ANTICUERPOS HUMANIZADOS ESPECÍFICOS PARA TANTO CD45RB COMO CD45RO.

Anticuerpos humanizados específicos para tanto CD45RB como CD45RO Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos humanizados contra isoformas del antígeno CD45, tales como por ejemplo anticuerpos monoclonales (AcM). Antecedentes de la invención Un enfoque en el tratamiento de una variedad de enfermedades es lograr la eliminación o la inactivación de leucocitos patógenos y la posibilidad de inducción de tolerancia para inactivar respuestas inmunitarias patológicas. Se cree que el rechazo de trasplantes de órganos, células y tejidos y las diversas enfermedades autoinmunitarias son principalmente el resultado de la respuesta inmunitaria mediada por células T desencadenada por células T auxiliares que pueden reconocer antígenos específicos que se capturan, procesan y presentan a las células T auxiliares por células presentadoras de antígenos (APC) tales como macrófagos y células dendríticas, en forma de un complejo de antígeno-CMH, es decir, las células T auxiliares, cuando reconocen antígenos específicos, se estimulan a producir citocinas tales como IL-2 y a expresar o regular por incremento algunos receptores de citocinas y otras moléculas de activación y a proliferar. Algunas de estas células T auxiliares pueden actuar directa o indirectamente, es decir, ayudando a células B o células T citotóxicas efectoras a destruir células o tejidos que expresan el antígeno seleccionado. Tras la terminación de la respuesta inmunitaria, algunas de las células seleccionadas clonalmente maduras permanecen como células T citotóxicas de memoria y auxiliares de memoria, que circulan por el cuerpo y reconocen rápidamente el antígeno si aparece de nuevo. Si el antígeno que desencadena esta respuesta es un antígeno medioambiental inocuo, el resultado es alergia, si el antígeno no es un antígeno foráneo, si no un antígeno propio, puede dar como resultado enfermedad autoinmunitaria; si el antígeno es un antígeno de un órgano transplantado, el resultado puede ser rechazo del injerto. El sistema inmunitario se ha desarrollado para reconocer lo propio de lo no propio. Esta propiedad permite a un organismo sobrevivir en un entorno expuesto a la exposición diaria de patógenos. Esta especificidad para lo no propio y tolerancia hacia lo propio surge durante el desarrollo del repertorio de células T en el timo a través de procesos de selección positiva y negativa, que también comprenden el reconocimiento y la eliminación de células T autorreactivas. Este tipo de tolerancia se denomina tolerancia central. Sin embargo, algunas de estas células autorreactivas escapan de este mecanismo selectivo y representan un peligro potencial para el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias. Para controlar las células T autorreactivas que han escapado a la periferia, el sistema inmunitario tiene mecanismos reguladores periféricos que proporcionan protección contra la autoinmunidad. Estos mecanismos son una base para la tolerancia periférica. Los antígenos de la superficie celular reconocidos por AcM específicos se designan generalmente por un número de CD (grupo de diferenciación) asignado por talleres de tipificación de leucocitos internacionales sucesivos y el término CD45 aplicado en el presente documento se refiere al antígeno común de leucocitos de la superficie celular CD45; y un AcM frente a ese antígeno se designa en el presente documento como anti-CD45. El antígeno común de leucocitos (LCA) o CD45 es el componente principal de la globulina anti-linfocitos (ALG). CD45 pertenece a la familia de tirosina fosfatasas transmembrana y es un regulador tanto positivo como negativo de la activación celular, dependiendo de la interacción del receptor. La actividad fosfatasa de CD45 parece requerirse para la activación de cinasas de la familia Src asociadas con el receptor de antígenos de linfocitos B y T (Trowbridge IS et al, Annu Rev Immunol. 1994; 12:85-116). Por tanto, en la activación de células T, CD45 es esencial para la señal 1 y células deficientes en CD45 tienen profundos efectos en acontecimientos de activación mediados por TCR. El antígeno CD45 existe en diferentes isoformas que comprenden una familia de glicoproteínas transmembrana. Isoformas distintas de CD45 difieren en su estructura de dominio extracelular que surgen del corte y empalme alternativo de 3 exones variables que codifican para parte de la región extracelular de CD45 (Streuli MF. et al, J. Exp. Med. 1987; 166:1548-1566). Las diversas isoformas de CD45 tienen diferentes dominios extracelulares, pero tienen los mismos segmentos citoplasmáticos y transmembrana teniendo dos dominios fosfatasa homólogos, altamente conservados de aproximadamente 300 residuos. Diferentes combinaciones de isoformas se expresan diferencialmente en subpoblaciones de linfocitos T y B (Thomas ML. et al, Immunol. Today 1988; 9:320-325). Algunos anticuerpos monoclonales reconocen un epítopo común a todas las diferentes isoformas, mientras que otros AcM tienen una especificidad restringida (CD45R), dependiente de cuales de los exones cortados y empalmados de manera alternativa (A, B o C) reconocen. Por ejemplo, anticuerpos monoclonales que reconocen el producto del exón A se designan por consiguiente CD45RA, los que reconocen las diversas isoformas que contienen el exón B se han designado CD45RB (Beverley PCL et al, Immunol. Sup. 1988; I:3-5). Anticuerpos tales como UCHL1 se unen selectivamente a la isoforma de 180 kDa CD45RO (sin ninguno de los exones variables A, B o C) 2   que parece que está restringida a un subconjunto de células T activadas, células de memoria y timocitos corticales y no se detecta en células B (Terry LA et al, Immunol. 