Anticuerpos monoclonales contra la proteína beta amiloide y usos de los mismos.

Un anticuerpo monoclonal que comprende una cadena pesada y ligera variable,

donde:

las tres CDR de dicha cadena pesada variable son las SEC ID Nº 5, SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 7, y las tres CDR de dicha cadena ligera variable son las SEC ID Nº 8, SEC ID Nº 9 y SEC ID Nº 10.

donde el anticuerpo se une con mayor especificidad a un globulómero proteico beta amiloide que a un monómero proteico beta amiloide.

Anticuerpos monoclonales contra la proteína beta amiloide y usos de los mismos

Antecedentes de la invención

Campo de la técnica La invención sujeto se refiere a anticuerpos monoclonales (p. ej., 8F5) que se pueden usar, por ejemplo, en la prevención, tratamiento y diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurodegenerativos.

Información básica La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo que se caracteriza por una pérdida progresiva de capacidades cognitivas y por características neuropatológicas que comprenden depósitos de amiloide, marañas neurofibrilares y pérdida neuronal en varias regiones del cerebro, véase Hardy y Selkoe (Science 297, 353 (2002) ; Mattson (Nature 431, 7004 (2004) . Los principales constituyentes de depósitos de beta-péptidos amiloides (Aβ) , siendo el más importante el tipo de 42 aminoácidos de longitud (Aβ1 -42) .

En concreto, la proteína amiloide β (1 -42) es un polipéptido que tiene 42 aminoácidos que deriva de la proteína precursora de amiloides (APP) mediante procesamiento proteolítico. Esto también incluye, además de variantes humanas, isoformas de la proteína amiloide β (1 -42) presente en organismos distintos a los seres humanos, en particular otros mamíferos, especialmente ratas. Esta proteína, que tiende a polimerizar en un ambiente acuoso, puede estar presente en formas moleculares muy diferentes.

Se ha demostrado que una sencilla correlación dl depósito de proteínas insolubles con la aparición o progresión de los trastornos de demencia, tales como, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer no es convincente (Terr y et al., Ann. Neurol. 30. 572 -580 (1991) ; Dickson et al., Neurobiol. Aging 16, 285 -298 (1995) ) . Por el contrario, la pérdida de sinapsis y de percepción cognitiva parece correlacionarse mejor con las formas solubles de Aβ (1 -42) (Lue et al., Am. J. Pathol. 155, 853 -862 (1999) ; McLean et al., Ann. Neurol. 46, 860 -866 (1999) ) .

Aunque en el pasado se han producido anticuerpos policlonales y monoclonales contra Aβ (1 -42) , no se ha demostrado que ninguno produzca el efecto terapéutico deseado sin producir también efectos secundarios graves en animales y/o seres humanos. Por ejemplo, resultados de inmunizacíón pasiva de estudios preclínicos en ratones 35 APP23 muy viejos que recibieron un anticuerpo anti-Aβ (1 -42) dirigido a N-terminal una vez a la semana durante 5 meses indican efectos secundarios terapéuticamente relevantes. En concreto, estos ratones mostraron un incremento del número y la gravedad de microhemorragias en comparación con los ratones tratados con solución salina (Pfeifer et al., Science 2002 298:1379) . Recientemente también se ha descrito un incremento similar de las hemorragias en ratones Tg2576 y PDAPP muy viejos (>24 meses) (Wilcock et al., J Neuroscience 2003, 23: 3745 51; Racke et al., J Neuroscience 2005, 25:629 -636) . En ambas cepas, la inyección de anti-Aβ (1 -42) tuvo como resultado un incremento significativo de microhemorragias. Por tanto, existe una tremenda necesidad terapéutica de desarrollo de productos biológicos que prevengan o ralenticen la progresión de la enfermedad sin inducir efectos negativos y potencialmente mortales sobre el cuerpo humano. Dicha necesidad es particularmente evidente a la luz del incremento de la longevidad de la población general y, con este incremento, una elevación asociada en el

número de pacientes a los que anualmente se les ha diagnosticado enfermedad de Alzheimer. Además, dichos anticuerpos permitirán un diagnóstico correcto de la enfermedad de Alzheimer en un paciente que está experimentando síntomas de la misma, un diagnóstico que en la actualidad solo se puede confirmar tras la autopsia. Adicionalmente, los anticuerpos permitirán la elucidación de las propiedades biológicas de las proteínas y otros factores biológicos responsables de esta debilitante enfermedad.

