Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1beta.

Anticuerpo de unión a IL-1ß o fragmento del mismo de unión a IL-1ß,

en donde dicho anticuerpo o fragmento seune a IL-1ß humana con una constante de disociación menor que 1pM y en donde el anticuerpo o fragmento delmismo compite con la unión de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº:11 y laregión variable de cadena pesada de ID SEC Nº:15, en donde la región CDR1 de cadena ligera de dichoanticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia RASQDISNYLS, en donde la región CDR2 de cadena ligerade dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia YTSKLHS, en donde la región CDR3 de cadenaligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia LQGKMLPWT, en donde la región CDR1 decadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia TSGMGVG, en donde la regiónCDR2 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia HIWWDGDESYNPSLK,y en donde la región CDR3 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuenciaX1X2YDPPWFVD y en donde X1 es N y en donde X2 es R o K.

Anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen a la IL-1beta Campo de la invención [0001] La invención se refiere a anticuerpos de unión a la IL-1β, y que incluyen fragmentos de los mismos, y a ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos, así como a vectores, células y composiciones que comprenden los anticuerpos o ácidos nucleicos, y a usos de los mismos.

Antecedentes de la invención [0002] La familia interleuquinas-1 (IL-1) de las citoquinas ha venido estando implicada en estados de enfermedad tales como artritis reumatoide (RA) , osteoartritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa (UC) , shock séptico, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) , asma, enfermedad de injerto contra huésped, aterosclerosis, leucemia de células T del adulto, mieloma múltiple, esclerosis múltiple, ictus y enfermedad de Alzheimer. Los miembros de la familia de las IL-1 incluyen la IL-1α, la IL-1β y la IL-1Ra. A pesar de que están emparentadas por su capacidad para unirse a receptores de IL-1 (IL-1R1 e IL-1R2) , cada una de estas citoquinas viene expresada por un gen distinto y tiene una secuencia distinta de aminoácidos primarios. Además las actividades fisiológicas de estas citoquinas pueden diferenciarse.

Se han investigado compuestos que alteran la señalización de los receptores de IL-1, como agentes terapéuticos para tratar enfermedades mediadas por IL-1. Estos compuestos incluyen la IL-1Ra recombinante (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) y el péptido "trampa" de receptores de IL-1 (Regeneron Inc., Tarr y town, NY) . También han sido investigados anticuerpos monoclonales derivados de animales que se unen a citoquinas IL-1. Sin embargo, su valor clínico puede ser limitado debido a su inmunogenicidad. Por ejemplo, se ha tenido conocimiento que sujetos humanos a los que se les han administrado anticuerpos monoclonales de ratón producen anticuerpos anti-ratón humanos (HAMA) . Se ha descrito que los HAMA reducen la eficacia de la terapia con anticuerpos monoclonales y producen reacciones adversas entre las que se incluyen daños renales. Otros anticuerpos para IL-1β pueden quedar limitados por su afinidad de unión y/o su potencia. En consecuencia, se necesitan compuestos adicionales que alteren la señalización de los receptores de IL-1. La invención aporta dichos compuestos, así como métodos para preparar y usar dichos compuestos.

