Análogos de oligorribonucleótidos inmunoestimulantes que contienen restos de oligofosfato modificados.

Un oligorribonucleótido (ORN) aislado que comprende un análogo de 5'-trifosfato proporcionado como**Fórmula**

en la que

X1 está seleccionado de O, S y NH y está ligado a un carbono 5' de un nucleótido del extremo 5' del ORN;

X2 está seleccionado de O, S y NH;

cada X3, cuando está presente, está seleccionado independientemente de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2;

X4 está seleccionado de OH, OR, SH, NHR, R, imidazol y Nu-O-P

(Z)(Y)X3, en las que R está seleccionado de un alquilo C1-C12 y un arilo C6-C10, y en la que Nu es un nucleósido;

cada Y, independiente de cualquier otro, está seleccionado de O, S y NH; y

cada Z, independiente de cualquier otro, está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OPO3H, OR' y R', en las que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22- arilo; y

n es 1;

con la condición de que el análogo de 5'-trifosfato no sea 5'-trifosfato,

y sales farmacéuticamente aceptables de dicho ORN.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2008/002940.

Solicitante: AdiuTide Pharmaceuticals GmbH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: Alt Fechenheim 34 60386 Frankfurt am Main ALEMANIA.

Inventor/es: UHLMANN, EUGEN, DR., DEBELAK,HARALD.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS;... > C07H21/00 (Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/04 (Inmunoestimulantes)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/7088 (Compuestos que tienen al menos tres nucleósidos o nucleótidos)

PDF original: ES-2530215_T3.pdf

 

google+ twitter facebook

Fragmento de la descripción:

Análogos de oligorribonucleótidos inmunoestimulantes que contienen restos de oligofosfato modificados Antecedentes de la invención En los últimos años se han descrito varias moléculas de ácidos nucleicos, que incluyen oligonucleótidos sintéticos, como moléculas inmunoestimulantes. Estas moléculas de ácidos nucleicos inmunoestimulantes incluyen oligodesoxinucleótidos (ODN) que contienen CpG, que señalizan mediante receptor similar a Toll 9 (TLR9) , además de ARN bicatenario (ARNbc) , que señaliza mediante receptor similar a Toll 3 (TLR3) , y ARN monocatenario y oligorribonucleótidos (ORN) , que señalizan mediante receptores similares a Toll 7 y 8 (TLR7 y TLR8) .

También se ha informado de inducción muy potente de interferón por ARN monocatenarios (ARNmc) cortos, que se obtuvieron por transcripción in vitro con ARN polimerasas T3, T7 y Sp6. Kim DH y col. (2004) Nat Biotechnol 22:321

5. Este informe desveló adicionalmente que se requiere un 5'-trifosfato en el ORN transcrito in vitro para la inducción de interferón (IFN) . Estos hallazgos también se desvelaron en la publicación de solicitud de patente de EE.UU. US 2006/0178334 A1.

Se informó por separado que el ARN de 5'-trifosfato es el ligando para la proteína I inducida por ácido retinoico (RIG-I) y que el grupo 5'-trifosfato sirve de distintivo molecular para la detección de ARN viral que conduce a fuerte inducción de IFN. Hornung V y col. (2006) Science 314:994-7.

Grupos 5'-trifosfato son compuestos energéticamente activados con una propensión a auto-descomponerse mediante hidrólisis. Bajo condiciones in vivo, los trifosfatos se escinden metabólicamente, por ejemplo, por 5'fosfatasas tales como fosfatasa intestinal de ternera (CIP) , y se tapa el ARN, de forma que la mayoría del ARN citoplásmico, sino todo, carece de 5'-trifosfatos expuestos.

Sumario de la invención La presente invención proporciona oligorribonucleótidos (ORN) inmunoestimulantes y análogos de oligorribonucleótidos con estabilidad metabólica y química mejorada y actividad biológica mejorada, composiciones que contienen dichas moléculas inmunoestimulantes, y procedimientos para la preparación y uso de las mismas.

