Anticuerpo monoclonal capaz de unirse con epítopo discontinuo específico que aparece en la región AD1 de la glucoproteína gB de citomegalovirus humano, y fragmento de unión a antígeno del mismo.

Un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno que se une específicamente con la glucoproteína gB de citomegalovirus humano y es capaz de neutralizar la bioactividad de la misma,

en el que

(i) las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de la cadena pesada incluyen:

(a) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 13;

(b) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 14: y

(c) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 15, respectivamente, y

(ii) las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de la cadena ligera incluyen:

(a) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 16;

(b) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 17: y

(c) la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 18, respectivamente.

Anticuerpo monoclonal capaz de unirse con epítopo discontinuo específico que aparece en la región AD1 de la glucoproteína gB de citomegalovirus humano, y fragmento de unión a antígeno del mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal que se une con citomegalovirus humano (en lo sucesivo en el presente documento, denominado en ocasiones "HCMV"), y un fragmento de unión a antígeno del mismo. Más particularmente, la presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal humano que se une con la región AD1 de la glucoproteína gB de HCMV y un fragmento de unión a antígeno del mismo.

Antecedentes de la técnica

Junto con el herpesvirus humano 6 (HHV-6) y el herpesvirus humano 7 (HHV-7), el citomegalovirus humano (HCMV) pertenece a beta herpesvirus de Herpesviridae. El HCMV es un virus de ADN bicatenario que es el mayor entre los Herpesviridae con un diámetro de aproximadamente 18 nm, cuya cepa silvestre codifica 165 genes con un tamaño de genoma de aproximadamente 235 kpb (Documentos No de Patente 1 y 2).

El HCMV es altamente específico de especie y no infecta a animales distintos del ser humano pero infecta ampliamente al ser humano y tiene afinidad por tipos generales de tejidos en el cuerpo humano.

Además, una vez infectado, el HCMV no se elimina incluso después del establecimiento de inmunidad en el hospedador y permanece durante toda la vida.

Una vez infectado, el HCMV permanece latente durante toda la vida. Más del 9 % de los adultos Japoneses ya se han infectado y portan el virus, aunque el virus está pocas veces activado y pocas veces produce enfermedades en personas sanas.

Sin embargo, un estado de inmunodeficiencia debido al SIDA, debido al cáncer, después de trasplante de órganos, después de trasplante de médula ósea, después de hemodiálisis o similares podría provocar la reactivación del HCMV latente, lo que puede provocar una grave infección por HCMV que puede ser letal tal como neumonía intersticial, retinitis, gastroenteritis, encefalitis o similares (Documentos No de Patente 3 y 4).

Además, cuando una mujer embaraza experimenta infección primaria por HCMV durante el periodo fetal, la infección por HCMV puede transmitirse al feto de la mujer embarazada a través de la placenta, en cuyo caso el feto puede desarrollar infección por CMV congénita (enfermedad de citomegalovirus congénita; también denominada enfermedad de inclusión citomegálica o enfermedad de inclusión citomegálica congénita), y puede dar como resultado aborto, mortinato o muerte poco después del nacimiento. Incluso en el caso de supervivencia, puede dar como resultado bajo peso al nacer, hepatoesplenomegalia, ictericia, púrpura trombocitopénica, microcefalia, trastorno del desarrollo mental, retardo del desarrollo intelectual, coriorretinitis, alteración de la audición o similares. Además, incluso durante el periodo neonatal o la infancia, si el anticuerpo de HCMV transmitido de la madre es insuficiente, la infección por HCMV a través del canal de parto, leche materna, orina, saliva o similares puede desarrollar anomalía de la función hepática, neumonía intersticial, mononucleosis o similares (Documentos no de Patente 3, 4 y 5).

La infección por HCMV se ha convertido en un problema mundial y se están desarrollando en la actualidad fármacos profilácticos y terapéuticos que son capaces de suprimir la aparición de diversas afecciones patológicas debidas al HCMV anteriormente descrito, o que son capaces de aliviar dichas afecciones patológicas. Recientemente, se han desarrollado ganciclovir (Documentos No de Patente 6 y 7), foscarnet (Documento No de Patente 8), valganciclovir (Documento No de Patente 9) y similares como fármacos antivirales para suprimir la proliferación de HCMV.

El ganciclovir es un fármaco antiviral que bloquea la síntesis de ADN viral, que se activa a ganciclovir trifosfato en células y antagoniza de forma competitiva el desoxiguanosin trifosfato (dGTP), es decir, un sustrato de ADN polimerasa, inhibiendo de esta manera la ADN polimerasa. Por lo tanto, se usa para tratar la retinitis por citomegalovirus en un estado de inmunodeficiencia, principalmente SIDA, o se usa para suprimir la aparición de retinitis por citomegalovirus en infección por VIH avanzada con 1 o menos linfocitos CD4/mm3, y está aprobado como un producto farmacéutico.

Se ha informado de diversos efectos secundarios de agentes antivirales tales como ganciclovir, sin embargo, tales como trastorno hematopoyético, y su modo de uso ha sido muy limitado como se ha descrito anteriormente.