Breve sumario [0004] La invención proporciona un fragmento del mismo que se une a la IL-1β, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a IL-1β humana con una constante de disociación menor que 1pM y en donde el anticuerpo o fragmento del mismo compite con la unión de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº:11 y la región variable de cadena pesada de ID SEC Nº:15, en donde la región CDR1 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia RASQDISNYLS, en donde la región CDR2 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia YTSKLHS, en donde la región CDR3 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia LQGKMLPWT, en donde la región CDR1 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia TSGMGVG, en donde la región CDR2 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia HIWWDGDESYNPSLK, y en donde la región CDR3 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia X1X2YDPPWFVD y en donde X1 es N y en donde X2 es R o K. La presente invención proporciona también un anticuerpo que se une a la IL-1β o fragmento del mismo que se une a la IL-1β, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a IL-1β humana con una constante de disociación menor que 1pM y en donde el anticuerpo o fragmento se une al mismo epítopo de IL-1β que un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº: 11 y la región variable de cadena pesada de ID SEC Nº: 15 de tal manera que el anticuerpo o fragmento unido permite sustancialmente la unión de IL-1β al receptor I de IL-1 (IL1RI) , en donde la región CDR1 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia RASQDISNYLS, en donde la región CDR2 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia YTSKLHS, en donde la región CDR3 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia LQGKMLPWT, en donde la región CDR1 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia TSGMGVG, en donde la región CDR2 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia HIWWDGDESYNPSLK, y en donde la región CDR3 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la Secuencia X1X2YDPPWFVD y en donde X1 es N y en donde X2 es R o K. En la presente se proporciona también un ácido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo, así como un vector que comprende el ácido nucleico, una célula que comprende el ácido nucleico o vector, y una composición que comprende el anticuerpo, ácido nucleico, o vector.

En el contexto se describe un método para tratar o prevenir una enfermedad en un mamífero, que comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo, ácido nucleico, o vector de la invención a un mamífero que tenga necesidad de ello, con lo cual se trata o previene una enfermedad en el mamífero.

En el contexto de la presente invención se describe un método de preparación de un polipéptido madurado por afinidad que se une a la IL-1β, que comprende (a) proporcionar un primer ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido de unión a la IL-1β y que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los ID SEC Nº: 1 a 26 y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que se diferencia de la primera secuencia de ácido nucleico en al menos un nucleótido, (b) llevar a cabo un reordenamiento de ácidos nucleicos para proporcionar dos o más ácidos nucleicos mutados, (c) seleccionar un ácido nucleico mutado que codifique un polipéptido que (i) se una a la IL-1β con una afinidad mayor que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (ii) tenga una selectividad para la IL-1β con respecto a la IL-1α que sea mayor que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, (iii) tenga una constante de disociación de la unión en equilibrio (KD) para IL-1β que sea menor que la del polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, o (iv) inhiba la expresión de IL-6 sérica inducida por IL-1β en un animal en mayor grado que el polipéptido codificado por el primer ácido nucleico, y (d) expresar el ácido nucleico mutado seleccionado, con lo cual se produce un polipéptido madurado por afinidad que se une a la IL-1β.

La invención proporciona anticuerpos novedosos de unión a IL-1β o fragmentos de los mismos de unión a IL-1β, los cuales se unen a IL-1β humana con una constante de disociación menor que 1pM. Dichos anticuerpos de alta afinidad se contemplan como útiles para varios métodos para tratar o prevenir enfermedades o condiciones relacionadas con la IL-1. Adicionalmente, los anticuerpos de unión a la IL-1β o los fragmentos de unión a la IL-1β se unen a un epítopo de IL-1β de forma tal que el anticuerpo o fragmento unido no evita sustancialmente que la IL-1β se una al receptor tipo I de IL-1. Adicionalmente, los anticuerpos de unión a la IL-1β o los fragmentos de unión a la IL-1β se unen a sustancialmente el mismo epítopo que uno o más de los anticuerpos indicados como ejemplos que aquí se describen, tales como el anticuerpo denominado AB7, que comprende una región variable de cadena pesada. Adicionalmente, los anticuerpos de unión a la IL-1β o los fragmentos de unión a la IL-1β compiten con la unión de un anticuerpo que tenga la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº: 11 y la región variable de cadena pesada de ID SEC Nº: 15. Adicionalmente, la presente invención abarca anticuerpos de unión a la IL-1β o fragmentos de unión a la IL1β que pueden unirse a un epítopo contenido en la secuencia ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (ID SEC Nº: 36) . Los anticuerpos de unión a la IL-1β ejemplificativos incluyen los anticuerpos designados AB5 y AB7 en la presente.

