Anticuerpo monoclonal humano ANTI-HER2.

Anticuerpo monoclonal humano anti-HER2.

La presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal humano que reconoce el dominio extracelular del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) y es producido en células de retina embriónica humana.

Asimismo, la presente invención se refiere al uso de dicho anticuerpo para medir el nivel de expresión de HER2 y para la preparación de un medicamento para el tratamiento de trastornos neoplásicos que cursan con la sobreexpresión de HER2.

CAMPO DE LA INVENCiÓN

La presente invención pertenece al campo de la producción de proteínas recombinantes, más concretamente se refiere a un anticuerpo monoclonal humano que reconoce el dominio extracelular del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) y es producido en células de retina embriónica humana. Asimismo, la presente invención se refiere al uso de dicho anticuerpo, en particular para la preparación de un medicamento para el tratamiento de trastornos neoplásicos que cursan con la sobreexpresión de HER2.

ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN

La mayoría de los anticuerpos terapéuticos desarrollados como agentes médicos son isotipos humanos IgG1 incluyendo IgG1 quimérica ratón/humano, humanizada y humana. La IgG1 humana es una glicoproteína que tiene en la mayoría de los casos dos glicosilaciones tipo complejo N-biantena unidos a la parte constante (Fc) del anticuerpo, en la cual la mayoría de los oligosacáridos están fucosilados. La IgG1 humana ejerce entre otras funciones, funciones efectoras en la Citotoxicidad Celular Dependiente de Anticuerpo (ADCC, Antibody Dependent Celular Citotoxicity) y en la Citotoxicidad Dependiente de Complemento (CDC, Complement Dependent Citotoxicity) a través de la interacción de la región Fc con cada uno de los receptores de los leucocitos (FcyRs) o el complemento. La eficacia de los anticuerpos terapéuticos resulta de la especificidad del antígeno diana y de las funciones efectoras del anticuerpo, las cuales son activadas por la formación de los complejos inmunes. Recientemente se ha demostrado que la respuesta ADCC y CDC es uno de los mayores mecanismos anti-neoplásicos responsables de la eficacia clínica de los anticuerpos terapéuticos.

Una de las características comunes de los anticuerpos terapéuticos usados en el tratamiento del cáncer es que su eficacia anti-tumoral requiere altas concentraciones séricas y una terapia continua durante varios meses. Los ciclos de tratamiento requieren, por tanto, varios gramos de anticuerpo terapéutico, resultando en una cantidad de droga significante y unos costes muy altos. De hecho, se requiere una alta dosis (2-8 mg kg-1) de rituximab IgG1 anti-CD20 (Rituxan ®) o de trastuzumab IgG1 anti-Her2 (Herceptin ®) para conseguir una concentración sérica efectiva de más de 10 IJg mL-1. A diferencia de estas dosis in vivo, la actividad citotóxica máxima in vitro vía ADCC de los anticuerpos terapéuticos se consigue con concentraciones de menos de 10 ng kg-1. Esta discrepancia entre la eficacia in vivo e in vitro se debe principalmente a que la IgG sérica, aunque no afecta la capacidad de unión al antígeno del anticuerpo terapéutico, dificulta la unión del anticuerpo terapéutico con el receptor FcyRllla de las células NK inhibiendo la respuesta ADCC inducida por dichos anticuerpos. Se ha visto que los anticuerpos terapéuticos afucosilados (no fucosilados) pueden evadir dicho efecto inhibidor de la IgG plasmática humana sobre la ADCC.

La mayoría de anticuerpos terapéuticos actualmente permitidos en el mercado son producidos en líneas celulares de roedores como células de Ovario de Hámster Chino (CHO) , mieloma de ratón NSO y SP2/0 e hibridoma de ratón, estando casi todas las moléculas producidas por estas líneas celulares fucosiladas en los oligosacáridos de la Fc, lo que significa que la respuesta ADCC no es la óptima. Además, en el sistema celular CHO los enzimas encargados de llevar a cabo los procesos de glicosilación difieren de los humanos, como es el caso del enzima que realiza la adición de galactosa (GnTI, GnTII) , muy activo y abundante en humanos a diferencia de los roedores. A este respecto, diferentes estudios han descrito que un aumento en el porcentaje de galactosilación resulta en una mejor respuesta CDC en IgG recombinantes, mientras que dicho aumento no tiene un efecto negativo en la respuesta ADCC.

