Agente de transfección.

Uso de un tensioactivo peptídico que consiste en la secuencia de aminoácidos de AAAAAAK para la introducción de ARNip en células

, en el que dicho uso no es un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano o animal por cirugía o terapia

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2009/064814.

Solicitante: 3-D Matrix, Ltd.

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 3-2-4, Kojimachi Chiyoda-ku Tokyo 102-0083 JAPON.

Inventor/es: YOSHIDA,DAIZO, TAKEI,JIRO.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P35/00 (Agentes antineoplásicos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > A61K48/00 (Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales caracterizadas por los... > A61K47/42 (Proteínas; Polipéptidos; Sus productos de degradación; Sus derivados)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P43/00 (Medicamentos para usos específicos, no previstos en los grupos A61P 1/00 - A61P 41/00)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con 5 a 20 aminoácidos en una secuencia... > C07K7/06 (con 5 a 11 aminoácidos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > C12N15/00 (Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K))

PDF original: ES-2491565_T3.pdf

 

google+ twitter facebook

Fragmento de la descripción:

Agente de transfección Campo técnico

La presente invención se refiere al uso de un tensioactivo peptídico según la reivindicación 1 y al uso médico de una composición que comprende ARNip y dicho tensioactivo peptídico según la reivindicación 2.

Técnica anterior

Se espera que la interferencia por ARN (iARN) se aplique al tratamiento de enfermedad ya que puede inhibir la expresión de genes específicos. En el nivel actual de tecnología, los agentes de transfección usados cuando se transfectan células con ARN de interferencia pequeño (ARNip) consisten principalmente en fosfolípidos catiónicos que se ha indicado que son tóxicos.

Sin embargo, cuando se considera la aplicación del ARNip y otros productos farmacéuticos de ácidos nucleicos en la práctica clínica, se desea que los agentes de transfección tengan una toxicidad tan baja como sea posible y se ha esperado el desarrollo de un agente de transfección que tenga menor toxicidad.

Los tensioactivos peptídicos se conocen por tener una acción que estabiliza proteínas de membrana tales como el receptor acoplado a la proteína G, rodopsina bovina y ser capaces de auto-ensamblarse (documentos no de patente 1 y 2). Sin embargo, su aplicación como agentes de transfección se ha desconocido hasta la fecha.

Documento no de patente 1: Zhao, X. y col., PNAS, vol. 13, N.°: 47, 1777-17712 Documento no de patente 2: Nagai, A. y col., J. Nanosci. Nanotechnol., vol. 7, N.°: 7, 1-7

Von Malzahn y col. (Langmuir, 19:1, pág. 4332-4337) enseñan que péptldos positivamente cargados pueden compactar y encerrar ácidos nucleicos, pero no mencionan la transfección de ARNip en células.

Zhao y col. (Macromol. Biosci., 7, pág. 13-22) desvelan AeD y sus propiedades físicas, pero no mencionan nada de la administración de ARNip a células.

Yeh y col. (Biochemistry, 44, pág. 16912-16919) desvelan que AeD y AeK, también como una mezcla de los mismos, puede estabilizar ciertas enzimas, pero no mencionan la administración de ARNip a células.

Yaghmur y col. (PLOS One, 2, E479) desvelan AeD y AeK y estudian su Influencia sobre la mezcla de monooleína/agua. Se desvela que estos péptidos experimentan auto-ensamblaje. No se mencionan ácidos nucleicos en este contexto, ni mucho menos ARNip.

Zhao y col. (Trends Biotech., 24, vol. 22:9, páginas 47-476) desvelan AeD además de algunos otros tensioactivos peptídicos, que consisten todos en una cabeza cargada, hidrófila y una cola hidrófoba. El documento también menciona pruebas sin publicar; pero no hay mención de AeD o AeK en el contexto de administración de ARNip a células.

Zang (Materiales Today, 23, 6, 2-27) desvela cuatro unidades de construcción peptídicas diseñadas distintas que se consideran útiles para ingeniería molecular; estas incluyen péptidos similares a tensioactivos que tienen siete u ocho residuos de aminoácidos, la cabeza está compuesta por ácidos aspártico y glutámico negativamente cargados o por Usina o histidina positivamente cargadas y la cola consiste en aminoácidos tales como alanina, valina o leucina. El documento menciona simplemente la ¡dea general de que los péptidos tensioactivos se están desarrollando generalmente como sistemas de administración elegidos como diana para, por ejemplo, ¡ARN, pero los péptidos específicos AeD y AeK no se desvelan.

Divulgación de la invención

Problemas a resolver por la invención

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un agente de transfección que tenga menor toxicidad y pueda aplicarse en la práctica clínica.

Como resultado de realizar amplios estudios para resolver los problemas anteriormente mencionados, los autores de la presente invención encontraron que un tensioactivo peptídico es útil como un agente de transfección, conduciendo así a la completitud de la presente invención.

