Anticuerpos anti-integrina alfa2 y sus usos.

Un anticuerpo anti-integrina α2 humanizado que comprende:

(i) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de

(a) HCDR1 (GFSLTNYGIH, SEQ ID NO: 1), (b) HCDR2 (VIWARGFTNYNSALMS, SEQ ID NO: 2) y (c) HCDR3 (ANDGVYYAMDY, SEQ ID NO: 3); y

(ii) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de (a) una LCDR1 seleccionada entre SANSSVNYIH (SEQ ID NO: 4) o SAQSSVNYIH (SEQ ID NO: 112), (b) LCDR2 (DTSKLAS; SEQ ID NO: 5) y (c) LCDR3 (QQWTTNPLT, SEQ ID NO: 6).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CA2006/001876.

Solicitante: GLENMARK PHARMACEUTICALS S.A..

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: Chemin de la Combeta, 5 2300 La Chaux-de-Fonds SUIZA.

Inventor/es: LAZARIDES,ELIAS, WOODS,CATHERINE, BERNARD,MARK A.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P35/00 (Agentes antineoplásicos)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/543 (con un soporte insoluble para la inmovilización de compuestos inmunoquímicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/13 (Inmunoglobulinas)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/10 (Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/705 (Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/395 (Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/53 (Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN... > Preparación de péptidos o de proteínas (proteína... > C12P21/08 (Anticuerpos monoclonales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/63 (Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/566 (utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/02 (Inmunomoduladores)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P19/00 (Medicamentos para el tratamiento de problemas del esqueleto)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/78 (Péptidos del tejido conectivo, p. ej. colágeno, elastina, laminina, fibronectina, vitronectina, globulina insoluble en frío (CIG))

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos anti-integrina alfa2 y sus usos.

Campo técnico

La presente invención se refiere en general a anticuerpos dirigidos contra la integrina 0:2131 y sus usos, que incluyen anticuerpos anti-integrina alfa2 (0:2) humanizados y métodos de tratamiento con anticuerpos anU-integrina 02.

Antecedentes de la invención La integrina n2131 (antígeno muy tardío 2; VLA-2) se expresa sobre una diversidad de tipos celulares, que incluyen plaquetas, células endoteliales vasculares, macrófagosfmonocitos activados, fibroblastos, leucocitos, linfocitos, neutrófilos activados y mastocitos (Hemler, Annu. Rev. Immunol., 8:365:365-400 (1999) ; Wu y Santoro, Dev. Dyn., 206:169-171 (1994) ; Edelson e1. al., Blood, 103 (6) :2214-2220 (2004) ; Dickeson et al., Cell Adhesion and Communication. 5:273-281 (1998». Los ligandos más tipicos para 0:2¡}1 incluyen el colágeno y la laminina, encontrándose ambos en la matriz exlracelular. Generalmente, el dominio I de la integrina 0:2 se une al colágeno de una manera dependiente de cationes divalentes, mientras que el mismo dominio se une a la laminina a través de mecanismos independientes y dependientes de cationes divalentes (Dickeson et al., Cell Adhesion and Communication. 5:273-281 (1998) ) . La especificidad de la integrina 0:2pl varía según el tipo celular y actúa como receptor del colágeno y/o la laminina para tipos celulares concretos, por ejemplo, la integrina 0:2131 se conoce como receptor del colágeno en plaquetas y como receptor de la laminina en células endoteliales (Dickeson et al., J. Biol Chem., 272: 7661-7668 (1997) ) . La ecovirus-1, la decorina, la E-caderina, la metaloproteinasa de matriz I (MMP-I) , la endorrepelina y múltiples colecUnas y la proteina del complemento Clq también son ligandos para la integrina 0:2131 (Edelson et al., Blood, 107 (1) :143-150 (2006» . Se ha implicado a la integrina a2¡}1 en varios procesos biológicos y patológicos, que incluyen la agregación de plaquetas inducida por colágeno, la migración celular sobre el colágeno, la reorganización dependiente de células de las fibras de colágeno, así como las respuestas celulares dependientes de colágeno que producen aumentos en la expresión de citoquinas y la proliferación (Gendron, J. Biol. Chem., 278:48633-48643 (2003) ; Andreasen et al., J. Immunol., 171 :2804-2811 (2003) ; Rao et al., J. Immunol., 165 (9) :493540 (2000) ) , aspectos de la función de células T, mastocitos, y neutrófilos (Chan et al., J. Immunol, . 147:398-404 (1991) ; DusUn y de Fougerolles, Curro Opino Immunol., 13:286-290 (2001) ; Edelson et al., Blood, 103 (6) :2214-2220 (2004) ; Werr et al., Blond, 95:1804-1809 (2000) , aspectos de la hipersensibilidad por contacto de tipo retardado y la artritis inducida por colágeno (de Fougerolles et al., J. Glin. Inves1., 105:721-720 (2000) ; Kriegelstein et al., J. Clin. Invest., 110 (12) :1773-1782 (2002) ) , la mortogénesis ductal de glándulas mamarias (Keely et al., J. Cell Sci., 108:595-607 (1995) ; Zuller et al., Am. J. Pathol., 155 (3) :927-940 (1995) ) , la curación de heridas epidérmicas (Pilcher et al., J. Biol. Chem., 272:181457-54 (1997) ) , y procesos asociados con la angiogénesis inducida por VEGF (Senger et al., Am. J. Pathol., 160 (1) :195-204 (2002) )

