados a los que se une una molécula efectora. Los ejemplos particulares de este aspecto de la invención se proporcionan en las fórmulas (III) y (IV) :

en las que Z es un resto de una molécula efectora;

R2 es el grupo funcional que resulta de la unión de Z; y cada una de las otras variables es como se define anteriormente en relación con la fórmula (I) o (II) .

Como se usa aquí, la expresión “alquilo de C1-4” se refiere a grupos alquilo de cadena lineal y ramificados, que contienen 1 a 4 átomos de carbono. Tales grupos son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo.

Como se usa aquí, el término “resto” se entenderá que significa aquella porción de una molécula efectora o un fragmento o su anticuerpo que permanece después de que haya sufrido una reacción de sustitución según tal terminología es familiar para la persona experta en la técnica.

Los restos A, A1 y A2 incluyen restos de anticuerpos completos y sus fragmentos funcionalmente activos o derivados, y pueden ser, pero no se limitan a, anticuerpos policlonales, monoclonales, humanizados o quiméricos, anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y F (ab') 2, y fragmentos de unión a epítopos de cualquiera de los anteriores.

Los anticuerpos incluyen moléculas inmunoglobulínicas y porciones inmunológicamente activas de moléculas inmunoglobulínicas, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión a antígenos que se une específicamente a un antígeno. Las moléculas inmunoglobulínicas de la invención pueden ser cualquier clase (por ejemplo IgG, IgE, IgM, IgD o IgA) o subclase de moléculas inmunoglobulínica.

Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar mediante cualquier método conocido en la técnica, tal como la técnica de hibridoma (Kohler y Milstein, Nature, 1975, 256, 495-497) , la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de célula B humana (Kozbor et al., Immunology Today, 1983, 4, 72) , y la técnica de hibridoma de EBV (Cole et al., “Monoclonal antibodies and Cancer Therapy”, p. 77-96, Alan R. Liss, Inc., 1985) .

Los anticuerpos para uso en la invención también se pueden generar usando métodos de anticuerpos de linfocitos individuales clonando y expresando ADNcs de la región variable inmunoglobulínica generados a partir de linfocitos individuales seleccionados para la producción de anticuerpos específicos mediante, por ejemplo, los métodos descritos por Babcook, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93 (15) , 7843-7848, documentos WO 92/02551, WO 2004/051268 y WO 2004/106377.

Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo procedentes de especies no humanas que tienen una o más regiones que determinan la complementariedad (CDRs) de la especie no humana, y una región de marco procedente de una molécula inmunoglobulínica humana (véase, por ejemplo, el documento US 5.585.089) .

Los anticuerpos quiméricos son aquellos anticuerpos codificados... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto seleccionado de la fórmula (I) o (II) :

en las que:

A, A1 y A2 representan independientemente el resto de un anticuerpo o su fragmento seleccionado del grupo que comprende anticuerpos monocatenarios, fragmentos Fab, fragmentos Fab' y F (ab') , o un fragmento de unión a epítopo de un anticuerpo o dichos fragmentos;

L, L1 y L2 son succinimida;

R representa un grupo reactivo que es adecuado para unirse a una molécula efectora pero que no reacciona con ninguno de A, A1 ni A2, en el que R se selecciona de:

R10 representa arilo o heteroarilo;

Y representa un enlace covalente o - (CH2) y-;

B, B1 y B2 representan independientemente -CONH-, -NHCO-o -CO-;

V, V1 y V2 representan independientemente un enlace covalente o - (CH2) V-;

X, X1 y X2 representan independientemente CR1 o N;

W, W1 y W2 representan independientemente - (CH2) wO-;

T, T1 y T2 representan independientemente un grupo ligador seleccionado de - (CH2) t-, - (CH2) tNHCO (CH2) n-, (CH2) tNHCO (CH2) xNHCO (CH2) n-, - (CH2) t, NHCO (CH2) p (OCH2CH2) zNHCO (CH2) n-, - (CH2) rNHCO (CH2) m-, 10 o t es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10;

n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6;

x es 2, 3, 4, 5 ó 6;

z es 1 a 500; 15 p es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6;

m es 1, 2, 3, 4, 5, ó 6;

r es 2, 3, 4 ó 5;

Q representa CO2Ra o CONRaRb;

Ra representa hidrógeno o alquilo de C1-4; 20 Rb representa hidrógeno o alquilo de C1-4;

R1 representa hidrógeno o alquilo de C1-4; v es 1, 2, 3 ó 4; w es 1, 2, 3 ó 4; y y es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6.

2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que A, A1 y A2 son cada uno el resto de un fragmento Fab'.

3. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (III) o (IV) :

en las que Z es el resto de una molécula efectora; R2 se selecciona de:

y cada una de las otras variables es como se define en la reivindicación 1; que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula Z-Z1, en la que Z1 se selecciona de:

en la que R10 es como se define en la reivindicación 1; con un compuesto de fórmula (I) o (II) como se define en la reivindicación 1.

4. El procedimiento según la reivindicación 3, en el que la molécula efectora, de la cual Z es el resto, es polietilenglicol.

Figura 1 continuación