Los documentos WO 2004/067561 y WO 2004/067561 describen oligómeros de Aβ (1 -42) estables (globulómeros Aβ (1 -42) ) y anticuerpos dirigidos contra los globulómeros (véase también Barghorn et al., 2005, J Neurochem, 95, 834 -847) .

Sumario de la invención La presente invención se refiere a la materia sujeto definida en las reivindicaciones.

Por tanto, la presente invención incluye un anticuerpo aislado que se une con mayor especificidad a un globulómero proteico beta amiloide (Aβ) que a un monómero proteico beta amiloide. Por tanto, se observa una unión preferencial. El anticuerpo puede ser, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal tal como 8F5. La proporción de la especificidad de unión por el globulómero frente al monómero es de al menos 1, 4. En concreto, la proporción es de al menos aproximadamente de 1, 4 a al menos aproximadamente 16, 9. (Una proporción de 1, 0 -17, 5 incluidos los extremos) también se considera que entra dentro del alcance de la presente invención, así como los porcentajes decimales de 65 la misma. Por ejemplo, , 1, 1, 1, 2, 1, 3, ..., 2, 0, 2, 1, 2, 2..., 17, 1, 17, 2, 17, 3, 17, 4, 17, 5, así como los números enteros completos de entremedias y los porcentajes de los mismos se considera que entran dentro del alcance de la presente invención. El monómero proteico beta amiloide puede ser, por ejemplo, monómero Aβ (1 -42) o monómero Aβ (1 –40) .

Además, la presente invención también abarca un anticuerpo monoclonal (denominado en el presente documento 5 "8F5") producido por un hibridoma con el número designado en la Colección Americana de Cultivos Tipo PTA-7238, así como el hibridoma que produce este anticuerpo monoclonal (es decir, 8F5 ) .

Adicionalmente, la presente invención incluye un anticuerpo monoclonal que comprende una cadena pesada variable codificada por la SEC ID Nº 1. Este anticuerpo puede ser murino, humano o humanizado.

Además, la presente invención incluye un anticuerpo monoclonal que comprende una cadena ligera variable codificada por la SEC ID Nº 2. Este anticuerpo también puede ser murino, humano o humanizado. El anticuerpo puede comprender además una cadena pesada ligera variable codificada por la SEC ID Nº 1 y puede ser humano o humanizado.

Además, la presente invención incluye un anticuerpo monoclonal que comprende la SEC ID Nº 3. El anticuerpo puede ser murino, humano o humanizado.

Adicionalmente, la presente invención abarca un anticuerpo monoclonal que comprende la SEC ID Nº 4. Este anticuerpo puede ser murino, humano o humanizado. Este anticuerpo puede comprender además la SEC ID Nº 3 y puede ser murino, humano o humanizado.

La presente invención también incluye un anticuerpo aislado que se une con mayor especificidad a un globulómero proteico beta amiloide que a una fibrilla proteica beta amiloide. Este anticuerpo puede ser, por ejemplo, monoclonal y

puede ser el anticuerpo monoclonal producido por el hibridoma que tiene como número designado por la Colección Americana de Cultivos Tipo PTA-7243. Los hibridomas que producen estos anticuerpos monoclonales también entran dentro del alcance de la presente invención.

Además, la presente invención incluye un anticuerpo en el que al menos una de las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la cadena pesad variable se selecciona del grupo que consiste en las SEC ID Nº 5, SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 7.

Además, la presente invención también incluye un anticuerpo en el que al menos una de las CDR de la cadena ligera variable se selecciona del grupo que consiste en SEC ID Nº8, SEC ID Nº9 y SEC ID Nº10. Este anticuerpo puede comprender además al menos una CDR de la cadena pesada variable seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº5, SEC ID Nº6 y SEC ID Nº7.

Adicionalmente, la presente invención se refiere a los anticuerpos de la invención para usar en un procedimiento de tratar o prevenir la enfermedad de Alzheimer en un paciente que necesite el tratamiento o la prevención. Este procedimiento comprende administrar al paciente uno cualquiera o más de los anticuerpos aislados descritos anteriormente en una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento o prevención. El anticuerpo aislado se puede administrar, por ejemplo, mediante una vía seleccionada del grupo que consiste en administración intramuscular, administración intravenosa y administración subcutánea.