La integrinas son heterodimeros formados por una subunidad o: y una subunidad ¡}, y comprende una gran familia de proteínas que median en la adherencia celular a la matriz exlracelular (ECM) , así como proteínas plasmáticas, y son fundamentales para algunos tipos de interacciones entre células. Las integrinas interaccionan con los componentes de la ECM, a través de sus dominios extracelulares (Poni y Zent, Exp. Nephrol., 94:77-84 (2003» Tras la unión a los ligandos, las integrinas transducen las señales intracelulares al citoesqueleto, que modifica la actividad celular en respuesta a estos acontecimientos de adherencia celular, denominados señalización exlracelular (~outside-in signaling") (véase, p. ej., Hemler, Annu. Rev. Immunol., 8:365:365-400 (1999) ; Hynes, Cell, 110 (6) :673687 (2002) ) . Esta señalización también puede activar otros subtipos de integrinas expresados sobre la misma célula, conocidos como señalización intracelular ("inside-out signaling") . La señalización intracelular también se produce a través de señales reguladoras que se originan dentro del citoplasma celular, tales como la interrupción de la conexión entre la subunidad o: y ¡}, que después se transmiten al dominio de unión al ligando externo del receptor Las integrinas pueden desempeñar papeles importantes en los acontecimientos de adherencia celular que controlan el desarrollo, la morfogérJesis de órganos, la fisiología y la patología, así como la homeostasis de tejidos normales y las respuestas inmunológias y trombóticas y, además, actúan como detectores ambientales para la célula. Estas proteínas se caracterizan por tener conformación cerrada bajo condiciones normales que, tras la activación, sufren un cambio conformacional rápido que expone el sitio de unión al ligando. La estructura de cristales por rayos X es una herramienta reciente que se ha empleado en el estudio de la estructura de la integrina y los mecanismos de activación. La comprensiÓfl de las características estructurales de la integrina facilita un mejor entendimiento de los sitios de unión, los estados diferenciados y sus formaciones activas e inactivas. En general, el sitio de unión para el ligandofcontrarreceptor para todas las integrinas se encuentra dentro del dominio o: y está formado por un sitio de unión dependiente de iones metálicos, denominado dominio MIDAS (Dembo et al., J. Biol. Chem., 274, 32108-32111 (1988) ; Feuston et al., J. Med. Chem., 46:5316-5325 (2003) ; Gadek et al., Science, 295 (5557) :1086-1089 (2002) ; Gurrath et al., Eur. J. Biochem., 210:911 -921 (1992». En las subunidades o: de las integrinas que se unen al colágeno, que incluyen las integrinas a l , a2, a10 y al1, el sitio MIDAS está localizado dentro de un dominio insertado extra en el N-terminal conocido como el dominio t, A o l/A, una característica que comparten con las subunidades a de la familia (32 de leucocitos de las integrinas (Randi y Hogg, J. Biol. Chem., 269: 12395-12398 (1994) ; Larson et aL, J. Cell Biol., 108 (2) :703-712 (1989) ; Lee et aL, J. Biol. Chem., 269: 12395-12398 (1995) ; Emsley et al., J. Bial. Chem., 272:28512-28517 (1997) , y Cell. 100:47-56 (2000) ) . Los dominios I son estructuralmente homólogos con el dominio A1 del factor de von Willebrandt, con una topología de plegamiento de Rossman de seis hebras en lámina f3, rodeadas por siete a-hélices (Colombatti y Bonaldo, Blood, 77 (11 ) :2305-2315 (1991) ; Larson et aL, J. Cell Biol., 108 (2) :703-712 (1989) ; Emsley et aL, J. Biol. Chem., 272:28512-28517 (1997) ; Nolte et al., FEBS LeHers, 452 (3) :379-385 (1999». Las integrinas que se unen al colágeno tienen una a-hélice adicional conocida como hélice aC (Emsley el aL, J. Biol. Chem., 272:28512-28517 (1997) , y Cell, 100:47-56 (2000) ; Nolte et al., FEBS Letlers, 452 (3) :379-385 (1999) )

