Antibiótico 107891, sus factores, sales farmacéuticamente aceptables y composiciones, y uso de los mismos.

Compuesto de la fórmula **Fórmula**

(SEQ ID NO: 2) en la que X se selecciona del grupo que consiste en H,

F, Cl, Br e I;

en la que Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en S, S-O-, S≥O, O--S≥O y O≥S≥O;

y en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, OH, alquilo

y arilo, siempre que al menos uno de Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 sea diferente de S.

Antibiótico 107891, sus factores, sales farmacéuticamente aceptables y composiciones, y uso de los mismos.

El documento WO2005/014628 da a conocer el antibiótico 107891, sus componentes factores A1 y A2, su preparación y su uso.

El documento WO2006075988 da a conocer derivados del antibiótico 107891 y su uso.

La presente invención se refiere a una sustancia antibiótica de origen microbiano, denominada de manera arbitraria antibiótico 107891, que es un complejo que comprende factores A1 y A2 (que no están dentro del alcance de la presente invención) . La invención se caracteriza por los compuestos según la reivindicación 1. La invención se refiere además a sales farmacéuticas aceptables del mismo, a composiciones farmacéuticas del mismo y a su uso como agente antibacteriano. También se da a conocer un procedimiento para preparar el antibiótico 107891 que incluye cultivar Microbispora sp. 107891 (identificada a continuación en el presente documento como Microbispora sp. ATCC PTA-5024) o una variante o mutante de la misma que mantiene la capacidad de producir dicho antibiótico, recuperar el antibiótico de la invención a partir del micelio y/o a partir del caldo de fermentación, aislar la sustancia pura mediante medios cromatográficos. El antibiótico 107891 es un agente antimicrobiano novedoso con una estructura peptídica que contiene lantionina y metil-lantionina como constituyentes. Estas son las características típicas de los lantibióticos y, en particular, del subgrupo que actúa principalmente sobre la biosíntesis de la pared celular.

Los lantibióticos son péptidos, que contienen el aminoácido de tioéter lantionina así como varios otros aminoácidos modificados (H. G. Sahl y G. Bierbaum, (1998) “Lantibiotics: biosynthesis and biological activities of uniquely modified peptides from gram-positive bacteria”, Ann. Rev. Microbiol. 52:41-79) . La mayoría de los lantibióticos conocidos tienen actividad antibacteriana, aunque se han notificado algunos como activos sobre diferentes dianas farmacológicas. Los lantibióticos antibacterianos pueden dividirse ampliamente en dos grupos basándose en sus estructuras: los lantibióticos tipo A son péptidos normalmente alargados, anfífilos, mientras que los lantibióticos tipo B son compactos y globulares

(O. McAuliffe, R. P. Ross y C. Hill, (2001) : “Lantibiotics: structure, biosynthesis and mode of action”, FEMS Microb. Rev. 25:285-308) . La nisina es el representante típico de lantibiótico tipo A, mientras que la actagardina (gardimicina) y la mersacidina pertenecen a la subclase de lantibióticos tipo B. Tanto los lantibióticos de tipo nisina como de tipo mersacidina interaccionan con el lípido II de precursores de peptidoglicano unidos a membrana, aunque las dos clases se diferencian en los efectos que producen sobre el proceso de proliferación bacteriana. Los lantibióticos de tipo nisina destruyen principalmente las bacterias mediante permeabilización de la membrana citoplasmática (H. Brotz, M. Josten,

I. Wiedemann, U. Schneider, F. Gotz, G. Bierbaum y H. G. Sahl, (1998) : “Role of lipid-bound peptidoglycan precursors in the formation of pores by nisin, epidermin and other lantibiotics”, Mol. Microbiol. 30:317-27) , mientras que los lantibióticos de tipo mersacidina destruyen principalmente las células bacterianas inhibiendo la biosíntesis de la pared

celular (H. Brotz, G. Bierbaum, K. Leopold, P. E. Reynolds y H. G. Sahl, (1998) : “The lantibiotic mersacidin inhibits peptidoglycan synthesis by targeting lipid II”, Antimicrob Agents Chemother. 42:154-60) .

Dos antibióticos producidos por la cepa NRRLL 30420 de Microbispora corallina, identificados como antibiótico MF-BA1768α1 y MF-BA-1768β1, respectivamente, se describen en el documento US 6.551.591 B1. Los datos fisicoquímicos notificados en la patente anteriormente identificada (por ejemplo datos de espectrometría de masas, peso molecular, contenido de aminoácidos) y comparación de tiempos de retención en análisis experimentales de LC-EM muestran claramente que el complejo de antibiótico 107891 así como sus componentes factor A1 y factor A2, que no están dentro del alcance de la presente invención, son entidades químicas distintas de los antibióticos MF-BA 1768α1 y MF-BA1768β1.

El documento EP 0592835A2 describe antibióticos antitumorales BU-4803TA1, A2, B, C1, C2 y D. Los antibióticos BU4803TA1 A2 y B se recuperan a partir del caldo de fermentación de Microbispora ATCC 55327 (AA 9966) mientras que los antibióticos BU4803TC1, C2 y D son productos de la transformación de los antibióticos BU 4803TA1, A2 y B, respectivamente, cuando se almacenan estos productos en dimetilsulfóxido. Los datos fisicoquímicos notificados en el documento EP 0592835 A para los antibióticos anteriores (por ejemplo, aspecto, absorción UV, peso molecular, actividad antitumoral) muestran claramente que son sustancias químicas distintas del complejo de antibiótico 107891.

