Anticuerpo que se une a la IL-1ß o fragmento del mismo que se une a la IL-1ß,

en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a la IL-1ß con una constante de disociaci ónde menos de 1pM, siendo dicho anticuerpo o fragmento del mismo seleccionado de entre los miembros del grupo que consta de:

* una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 9 o de la ID SEC Nº: 9 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 8 o de la ID SEC Nº: 8 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

* una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 10 o de la ID SEC Nº: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 14 o de la ID SEC Nº: 14 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

* una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11 o de la ID SEC Nº: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 15 o de la ID SEC Nº: 15 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

* una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 10 o de la ID SEC Nº: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 25 o de la ID SEC Nº: 25 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

* una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 11 o de la ID SEC Nº: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la ID SEC Nº: 26 o de la ID SEC Nº: 26 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos.

Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a la IL-l

Ámbito de la invención

La invención se refiere a los anticuerpos que se unen a la IL-1º, incluyendo a fragmentos de los mismos, y a los ácidos nucleicos que codifican tales anticuerpos, asi como a vectores, celulas y composiciones que comprenden los anticuerpos o acidos nucleicos, y a los usos de los mismos.

Antecedentes de la invención

La familia de las citoquinas de las interleuquinas-1 (IL-1) ha venido estando implicada en estados de enfermedad tales como la artritis reumatoidea (RA) , la osteoartritis, la enfermedad de Crohn la colitis ulcerosa (UC) , el shock septico, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COP0) , el asma, la enfermedad de injerto versus huesped, la aterosclerosis, la leucemia de celulas T del adulto, el mieloma multiple, la esclerosis multiple, la crisis fulminante y la enfermedad de Alzheimer. Los miembros de la familia de las 1L-1 incluyen a la IL-1a, la 1L-1º y la 1L-1Ra. A pesar de que estan emparentadas por su capacidad para fijarse a los receptores de 1L-1 (IL-1R1 e IL-1R2) , cada una de estas citoquinas es expresada por un gen distinto y tiene una distinta secuencia de aminoacidos primarios. Ademas pueden distinguirse unas de otras las actividades fisiologicas de estas citoquinas.

Se han investigado compuestos que trastornan la señalización de los receptores de IL-1 como agentes terapeuticos para tratar las enfermedades mediadas por 1L-1. Estos compuestos incluyen a la 1L-1Ra recombinante (Amgen 1nc., Thousand Oaks, CA) y el peptido "trampa" de receptores de 1L-1 (Regeneron 1nc., Tarr y town, NY) . Tambien han sido investigados anticuerpos monoclonales derivados de animales que se unen a las citoquinas 1L-1. Sin embargo, su valor clinico puede ser limitado debido a su inmunogenicidad. Por ejemplo, ha llegado a ser sabido que sujetos humanos a los que se les administran anticuerpos monoclonales de raton producen anticuerpos anti-ratón humanos (HAMA) . Se ha descrito que los HAMA reducen la eficacia de la terapia con anticuerpos monoclonales y producen reacciones adversas entre las que se incluyen las lesiones renales. Otros anticuerpos para 1L-1º pueden quedar limitados por su afinidad de fijacion y/o su potencia. En consecuencia, se necesitan compuestos adicionales que trastornen la señalización de los receptores de IL-1. La invencion aporta tales compuestos, asi como metodos para preparar y usar tales compuestos.

Breve sumario

La invención aporta un anticuerpo que se une a la IL-1º o un fragmento del mismo que se une a la 1L-1º, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a la IL-1º con una constante de disociacion de menos de 1pM, siendo dicho anticuerpo o fragmento del mismo seleccionado de entre los miembros del grupo que consta de: una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 9 o de la 10

SEC N°: 9 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 8 o de la 10 SEC N°: 8 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 10 o de la 10 SEC N°: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 14 o de la 10 SEC N°: 14 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 11 o de la 10 SEC N°: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 15 o de la 10 SEC N°: 15 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 10 o de la 10 SEC N°: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 25 o de la 10 SEC N°: 25 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 11 o de la 10 SEC N°: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 26 o de la 10 SEC N°: 26 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos.

Tambien se aporta aqui un acido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento del anticuerpo, asi como un vector que comprende el acido nucleico, una celula que comprende el acido nucleico o el vector, y una composición que comprende el anticuerpo, el acido nucleico o el vector.

En el contexto se describe un metodo que es para tratar o prevenir una enfermedad en un mamifero y comprende el paso de administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, acido nucleico o

vector de la invencion a un mamifero que tenga necesidad de ello, con lo cual se trata o previene una enfermedad en el mamifero.