El uso de células no humanas para la producción de proteínas recombinantes puede causar además otros problemas, como un plegamiento incorrecto de las proteínas que sucede durante o después de la traducción, el cual puede ser dependiente de la presencia de las proteínas chaperonas apropiadas. Un plegamiento aberrante puede conducir a una disminución o ausencia de actividad biológica de la proteína recombinante, a una disminución del tiempo de vida media en sangre e inclusive a un aumento de la inmunogenicidad. Además, es de gran importancia la expresión simultánea yen cantidades relativas correctas de aquellos polipéptidos que forman las distintas subunidades de proteínas con estructura cuaternaria, como son los anticuerpos. Los anticuerpos están formados por una unidad básica compuesta de dos cadenas polipeptídicas globulares pesadas y dos cadenas polipeptídicas ligeras unidas entre sí por puentes disulfuro. Ambas cadenas presentan una zona constante y una zona variable. En esta última, se encuentra una zona hipervariable formada por 10 a 15 aminoácidos responsables de la unión específica con el antígeno.

En cuanto a los anticuerpos terapéuticos para el tratamiento del cáncer, el Trastuzumab (comercializado por Roche como Herceptin®) es un anticuerpo monoclonal humanizado IgG1 que reconoce el dominio extracelular del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) . Este anticuerpo está diseñado para bloquear la ruta de proliferación activada por el receptor HER2, producido por un gen específico con potencial cancerígeno. La producción de dicho anticuerpo se lleva a cabo utilizando la línea celular CHO lo que puede conllevar los inconvenientes descritos anteriormente (disminución de la actividad biológica, aumento de la inmunogenicidad, etc.) . Por lo tanto, sigue existiendo en el estado de la técnica la necesidad de conseguir un anticuerpo monoclonal humano anti-HER2 con un patrón de glicosilación que favorezca una mejor respuesta inmune.

OBJETO DE LA INVENCiÓN

La presente invención se refiere en un aspecto a un polipéptido caracterizado porque comprende la secuencia polipeptídica SEO ID NO 1. Asimismo se refiere a la secuencias nucleotídica que codifica dicha secuencia SEO ID NO 1 ya un vector que comprende dicha secuencia nucleotídica. También se refiere, en otro aspecto, a una célula de retina embrionaria humana caracterizada porque ha sido transfectada con dicho vector.

Otro aspecto de la invención se refiere a un anticuerpo monoclonal humano que reconoce HER2 caracterizado porque es producido por dicha célula de retina embrionaria humana. Y se refiere también a una inmunotoxina que comprende un conjugado de dicho anticuerpo y al menos un agente citotóxico. Asimismo se refiere a un kit que comprende dicho anticuerpo o dicha inmunotoxina.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Asimismo, se refiere a una composición farmacéutica que comprende una inmunotoxina que comprende un conjugado de dicho anticuerpo con al menos un agente citotóxico, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención se refiere, en otro aspecto, al uso de dicho anticuerpo para medir el nivel de expresión de HER2. Asimismo, se refiere al uso de dicho anticuerpo para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neoplásico que cursa con la sobreexpresión de HER2. También, se refiere al uso de una inmunotoxina que comprende un conjugado de dicho anticuerpo y al menos un agente citotóxico, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neoplásico que cursa con la sobreexpresión de HER2.