El efecto secundario de aparición más frecuente y que requiere más atención entre los efectos secundarios del ganciclovir es los trastornos sanguíneos asociados con la supresión de médula ósea, en los que los números de leucocitos, eritrocitos y plaquetas se reducen de forma anómala. Los síntomas tempranos incluyen fiebre, dolor de garganta, inactividad anómala y tendencia al sangrado tal como sangrado debajo de la piel. En algunos casos,

puede provocar anomalía en el sistema psiconeurótico, dando como resultado cefalea, mareos, insomnio, dificultad al pensar, sensación de ansiedad o similares.

Además, se ha presentado teratogénesis, mutagenicidad y carcinogenicidad en experimentos animales, y por lo tanto no puede usarse durante el embarazo.

Además, aunque se cree que el uso de ganciclovir en varios casos de infección por HCMV congénita es eficaz en la reducción de la aparición de efectos posteriores neurológicos y en la mejora de la progresión de la pérdida de audición (Documento No de Patente 1), los problemas de supresión de la médula ósea, teratogénesis o carcinogenicidad como efectos secundarios de ganciclovir aún requieren suficiente y cuidadosa consideración.

El valganciclovir es éster de L-valina de ganciclovir que se convierte a ganciclovir con esterasas intestinales y hepáticas después de la administración oral. En consecuencia, su mecanismo de acción y efectos secundarios son iguales que los de ganciclovir y por lo tanto está asociado con los problemas de supresión de la médula ósea, teratogénesis y carcinogenicidad. En Japón, el valganciclovir está aprobado como un fármaco terapéutico para retinitis por citomegalovirus en estados de inmunodeficiencia, principalmente SIDA.

Al mismo tiempo, el foscarnet es un análogo de ácido pirofosfórico y suprime la proliferación del HCMV actuando directamente en el sitio de unión a ácido pirofosfórico de la ADN polimerasa para inhibir la ADN polimerasa. También es eficaz contra HCMV resistente a ganciclovir. Los principales efectos secundarios incluyen sensación de mareo, anemia, aumento de la creatinina en suero, vómitos, hipomagnesemia, hipocalemia, sensación anómala y similares. En particular, se produce frecuentemente choque y daño renal y por lo tanto requiere administración cuidadosa. En Japón, el uso del foscarnet está permitido solamente en pacientes que se ha diagnosticado de forma decisiva que tienen retinitis por HCMV o pacientes altamente y clínicamente sospechosos de retinitis por HCMV entre los pacientes con SIDA, y no debe usarse para el fin de prevenir la infección (Documento No de Patente 8).

Por lo tanto, se desea en gran medida el desarrollo de un fármaco capaz de prevenir la aparición de diversas enfermedades debido al HCMV anteriormente descrito o aliviar los síntomas del mismo sin ningún efecto secundario. En estas circunstancias, se han llevado a cabo desarrollos clínicos de dos anticuerpos anti HCMV, en los que uno es anticuerpo anti HCMV "C23 (también denominado TI-23 en el momento del desarrollo)" descrito en el Documento de Patente 3 que es un anticuerpo que reconoce la región AD2 de la glucoproteína gB, y el otro es un anticuerpo anti HCMV "SDZ MSL 19" descrito en el Documento de Patente 4 que es un anticuerpo monoclonal que reconoce la glucoproteína gH en la superficie del HCMV. Particularmente, el desarrollo del C23 se abandonó durante la investigación a pesar de su alta actividad neutralizante, es decir concentración inhibidora al 5 % de ,5 pg/ml como se determinó por el método de placas (Documento No de Patente 11).

Por el momento, se ha realizado intensamente desarrollo de vacunas de HCMV pero aún no está disponible ninguna vacuna que pueda soportar el uso clínico. Se ha desarrollado recientemente una formulación de gamma globulina de alta titulación anti CMV derivada de ser humano, que está aprobada en los Estados Unidos para su uso para prevenir la aparición de infección por HCMV asociada con trasplante de riñón. Sin embargo, ya que una formulación de gamma globulina de alta titulación anti CMV es una preparación de sangre derivada de ser humano, tiene... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno que se une específicamente con la glucoproteína gB de citomegalovirus humano y es capaz de neutralizar la bioactividad de la misma, en el que

(I) las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 de la reglón variable de la cadena pesada incluyen:

(a) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 13;

(b) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 14: y

(c) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 15, respectivamente, y

(¡I) las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 de la reglón variable de la cadena ligera incluyen:

(a) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 16;

(b) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 17: y

(c) la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 18, respectivamente.

2. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada (HCVR) que incluye la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1; y

(b) una región variable de cadena ligera (LCVR) que incluye la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 12.

3. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que comprende:

(a) una cadena pesada (cadena H) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 2 o 6; y

(b) una cadena ligera (cadena L) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 4 u 8.

4. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende:

(a) una cadena pesada (cadena H) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 6; y

(b) una cadena ligera (cadena L) que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 8.

5. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la subclase del anticuerpo es IgGIX.

6. Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Un vector que incorpora un ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1 y un ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 12.

8. Una célula hospedadora que incorpora el vector de acuerdo con la reivindicación 7.

9. Una célula hospedadora que incorpora un vector que comprende un ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 1 y un vector que comprende un ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 12.

1. Un método para producir el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende una etapa de cultivar la célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 8 o 9.