Anticuerpos que se unen a PAR-2.

Una proteína ligante de antígeno aislada, que es un anticuerpo monoclonal, que se une al receptor 2 activado por proteinasas

(PAR-2) y produce antagonismo de la activación proteolítica del mismo, en donde la proteína ligante de antígeno aislada se une al PAR-2 de longitud completa que se expone en la ID. SEC. nº 2 y se une en menor grado al PAR-2 que se expone en la ID. SEC. nº 2 cuando es escindido entre R36 y S37

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2007/003796.

Solicitante: AMGEN INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: ONE AMGEN CENTER DRIVE THOUSAND OAKS, CA 91320-1799 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: HU, SHAW-FEN, SYLVIA, VIRCA,GEORGE DUKE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/395 (Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P29/00 (Agentes analgésicos, antipiréticos o antiinflamatorios que no actúan sobre el sistema nervioso central, p. ej. agentes antirreumáticos; Antiinflamatorios no esteroideos (AINEs))

PDF original: ES-2476892_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos que se unen a PAR-2

Campo de la invención Esta solicitud proporciona composiciones y métodos relativos a anticuerpos anti-PAR-2.

Antecedentes de la invención La familia de receptores activados por proteinasas (PAR; del inglés, proteinase-activated receptors) es una parte de la superfamilia de receptores acoplados a proteínas G, de siete dominios transmembranales. Actualmente hay cuatro PARs conocidos, de los cuales tres (PARs-1, -3 y -4) son activados por trombina; un cuarto (PAR-2) es activado por tripsina o por triptasa de mastocito, pero no por trombina. Los PARs están ampliamente distribuidos por

una diversidad de tejidos y participan en diversos fenómenos fisiológicos o patofisiológicos tales como agregación plaquetaria, inflamación y funciones cardiovasculares, digestivas o respiratorias.

Los PARs difieren de otros receptores en que la activación es iniciada por escisión proteolítica del extremo N del PAR, que forma luego un ligando atado que interacciona con la región extracelular (bucle 2) del mismo polipéptido receptor. La escisión de PAR-2 se produce entre los restos R y S del dominio de escisión por proteasas, SKGRSLIG

(aminoácidos 33 a 40 de la ID. SEC. nº 2) , que está conservado entre los PAR-2 humano, murino y de rata. Se ha mostrado que péptidos que remedan el ligando atado presentan efectos agonistas sobre PAR-2 [Saifeddine et al., Br. J. Pharmacol. 118 (3) : 521-30 (1996) ; McGuire et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 309 (3) : 1124-31 (2004) ].

El PAR-2 activa las vías de transducción de señales comunes mediadas por receptores acoplados a proteínas G, la producción de inositol 1, 4, 5-trifosfato y la movilización de Ca (2+) , así como múltiples vías de cinasas, incluyendo 20 ERK, p38MAPK, JNK e IKK. Está presente en células epiteliales y endoteliales, miocitos, fibroblastos, células inmunes, neuronas y células gliales, en el riñón, el páncreas, el estómago, el intestino, las vías aéreas, la piel, la vejiga y el cerebro. La proteasa que activa PAR-2 está presente durante la inflamación, y PAR-2 es suprarregulado por factores inflamatorios tales como el factor alfa de necrosis tumoral, la interleucina 1 alfa y el lipopolisacárido. Además, estudios en que se han usado ratones deficientes en PAR-2 o que lo sobreexpresan, confirman una función de este receptor en la inflamación [Schmidlin et al., J. Immunol. 169, 5315-5321 (2002) ; Ferrell et al., J. Clin. Invest. 111, 35-41 (2003) ]. En consecuencia, en la técnica existe la necesidad de desarrollar antagonistas de la activación de PAR-2, que sean útiles en el tratamiento o la mejoría de estados inflamatorios.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 proporciona una transferencia Western en que se compara la unión de varios anticuerpos PAR-2 a PAR30 2 de longitud completa frente a PAR-2 cortado/Fc.

La Figura 2 demuestra esa capacidad de un anticuerpo PAR-2 para producir antagonismo de la activación de PAR-2 en un ensayo FLIPR, usando diversas células que expresan PAR-2.

La Figura 3 presenta los resultados de una transferencia Western para un anticuerpo PAR-2 antagónico así como para un anticuerpo que no produce antagonismo de PAR-2.

La Figura 4 compara esa capacidad de varios anticuerpos PAR-2 para producir antagonismo de la activación de PAR-2 en un ensayo FLIPR.

Sumario de la invención En un aspecto, la presente invención proporciona una proteína ligante de antígeno aislada, como es definida por las reivindicaciones, que se une al receptor 2 activado por proteinasa (PAR-2) . La proteína ligante de antígeno aislada,

cuando se une a un PAR-2 humano, inhibe la escisión proteolítica y la subsiguiente señalización a través de dicho PAR-2 humano. La proteína ligante de antígeno aislada se une a PAR-2 de longitud completa y se une en menor grado a PAR-2 escindido.