BREVE DESCRIPCiÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 muestra un ensayo de unión del anticuerpo CRX01 (anticuerpo monoclonal humano anti-HER2 producidos en células PER.C6® cuyas cadenas pesadas comprenden la SEO ID NO 1, cuyas cadenas ligeras comprenden la SEO ID NO 4 Y cuyo perfil de glicosilación comprende un porcentaje de afucosilación menor o igual al 4% y un porcentaje de galactosilación mayor o igual al 35%) y Herceptin® realizado mediante Wesfern Blof en condiciones reductoras utilizando como anticuerpo primario CRX01 (A) o Herceptin® (B) , ambos a una concentración de 5 ¡.Jg/ml, y como anticuerpo secundario peroxidasa anti-lgG humana a una dilución 1 :20.000. Se cargaron 300 ng de un péptido correspondiente al dominio extracelular de la proteína HER2 conjugado a la proteína GST, que tiene un peso molecular total de 35 kDa. Como control negativo se cargo un extracto de células JKT. El Wesfern Blof muestra que CRX01 es capaz de unirse en condiciones reductoras a HER2, pudiendo bloquear su actividad.

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido caracterizado por que comprende la secuencia SEQ ID NO 1.

2. Molécula de ADN, ADNc o ARN caracterizada por que comprende la secuencia que codifica un pOlipéptido según la reivindicación 1.

3. Molécula de ADN según la reivindicación anterior caracterizada por que comprende la secuencia SEQ ID NO 2.

4. Vector que comprende una molécula de ADN según una cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 3.

5. Vector según la reivindicación 4 que además comprende una molécula de ADN que comprende una secuencia que codifica un polipéptido de secuencia SEQ ID NO 4.

6. Vector según la reivindicación 5 que comprende la secuencia nucleotídica SEQ ID N03.

7. Célula de retina embriónica humana caracterizada por que es transfectada con un vector según la reivindicación 4.

8. Célula según la reivindicación 7 donde la célula de retina embriónica humana es la célula ECAAC No. 96022940.

9. Célula de retina embriónica humana caracterizada por que ha sido transfectada con un vector según la reivindicación 5 ó 6.

10. Célula según la reivindicación 9 donde la célula de retina embriónica humana es la célula ECAAC No. 96022940.

11. Célula según la reivindicación 10 depositada en la HPACC con el número de depósito 12030701.

12. Anticuerpo monoclonal humano que reconoce el dominio extracelular del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2) caracterizado porque es producido por una célula según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11.

13. Anticuerpo según la reivindicación 12 con un perfil de glicosilación que comprende un porcentaje de afucosi/ación menor o igual al 4%.

14. Anticuerpo según la reivindicación 12 con un perfil de glicosilación que comprende un porcentaje de galactosilación mayor o igual al 35%.

15. Anticuerpo según la reivindicación 12 con un perfil de glicosilación que comprende un porcentaje de afucosilación menor o igual al 4% y un porcentaje de galactosilación mayor o igual al 35%.

16. Inmunotoxina que comprende un conjugado de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 12-15, y al menos un agente citotóxico.

17. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 12-15 o una inmunotoxina según la reivindicación 16, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

18. Uso de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 12-15 para la detección del nivel de expresión de la proteína HER2.

19. Uso de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 12-15 o una inmunotoxina según la reivindicación 16 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neoplásico que cursa con la sobreexpresión de HER2.

20. Uso de un anticuerpo según la reivindicación 19 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de cáncer de mama HER2-positivo.

21. Uso de una inmunotoxina según la reivindicación 19 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de cáncer de mama HER2-positivo.

22. Kit que comprende un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1215 o una inmunotoxina según la reivindicación 16.