1988; 64: 331-336). Aversa G.G et al (1989), Transplantation proceedings, vol. 21, n.º 1; págs. 349-350, describen el uso de tres anticuerpos monoclonales para identificar antígenos de activación en linfocitos y visualizar células T activadas en aloinjertos renales rechazados. Se da a conocer un anticuerpo denominado A6. En el documento WO98/11918 se dan a conocer anticuerpos y usos de los mismos, frente a CDR45R. Los usos dados a conocer incluyen la reversión del rechazo de trasplantes o el tratamiento de enfermedad autoinmunitaria. Descripción de las figuras La figura 1 muestra que la inhibición de la MLR primaria por el AcM candidato es dependiente de la dosis en el intervalo de 0,001 y 10 ug/ml. Concentración es la concentración del AcM candidato. La figura 2 muestra el mapa de plásmido del vector de expresión HCMV-G1 HuAb-VHQ que comprende la cadena pesada que tiene la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 12 (3921-4274) en la secuencia de nucleótidos del vector de expresión completo SEQ ID NO: 15. La figura 3 muestra el mapa de plásmido del vector de expresión HCMV-G1 HuAb-VHE que comprende la cadena pesada que tiene la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO:11 (3921-4274) en la secuencia de nucleótidos del vector de expresión completo SEQ ID NO: 16. La figura 4 muestra el mapa de plásmido del vector de expresión HCMV-KHuAb-humV1 que comprende la cadena ligera que tiene la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 14 (3964-4284) en la secuencia de nucleótidos del vector de expresión completo SEQ ID NO: 17. La figura 5 muestra el mapa de plásmido del vector de expresión HCMV-KHuAb-humV2 que comprende la cadena ligera que tiene la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 13 (3926-4246) en la secuencia de nucleótidos del vector de expresión completo SEQ ID NO: 18. Descripción de la invención Se ha encontrado ahora un anticuerpo humanizado que comprende una secuencia polipeptídica que se une a CD45RO y CD45RB, también designado a continuación en el presente documento como anticuerpo humanizado frente a CD45RO/RB. Este anticuerpo humanizado según la invención puede inducir inmunosupresión, inhibir respuestas de células T primarias e inducir tolerancia de células T. Además, el anticuerpo humanizado de la invención inhibe respuestas de linfocitos mixtos primarias (MLR). Células derivadas de cultivos tratados con el anticuerpo humanizado frente a CD45RO/RB también tienen de manera preferida respuestas proliferativas alteradas en MLR secundaria incluso en ausencia de anticuerpo humanizado frente a CD45RO/RB en la MLR secundaria. Tales respuestas proliferativas alteradas en MLR secundaria son una indicación de la capacidad del anticuerpo humanizado de la invención para inducir tolerancia. Adicionalmente, la administración in vivo de molécula de unión a CD45RO/RB a ratones con inmunodeficiencia combinada grave (SCID) que se someten a xeno GVHD tras inyección con PBMC humanas puede prolongar la supervivencia de los ratones, en comparación con ratones tratados de control, aún cuando todavía pueden detectarse células T humanas circulantes en ratones tratados con molécula de unión a CD45RO/RB. El anticuerpo humanizado de la invención tiene una... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo humanizado anti-CD45RO/RB que comprende una región variable de cadena pesada de SEQ ID No:9 o de SEQ ID No:10 y una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:7 o de SEQ ID No:8. 2. Anticuerpo humanizado anti-CD45RO/RB según la reivindicación 1 que comprende: - una región variable de cadena pesada de SEQ ID No:9 y una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:7; - una región variable de cadena pesada de SEQ ID No:9 y una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:8; - una región variable de cadena pesada de SEQ ID No: 10 y una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:7, o - una región variable de cadena pesada de SEQ ID No: 10 y una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:8. 3. Polinucleótidos aislados que codifican para un anticuerpo humanizado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2. 4. Polinucleótidos aislados que codifican para una región variable de cadena ligera de SEQ ID No:7 o SEQ ID No:8 y una región variable de cadena pesada de SEQ ID No:9 o SEQ ID No:10. 5. Polinucleótido según la reivindicación 4, que comprende SEQ ID No:11 o SEQ ID No: 12 y SEQ ID No: 13 o SEQ ID No:14. 6. Vector de expresión que comprende polinucleótidos según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5. 7. Sistema de expresión que comprende un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, pudiendo dicho sistema de expresión producir un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, cuando dicho sistema de expresión o parte del mismo está presente en una célula huésped compatible. 8. Célula huésped aislada que comprende un sistema de expresión según la reivindicación 7. 9. Uso del anticuerpo humanizado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 como producto farmacéutico. 10. Uso del anticuerpo humanizado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la preparación de un medicamento que va a usarse en el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades autoinmunitarias, rechazo de trasplantes, psoriasis, enfermedad inflamatoria del intestino y alergias. 11. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humanizado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 en asociación con al menos un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.   46   47   48   49