La invención también aporta anticuerpos de unión a la IL-1 ó fragmentos de los mismos de unión a la IL-1β que tienen una constante de disociación menor que 1pM, y que comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una de las secuencias de aminoácidos de las ID SEC Nº: 8, 14, 15, 25 ó 26. El anticuerpo que se... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo de unión a IL-1β o fragmento del mismo de unión a IL-1β, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a IL-1β humana con una constante de disociación menor que 1pM y en donde el anticuerpo o fragmento del mismo compite con la unión de un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº:11 y la región variable de cadena pesada de ID SEC Nº:15, en donde la región CDR1 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia RASQDISNYLS, en donde la región CDR2 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia YTSKLHS, en donde la región CDR3 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia LQGKMLPWT, en donde la región CDR1 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia TSGMGVG, en donde la región CDR2 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia HIWWDGDESYNPSLK, y en donde la región CDR3 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia X1X2YDPPWFVD y en donde X1 es N y en donde X2 es R o K.

2. Anticuerpo de unión a IL-1β o fragmento del mismo de unión a IL-1β, en donde dicho anticuerpo o fragmento se une a IL-1β humana con una constante de disociación menor que 1pM y en donde el anticuerpo o fragmento se une al mismo epítopo de IL-1β que un anticuerpo que tiene la región variable de cadena ligera de ID SEC Nº: 11 y la región variable de cadena pesada de ID SEC Nº: 15 de tal manera que el anticuerpo o fragmento unido permite sustancialmente la unión de IL-1β al receptor I de IL-1 (IL-1RI) , en donde la región CDR1 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia RASQDISNYLS, en donde la región CDR2 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia YTSKLHS, en donde la región CDR3 de cadena ligera de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia LQGKMLPWT, en donde la región CDR1 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia TSGMGVG, en donde la región CDR2 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la secuencia HIWWDGDESYNPSLK, y en donde la región CDR3 de cadena pesada de dicho anticuerpo o fragmento del mismo tiene la Secuencia X1X2YDPPWFVD y en donde X1 es N y en donde X2 es R o K.

3. Anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 1 ó 2, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un Fab, un F (ab’) 2, un Fv, un fragmento de anticuerpo de cadena única, un anticuerpo multiespecífico, un diacuerpo, un triacuerpo, un tetracuerpo, un minicuerpo, un anticuerpo lineal, un anticuerpo recombinante quelante, un tricuerpo, un bicuerpo, un intracuerpo, un nanocuerpo, un pequeño producto inmunofarmacéutico modular (SMIP) , una proteína de fusión de inmunoglobulina de dominio de unión, un anticuerpo camelizado o un anticuerpo que contiene VHH.

4. Anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende una de las secuencias de aminoácidos de ID SEC Nº: 8 y 26, y una región variable de cadena ligera que comprende una de las secuencias de aminoácidos de ID SEC Nº: 9 y 11.

5. Anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 8, y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 9.

6. Anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 26, y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 11.

7. Ácido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de un anticuerpo, en donde la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 8 ó 26.

9. Ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera de un anticuerpo, en donde la región variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº: 9 u 11.

10. Vector que comprende la secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9.

11. Célula que comprende el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9 ó el vector de la reivindicación 10, no siendo dicha célula una célula troncal embrionaria humana o un óvulo fertilizado humano.

12. Composición que comprende (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, o el vector de la reivindicación 10, y (b) un vehículo adecuado.

13. Composición de la reivindicación 12, en donde el vehículo es un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. Composición de la reivindicación 13, en donde la composición está en una forma adecuada para administración intraarticular, subcutánea, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intraarterial, intralesional, oral o por inhalación.

15. Composición de la reivindicación 13, en donde la composición es una composición farmacéutica de liberación controlada o de liberación sostenida.

16. Composición farmacéutica para ser usada en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o condición

relacionada con las IL-1 en un mamífero, que comprende una cantidad eficaz de (a) el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, (b) el ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, (c) el vector de la reivindicación 10, o (d) la composición de la reivindicación 12 a 15, en donde la enfermedad o condición relacionada con la IL-1 es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune o un cáncer.

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