A) CRXOl B) Herceptin I I

I • I •

JKT Her2 JKT Her2

FIG.1

CRX01-seqs_ST25 (2)

<110> curaxys <120> Anticuerpo monoclonal humano anti-HER2

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 450

<212> PRT

<213> Artificial sequen ce <220>

<223> secuencia aminoac'dica de la cadena pesada de CRX01

<400> 1

Glu val Gln Leu val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly phe Asn Ile Lys ASp Thr 20 25 30

Tyr Ile His Trp val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp val 35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala ASp Ser val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala ASp Thr ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu ASp Thr Ala val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly ASp Gly Phe Tyr Ala Met ASp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser val 115 120 125

phe Pro Leu Ala Pro ser Ser Lys Ser Thr ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140

Leu Gly cys Leu val Lys ASp Tyr Phe pro Glu Pro val Thr val Ser 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly val His Thr Phe pro Ala val 165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser ser val val Thr val Pro 180 185 190

CRX01-seqs_ST25 (2)

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile cys Asn val Asn H;S Lys195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys val ASp Lys Lys val Glu Pro Lys Ser Cys ASp210 215 220

Lys Thr H;S Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240

pro Ser val Phe Leu phe pro Pro Lys Pro Lys ASp Thr Leu Met Ile 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu val Thr cys val val val ASp val Ser H;S Glu 260 265 270

ASp pro Glu val Lys phe Asn Trp Tyr val ASp Gly val Glu val H;S275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg290 295 300

val val Ser val Leu Thr val Leu H;S Gln ASp Trp Leu Asn Gly Lys305 310 315 320

Glu Tyr Lys cys Lys val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335

Lys Thr pro val Leu ASp Ser ASp Gly Ser phe Phe Leu Tyr Ser Lys340 345 350

Leu Thr val ASp Lys Trp ASp Glu Leu Thr Lys Asn Gln val Ser Leu 355 360 365

Thr Cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser ASp Ile Ala val Glu Trp370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ile Ser 385 390 395 400

Lys Ala Lys Gly Gln pro Arg Glu Pro Gln val Tyr Thr Leu Pro Pro 405 410 415

Ser Pro Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe ser Cys Ser val Met H;S420 425 430

Glu Ala Leu H;S Asn H;S Tyr Thr Gln Lys ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445

Gly Lys450

CRX01-seqs_ST25 (2)

<210> 2

<211> 1350

<212> DNA

<213> Artificial sequence <220>

<223> Secuencia ADN que codifica la cadena pesada del anticuerpo CRX01

<400> 2 gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgcggctg

tcctgcgccg cctccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggcc 120 cctggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atctacccta ccaacggcta caccagatac 180 gccgactccg tgaagggccg gttcaccatc tccgccgaca cctccaagaa caccgcctac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgctc cagatggggc 300 ggagatggct tctacgccat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctcc 360 gctagcacca agggcccttc cgtgttccct ctggcccctt cctccaagtc cacctccggc 420 ggcaccgccg ctctgggctg cctggtgaag gactacttcc ctgagcctgt gaccgtgagc 480 tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ctgccgtgct gcagtcctcc 540 ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgaca gtgccttcct cctccctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagcct 660 aagtcctgcg acaagaccca cacctgccct ccctgccctg cccctgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc tcctaagcct aaggacaccc tgatgatctc ccggacccct 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc cagaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900 tccacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gaatacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gactcctgtg 1020 ctggactccg acggctcctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtgggacgag 1080 ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc ttccgatatc 1140 gccgtggagt gggagtccaa cggccagcct gagaacaact acaagaccac ccccatctcc 1200 aaggccaagg gccagcctcg cgagcctcag gtgtacaccc tgcctccctc cccccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagtccc tgtccctgag ccctggcaag 1350