En ciertos aspectos, las moléculas inmunoestimulantes de la invención se caracterizan en parte por tener al menos un análogo de oligofosfato del extremo 5', por ejemplo, un análogo de 5'-trifosfato. Las moléculas inmunoestimulantes según este aspecto pueden incluir, en una realización, ARN que es ARN de otro modo no modificado. Según esta realización, el ORN tiene un oligofosfato del extremo 5' modificado y un ARN de otro modo no modificado. A pesar de tener ARN no modificado, el ORN según esta realización no puede obtenerse por transcripción in vitro con ARN polimerasas T3, T7 y Sp6 debido a que estas enzimas no pueden incorporar el análogo de oligofosfato del extremo 5'. Adicionalmente, según este aspecto de la invención, en una realización las moléculas inmunoestimulantes pueden incluir ARN que se caracteriza de otro modo por tener al menos un enlace internucleotídico modificado, residuo de azúcar, nucleobase, o cualquier combinación de los mismos. Según esta realización, el ORN tiene un oligofosfato del extremo 5' modificado y un ARN que está modificado de otro modo. El ORN según esta realización no puede obtenerse por transcripción in vitro con ARN polimerasas T3, T7 y Sp6 debido a que estas enzimas no pueden incorporar tanto el análogo de oligofosfato del extremo 5' como la al menos otra modificación de ARN.

En ciertos aspectos, las moléculas inmunoestimulantes de la invención se caracterizan en parte por tener al menos un trifosfato del extremo 5'. Las moléculas inmunoestimulantes según este aspecto pueden incluir, en una realización, ARN que se caracteriza de otro modo por tener al menos un enlace internucleotídico modificado, residuo de azúcar, nucleobase, o cualquier combinación de los mismos. Según esta realización, el ORN tiene un trifosfato del extremo 5' y un ARN que está de otro modo modificado. El ORN según esta realización no puede obtenerse por transcripción in vitro con ARN polimerasas T3, T7 y Sp6 debido a que estas enzimas no pueden incorporar la al menos una modificación de ARN.

En una realización, el ORN de la invención puede administrarse usando un sistema de administración, tal como una formulación de lípido.

La invención en un aspecto es un oligorribonucleótido aislado (ORN) que incluye un análogo de 5'-trifosfato proporcionado como en la que

X1 está seleccionado de O, S y NH y está ligado a un carbono 5' de un nucleótido del extremo 5' de ORN; X2 está seleccionado de O, S y NH; cada X3, cuando está presente, está seleccionado independientemente de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2; X4 está seleccionado de OH, OR, SH, NHR, R, imidazol y Nu-O-P (Z) (Y) X3, en las que R está seleccionado de

un alquilo C1-C12 y un arilo C6-C10, y en la que Nu es un nucleósido; cada Y, independiente de cualquier otro, está seleccionado de O, S y NH; y cada Z, independiente de cualquier otro, está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OPO3H, OR' y R', en las que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22arilo; y

n es 1; con la condición de que el análogo de 5'-trifosfato no sea 5'-trifosfato, y sales farmacéuticamente aceptables de dicho ORN.

En una realización, cada Y es O.

En una realización, X4 está seleccionado de OH y O-fenilo. En una realización, X4 es OH.

En una realización, el análogo de 5'-trifosfato está seleccionado del grupo que consiste en

En una realización, el análogo de 5'-trifosfato se proporciona como en la que X3 está seleccionado de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2; y

Z está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OR' y R', en la que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22-arilo; con la condición de que el análogo de 5'-trifosfato no sea 5'-trifosfato.

En una realización, el nucleótido del extremo 5' es G.

En una realización, G del extremo 5' es parte de un dinucleótido seleccionado de GU, GC y GT.

En una realización, el nucleótido del extremo 5' no es G. Por ejemplo, el nucleótido del extremo 5' puede seleccionarse de A, C, U y T.