En otro aspecto de la invención, la proteína ligante de antígeno aislada se une específicamente al PAR-2 de un primate no humano, un macaco cangrejero, un chimpancé, un mamífero no primate, un roedor, un ratón, una rata,

un hámster, un cobayo, un gato o un perro. En otra realización, la proteína ligante de antígeno aislada comprende: un anticuerpo humanizado, un anticuerpo quimérico, un fragmento de anticuerpo ligante de antígeno, un fragmento Fab, o un fragmento F (ab') 2.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una célula aislada que secreta una proteína ligante de antígeno que se une a PAR-2. En otra realización, la célula es un hibridoma. En otra realización, la presente invención 50 proporciona un método para preparar una proteína ligante de antígeno que se une a PAR-2 humano, que comprende incubar dicha célula aislada bajo unas condiciones que permiten que exprese dicha proteína ligante de antígeno.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende la proteína ligante de antígeno. En una realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para uso en el tratamiento de un estado de un sujeto, que comprende administrar a dicho sujeto dicha composición farmacéutica, en donde dicho estado es tratable por reducción de la actividad de PAR-2 en dicho sujeto. En otra realización, dicho sujeto es un ser humano. En otra realización, dicho estado es un estado inflamatorio de la piel, las articulaciones, el sistema gastrointestinal y/o las vías aéreas. El método puede comprender además administrar a dicho sujeto un segundo tratamiento. Dicho segundo tratamiento se administra a dicho sujeto antes de que, y/o simultáneamente con, y/o después de que, se administre dicha composición farmacéutica a dicho sujeto. Dicho segundo tratamiento puede comprender un agente antiinflamatorio. Dicha segunda composición farmacéutica comprende un agente seleccionado del grupo que consiste en fármacos antiinflamatorios no esteroideos, esteroides, y agentes inmunomoduladores. Dicho método puede comprender administrar a dicho sujeto un tercer tratamiento.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para disminuir la actividad de PAR-2 en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar a dicho sujeto dicha composición farmacéutica.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para disminuir la señalización de PAR-2 en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar a dicho sujeto dicha composición farmacéutica.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para inhibir la activación proteolítica de PAR-2 en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar a dicho sujeto dicha composición farmacéutica.

Descripción detallada de la invención La presente descripción proporciona composiciones, kits y métodos relativos a moléculas que se unen al receptor 2 activado por proteinasa ("PAR-2") , incluyendo moléculas que presentan agonismo o antagonismo sobre PAR-2, tales como anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y derivados de anticuerpo anti-PAR-2, tales como, por ejemplo, anticuerpos, fragmentos de anticuerpo o derivados de anticuerpo anti-PAR-2 antagónicos. También se proporcionan ácidos nucleicos, y derivados y fragmentos de los mismos, que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica todo, o una porción de, un polipéptido que se une a PAR-2, tal como, por ejemplo, un ácido nucleico que codifica todo, o parte de, un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-PAR-2, plásmidos y vectores que comprenden dichos ácidos nucleicos, y células o líneas celulares que comprenden dichos ácidos nucleicos y/o vectores y plásmidos. Los métodos proporcionados incluyen, por ejemplo, métodos para preparar, identificar o aislar moléculas que se unen a PAR-2,... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una proteína ligante de antígeno aislada, que es un anticuerpo monoclonal, que se une al receptor 2 activado por proteinasas (PAR-2) y produce antagonismo de la activación proteolítica del mismo, en donde la proteína ligante de antígeno aislada se une al PAR-2 de longitud completa que se expone en la ID. SEC. nº 2 y se une en menor grado al PAR-2 que se expone en la ID. SEC. nº 2 cuando es escindido entre R36 y S37.

2. La proteína ligante de antígeno aislada de la Reivindicación 1, que se une específicamente al PAR-2 de un primate no humano, un macaco cangrejero, un chimpancé, un mamífero no primate, un roedor, un ratón, una rata, un hámster, un cobayo, un gato o un perro.

3. La proteína ligante de antígeno aislada de la Reivindicación 1, en donde dicha proteína ligante de antígeno 10 comprende:

a. un anticuerpo humanizado;

b. un anticuerpo quimérico;

c. un fragmento de anticuerpo, ligante de antígeno;

d. un fragmento Fab; o 15 e. un fragmento F (ab') 2.

4. Una célula aislada que secreta una proteína ligante de antígeno de la Reivindicación 1, en donde la célula es un hibridoma.

5. Un método para preparar una proteína ligante de antígeno que se une a PAR-2, que comprende incubar la célula aislada de la Reivindicación 4 bajo unas condiciones que la permiten expresar la proteína ligante de antígeno.

6. Una composición farmacéutica que comprende la proteína ligante de antígeno de cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 3.

7. La composición farmacéutica de la Reivindicación 6 para uso en el tratamiento de un estado de un sujeto, en donde el estado es tratable por reducción de la actividad de PAR-2 en el sujeto.

8. La composición de la Reivindicación 7, en donde el sujeto es un ser humano.

9. La composición de la Reivindicación 8, en donde dicho estado es seleccionado del grupo que consiste en estados inflamatorios de la piel, las articulaciones, el sistema gastrointestinal y/o las vías aéreas.

10. La composición de la Reivindicación 8, en donde la reducción de la actividad de PAR-2 en el sujeto es por disminución de la señalización de PAR-2 en el sujeto.

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Figura 4