Las interacciones de integrina/ligando pueden facilitar la extravasación de leucocitos hacia tejidos inflamados (Jackson el al., J. Med. Chem., 40:3359-3368 (1997) ; Gadek et al., Science, 295 (5557) :1086-1089 (2002) , Sircar et aL, Bioorg. Med. Chem., 10:2051-2066 (2002) ) , y desempeñan un papel en acontecimientos corriente abajo después de la extravasación inicial de los leucocitos desde la circulación hacia tejidos en respuesta a estímulos inflamatorios, que incluyen la migración, el reclutamiento y la activación de células proinflamatorias en el sitio de la inflamación (Eble J.A., Curro Phar. Des., 11 (7) :867-880 (2005» . Se ha ind icado que algunos anticuerpos que bloquean la integrina a2131 muestran un impacto sobre las respuestas de hipersensibilidad... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo anti-integrina 02 humanizado que comprende:

(i) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de (a) HCOR1 (GFSLTNYGIH, SEO ID NO: 1) , (b) HCOR2 (VIWARGFTNYNSALMS, SEO ID NO: 2) y (e) HCDR3 (ANOGYYYAMDY, SEO ID NO: 3) ; y

(ii) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de (a) una LCOR1 seleccionada entre SANSSYNYIH (SEO ID NO: 4) o SAOSSVNYIH (SEO ID NO: 112) , (b) LCOR2 (OTSKLAS; SEO ID NO: 5) y (c) LCOR3 (OQWTTNPLT, SEO ID NO: 6)

2. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde (a) la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos del SEO ID NO: 185, (b) la región va riable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEO ID NO: 186, o (c) tanto (a) como (b) .

3. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde (i) la región variable de cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos del SEO ID NO: 185 en la que (a) la posición 71 es Lys, (b) la posición 73 es Asn, (c) la posición 78 es Yal, o (d) cualquier combinación de (a) - (e) ; (ii) la región variable de cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos del SEO ID NO: 186 en la que (a) la posición 2 es Phe, (b) la posición 45 es Lys, (c) la posición 48 es Tyr, o (d) cualquier combinación de (a) - (c) ; o (iii) tanto (i) como (ii) .

4. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde (a) la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre los SEO ID NO.

7. 79 y los SEO ID NO.

10. 111, (b) la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el SEO ID NO: 41 , los SEO ID NO.

8. 92 y el SEO ID NO: 108; o (c) tanto (a) como (b)

5. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde la región variable de cadena pesada comprende adicionalmente una regiÓfl FW4 que comprende la secuencia de aminoácidos WGOGTLVTVSS (SEO ID NO: 13)

6. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde la región variable de cadena ligera comprende adicionalmente una región FW4 que comprende la secuencia de aminoácidos FGOGTKVEIK (SEO ID NO: 38) .

7. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo reconoce el dominio I de la integrina 02 humana.

8. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se une a la integrina a2131.

9. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se une a un epitopo de la integrina 02, comprendiendo el epítopo·

(a) un residuo de Lys correspondiente a la posición 192 de la secuencia de aminoácidos de la integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 40 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 11 ,

(b) un residuo de Asn correspondiente a la posición 225 de la secuencia de aminoácidos de la integrina 02 mostrada en el SEa ID NO: 8 o la posición 73 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 11 ;

(c) un residuo de Gln correspondiente a la posición 241 de la secuencia de aminoácidos de la integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 89 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEa ID NO: 11 ;

(d) un residuo de Tyr correspondiente a la posición 245 de la secuencia de aminoácidos de la integrina a2 mostrada en el SEa ID NO: 8 o la posiciÓfl 93 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 11 ;

(e) un residuo de Arg correspondiente a la posición 317 de la secuencia de aminoácidos de la integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 165 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina a2 mostrada en el SEO ID NO: 11 ;

(f) un residuo de Asn correspondiente a la posición 318 de la secuencia de aminoácidos de la integrina a2 mostrada en el SEa ID NO: 8 o la posición 166 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEO ID NO· 11 ; o

(g) cualquier combinación de (a) a (f) .