En el contexto de la presente invencion se describe un metodo de preparacion de un polipeptido madurado por afinidad que se une a la IL-1º, comprendiendo dicho metodo los pasos de: (a) prever un primer acido nucleico que comprende una secuencia de acido nucleico que codifica un polipeptido que se une a la 1L-1º y comprende la secuencia de aminoacidos de cualquiera de los 10 SEC NOMS.: 1-26 y un segundo acido nucleico que comprende una secuencia de acido nucleico que se diferencia de la primera secuencia de acido nucleico en al menos un nucleotido, (b) llevar a cabo una mezcla de ácidos nucleicos para asi contar con dos o mas acidos nucleicos mutados, (c) seleccionar un acido nucleico mutado que codifique un polipeptido que (1) se una a la 1L-1 con una afinidad mayor que la del polip

eptido codificado por el primer acido nucleico, (11) tenga una selectividad para la 1L-1º con preferencia sobre la 1L-1a que sea mayor que la del polipeptido codificado por el primer acido nucleico, (111) tenga una constante de disociacion de la union en equilibrio (K0) para IL-1º que sea mas baja que la del polipeptido codificado por el primer acido nucleico, o (1V) inhiba la expresión inducida por IL-1 de 1L-6 serica en un animal en mayor grado que el polipeptido codificado por el primer acido nucleico, y (d) expresar el acido nucleico mutado seleccionado, con lo cual se produce un polipeptido madurado por afinidad que se une a la IL-1º.

La invención aporta nuevos anticuerpos que se unen a la IL-1 o fragmentos de los mismos que se unen a la 1L1º, los cuales se unen a la 1L-1º humana con una constante de disociaci

on de menos de 3pM, como alternativa de aproximadamente 2pM o menos, y preferiblemente de poco mas o menos 1pM o menos. Tales anticuerpos de alta afinidad se contemplan como utiles para varios metodos para tratar o prevenir enfermedades o condiciones relacionadas con las IL-1. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la 1L-1º o los fragmentos que se unen a la IL1º pueden unirse a un epitope de 1L -1 de forma tal que el anticuerpo o fragmento unido no impida considerablemente que la IL-1º se fije al receptor tipo 1 de 1L-1. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la 1L-1 o los fragmentos que se unen a la IL-1º pueden unirse a en sustancia el mismo epitope como uno o varios de los anticuerpos indicados como ejemplos que aqui se describen, tales como el anticuerpo denominado AB7, que comprende una region variable de cadena pesada. Adicionalmente, los anticuerpos que se unen a la 1L-1º o los fragmentos que se unen a la 1L-1º pueden competir con la union de un anticuerpo que tenga la region variable de cadena liviana de la 10 SEC N°: 11 y la region variable de cadena pesada de la 10 SEC N°: 15. Adicionalmente, la presente invencion incluye a los anticuerpos que se unen a la IL-1 o los fragmentos que se unen a la 1L-1º y pueden unirse a un epitope contenido en la secuencia ESV0PKNYPKKKMEKRFVFNK1E (10 SEC N°: 36) . Los ejemplos de anticuerpos que se unen a la IL-1º incluyen al anticuerpo que aqui se ha denominado AB7.

La invencion tambien aporta anticuerpos que se unen a las 1L-1 o fragmentos de los mismos que se unen a la IL1º y tienen una constante de disociacion de menos de 3pM, y com o alternativa... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo que se une a la IL-1º o fragmento del mismo que se une a la 1L-1º, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a la IL-1º con una constante de disociaci

on de menos de 1pM, siendo dicho anticuerpo o fragmento del mismo seleccionado de entre los miembros del grupo que consta de:

una región variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 9 o de la 10 SEC N°: 9 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 8 o de la 10 SEC N°: 8 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 10 o de la 10 SEC N°: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 14 o de la 10 SEC N°: 14 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 11 o de la 10 SEC N°: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 15 o de la 10 SEC N°: 15 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 10 o de la 10 SEC N°: 10 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos y una region variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 25 o de la 10 SEC N°: 25 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos;

una region variable de cadena liviana que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 11 o de la 10 SEC N°: 11 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoácidos y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 26 o de la 10 SEC N°: 26 con una o varias sustituciones conservadoras de aminoacidos.

2. El anticuerpo o fragmento de union del mismo segun la reivindicacion 1, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un Fab, un F (ab') 2, un Fv, un fragmento de anticuerpo de cadena unica, un anticuerpo multiespecifico, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un minicuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo recombinante quelante, un tricuerpo, un bicuerpo, un intracuerpo, un nanocuerpo, un pequefo producto inmunofarmaceutico modular (SM1P) , una proteina de fusion de inmunoglobulina de dominio de union, un anticuerpo camelizado o un anticuerpo con contenido de VHH.

3. Acido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicacion 1 o 2.

4. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de un anticuerpo, en donde la region variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 8, 12, 13, 14, 15, 23, 24, 25 o 26.

5. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena liviana de un anticuerpo, en donde la region variable de cadena liviana comprende la secuencia de aminoacidos de la 10 SEC N°: 9, 10 u 11.

6. Vector que comprende la secuencia de acido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5.

7. Celula que comprende el acido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, o el vector de la reivindicacion 6.

8. Composicion que comprende (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de las reivindicaciones 1 o 2, el acido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, o el vector de la reivindicacion 6, y (b) un soporte adecuado.

9. Composicion farmaceutica que es para ser usada para tratar o prevenir una enfermedad o condicion relacionada con las IL-1 en un mamifero y comprende una cantidad eficaz de (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de las reivindicaciones 1 o 2, (b) el acido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 3-5, (c) el vector de la reivindicacion 6, o (d) la composicion de la reivindicacion 7, en donde dicha enfermedad o condición relacionada con las IL-1 es seleccionada de entre los miembros del grupo que consta de una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune y un cancer.