Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.

Procedimiento para producir, en una levadura, un anticuerpo de dominio capaz de formar una unidad de unión a antígeno única y caracterizado por un nivel reducido o ausencia de una variante de anticuerpo de dominio que carece de al menos un enlace disulfuro, que comprende

I) aplicar condiciones que promuevan la formación de puentes disulfuro en anticuerpos de dominio, o

II) retirar los anticuerpos de dominio que carecen de al menos un puente disulfuro aplicando condiciones seleccionadas de

i) unión de anticuerpos de dominio que comprenden grupos tiol libres a grupos reactivos adecuados,

opcionalmente en condiciones desnaturalizantes; y

ii) cromatografía de alta resolución en fase inversa, o

III) una combinación de

(I) y (II);

en el que las condiciones que promueven la formación de puentes disulfuro se seleccionan de una o más de las siguientes:

a) adición de agentes oxidantes, preferiblemente iones metálicos oxidantes, preferiblemente uno o más seleccionados de Cu2+, Fe2+, Fe3+ y Zn2+;

b) potenciación de la expresión de una proteína disulfuro isomerasa (PDI) con una secuencia de control adecuada o aumentando la dosis génica;

c) adaptación de las condiciones de cultivo mediante uno o más seleccionados de los siguientes: rebajar la temperatura de cultivo y/u optimizar el medio de cultivo, mediante uno o más seleccionados de los siguientes: reducción de la alimentación de metanol para hospedadores que requieran una alimentación de metanol, rebaja de la conductividad del medio de cultivo o cualquier combinación de los mismos;

d) replegamiento del anticuerpo de dominio en presencia de tampón rédox, preferiblemente en presencia adicional de desnaturalizante;

e) tratamiento del anticuerpo de dominio por oxigenación, aumento de temperatura, aumento del pH o alta presión, o cualquier combinación de los mismos, y

f) combinaciones de cualquiera de a) a e).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/055916.

Solicitante: ABLYNX N.V.

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: Technologiepark 21 9052 Ghent-Zwijnaarde BELGICA.

Inventor/es: STANSSENS, PATRICK, LABEUR,CHRISTINE, SCHOTTE,PETER, JONNIAUX,JEAN-LUC, LAUWEREYS,MARC JOZEF.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/18 (contra materiales animales o humanos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > C07K16/00 (Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/81 (para levaduras)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN... > Preparación de compuestos o de composiciones, no... > C12P1/02 (utilizando hongos)

PDF original: ES-2551854_T3.pdf

 

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