10. Un anticuerpo anli-integrina 02 humanizado, en donde el anticuerpo se une a un epílopo de la inlegrina 02, comprendiendo el epitopo·

(a) un residuo de Lys correspondiente a la posición 192 de la secuencia de aminoácidos de la integrina 02 mostrada en el SEQ ID NO: 8 o la posición 40 de la secuencia de aminoácidos del dominio 1de integrina 02 mostrada en el SEa ID NO: 11 ;

(b) un residuo de Asn correspondiente a la posición 225 de la secuencia de aminoácidos de la integTina 02 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posicioo 73 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEQ ID NO: 11 ;

(e) un residuo de Gln correspoodienle a la posición 241 de la secuencia de aminoácidos de la inlegrina 02 mostrada en el SEQ ID NO: 8 o la posición 89 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 11 ;

(d) un residuo Tyr correspondiente a la posición 245 de la secuencia de aminoácidos de la integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 93 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 11 ,

(e) un residuo de Arg correspondiente a la posición 317 de la secuencia de aminoácidos de la integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 165 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 11 ; Y

(f) un residuo de Asn correspondiente a la posición 318 de la secuencia de aminoácidos de la integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 8 o la posición 166 de la secuencia de aminoácidos del dominio I de integrina 02 mostrada en el SEO ID NO: 11

. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, que es un anticuerpo completo. 12 El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, que es un fragmento de anticuerpo 13. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1 unido a una marca detectable. 14 El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1 inmovilizado sobre una fase sólida

15. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, en donde el anticuerpo inhibe la unión de la integrina 02 o 02[31 a un ligando de la integrina 02[31 .

16. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 15, en donde el ligando de la integrina 02[31 se selecciona entre colágeno, laminina, Ecovirus-1 , decorina, E-cadherina, metaloproteinasa I de la matriz (MMP-I) , endorrepelinas, colectina y proteina del complemento Clq

17. Un método para determinar si una muestra contiene integrina 02, integrina 02[31, o ambas, que comprende poner en contacto la muestra con el anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1, y determinar si el anticuerpo se une a la muestra, siendo dicha unión una indicación de que la muestra contiene integrina 02, integrina 02[31 , o ambas

18. Un kit que comprende el anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1 e instrucciones para su uso para detectar la proteína integrina 02 o 02[31 .

19. Un ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo anti-integrina 02[31 humanizado de la reivindicación 1.

Un vector que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 19

. Una célula anfitriona que comprende:

(a) el ácido nudeico de acuerdo con la reivindicación 19;

(b) el vector de acuerdo con la reivindicación 20; o

(c) cualquier combinación de (a) y (b)

22. Un procedimiento para producir un anticuerpo anti-integrina 02 humanizado que comprende cultivar la célula anfitriona de la reivindicación 21 en condiciones que permiten la expresión del anticuerpo

23. El procedimiento de la reivindicación 22 que comprende adicionalmente recuperar el anticuerpo antiintegrina 02 humanizado de la célula anfitriona

24. El procedimiento de la reivindicación 23, en donde el anticuerpo anti-integrina 02[31 humanizado se recupera del medio de cultivo de células anfitrionas.

25. Un método de escrutinio que comprende:

(a) detectar la unión de integrina 02 o 02p1 a un anticuerpo que comprende la región VL del SEO ID NO: 19 y la región VH del SEO ID NO: 21 en presencia frente a ausencia de un anticuerpo de ensayo; y

(b) seleccionar el anticuerpo de ensayo si su presencia se correlaciona con la disminución de la unión de la integrina 02 o 02p1 al anticuerpo que comprende la región VL del SEO ID NO: 19 y la región VH del SEO ID NO: 21

El método de la reivindicación 25, en donde la integrina 02 o 02p1 se inmoviliza sobre un soporte sólido.

27. Un método de escrutinio que comprende:

(a) detectar la unión de la integrina 02p1 a colágeno en presencia de un anticuerpo de ensayo, en donde el anticuerpo de ensayo es un anticuerpo que se une a un dominio I de 02;

(b) detectar la unión del an1icuerpo de ensayo al dominio I de 02 en presencia de iones Mg" ;

(c) detectar la unión del anticuerpo de ensayo al dominio I de 02 en presencia de iones Ca";

(d) detectar la unión del anticuerpo de ensayo al dominio I de 02 en presencia de los medios libres de cationes; y

(e) seleccionar el anticuerpo de ensayo si éste inhibe la unión de la integrina 02p1 al colágeno y se une al dominio I de 02 en presencia de iones Mg" e iones Ca" y medios libres de cationes.