CEPA Y FERMENTACIÓN

Se aisló Microbispora sp. 107891 en el medio ambiente y se depositó el 27 de febrero de 2003 en la Colección Americana de Cultivos Tipo (“American Type Culture Collection”, ATCC) , 10801 University Blvd, Manassas VA, 201102209 EE.UU., bajo la disposición del tratado de Budapest. A la cepa se le asignó el número de registro PTA- 5024.

La producción de antibiótico 107891 se logra cultivando una cepa de Microbispora sp. que puede producirlo, es decir, Microbispora sp. ATCC PTA-5024 o una variante o mutante de la misma que mantiene la capacidad para producir dicho antibiótico; aislando el antibiótico resultante del caldo de cultivo completo y/o del micelio separado y/o del caldo de fermentación filtrado; y purificando el antibiótico aislado mediante medios cromatográficos. En cualquier caso, se prefiere producir el antibiótico 107891 en condiciones aerobias en un medio de nutrientes acuoso que contiene fuentes fácilmente asimilables de carbono, nitrógeno y sales inorgánicas. Pueden usarse muchos de los medios de nutrientes habitualmente empleados en el campo de la fermentación, sin embargo se prefieren ciertos medios.

Fuentes de carbono preferidas son sacarosa, fructosa, glucosa, xilosa y similares. Fuentes de nitrógeno preferidas son harina de semilla de soja, peptona, extracto de carne, extracto de levadura, triptona, aminoácidos, caseína hidrolizada y similares. Entre las sales inorgánicas que pueden incorporarse en el medio de cultivo, están las sales solubles habituales que pueden proporcionar sodio, potasio, hierro, zinc, cobalto, magnesio, calcio, amonio, cloruro, carbonato, sulfato, fosfato, nitrato e iones similares.

Preferiblemente, la cepa que produce el antibiótico 107891 se cultiva previamente en un tubo de fermentación o en un frasco de agitación, luego se usa el cultivo para inocular fermentadores en recipiente para la producción de cantidades sustanciales de sustancias. El medio usado para el cultivo previo puede ser el mismo que el empleado para fermentaciones mayores, pero también pueden emplearse otros medios. La cepa que produce el antibiótico 107891 puede hacerse crecer a una temperatura de entre 17ºC y 37ºC, siendo las temperaturas óptimas de alrededor de 2830ºC.

Durante la fermentación, puede monitorizarse la producción de antibiótico 107891 mediante bioensayo con microorganismos sensibles y/o mediante análisis de HPLC. La producción máxima de antibiótico 107891 se produce generalmente tras cerca de 90 horas y antes de 200 horas de fermentación.

El antibiótico 107891 se produce cultivando Microbispora sp. ATCC PTA-5024 o una variante o mutante de la misma que puede producir el antibiótico 107891, y se encuentra en los caldos de cultivo y/o en el micelio.

En esta descripción y reivindicaciones, el término “antibiótico 107891”, a menos que se especifique lo contrario, identifica el complejo de antibiótico 107891 que comprende los factores A1 y A2, factores A1 y A2 que no están dentro del alcance de la presente invención.

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE Microbispora sp. ATCC PTA-5024

Microbispora sp. ATCC PTA-5024 crece bien en diversos medios sólidos convencionales. Se midieron las dimensiones microscópicas usando el cultivo que se hizo crecer en agar de ácido húmico-sales de elementos traza (composición en g/l: ácido húmico 0, 5, FeSO4*7H2O 0, 001, MnCl2*4H2O 0, 001, ZnSO4*7H2O 0, 001,... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de la fórmula

(SEQ ID NO: 2) en la que X se selecciona del grupo que consiste en H, F, Cl, Br e I;

en la que Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en S, S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O;

y en la que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, OH, alquilo y arilo, siempre que al menos uno de Y1, Y2, Y3, Y4 e Y5 sea diferente de S.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R4, R5, R6, R7 y R8 son H.

3. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es H, R2 es H y R3 es H.

4. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es H, R2 es H y R3 es OH.

5. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es H, R2 es OH y R3 es OH.

6. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es OH, R2 es OH y R3 es OH.

7. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es OH, R2 es H y R3 es H.

8. Compuesto según la reivindicación 2, en el que R1 es OH, R2 es H y R3 es OH.

9. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y1 se selecciona del grupo que consiste en S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O e Y2, Y3, Y4 e Y5 son S.

10. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y2 se selecciona del grupo que consiste en S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O e Y1, Y3, Y4 e Y5 son S.

11. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y3 se selecciona del grupo que consiste en S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O e Y1, Y2, Y4 e Y5 son S.

12. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y4 se selecciona del grupo que consiste en S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O e Y1, Y2, Y3 e Y5 son S.

13. Compuesto según la reivindicación 1, en el que Y5 se selecciona del grupo que consiste en S-O-, S=O, O--S=O y O=S=O e Y1, Y2, Y3 e Y4 son S.

14. Composición farmacéutica que comprende un antibiótico seleccionado de los compuestos según la reivindicación 1

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos con un ácido.

15. Composición farmacéutica según la reivindicación 14, que comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.

16. Compuestos según la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos con un ácido para su uso como medicamento.

17. Uso de los compuestos según la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos con un

ácido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infecciones bacterianas. 25

18. Uso de los compuestos según la reivindicación 1 y una sal no tóxica de los mismos con un ácido como promotor del crecimiento animal.