<210> 3

<211> 8841

<212> DNA

<213> Art; fi cial sequen ce <220>

<223> secuencia ADN del vector v074

<400> 3 tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat

CRX01-seqs_sT25 (2) acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa 120 aagtgccacc tgacgtcgac ggatcgggag atctcccgat cccctatggt gcactctcag 180 tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt gtgtgttgga 240 ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct tgaccgacaa 300 ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgctagg tggtcaatat 360 tggccattag ccatattatt cattggttat atagcataaa tcaatattgg ctattggcca 420 ttgcatacgt tgtatccata tcataatatg tacatttata ttggctcatg tccaacatta 480 ccgccatgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta 540 gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc 600 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg 660 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg 720 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa 780 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac 840 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg 900 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg 960 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca 1020 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta 1080 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac 1140 cgggaccgat ccagcctccg cggccgggaa cggtgcattg gaagcttggt accgagctcg 1200 gatccgccac catggagtgg tccggcgtgt tcatgttcct gctgtccgtg accgctggcg 1260 tgcactccga ggtgcagctg gtcgagtctg gcggcggact ggtgcagcct ggcggctccc 1320 tgcggctgtc ctgcgccgcc tccggcttca acatcaagga cacctacatc cactgggtgc 1380 ggcaggcccc tggcaagggc ctggagtggg tggcccggat ctaccctacc aacggctaca 1440 ccagatacgc cgactccgtg aagggccggt tcaccatctc cgccgacacc tccaagaaca 1500 ccgcctacct gcagatgaac tccctgcggg ccgaggacac cgccgtgtac tactgctcca 1560 gatggggcgg agatggcttc tacgccatgg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg 1620 tgtcctccgc tagcaccaag ggcccttccg tgttccctct ggccccttcc tccaagtcca 1680 cctccggcgg caccgccgct ctgggctgcc tggtgaagga ctacttccct gagcctgtga 1740 ccgtgagctg gaactctggc gccctgacca gcggcgtgca caccttccct gccgtgctgc 1800 agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgacagt gccttcctcc tccctgggca 1860 cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg 1920 tggagcctaa gtcctgcgac aagacccaca cctgccctcc ctgccctgcc cctgagctgc 1980 tgggcggacc ctccgtgttc ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc 2040 ggacccctga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt 2100

CRx01-seqs_sT25 (2) tcaattggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcct cgggaggaac 2160 agtacaactc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga 2220 acggcaagga atacaagtgc aaggtgtcca acaaggccct gcctgccccc atcgaaaaga 2280 ccatctccaa ggccaagggc cagcctcgcg agcctcaggt gtacaccctg cctccctccc 2340 gggacgagct gaccaagaac caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctaccctt 2400 ccgatatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc 2460 ctcctgtgct ggactccgac ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt 2520 cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc 2580 actacaccca gaagtccctg tccctgagcc ctggcaagtg ataatctagc gaattcaccg 2640 gtaccaagct taagtttaaa ccgctgatca gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca 2700 tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc 2760 ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg 2820 gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct 2880 ggggatgcgg tgggctctat ggcttctgag gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg 2940 tatccccacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc 3000 gtgaccgcta cacttgccag cgcctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc 3060 tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc 3120 gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta 3180 gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta 3240 atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg 3300 atttataagg gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa 3360 aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg 3420 ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg 3480 aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc 3540 aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta actccgccca gttccgccca 3600 ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc 3660 ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa 3720 gctcccggga gcttggatat ccattttcgg atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt 3780 tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg tggagaggct 3840 attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg tgttccggct 3900 gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg 4080 gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc 4140 CRXOl_seqs_ST25 (2) aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca 4200 tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga 4260 cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc 4320 cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga 4380 aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca 4440 ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg 4500 cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct 4560 tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg gggttcggtg ctacgagatt tcgattccac 4620 cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat 4680 cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc 4740 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc 4800 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc 4860 gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg 4920 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 4980 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 5040 gggaaacctg tcgtgccaga attgcatgaa gaatctgctt agggttaggc gttttgcgct 5100 gcttcgctag gtggtcaata ttggccatta gccatattat tcattggtta tatagcataa 5160 atcaatattg gctattggcc attgcatacg ttgtatccat atcataatat gtacatttat 5220 attggctcat gtccaacatt accgccatgt tgacattgat tattgactag ttattaatag 5280 taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt 5340 acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg 5400 acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat 5460 ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct 5520 attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg 5580 gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg 5640 ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc 5700 caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa 5760 tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc 5820 tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt 5880 tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga tccagcctcc gcggccggga acggtgcatt 5940 ggaagcttgg taccggtgaa ttcggcgcgc caccatggag tggtccggcg tgttcatgtt cctgctgtcc gtgaccgctg gcgtgcactc cgacatccag atgacccagt ccccctcctc cctgtccgcc tccgtgggcg accgggtgac catcacctgc cgggcctccc aggacgtgaa 6120 caccgccgtg gcctggtatc agcagaagcc tggcaaggcc cctaagctgc tgatctactc 6180 CRX01-seqs_ST25 (2) cgcctccttc ctgtactccg gcgtgccttc ccggttctcc ggctcccggt ccggcaccga 6240 cttcaccctg accatctcct ccctgcagcc tgaggacttc gccacctact actgccagca 6300 gcactacacc acccctccta ccttcggcca gggcaccaag gtggagatca agcggaccgt 6360 ggccgctcct tccgtgttca tcttccctcc ctccgacgag cagctgaaga gcggcaccgc 6420 cagcgtggtg tgcctgctga acaacttcta ccctcgggag gccaaggtgc agtggaaggt 6480 ggacaacgcc ctgcagtccg gcaactccca ggaaagcgtc accgagcagg actccaagga 6540 cagcacctac tccctgtcct ccaccctgac cctgtccaag gccgactacg agaagcacaa 6600 ggtgtacgcc tgcgaggtga cccaccaggg cctgtccagc cctgtgacca agtccttcaa 6660 ccggggcgag tgctgatgag ttaacggatc gatccgagct cggtaccaag cttaagttta 6720 aaccgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc 6780 cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag 6840 gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag 6900 gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc ggtgggctct 6960 atggcttctg aggcggaaag aaccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag 7020 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg 7080 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat 7140 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta 7200 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa 7260 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc 7320 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt 7380 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca 7440 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg 7500 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat 7560 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta 7620 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct 7680 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac 7740 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa 7800 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa 7860 actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt 7920 taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca 7980 gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa 8160 accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc 8220

