Anticuerpo anti-ILT7.

Anticuerpo monoclonal que se une a ILT7 humano, no se une a ninguno de ILT1 humano,

ILT2 humano e ILT3 humano, y suprime la producción de interferón-a (IFNa) desde células que expresan ILT7, o un fragmento que comprende su región de unión a antígeno.

Anticuerpo anti-ILT7

Campo técnico La presente invención se refiere a un anticuerpo que se une a ILT7 humano.

Antecedentes de la técnica El interferón α (IFNα: a continuación en el presente documento, “interferón” se abrevia como IFN) y el interferón β (IFNβ) se conocen como IFN tipo 1 que presentan actividad antiviral o actividad antitumoral. Por otro lado, también se ha revelado que IFNα está relacionado con la enfermedad autoinmunitaria. Por ejemplo, se ha notificado la producción anómala de IFNα en pacientes con las siguientes enfermedades autoinmunitarias. También se ha sugerido que los síntomas de las enfermedades autoinmunitarias pueden reducirse mediante la neutralización de IFNα.

Lupus eritematoso sistémico (Shiozawa et al., Arthr. & Rheum. 35, 412, 1992)

Reumatismo crónico (Hopkins et al., Clin. Exp. Immunol. 73, 88, 1988)

Se notificaron casos en los que los síntomas de las enfermedades autoinmunitarias se habían manifestado o empeorado mediante la administración de IFNα2 o IFN recombinantes (Wada et al., Am. J. Gastroenterol. 90, 136, 1995; Perez et al., Am. J. Hematol. 49, 365, 1995; Wilson LE et al, Semin Arthritis. Rheum. 32, 163-173, 2002.) .

Además, también se ha revelado que IFNα induce la diferenciación de células dendríticas. La célula dendrítica es también una célula presentadora de antígeno. Por tanto, se considera que la inducción de diferenciación de células dendríticas consiste en un importante mecanismo en enfermedades autoinmunitarias. Se ha sugerido que existe una profunda asociación entre la inducción de diferenciación de células dendríticas de IFNα y la aparición de lupus eritematoso sistémico (Blanco et al., Science, 16:294, 1540-1543, 2001) . Por tanto, se ha señalado que IFNα está estrechamente relacionado con la actividad antitumoral así como con enfermedades autoinmunitarias. Además, IFNα está profundamente implicado en la aparición de psoriasis (Nestle FO et al., J. Exp. Med. 202, 135-143, 2005) .

Se identificaron células productoras de interferón (IPC) como células que producen IFN tipo 1 en grandes cantidades asociadas con infección viral. Se presentan pocas IPC en la sangre. Se considera que los linfocitos de sangre periférica representan el 1% o menos de las IPC. Sin embargo, las IPC tienen una capacidad muy elevada para producir IFN. La capacidad de producción de IFN de las IPC alcanza, por ejemplo, 3000 pg/ml/104 células. Es decir, puede decirse que la mayor parte del IFNα o IFNβ en la sangre, que se produce en la infección viral, resulta de las IPC, aunque haya pocas células.

Por otro lado, las IPC son células dendríticas linfoides no diferenciadas que se consideran como células precursoras de las células dendríticas. Las IPC pueden denominarse células dendríticas plasmocitoides. Las IPC se diferencian en células dendríticas mediante estimulación viral e inducen la producción de IFNy o IL-10 por células T. Las IPC también se diferencian en células dendríticas mediante la estimulación por IL-3. Las células dendríticas diferenciadas mediante la estimulación por IL-3 inducen la producción de citocina Th2 (IL-4, IL-5 e IL-10) por células T. Por tanto, las IPC tienen propiedades que les permiten diferenciarse en distintas células dendríticas mediante diferente estimulación. Por consiguiente, las IPC tienen dos perfiles: células productoras de IFN y células precursoras de células dendríticas. Ambas células desempeñan un papel importante en el sistema inmunitario. En otras palabras, IPC es una de las células importantes que soportan el sistema inmunitario en diversos aspectos.

Documento no de patente 1: Shiozawa et al., Arthr. & Rheum. 35, 412, 1992 Documento no de patente 2: Hopkins et al., Clin. Exp. Immunol. 73, 88, 1988 Documento no de patente 3: Wada et al., Am. J. Gastroenterol. 90, 136, 1995 Documento no de patente 4: Parez et al., Am. J. Hematol. 49, 365, 1995 Documento no de patente 5: Bianco et al., Science, 16:294, 1540-1543, 2001 Documento no de patente 6: Ju et al., Gene. 28 de abril de 2004; 331: 159-64. Documento no de patente 7: Colonna M et al., Seminars in Immunology 12: 121-127, 2000.

Documento no de patente 8: Nakajima H. et al., J. Immunology 162: 5-8. 1999

Documento no de patente 9: Wilson LE et al., Semin Arthritis. Rheum. 32, 163-173, 2002

Documento no de patente 10: Nestle FO et al., J. Exp. Med. 202, 135-143, 2005

Documento de patente 1: documento WO03/12061 (solicitud de patente estadounidense publicada nº 2003-148316)

Descripción de la invención Problemas que debe resolver la invención Un objetivo de la presente invención es proporcionar un anticuerpo que se una al transcrito 7 similar a inmunoglobulina (ILT7) , para regular por disminución la actividad de IFN de las IPC.