La presente invención se refiere a:

1. El uso de un tensioactivo péptfdico que consiste en la secuencia de aminoácidos AAAAAAK para la introducción de ARNip en células, en el que dicho uso no es un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano o animal por cirugía o terapia.

2. Una composición que comprende ARNip y un tensioactivo péptfdico que consiste en la secuencia de aminoácidos de AAAAAAK para su uso como un medicamento.

3. Una composición que comprende ARNip y un tensioactivo péptfdico que consiste en la secuencia de aminoácidos de AAAAAAK para uso en el tratamiento de tumor cerebral, particularmente glioblastoma.

Así, la presente divulgación también se refiere a lo siguiente:

1. un agente de transfección que comprende un tensioactivo péptfdico;

2. el agente de transfección descrito en 1 anteriormente, en el que el tensioactivo péptfdico consiste en una porción de cabeza que consiste en 4 a 1 aminoácidos hidrófilos y una porción de cola que consiste en 1 o 2 aminoácidos hidrófobos;

3. el agente de transfección descrito en 1 anteriormente, en el que el tensioactivo péptfdico es AAAAAAD o AAAAAAK (en el que AAAAAAD es para referencia); y

4. una sustancia farmacéutica que comprende el agente de transfección descrito en cualquiera de 1 a 3 anteriores y ácido nucleico.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 es una gráfica que indica una comparación de citotoxicidad entre un tensioactivo péptfdico y agentes de transferencia de genes mediados por liposomas catiónicos (Lipofectamine 2 y siFECTOR).

La FIG. 2 es una gráfica que indica los resultados de un análisis de cambios basados en el tiempo en la cantidad de ARNip introducido en tres tipos de células de glioma maligno humano cultivadas usando un tensioactivo péptfdico.

La FIG. 3 es una gráfica que indica los resultados de un análisis de la relación entre la concentración de tensioactivo péptfdico y la eficiencia de introducción de ARNip.

La FIG. 4 es una gráfica que indica los resultados de confirmar los efectos de Interferencia por ARN por ARNip introducido en tres tipos de células de glioma maligno humano cultivadas por tensioactivo peptídico.

La FIG. 5 es una gráfica que indica los resultados de confirmar los efectos de Interferencia por ARN por ARNip introducido en tres tipos de células de glioma maligno humano cultivadas por tensioactivo peptídico.

La FIG. 6 es una gráfica que indica los resultados de confirmar los efectos de Interferencia por ARN por ARNip introducido en tres tipos de células de glioma maligno humano cultivadas por tensioactivo peptídico.

En la presente divulgación, un tensioactivo peptídico se refiere al que contiene 6 a 1 residuos de aminoácidos, tiene una longitud de aproximadamente 2 a 3 nm y demuestra propiedades similares a aquellas de tensioactivos convencionales tales como n-dodecll-(3-D-maltósido (DM) u octil-D-glucósido (OG).

El tensioactivo peptídico de la presente Invención consiste preferentemente en una porción de cabeza que consiste en 4 a 1 aminoácidos hidrófilos y una porción de cola que consiste en 1 o 2 aminoácidos hidrófobos.

Más específicamente, los péptidos de referencia desvelados en el presente documento Incluyen GGGGDD (G4D2), GGGGGGDD (G6D2), GGGGGGGGDD (G8D2), GGGGGGGGGGDD (G1D2), AAAAAAD (A6D), AAAAAADD (A6D2), AAAAAAKK (A6K2), VVVVVVD (V6D), VVVVWDD (V6D2), VVVVVVK (V6K), VVVVVVKK (V6K2), LLLLLLD (L6D), LLLLLLDD (L6D2), LLLLLLK (L6K) y LLLLLLKK (L6K2), AAAAAAD (A6D), en particular AAAAAAK (A6K) se usa en la presente invención según se reivindica.

El tensioactivo peptídico de la presente Invención puede producirse usando un procedimiento de síntesis en fase sólida convencionalmente conocido. Además, péptidos artificialmente sintetizados de este modo pueden usarse preferentemente ya que... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1.- Uso de un tensioactivo peptídico que consiste en la secuencia de aminoácidos de AAAAAAK para la introducción de ARNip en células, en el que dicho uso no es un procedimiento para el tratamiento del cuerpo humano o animal

por cirugía o terapia.

2.- Una composición que comprende ARNip y un tensioactivo peptídico que consiste en la secuencia de aminoácidos de AAAAAAK para su uso como medicamento.

3.- Una composición que comprende ARNip y un tensioactivo peptídico que consiste en la secuencia de

aminoácidos de AAAAAAK para su uso en el tratamiento de tumor cerebral.

4.- La composición de la reivindicación 3 para el uso de la reivindicación 3, en la que el tumor cerebral es glioblastoma.