CRX01-seqs_sT25 (2)

agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca 8280 acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat 8340 tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag 8400 cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac 8460 tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt 8520 ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt 8580 gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc 8640 tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat 8700 ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca 8760 gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga 8820 cacggaaatg ttgaatactc a 8841

<210> 4

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial sequen ce <220>

<223> Secuencia aminoac'dica de la cadena ligera del anticuerpo CRX01.

<400> 4

ASp rle Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser val Gly1 5 10 15

ASp Arg val Thr rle Thr Cys Arg Ala Ser Gln ASp val Asn Thr Ala 20 25 30

val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala pro Lys Leu Leu rle 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly val pro Ser Arg phe Ser Gly50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr ASp Phe Thr Leu Thr rle Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80

Glu ASp phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys val Glu rle Lys Arg Thr val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser val Phe rle phe pro Pro Ser ASp Glu Gln Leu Lys Ser Gly115 120 125

Thr Ala Ser val val cys Leu Leu Asn Asn phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 CRX01-seqs_ST25 (2)

Lys val Gln Trp Lys val ASp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160

Glu ser val Thr Glu Gln ASp Ser Lys ASp ser Thr Tyr Ser Leu ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala ASp Tyr Glu Lys His Lys val Tyr180 185 190

Ala cys Glu val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser pro val Thr Lys ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu cys 210

<210> 5

<211> 642

<212> DNA

<213> Artificial sequence <220>

<223> Secuencia ADN que codifica la cadena ligera del anticuerpo CRX01.

<400> 5

gacatccaga tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60 atcacctgcc gggcctccca ggacgtgaac accgccgtgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc gcctccttcc tgtactccgg cgtgccttcc 180 cggttctccg gctcccggtc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctcctac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggagatcaa gcggaccgtg gccgctcctt ccgtgttcat cttccctccc 360 tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 cctcgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagtccgg caactcccag 480 gaaagcgtca ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc caccctgacc 540 ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ctgtgaccaa gtccttcaac cggggcgagt gc 642