Medios para resolver los problemas Para regular la actividad de un factor humoral tal como IFN, la administración de anticuerpos, que reconocen el factor, es eficaz. Por ejemplo, se ha realizado el intento de tratar enfermedades autoinmunitarias mediante anticuerpos contra interleucina (IL) -1 o IL-4 (Guler et al., Arthritis Rheum., 44. S307, 2001) . Además, se supone que los anticuerpos neutralizantes pueden servir como agentes terapéuticos de enfermedades autoinmunitarias como con el interferón (Stewart, TA. Cytokine Growth Factor Rev. 14; 139-154, 2003) . Puede predecirse que el mismo enfoque que se describió anteriormente es eficaz con el IFN producido por las IPC. Sin embargo, un enfoque se este tipo se basa en la inhibición del efecto del factor humoral tras la producción del factor. Si la producción del factor humoral deseado puede controlarse directamente, pueden lograrse efectos terapéuticos más sustanciales. Se han notificado anticuerpos, que reconocen IPC humanas. Por ejemplo, el anticuerpo monoclonal anti-BDCA-2 es anticuerpo monoclonal específico de IPC humanas (Dzionek A. et al. J. Immunol. 165: 6037-6046, 2000) . Se encuentra que anticuerpo monoclonal anti-BDCA-2 es eficaz en la inhibición de la producción de IFN por IPC humanas (J. Exp. Med. 194: 1823-1834, 2001.) . Además, también se ha notificado que anticuerpos monoclonales, que reconocen células productoras de interferón en ratones, inhiben la producción de interferón (Blood 1 de junio de 2004; 103/11: 4201-4206. Epub diciembre de 2003) . Se notificó que el número reducido de células dendríticas se debía a anticuerpos monoclonales contra células dendríticas plasmocitoides en ratones (J. Immunol. 2003, 171: 6466-6477) .

De manera similar, será útil que se proporcionen anticuerpos que reconozcan IPC humanas y que puedan regular la actividad. Por ejemplo, los presentes inventores han mostrado ya que un anticuerpo, que reconoce Ly49Q, se une específicamente a IPC de ratón. Sin embargo, el anticuerpo contra Ly49Q no interfirió en la actividad de IPC de ratón (Blood, 1 de abril de 2005, Vol. 105, Nº 7 y págs. 2787-2792.; documento WO2004/13325) . Por otro lado, ILT7 se conoce como molécula cuya expresión específica se observa en células dendríticas plasmocitoides (Ju XS et al.y Gene. 28 de abril de 2004; 331: 159-64.; documento WO03/12061) . Sin embargo, no se ha obtenido ningún anticuerpo contra ILT7. Por tanto, también se desconocen los efectos de los anticuerpos sobre las IPC. ILT7 es una proteína de membrana que contiene un motivo similar a inmunoglobulina. Se ha notificado como una de las moléculas expresadas en células del sistema mieloide o el sistema linfático (Colonna M et al., Seminars in Immunology 12:121-127, 2000.) . Una pluralidad de moléculas con estructuras análogas a ILT7 se denomina familia de ILT. La familia de ILT también es estructuralmente similar a los receptores inhibidores de células citotóxicas (KIR) . ILT7 tiene cuatro dominios similares a inmunoglobulina tipo C como con otras moléculas de la familia de ILT. Se considera que ILT7 envía señales de activación al interior de la célula como con ILT1, proteína similar a ILT1, ILT8 y LIR6a. Se ha confirmado que una molécula perteneciente a la familia de ILT se expresa en células del sistema hemocítico (Young et al., Immunogenetics 53: 270-278, 2001; “The KIR Gene Cluster. “Carrington, Mar y y Norman, Paul. Bethesda (MD) : National Librar y of Medicine (EE.UU.) , NCBI; 2003) .

Entonces, se detectó una alta expresión de ILT7 en células dendríticas plasmocitoides (PDC) y se detectó una baja expresión de ILT7 en células dendríticas derivadas de monocitos (MDDC) mediante hibridación sustractiva. ILT2 e ILT3 se expresaron no sólo en PDC sino también en DC obtenidas de células positivas para CD34 o MDDC. Sin embargo, puesto que el ARNm en ILT7... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal que se une a ILT7 humano, no se une a ninguno de ILT1 humano, ILT2 humano e ILT3 humano, y suprime la producción de interferón-α (IFNα) desde células que expresan ILT7, o un fragmento que comprende su región de unión a antígeno.

2. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1, en el que la célula que expresa ILT-7 es una célula productora de interferón (IPC) .

3. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 1 ó 2, en el que la célula es positiva para CD123 o positiva para BDCA-2.

4. Anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la célula es negativa para CD3, negativa para CD14, negativa para CD16, negativa para CD19, negativa para CD20 y negativa para CD56.

5. Anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo monoclonal se produce mediante un método que comprende las siguientes etapas de:

(1) administrar a un animal no humano una célula que conserva los siguientes puntos (a) y (b) de manera expresable:

(a) un polinucleótido exógeno que codifica para una secuencia de aminoácidos que comprende un dominio extracelular de ILT7 humano; y

(b) un polinucleótido exógeno que codifica para la cadena γ del receptor de Fc (FcRγ) ;

(2) producir y seleccionar una célula productora de anticuerpos que produce un anticuerpo que se une a ILT7 humano desde la célula productora de anticuerpos del animal no humano; y

(3) cultivar la célula así seleccionada y recuperar un anticuerpo monoclonal del cultivo.

6. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación 5, en el que la célula es una célula animal; y opcionalmente en el que la célula es una célula derivada de ser humano; y además opcionalmente en la que la célula derivada de ser humano es una célula 293T.

7. Anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el fragmento que comprende su región de unión a antígeno es Fab, F (ab’) 2, Fv de cadena sencilla o diacuerpo.

8. Método para detectar una célula productora de interferón, que comprende las etapas de:

poner en contacto el anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 con una célula de prueba; y

detectar el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión a antígeno que se une a la célula.

9. Agente de supresión de interferón a (IFNα) que comprende el anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 como componente activo.