Una composición que comprende el anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

29. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 10 para su uso en un método in vivo para inhibir la unión de leucocitos a colágeno que comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de dicho anticuerpo para inhibir la unión de los leucocitos al colágeno.

30. Un método para dirigir una molécula, una composiciÓfl o un complejo a un sitio que se caracteriza por la presencia de un ligando de integrina 02p1 , comprendiendo el método anclar o unir la molécula, composición o complejo al anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de la reivindicación 1.

. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 16 para su uso como medicamento.

32. El anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-16

o la composición de la reivindicación 28 para su uso en un método para el tratamiento de un trastorno asociado con la integrina 02p1 seleccionado entre enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, una enfermedad asociada con angiogénesis anormal o mayor que la normal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, reacciones a trasplantes, neuritis óptica, traumatismo de la médula espinal, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES) , diabetes mellitus, esclerosis múltiple, síndrome de Reynaud, encefalomielitis autoinmunitaria experimental, sindrome de Sjorgen, esclerodermia, diabetes de inicio juvenil, retinopatia diabética, degeneración macular relacionada con la edad, enfermedades cardiovasculares, psoriasis, cáncer, así como infecciones que inducen una respuesta inflamatoria.

33. El uso del anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 para la preparaciÓll de un medicamento para el tratamiento de un trastomo asociado con la integrina a2p1 seleccionado entre enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, una enfermedad asociada con angiogénesis anormal o mayor que la normal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, reacciones a trasplantes, neuritis óptica, traumatismo de la médula espinal, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES) , diabetes mellitus, esclerosis múltiple, síndrome de Reynaud, encefalomielitis autoinmunitaria experimental, síndrome de Sjorgen, esclerodermia, diabetes de inicio juvenil, retinopatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad, enfermedades cardiovasculares, psoriasis, cáncer, así como infecciones que inducen una respuesta inflamatoria

34. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, en donde el trastorno asociado a la integrina 02p1 se selecciona entre esclerosis múltiple, artritis reumatoide, neuritis óptica y traumatismo de la médula espinal.

35. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, en donde el trastorno asociado a la integrina 02131 no está asociado con (a) activación plaquetaria, (b) la agregación plaquetaria, (c) una disminución en el recuento de plaquetas circulantes, (d) complicaciones de sangrado, o (e) cualquier combinación de (a) a (d) .

36. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, donde el anticuerpo anti-integrina 02 comprende una cadena pesada que comprende el SEO ID NO· 174 o el SEO ID NO: 176 y una cadena ligera que comprende el SEO ID NO· 17B

37. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, en donde el anticuerpo anti-integrina 02 inhibe competitivamente la unión de un anticuerpo que comprende la región VL del SEO ID NO: 19 y la región VH del SEO ID NO: 21 a la integrina 02131 humana o el dominio I de la misma.

38. El uso de acuerdo con la reivindicación 34, en doode la esclerosis múltiple se caracteriza por la recaída

39. El uso de acuerdo con la reivindicación 33, en donde el anticuerpo anti-integrina 02 inhibe la unión de la integrina 02131 a colágeno y no es un mimético de ligando

40. Una composición para su uso en el tratamiento de un trastomo asociado con la integrina 02131 seleccionado entre enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, una enfermedad asociada con angiogénesis anormal o mayor que la normal, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, reacciones a trasplantes, neuritis óptica, traumatismo de la médula espinal, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico (LES) , diabetes mellitus, esclerosis múltiple, síndrome de Reynaud, encefalomielitis autoinmunitaria experimental, síndrome de Sjorgen, esclerodermia, diabetes de inicio juvenil, retillOpatía diabética, degeneración macular relacionada con la edad, enfermedades cardiovasculares, psoriasis, cáncer así como infecciones que inducen una respuesta inflamatoria, comprendiendo la composición el anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptables

La composición para su uso en el tratamiento de acuerdo con la reivindicación 40, en donde el trastomo asociado a integrina 02131 se selecciona entre esclerosis múltiple, artritis reumatoide, neuritis óptica y traumatismo de la médula espinal.

42. Un paquete que comprende el anticuerpo anti-integrina 02 humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-16 o la composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 40 o 41 junto con instrucciones para el lralamiento de un trastomo asodado a integrina 02131