La invención en un aspecto es un oligorribonucleótido (ORN) aislado que comprende un extremo 5' proporcionado como en la que X1 está seleccionado de O, S y NH; X2 está seleccionado de O, S y NH; cada X3 está seleccionado independientemente de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2; X4 está seleccionado de OH, OR, SH, NHR, R, imidazol y Nu-O-P (Z) (Y) X3, en las que R está seleccionado de

un alquilo C1-C12 y un arilo C6-C10, y en la que Nu es un nucleósido; cada Y, independiente de cualquier otro, está seleccionado de O, S y NH; y cada Z, independiente de cualquier otro, está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OPO3H, OR' y R', en las que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22arilo; y

B es H o es una nucleobase seleccionada de guanina, adenina, citosina, uracilo, timina e hipoxantina, y sales farmacéuticamente aceptables de dicho ORN.

En una realización, cada Y es O.

En una realización, X4 está seleccionado de OH y O-fenilo. En una realización, X4 es OH.

Para cada aspecto de la invención:

En una realización, el ORN comprende al menos un motivo inmunoestimulante seleccionado del grupo que consiste en RURGY, GUAGU, GUUGB, GUGUG, GUGUU, G/C-U-A/C-G-G-C-A-C, UUGUGG, UGGUUG, GUGUGU, GGGUUU, CUGU, UUGU, CUUU y UUUU, en la que R es purina; Y es pirimidina; B es G, C, T o U; G/C es G... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un oligorribonucleótido (ORN) aislado que comprende un análogo d.

5. trifosfato proporcionado como en la que X1 está seleccionado de O, S y NH y está ligado a un carbono 5' de un nucleótido del extremo 5' del ORN; X2 está seleccionado de O, S y NH; cada X3, cuando está presente, está seleccionado independientemente de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2; X4 está seleccionado de OH, OR, SH, NHR, R, imidazol y Nu-O-P (Z) (Y) X3, en las que R está seleccionado de

un alquilo C1-C12 y un arilo C6-C10, y en la que Nu es un nucleósido; cada Y, independiente de cualquier otro, está seleccionado de O, S y NH; y cada Z, independiente de cualquier otro, está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OPO3H, OR' y R', en las que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22arilo; y

n es 1; con la condición de que el análogo d.

5. trifosfato no se.

5. trifosfato, y sales farmacéuticamente aceptables de dicho ORN.

2. Un oligorribonucleótido (ORN) aislado que comprende un extremo 5' proporcionado como en la que X1 está seleccionado de O, S y NH;

X2 está seleccionado de O, S y NH;

cada X3 está seleccionado independientemente de O, S, NH, CH2, CCl2, CHF y CF2;

X4 está seleccionado de OH, OR, SH, NHR, R, imidazol y Nu-O-P (Z) (Y) X3, en las que R está seleccionado de 25 un alquilo C1-C12 y un arilo C6-C10, y en la que Nu es un nucleósido;

cada Y, independiente de cualquier otro, está seleccionado de O, S y NH; y

cada Z, independiente de cualquier otro, está seleccionado de H, OH, SH, NH2, NHR', BH3, OPO3H, OR' y R',

en las que R' está seleccionado de alquilo C1-C12, alquenilo C2-C12, alquinilo C2-C12, arilo C6-C10 y alquil C7-C22

arilo; y 30 B es H o es una nucleobase seleccionada de guanina, adenina, citosina, uracilo, timina e hipoxantina,

y sales farmacéuticamente aceptables de dicho ORN.

3. Una composición farmacéutica que comprende un oligorribonucleótido aislado de la reivindicación 1 o 2, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, que comprende además un antígeno.

5. Un oligorribonucleótido como se define en la reivindicación 1 o 2 para su uso en un procedimiento de potenciamiento de una respuesta inmunitaria en un sujeto, que comprende administrar, a un sujeto en necesidad de una respuesta inmunitaria potenciada, una cantidad eficaz de dicho oligorribonucleótido.

6. Un oligorribonucleótido como se define en la reivindicación 1 o 2 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una afección seleccionada del grupo que consiste en cáncer, una afección alérgica, asma, o infección que 40 comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de dicho oligorribonucleótido para el tratamiento de la afección.