La presente invención también incluye un procedimiento de diagnosticar la enfermedad de Alzheimer en un paciente que se sospecha que tiene esta enfermedad. Este procedimiento comprende las etapas de: 1) poner en contacto una muestra biológica de dicho paciente con al menos uno de los anticuerpos descritos anteriormente durante un tiempo y en condiciones... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal que comprende una cadena pesada y ligera variable, donde:

las tres CDR de dicha cadena pesada variable son las SEC ID Nº 5, SEC ID Nº 6 y SEC ID Nº 7, y las tres CDR de dicha cadena ligera variable son las SEC ID Nº 8, SEC ID Nº 9 y SEC ID Nº 10. donde el anticuerpo se une con mayor especificidad a un globulómero proteico beta amiloide que a un monómero proteico beta amiloide.

2. El anticuerpo monoclonal de la reivindicación 1, que es un anticuerpo humanizado.

3. El anticuerpo monoclonal de la reivindicación 1, donde la cadena pesada variable comprende la SEC ID Nº 3 y la cadena ligera variable comprende la SEC ID Nº 4.

4. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 2, donde todas o sustancialmente todas las regiones de estructura corresponden a las de una secuencia consenso de la inmunoglobulina humana.

5. Un hibridoma que tiene el número de designación en la Colección Americana de Cultivos Tipo PTA-7238.

6. Un anticuerpo monoclonal (8F5) producido por dicho hibridoma de la reivindicación 5.

7. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 para usar en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Alzheimer.

8. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6.

9. Una vacuna que comprende un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 y un adyuvante farmacéuticamente aceptable.

10. El uso de un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir la enfermedad de Alzheimer.

11. Un procedimiento de diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un paciente que se sospecha que tiene esta enfermedad, que comprende las etapas de:

a) poner en contacto una muestra biológica de dicho paciente con un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 durante un tiempo en condiciones suficientes para la formación de complejos antígeno/anticuerpo; y b) detectar la presencia de dichos complejos antígeno/anticuerpo en dicha muestra, indicando la presencia de dichos complejos un diagnóstico de enfermedad de Alzheimer en dicho paciente.

12. Un procedimiento de diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un paciente que se sospecha que tiene esta enfermedad, que comprende las etapas de:

a) poner en contacto una muestra biológica de dicho paciente con un antígeno que es un globulómero proteico beta amiloide (Aß) durante un tiempo en condiciones suficientes para la formación de complejos antígeno/anticuerpo; b) añadir un conjugado a los complejos antígeno/anticuerpo resultantes durante un tiempo en condiciones suficientes para permitir que dicho conjugado se una al anticuerpo unido, donde dicho conjugado comprende un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, o 6, c) detectar la presencia de dichos complejos antígeno/anticuerpo en dicha muestra, indicando la presencia de dichos complejos un diagnóstico de enfermedad de Alzheimer en dicho paciente.

13. Un procedimiento de diagnóstico de la enfermedad de Alzheimer en un paciente que se sospecha que tiene esta 55 enfermedad, que comprende las etapas de:

a) poner en contacto una muestra biológica de dicho paciente con un anti-anticuerpo, donde dicho anti-anticuerpo es específico de dicho anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 durante un tiempo en condiciones suficientes para permitir la formación de complejos antígeno/anticuerpo, conteniendo dichos complejos anticuerpo presente en dicha muestra biológica; b) añadir un conjugado a los complejos antígeno/anticuerpo resultantes durante un tiempo y en condiciones suficientes para permitir que dicho conjugado se una al anticuerpo unido, donde dicho conjugado comprende un antígeno, que se une a un compuesto generador de señal capaz de generar una señal detectable; y c) detectar una señal generada por dicho compuesto generador de señal, indicando dicha señal un 65 diagnóstico de enfermedad de Alzheimer en dicho paciente.

14. Un procedimiento de identificación de compuestos adecuados para inmunización activa de un paciente que se ha predicho que va a desarrollar la enfermedad de Alzheimer, que comprende las etapas de:

a) exponer uno o más compuestos de interés a un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6 durante un tiempo en condiciones suficientes para que dichos uno o más compuestos se unan a dicho anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6; e b) identificar dichos compuestos que se unen a dicho anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4

o 6, dichos compuestos identificados para uso en inmunización activa en un paciente predicho para desarrollar la enfermedad de Alzheimer. 10

15. Un kit que comprende: a) un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6, y b) un conjugado que comprende un segundo anticuerpo específico del globulómero de la proteína Aß unido a un compuesto generador de señal capaz de generar una señal detectable, donde dicho segundo anticuerpo de dicho conjugado es diferente de dicho anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o 6.

16. Un kit que comprende: a) un anti-anticuerpo frente a un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4

o 6 y b) un conjugado que comprende un globulómero de la proteína Aß unido a un compuesto generador de señal capaz de generar una señal detectable.